CN109879924A - 一种奥贝胆酸纯化方法 - Google Patents
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Abstract
奥贝胆酸(Obeticholic Acid，化合物1)为法尼酯衍生物X受体(FXR)的天然配体，可以抑制胆酸合成，用于治疗原发性胆汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病。制备奥贝胆酸过程中，发现了一种新的未知杂质化合物2。利用传统的有机溶剂重结晶方法去除杂质化合物2的效果不理想，而且得到的奥贝胆酸成品纯度也不高。为了克服上述缺陷，本发明提供了一种操作简单、便于工业化生产制备高纯度奥贝胆酸的方法：将粗品奥贝胆酸经皂化、可溶性盐转化为难溶盐、酸化、重结晶，最后得到高纯度奥贝胆酸产品，其中奥贝胆酸纯度≥99.0％，化合物2含量≤0.1％。
Description
技术领域
本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一种奥贝胆酸纯化方法及高纯度的奥贝胆酸组合物
技术背景
奥贝胆酸(Obeticholic Acid)是人初级胆汁酸中鹅去氧胆酸(CDCA)的一种新型衍生物，为法尼酯衍生物X受体(FXR)的天然配体。奥贝胆酸属法尼醇X受体激动剂，通过活化法尼醇X受体，间接抑制细胞色素7A1(CYP7A1)的基因表达。由于CYP7A1是胆酸生物合成的限速酶，因此奥贝胆酸可以抑制胆酸合成，用于治疗原发性胆汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病。奥贝胆酸由美国Intercept制药公司研发成功，是二十年来首个研发用于治疗胆汁淤积性肝病的药物。据预测，2020年奥贝胆酸的销售额可望达到29.92亿美元。
从文献和专利可知，奥贝胆酸主要由鹅去氧胆酸制备得到，两者结构上唯一的区别在于奥贝胆酸的6位比鹅去氧胆酸多了一个乙基。鹅去氧胆酸制备奥贝胆酸的路线如下所示，鹅去氧胆酸经氧化和甲酯化生成化合物3，化合物3与乙醛进行缩合得到化合物5，化合物5脱水形成化合物4，化合物4经还原、水解得到奥贝胆酸。
发明内容
本发明的目的在于提供一种奥贝胆酸新的未知杂质化合物2及含有该杂质的奥贝胆酸组合物以及该组合物的制备方法。
本发明在制备奥贝胆酸的过程中，发现了一种新的未知杂质化合物2，该杂质可由未参与脱水反应的化合物5经还原、水解制备得到。
经上述制备方法得到的奥贝胆酸其纯度较低，且杂质化合物2含量较高，无法满足药用标准，需经进一步精致制备高纯度的奥贝胆酸。但利用传统的有机溶剂重结晶方法去除杂质化合物2的效果不理想，而且得到的奥贝胆酸成品纯度也不高。为了克服上述缺陷，本发明提供了一种操作简单、便于工业化生产制备高纯度奥贝胆酸的方法。通过本方法可以得到高纯度的奥贝胆酸，其中奥贝胆酸纯度≥99.0％，化合物2含量≤0.1％。
本发明首先提供了一种奥贝胆酸杂质化合物2(Mass(ESI)calcd for 436.3,found 459.3 (M+Na)+.)。
本发明的第二个目的是提供一种奥贝胆酸组合物：奥贝胆酸纯度≥98.0％，更优选奥贝胆酸纯度≥99.0％，其中化合物2含量≤0.3％；更优选化合物2含量≤0.1％。
本发明的第三个目的是提供一种由奥贝胆酸粗品制备上述奥贝胆酸组合物的方法，粗品奥贝胆酸经皂化、可溶性盐转化为难溶盐、酸化、重结晶，最后得到高纯度奥贝胆酸。具体包括以下步骤：
(1)皂化，将粗品奥贝胆酸与碱水中加热反应，生成可溶性盐；
(2)可溶性盐转化为难溶盐，将步骤(1)中得到的可溶性盐与无机盐反应，调节pH，析出固体；
(3)酸化，将步骤2中得到的固体加入酸性溶液中，升温回流，然后将该溶液倒入冰水中析出固体；
(4)重结晶，将步骤3中得到的固体溶于有机溶剂，低温析晶得高纯度奥贝胆酸；
更进一步，上述制备方法，其特征在于步骤(1)中所述碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氨水；
更进一步，上述制备方法，其特征在于步骤(1)中所述碱的的用量为奥贝胆酸的1.5～3 摩尔当量；
更进一步，上述制备方法，其特征在于步骤(1)中所述加热温度为25-100℃，优选回流温度，皂化时间2～4小时；
更进一步，上述制备方法，其特征在于步骤(2)中所述无机盐为氯化钙或氯化钡；
更进一步，上述制备方法，其特征在于步骤(2)中所述无机盐当量数为的用量为奥贝胆酸的1.5～3摩尔当量；
更进一步，上述制备方法，其特征在于所述步骤(2)中，pH范围为10～14；
更进一步，上述制备方法，其特征在于所述步骤(2)中调节体系pH用到的碱为氢氧化钠溶液；
更进一步，上述制备方法，其特征在于步骤(3)中进一步酸化时，所述酸性溶液为醋酸；
更进一步，上述制备方法，其特征在于所述步骤(3)中进一步酸化时，在醋酸中回流时间为4～8小时；
更进一步，上述制备方法，其特征在于所述步骤(4)中进一步重结晶时，重结晶所用溶剂为卤代烃，优选二氯甲烷，三氯甲烷、四氯甲烷；
更进一步，上述制备方法，其特征在于所述步骤(4)中进一步重结晶时，使用步骤(3) 得到的固体与有机溶剂的质量体积比为1:2～1:30g/mL，优选1:8～1:15g/mL；
更进一步，上述制备方法，其特征在于可以得到纯度≥98.0％，化合物2含量≤0.3％的奥贝胆酸；优选得到纯度≥99.0％，化合物2含量≤0.1％的奥贝胆酸。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例中所用奥贝胆酸粗品由技术背景里所示路线制备得到，而且所有实施例中所用到的奥贝胆酸粗品均为同一批次，其中奥贝胆酸粗品纯度为70％，杂质2的含量为3％。
实施例一
将17g氢氧化钠加入1000mL水，溶清后倒入100g奥贝胆酸粗品100g，升温至100℃，并在此温度下回流搅拌3小时。保温结束后，将体系降温至50℃，分四批加入104g无水氯化钙，并在此温度下搅拌4小时，然后降温到20～30℃，用20％氢氧化钠溶液调节体系pH为12。将体系过滤，得到固体滤饼。将得到的固体滤饼加入到200mL醋酸中，升温至回流反应 6小时。保温结束后将反应液降温至40℃，缓慢滴加至2000mL的冰水溶液中；滴加完毕后保温反应5小时，过滤得到固体，固体在70℃烘干得到固体92.0g。将92.0g固体加入到850mL 二氯甲烷溶剂中，升温至40℃回流反应5小时，然后缓慢降温至0～5℃，过滤烘干得到91.0g 高纯度奥贝胆酸，收率91.0％，纯度99.1％，杂质2含量为0.07％。Mass(ESI)calcd for420.3, found 443.3(M+Na)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.60(s,3H),0.80-1.78(m,34H),2.07-2.14(m,1H),2.17-2.23(m,1H),3.10-3.20(m,1H),3.50-3.57(m,1H),4.03(d,J＝4.8Hz, 1H),4.29(d,J＝4.0Hz,1H).
实施例二
将17g氢氧化钠加入1000mL水，溶清后倒入100g奥贝胆酸粗品100g，升温至100℃，并在此温度下回流搅拌3小时。保温结束后，将体系降温至50℃，分四批加入194g无水氯化钡，并在此温度下搅拌4小时，然后降温到20～30℃，用20％氢氧化钠溶液调节体系pH为12。将体系过滤，得到固体滤饼。将得到的固体滤饼加入到200mL醋酸中，升温至回流反应 6小时。保温结束后将反应液降温至40℃，缓慢滴加至2000mL的冰水溶液中；滴加完毕后保温反应5小时，过滤得到固体，固体在70℃烘干得到固体90.0g。将90.0g固体加入到830mL 二氯甲烷溶剂中，升温至40℃回流反应5小时，然后缓慢降温至0～5℃，过滤烘干得到89.0g高纯度奥贝胆酸，收率89.0％，纯度99.2％，杂质2含量为0.06％。Mass(ESI)calcd for420.3, found 443.3(M+Na)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.60(s,3H),0.80-1.78(m,34H),2.07-2.14(m,1H),2.17-2.23(m,1H),3.10-3.20(m,1H),3.50-3.57(m,1H),4.03(d,J＝4.8Hz, 1H),4.29(d,J＝4.0Hz,1H).
实施例三
将17g氢氧化钠加入1000mL水，溶清后倒入100g奥贝胆酸粗品100g，升温至40℃，并在此温度下搅拌3小时。保温结束后，分四批加入104g无水氯化钙，并在此温度下搅拌4小时，然后降温到20～30℃，用20％氢氧化钠溶液调节体系pH为12。将体系过滤，得到固体滤饼。将得到的固体滤饼加入到200mL醋酸中，升温至回流反应6小时。保温结束后将反应液降温至40℃，缓慢滴加至2000mL的冰水溶液中；滴加完毕后保温反应5小时，过滤得到固体，固体在70℃烘干得到固体92.0g。将92.0g固体加入到850mL三氯甲烷溶剂中，升温至60℃回流反应5小时，然后缓慢降温至0～5℃，过滤烘干得到90.5g高纯度奥贝胆酸，收率90.5％，纯度99.3％，杂质2含量为0.06％。Mass(ESI)calcd for 420.3,found 443.3 (M+Na)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.60(s,3H),0.80-1.78(m,34H),2.07-2.14(m,1H), 2.17-2.23(m,1H),3.10-3.20(m,1H),3.50-3.57(m,1H),4.03(d,J＝4.8Hz,1H),4.29(d,J＝4.0 Hz,1H).
实施例四
将17g氢氧化钠加入1000mL水，溶清后倒入100g奥贝胆酸粗品100g，升温至40℃，并在此温度下搅拌3小时。保温结束后，分四批加入194g无水氯化钡，并在此温度下搅拌4小时，然后降温到20～30℃，用20％氢氧化钠溶液调节体系pH为13。将体系过滤，得到固体滤饼。将得到的固体滤饼加入到200mL醋酸中，升温至回流反应6小时。保温结束后将反应液降温至40℃，缓慢滴加至2000mL的冰水溶液中；滴加完毕后保温反应5小时，过滤得到固体，固体在70℃烘干得到固体90.0g。将90.0g固体加入到830mL四氯甲烷溶剂中，升温至75℃回流反应5小时，然后缓慢降温至0～5℃，过滤烘干得到90.0g高纯度奥贝胆酸，收率90.0％，纯度99.2％，杂质2含量为0.07％。Mass(ESI)calcd for 420.3,found 443.3 (M+Na)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.60(s,3H),0.80-1.78(m,34H),2.07-2.14(m,1H), 2.17-2.23(m,1H),3.10-3.20(m,1H),3.50-3.57(m,1H),4.03(d,J＝4.8Hz,1H),4.29(d,J＝4.0 Hz,1H).
实施例五
将24g氢氧化钾加入1000mL水，溶清后倒入100g奥贝胆酸粗品100g，升温至100℃，并在此温度下回流搅拌3小时。保温结束后，将体系降温至50℃，分四批加入104g无水氯化钙，并在此温度下搅拌4小时，然后降温到20～30℃，用20％氢氧化钠溶液调节体系pH为12。将体系过滤，得到固体滤饼。将得到的固体滤饼加入到200mL醋酸中，升温至回流反应 6小时。保温结束后将反应液降温至40℃，缓慢滴加至2000mL的冰水溶液中；滴加完毕后保温反应5小时，过滤得到固体，固体在70℃烘干得到固体92.0g。将92.0g固体加入到850mL 二氯甲烷溶剂中，升温至40℃回流反应5小时，然后缓慢降温至0～5℃，过滤烘干得到91.0g高纯度奥贝胆酸，收率91.6％，纯度99.1％，杂质2含量为0.05％。Mass(ESI)calcd for420.3, found 443.3(M+Na)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.60(s,3H),0.80-1.78(m,34H),2.07-2.14(m,1H),2.17-2.23(m,1H),3.10-3.20(m,1H),3.50-3.57(m,1H),4.03(d,J＝4.8Hz, 1H),4.29(d,J＝4.0Hz,1H).
实施例六
将40g氨水加入1000mL水，溶清后倒入100g奥贝胆酸粗品100g，升温至40℃，并在此温度下搅拌3小时。保温结束后，分四批加入104g无水氯化钙，并在此温度下搅拌4小时，然后降温到20～30℃，用20％氢氧化钠溶液调节体系pH为12。将体系过滤，得到固体滤饼。将得到的固体滤饼加入到200mL醋酸中，升温至回流反应6小时。保温结束后将反应液降温至40℃，缓慢滴加至2000mL的冰水溶液中；滴加完毕后保温反应5小时，过滤得到固体，固体在70℃烘干得到固体92.0g。将92.0g固体加入到850mL二氯甲烷溶剂中，升温至40℃回流反应5小时，然后缓慢降温至0～5℃，过滤烘干得到91.0g高纯度奥贝胆酸，收率91.6％，纯度99.1％，杂质2含量为0.07％。Mass(ESI)calcd for 420.3,found 443.3(M+Na)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.60(s,3H),0.80-1.78(m,34H),2.07-2.14(m,1H),2.17-2.23(m,1H), 3.10-3.20(m,1H),3.50-3.57(m,1H),4.03(d,J＝4.8Hz,1H),4.29(d,J＝4.0Hz,1H).
比较例一：用CN105669811方法纯化奥贝胆酸粗品
将奥贝胆酸粗品100g用稀氨水溶解，保证体系为pH为碱性，然后将其滴加至磷酸水溶液中，有大量固体析出，过滤，得到奥贝胆酸精品，收率85.0％，纯度95.5％，杂质2含量为2.4％。
比较例二：用CN105777835方法纯化奥贝胆酸粗品
将奥贝胆酸粗品100g用500mL乙酸丁酯加热至60℃溶解，然后缓慢降温至0～5℃，保温2 小时后过滤反应体系得到固体，固体烘干即为奥贝胆酸精品，收率86.0％，纯度97.8％，杂质2含量为0.5％。
Claims (10)
1.一种奥贝胆酸组合物，其特征在于奥贝胆酸纯度≥98.0％，更优选奥贝胆酸纯度≥99.0％其中化合物2的含量≤0.3％；更优选化合物2的含量≤0.1％，
2.一种奥贝胆酸纯化方法，包含以下方法，将奥贝胆酸粗品经(1)皂化反应，(2)可溶性盐转化为难溶盐，(3)酸化反应，(4)重结晶反应后后，得到如权利要求1所述的奥贝胆酸组合物。
3.一种奥贝胆酸纯化方法，包括如下步骤：
(1)皂化反应，将粗品奥贝胆酸与碱在水中加热反应，生成可溶性盐；
(2)可溶性盐转化为难溶盐，将步骤(1)中得到的可溶性盐与无机盐反应，调pH至碱性，析出固体；
(3)酸化反应，将步骤(2)中得到的固体加入酸性溶液中，升温回流，然后将该溶液倒入冰水中析出固体；
(4)重结晶，将步骤(3)中得到的固体溶于有机溶剂，低温析晶得高纯度奥贝胆酸。
4.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，步骤(1)中所述碱为氢氧化钠、氢氧化钾或氨水；所述碱的用量为奥贝胆酸的1.5～3倍摩尔当量，步骤(1)中加热温度为25-100℃。
5.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，步骤(2)中所述无机盐为氯化钙或氯化钡；所述无机盐用量为为奥贝胆酸的1.5～3倍摩尔当量。
6.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤(2)中pH范围为10～14，调节体系pH用到的碱为氢氧化钠溶液。
7.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，步骤(3)所述酸性溶液为醋酸。
8.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤(4)重结晶时，使用步骤(3)得到的固体与有机溶剂的质量体积比为1:2～1:30g/mL，优选1:8～1:15g/mL。
9.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于所述步骤(4)重结晶时，重结晶所用溶剂为卤代烃，优选二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷。
10.一种化合物2，如下式所示，具体在制备奥贝胆酸药物和奥贝胆酸质量研究中的应用，
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113387992A (zh) * | 2020-03-11 | 2021-09-14 | 成都倍特药业股份有限公司 | 奥贝胆酸杂质及其制备方法和检测方法 |
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- 2017-12-06 CN CN201711275130.6A patent/CN109879924A/zh active Pending
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