CN109874667A - 一种香叶天竺葵多倍体的培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种香叶天竺葵多倍体的培育方法，属于花卉培育技术领域，包括配制：1)将诱导助剂溶解于葡萄糖溶液中即得诱导溶液；2)诱导：香叶天竺葵种子置于诱导溶液中诱导培养；3)萌芽：诱导完成的香叶天竺葵种子转接到萌芽培养基中培养得多倍体幼苗；4)扩繁：选取多倍体幼苗转接到增殖培养基中进行扩繁并鉴定；5)生根：鉴定为多倍体的植株转接到生根培养基中生根培养得幼苗后移栽。有益效果为：相对单纯使用氨磺灵时诱导成功率得到显著提高，多倍体性状稳定，还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的香叶天竺葵，培育后幼苗根系强壮，移栽成活率较高。

Description

一种香叶天竺葵多倍体的培育方法

技术领域

本发明属于花卉培育技术领域，具体涉及一种香叶天竺葵多倍体的培育方法。

背景技术

香叶天竺葵(学名：Pelargonium graveolens L'Herit.)，为多年生草本或灌木状，高可达1m。茎直立，基部木质化，上部肉质，密被具光泽的柔毛，有香味。原生在非洲南部，尤其是南非；喜温暖、湿润和阳光充足环境。耐寒性差，怕水湿和高温。香叶天竺葵因植株具有挥发性香气而广受欢迎，可用于制作精油，其成分主要有香叶草醇，香茅醇，芳樟醇等。香叶天竺葵有多种气味，包括玫瑰、柑橘、薄荷、椰子及豆蔲，与多种水果味。香叶天竺葵喜温耐旱，不耐寒，怕涝，对水分要求不高。适宜在中性或弱碱性的土壤中生长，香叶天竺葵的生长需要充足的日照，光照对其发育和精油含量的增加有良好的作用，年日照时数1100～1300h地区能基本满足其生长的需求，而在年日照时数1500h小时以上条件下，含油量显著增加。因此，选择栽培地区时应以日照充足向阳为主，要求土层深厚、质地疏松、富含腐殖质的肥沃砂土或壤土，而粘重的土壤和低洼排水不良的土地不宜栽培。种植适宜范围要求在海拔1800m以下，霜期10d以下的地区。

由于香叶天竺葵为国外引进的杂种品种，杂种雄花不育，很难得到种子，生产上一直采用扦插繁殖，例如现有技术申请号为201711192999.4的中国发明专利申请，还有现有技术如申请号为201810059146.1的中国发明专利公布的香叶天竺葵的组织培养快速繁殖方法，无论扦插繁殖还是组织培养繁殖都将导致品种单一，单产低，阻碍了优势创汇产业的持续发展。多倍体植株普遍具有器官巨大性、抗性强、新奇变异等特征，且次生代谢物含量增加，是植物育种中重要的种质资源。

据国外文献报道，目前香叶天竺葵得到多倍体植株的方法是：在组织培养过程中，通过对香叶天竺葵叶柄、根、茎段等组织的培养，先诱导愈伤组织再分化出不定芽，从不定芽中筛选得到多倍体植株，但此法后代变异型多、操作过程复杂，需用多种培养基，成本较高。国内有关香叶天竺葵诱导多倍体的研究较少。

发明内容

本发明的目的在于提供一种香叶天竺葵多倍体的培育方法，相对单纯使用氨磺灵时诱导成功率得到显著提高，多倍体性状稳定，还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的香叶天竺葵，培育后幼苗根系强壮，移栽成活率较高。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

[i]一种多倍体培育诱导助剂，所述诱导助剂包括：

(a)占主要成分的氨磺灵；

(b)特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物；

其中，所述米格列醇和诃黎勒酸的特定重量比是25～26:1。

优选地，所述诱导助剂中的以下各项基于所述诱导助剂的总量可按以下重量百分比存在于所述诱导助剂中：

(a)80～99.9wt％的占主要成分的氨磺灵；

(b)0.1～20wt％的特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物；

其中，所述米格列醇和诃黎勒酸的特定重量比是25～26:1。

氨磺灵可抑制细胞有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期，在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍，可以利用氨磺灵溶液获得植物多倍体；然而，单单使用氨磺灵获取多倍体的效率较低，其成功诱导率仅能达到40～50％，后期需要进行大量的筛选工作；将特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物与氨磺灵混合使用可以大大提高种子的萌芽率和诱导成功率，可使诱导率超过80％，提高诱导效率的同时还能使诱导后的多倍体性状更加稳定，能够得到稳定的遗传，此外，特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸发挥协同作用还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，然后采用组织培养的方法进行繁殖和延续，嵌合体在果树园艺中有很高的经济价值，高含量、高稳定性的嵌合体可显著提高植物的可选性状，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的变异植株。

[ii]项[i]中的多倍体培育诱导助剂在培育植物多倍体中的应用，所述应用包括将植物种子和/或组织浸泡入所述的项[i]中的多倍体培育诱导助剂溶液中进行诱导的步骤。

[iii]项[i]中的多倍体培育诱导助剂在培育香叶天竺葵多倍体中的应用，所述应用包括将香叶天竺葵种子浸泡入所述的项[i]中的多倍体培育诱导助剂溶液中进行诱导的步骤。

[iv]一种香叶天竺葵多倍体的培育方法，所述培育方法包括将香叶天竺葵种子浸泡入所述的项[i]中的多倍体培育诱导助剂溶液中进行诱导的步骤。

[v]一种香叶天竺葵多倍体的培育方法，包括：

配制：避光、1～2℃温度下，将项[i]中的诱导助剂按照25～80mg/L的质量含量溶解于0.5～3wt％的葡萄糖溶液中即得诱导溶液；将诱导助剂溶解于葡萄糖溶液中有助于增加诱导助剂的分散程度，利于后期诱导过程中诱导助剂中的有效成分顺利进入香叶天竺葵种子中完成诱导培育；

诱导：经消毒的香叶天竺葵种子置于诱导溶液中，保持所述种子始终处于液面下，黑暗、15～25℃温度、60～120r/min条件下诱导培养7～14d，洗涤去除种子表面的溶液；避光、摇床环境下，以含有诱导助剂的诱导溶液对香叶天竺葵种子进行诱导，诱导助剂中特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物与氨磺灵混合使用可以大大提高种子的萌芽率和诱导成功率，可使诱导率超过80％，多倍体性状更加稳定，且能够得到稳定的遗传，同时米格列醇和诃黎勒酸发挥协同作用还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，高含量、高稳定性的嵌合体可显著提高植物的可选性状，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的变异植株；

萌芽：将诱导完成的香叶天竺葵种子转接到萌芽培养基中，黑暗条件下培养2～5d，再于23～25℃、2200～2500Lux光照度、10～12h/d光照时间的条件下培养30～45d得到多倍体幼苗；

扩繁：选取具有器官巨大、抗性强、新奇变异特征的多倍体幼苗，转接到增殖培养基中进行扩繁，在20～22℃、1800～2000Lux光照度、8～10h/d光照时间的条件下培养扩繁3～5代，取性状稳定的植株进行多倍体的鉴定；扩繁培养一方面有利于以较少的多倍体幼苗获取较大量的多倍体植株，降低培育成本，另一方面有利于获得活性较好和遗传性状较稳定的多倍体植株，后代中多倍体的占比较高，植株的成活率较高；

生根：鉴定为多倍体的植株转接到生根培养基中进行生根培养，即获得香叶天竺葵多倍体植株的幼苗，移栽至大田即得香叶天竺葵多倍体植株；生根培养可以在扩繁培养的基础上促使更多的新根生出，使幼苗根条数增多、直径增大、长度增长，可以大大提高移栽后香叶天竺葵多倍体的成活率。

香叶天竺葵多倍体的培育方法易于实施，诱导助剂中特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物与氨磺灵混合使用可以大大提高种子的萌芽率和诱导成功率，可使诱导率超过80％，多倍体性状更加稳定，且能够得到稳定的遗传，同时米格列醇和诃黎勒酸发挥协同作用还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，高含量、高稳定性的嵌合体可显著提高植物的可选性状，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的变异植株；生根培养时，梓醇能够有效防止生长素调节物质被光降解，持续地为幼苗提供生长素，促使幼苗根条数增多、直径增大、长度增长，大大提高移栽后香叶天竺葵多倍体的成活率。

优选地，所述萌芽培养基组成如下：MS+KT0.15mg/L+椰汁8g/L，pH6.2～6.8。

优选地，所述增殖培养基组成如下：1/2MS+6-BA2mg/L+萘乙酸0.3mg/L，pH6.0～6.5。

优选地，所述生根培养基组成如下：1/2MS+吲哚乙酸0.3mg/L+梓醇0.02mg/L+嫩柳汁30g/L，pH6.3～6.5；吲哚乙酸、嫩柳汁能够作用于细胞，可刺激形成层细胞分裂，刺激根细胞生长，促进木质部、韧皮部细胞分化，促进逾伤组织发根、调节愈伤组织的形态建成，梓醇能够与吲哚乙酸发生络合反应生成络合物，从而可以防止其被光氧化分解为醛与吲哚而失去调节作用，上述梓醇与吲哚乙酸的络合物进入植物体内后，在适当条件下可以经由解络合反应而转变为游离型，经运输转移到作用部位起作用。

本发明的有益效果为：

1)将米格列醇和诃黎勒酸的混合物与氨磺灵混合使用可以大大提高种子的萌芽率和诱导成功率，可使诱导率超过80％，提高诱导效率的同时还能使诱导后的多倍体性状更加稳定，能够得到稳定的遗传；

2)特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸发挥协同作用有助于增加多倍体中嵌合体的含量，采用组培方法进行繁殖和延续，高含量、高稳定性的嵌合体可显著提高植物的可选性状，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的变异植株；

3)梓醇能够与吲哚乙酸发生络合反应生成络合物，从而可以防止吲哚乙酸被光氧化分解为醛与吲哚而失去调节作用，上述络合物进入植物体内后，在适当条件下可以经由解络合反应而转变为游离型，经运输转移到作用部位起作用；

4)生根培养基持续地为幼苗提供生长素，促使幼苗根条数增多、直径增大、长度增长，大大提高移栽后香叶天竺葵多倍体的成活率。

本发明采用了上述技术方案提供一种香叶天竺葵多倍体的培育方法，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述：

实施例1：

本实施例一种多倍体培育诱导助剂，所述诱导助剂中的以下各项基于所述诱导助剂的总量可按以下重量百分比存在于所述诱导助剂中：

(a)80wt％的占主要成分的氨磺灵；

(b)20wt％的特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物；

其中，所述米格列醇和诃黎勒酸的特定重量比是25:1。

氨磺灵可抑制细胞有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期，在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍，可以利用氨磺灵溶液获得植物多倍体；然而，单单使用氨磺灵获取多倍体的效率较低，其成功诱导率仅能达到40～50％，后期需要进行大量的筛选工作；将特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物与氨磺灵混合使用可以大大提高种子的萌芽率和诱导成功率，可使诱导率超过80％，提高诱导效率的同时还能使诱导后的多倍体性状更加稳定，能够得到稳定的遗传，此外，特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸发挥协同作用还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，然后采用组织培养的方法进行繁殖和延续，嵌合体在果树园艺中有很高的经济价值，高含量、高稳定性的嵌合体可显著提高植物的可选性状，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的变异植株。

上述多倍体培育诱导助剂在培育植物多倍体中的应用，所述应用包括将植物种子和/或组织浸泡入上述多倍体培育诱导助剂溶液中进行诱导的步骤。

上述多倍体培育诱导助剂在培育香叶天竺葵多倍体中的应用，所述应用包括将香叶天竺葵种子浸泡入上述多倍体培育诱导助剂溶液中进行诱导的步骤。

一种香叶天竺葵多倍体的培育方法，包括：

配制：避光、1℃温度下，将上述诱导助剂按照25mg/L的质量含量溶解于0.5wt％的葡萄糖溶液中即得诱导溶液；将诱导助剂溶解于葡萄糖溶液中有助于增加诱导助剂的分散程度，利于后期诱导过程中诱导助剂中的有效成分顺利进入香叶天竺葵种子中完成诱导培育；

诱导：经消毒的香叶天竺葵种子置于诱导溶液中，保持所述种子始终处于液面下，黑暗、15℃温度、60r/min条件下诱导培养7d，洗涤去除种子表面的溶液；避光、摇床环境下，以含有诱导助剂的诱导溶液对香叶天竺葵种子进行诱导，诱导助剂中特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物与氨磺灵混合使用可以大大提高种子的萌芽率和诱导成功率，可使诱导率超过80％，多倍体性状更加稳定，且能够得到稳定的遗传，同时米格列醇和诃黎勒酸发挥协同作用还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，高含量、高稳定性的嵌合体可显著提高植物的可选性状，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的变异植株；

萌芽：将诱导完成的香叶天竺葵种子转接到萌芽培养基中，黑暗条件下培养2d，再于23℃、2200Lux光照度、10h/d光照时间的条件下培养30d得到多倍体幼苗；

扩繁：选取具有器官巨大、抗性强、新奇变异特征的多倍体幼苗，转接到增殖培养基中进行扩繁，在20℃、1800Lux光照度、8h/d光照时间的条件下培养扩繁3代，取性状稳定的植株进行多倍体的鉴定；扩繁培养一方面有利于以较少的多倍体幼苗获取较大量的多倍体植株，降低培育成本，另一方面有利于获得活性较好和遗传性状较稳定的多倍体植株，后代中多倍体的占比较高，植株的成活率较高；

生根：鉴定为多倍体的植株转接到生根培养基中进行生根培养，即获得香叶天竺葵多倍体植株的幼苗，移栽至大田即得香叶天竺葵多倍体植株；生根培养可以在扩繁培养的基础上促使更多的新根生出，使幼苗根条数增多、直径增大、长度增长，可以大大提高移栽后香叶天竺葵多倍体的成活率。

香叶天竺葵多倍体的培育方法易于实施，诱导助剂中特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物与氨磺灵混合使用可以大大提高种子的萌芽率和诱导成功率，可使诱导率超过80％，多倍体性状更加稳定，且能够得到稳定的遗传，同时米格列醇和诃黎勒酸发挥协同作用还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，高含量、高稳定性的嵌合体可显著提高植物的可选性状，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的变异植株；生根培养时，梓醇能够有效防止生长素调节物质被光降解，持续地为幼苗提供生长素，促使幼苗根条数增多、直径增大、长度增长，大大提高移栽后香叶天竺葵多倍体的成活率。

所述萌芽培养基组成如下：MS+KT0.15mg/L+椰汁8g/L，pH6.2。

所述增殖培养基组成如下：1/2MS+6-BA2mg/L+萘乙酸0.3mg/L，pH6.0。

所述生根培养基组成如下：1/2MS+吲哚乙酸0.3mg/L+梓醇0.02mg/L+嫩柳汁30g/L，pH6.3；吲哚乙酸、嫩柳汁能够作用于细胞，可刺激形成层细胞分裂，刺激根细胞生长，促进木质部、韧皮部细胞分化，促进逾伤组织发根、调节愈伤组织的形态建成，梓醇能够与吲哚乙酸发生络合反应生成络合物，从而可以防止其被光氧化分解为醛与吲哚而失去调节作用，上述梓醇与吲哚乙酸的络合物进入植物体内后，在适当条件下可以经由解络合反应而转变为游离型，经运输转移到作用部位起作用。

实施例2：

一种香叶天竺葵多倍体的培育方法，包括：

配制：避光、2℃温度下，将诱导助剂按照80mg/L的质量含量溶解于3wt％的葡萄糖溶液中即得诱导溶液；将诱导助剂溶解于葡萄糖溶液中有助于增加诱导助剂的分散程度，利于后期诱导过程中诱导助剂中的有效成分顺利进入香叶天竺葵种子中完成诱导培育；

诱导：经消毒的香叶天竺葵种子置于诱导溶液中，保持所述种子始终处于液面下，黑暗、25℃温度、120r/min条件下诱导培养14d，洗涤去除种子表面的溶液；避光、摇床环境下，以含有诱导助剂的诱导溶液对香叶天竺葵种子进行诱导，诱导助剂中特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物与氨磺灵混合使用可以大大提高种子的萌芽率和诱导成功率，可使诱导率超过80％，多倍体性状更加稳定，且能够得到稳定的遗传，同时米格列醇和诃黎勒酸发挥协同作用还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，高含量、高稳定性的嵌合体可显著提高植物的可选性状，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的变异植株；

萌芽：将诱导完成的香叶天竺葵种子转接到萌芽培养基中，黑暗条件下培养5d，再于25℃、2500Lux光照度、12h/d光照时间的条件下培养45d得到多倍体幼苗；

扩繁：选取具有器官巨大、抗性强、新奇变异特征的多倍体幼苗，转接到增殖培养基中进行扩繁，在22℃、2000Lux光照度、10h/d光照时间的条件下培养扩繁5代，取性状稳定的植株进行多倍体的鉴定；扩繁培养一方面有利于以较少的多倍体幼苗获取较大量的多倍体植株，降低培育成本，另一方面有利于获得活性较好和遗传性状较稳定的多倍体植株，后代中多倍体的占比较高，植株的成活率较高；

生根：鉴定为多倍体的植株转接到生根培养基中进行生根培养，即获得香叶天竺葵多倍体植株的幼苗，移栽至大田即得香叶天竺葵多倍体植株；生根培养可以在扩繁培养的基础上促使更多的新根生出，使幼苗根条数增多、直径增大、长度增长，可以大大提高移栽后香叶天竺葵多倍体的成活率。

香叶天竺葵多倍体的培育方法易于实施，诱导助剂中特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物与氨磺灵混合使用可以大大提高种子的萌芽率和诱导成功率，可使诱导率超过80％，多倍体性状更加稳定，且能够得到稳定的遗传，同时米格列醇和诃黎勒酸发挥协同作用还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，高含量、高稳定性的嵌合体可显著提高植物的可选性状，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的变异植株；生根培养时，梓醇能够有效防止生长素调节物质被光降解，持续地为幼苗提供生长素，促使幼苗根条数增多、直径增大、长度增长，大大提高移栽后香叶天竺葵多倍体的成活率。

所述诱导助剂中的以下各项基于所述诱导助剂的总量可按以下重量百分比存在于所述诱导助剂中：

(a)99.9wt％的占主要成分的氨磺灵；

(b)0.1wt％的特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物；

其中，所述米格列醇和诃黎勒酸的特定重量比是26:1。

氨磺灵可抑制细胞有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期，在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍，可以利用氨磺灵溶液获得植物多倍体；然而，单单使用氨磺灵获取多倍体的效率较低，其成功诱导率仅能达到40～50％，后期需要进行大量的筛选工作；将特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物与氨磺灵混合使用可以大大提高种子的萌芽率和诱导成功率，可使诱导率超过80％，提高诱导效率的同时还能使诱导后的多倍体性状更加稳定，能够得到稳定的遗传，此外，特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸发挥协同作用还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，然后采用组织培养的方法进行繁殖和延续，嵌合体在果树园艺中有很高的经济价值，高含量、高稳定性的嵌合体可显著提高植物的可选性状，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的变异植株。

所述萌芽培养基组成如下：MS+KT0.15mg/L+椰汁8g/L，pH6.8。

所述增殖培养基组成如下：1/2MS+6-BA2mg/L+萘乙酸0.3mg/L，pH6.5。

所述生根培养基组成如下：1/2MS+吲哚乙酸0.3mg/L+梓醇0.02mg/L+嫩柳汁30g/L，pH6.5；吲哚乙酸、嫩柳汁能够作用于细胞，可刺激形成层细胞分裂，刺激根细胞生长，促进木质部、韧皮部细胞分化，促进逾伤组织发根、调节愈伤组织的形态建成，梓醇能够与吲哚乙酸发生络合反应生成络合物，从而可以防止其被光氧化分解为醛与吲哚而失去调节作用，上述梓醇与吲哚乙酸的络合物进入植物体内后，在适当条件下可以经由解络合反应而转变为游离型，经运输转移到作用部位起作用。

实施例3：

[i]一种多倍体培育诱导助剂，所述诱导助剂包括：

(a)占主要成分的氨磺灵；

(b)特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物；

其中，所述米格列醇和诃黎勒酸的特定重量比是25:1。

所述诱导助剂中的以下各项基于所述诱导助剂的总量可按以下重量百分比存在于所述诱导助剂中：

(a)99wt％的占主要成分的氨磺灵；

(b)1wt％的特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物；

其中，所述米格列醇和诃黎勒酸的特定重量比是25:1。

氨磺灵可抑制细胞有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期，在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍，可以利用氨磺灵溶液获得植物多倍体；然而，单单使用氨磺灵获取多倍体的效率较低，其成功诱导率仅能达到40～50％，后期需要进行大量的筛选工作；将特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物与氨磺灵混合使用可以大大提高种子的萌芽率和诱导成功率，可使诱导率超过80％，提高诱导效率的同时还能使诱导后的多倍体性状更加稳定，能够得到稳定的遗传，此外，特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸发挥协同作用还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，然后采用组织培养的方法进行繁殖和延续，嵌合体在果树园艺中有很高的经济价值，高含量、高稳定性的嵌合体可显著提高植物的可选性状，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的变异植株。

[ii]项[i]中的多倍体培育诱导助剂在培育植物多倍体中的应用，所述应用包括将植物种子和/或组织浸泡入所述的项[i]中的多倍体培育诱导助剂溶液中进行诱导的步骤。

[iii]项[i]中的多倍体培育诱导助剂在培育香叶天竺葵多倍体中的应用，所述应用包括将香叶天竺葵种子浸泡入所述的项[i]中的多倍体培育诱导助剂溶液中进行诱导的步骤。

[iv]一种香叶天竺葵多倍体的培育方法，所述培育方法包括将香叶天竺葵种子浸泡入所述的项[i]中的多倍体培育诱导助剂溶液中进行诱导的步骤。

[v]一种香叶天竺葵多倍体的培育方法，包括：

配制：避光、1℃温度下，将项[i]中的诱导助剂按照50mg/L的质量含量溶解于2.5wt％的葡萄糖溶液中即得诱导溶液；将诱导助剂溶解于葡萄糖溶液中有助于增加诱导助剂的分散程度，利于后期诱导过程中诱导助剂中的有效成分顺利进入香叶天竺葵种子中完成诱导培育；

诱导：经消毒的香叶天竺葵种子置于诱导溶液中，保持所述种子始终处于液面下，黑暗、22℃温度、100r/min条件下诱导培养10d，洗涤去除种子表面的溶液；避光、摇床环境下，以含有诱导助剂的诱导溶液对香叶天竺葵种子进行诱导，诱导助剂中特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物与氨磺灵混合使用可以大大提高种子的萌芽率和诱导成功率，可使诱导率超过80％，多倍体性状更加稳定，且能够得到稳定的遗传，同时米格列醇和诃黎勒酸发挥协同作用还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，高含量、高稳定性的嵌合体可显著提高植物的可选性状，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的变异植株；

萌芽：将诱导完成的香叶天竺葵种子转接到萌芽培养基中，黑暗条件下培养3d，再于23℃、2400Lux光照度、10h/d光照时间的条件下培养40d得到多倍体幼苗；

扩繁：选取具有器官巨大、抗性强、新奇变异特征的多倍体幼苗，转接到增殖培养基中进行扩繁，在20℃、2000Lux光照度、8h/d光照时间的条件下培养扩繁4代，取性状稳定的植株进行多倍体的鉴定；扩繁培养一方面有利于以较少的多倍体幼苗获取较大量的多倍体植株，降低培育成本，另一方面有利于获得活性较好和遗传性状较稳定的多倍体植株，后代中多倍体的占比较高，植株的成活率较高；

生根：鉴定为多倍体的植株转接到生根培养基中进行生根培养，即获得香叶天竺葵多倍体植株的幼苗，移栽至大田即得香叶天竺葵多倍体植株；生根培养可以在扩繁培养的基础上促使更多的新根生出，使幼苗根条数增多、直径增大、长度增长，可以大大提高移栽后香叶天竺葵多倍体的成活率。

香叶天竺葵多倍体的培育方法易于实施，诱导助剂中特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物与氨磺灵混合使用可以大大提高种子的萌芽率和诱导成功率，可使诱导率超过80％，多倍体性状更加稳定，且能够得到稳定的遗传，同时米格列醇和诃黎勒酸发挥协同作用还有助于增加多倍体中嵌合体的含量，高含量、高稳定性的嵌合体可显著提高植物的可选性状，进而获取到色、形、味等更加优异和特殊的变异植株；生根培养时，梓醇能够有效防止生长素调节物质被光降解，持续地为幼苗提供生长素，促使幼苗根条数增多、直径增大、长度增长，大大提高移栽后香叶天竺葵多倍体的成活率。

所述萌芽培养基组成如下：MS+KT0.15mg/L+椰汁8g/L，pH6.5。

所述增殖培养基组成如下：1/2MS+6-BA2mg/L+萘乙酸0.3mg/L，pH6.3。

所述生根培养基组成如下：1/2MS+吲哚乙酸0.3mg/L+梓醇0.02mg/L+嫩柳汁30g/L，pH6.4；吲哚乙酸、嫩柳汁能够作用于细胞，可刺激形成层细胞分裂，刺激根细胞生长，促进木质部、韧皮部细胞分化，促进逾伤组织发根、调节愈伤组织的形态建成，梓醇能够与吲哚乙酸发生络合反应生成络合物，从而可以防止其被光氧化分解为醛与吲哚而失去调节作用，上述梓醇与吲哚乙酸的络合物进入植物体内后，在适当条件下可以经由解络合反应而转变为游离型，经运输转移到作用部位起作用。

实施例4：

实施例4与实施例3基本相同，不同之处在于实施例4的诱导助剂为：

(a)99wt％的占主要成分的氨磺灵；

(b)1wt％的米格列醇。

实施例5：

实施例5与实施例3基本相同，不同之处在于实施例5的诱导助剂为：

(a)99wt％的占主要成分的氨磺灵；

(b)1wt％的诃黎勒酸；

实施例6：

实施例6与实施例3基本相同，不同之处在于实施例6的诱导助剂为：

(a)100wt％的占主要成分的氨磺灵。

实施例7：

实施例7与实施例3基本相同，不同之处在于实施例7的生根培养基中未添加梓醇。

试验例：

试验实施例1～7中的下列理化指标并统计入表1：

发芽率(％)＝发芽的种子数/总种子数×100％；

变异率(％)＝出现形态变化的幼苗数/发芽的种子数×100％；

移栽成活率(％)＝移栽成活数/总移栽幼苗数×100％。

表1发芽率、变异率以及移栽成活率

例别	发芽率(％)	变异率(％)	移栽成活率(％)
				实施例1	100.0％	84.0％	100.0％
实施例2	100.0％	83.0％	100.0％
				实施例3	100.0％	85.0％	100.0％
实施例4	92.0％	44.4％	95.0％
				实施例5	90.0％	46.7％	95.2％
实施例6	88.0％	43.2％	97.4％
				实施例7	99.0％	82.8％	85.4％

由表1可知，在本发明方法的优选实施例1～3中，香叶天竺葵种子的发芽率和多倍体幼苗的移栽成活率均达到了100％，而且多倍体植株的获得率及变异率均超过了80％，因此本发明方法是一种变异率高、移栽成活率高的香叶天竺葵多倍体的培育方法。

上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。

以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。

Claims (10)

1.一种多倍体培育诱导助剂，其特征在于：所述诱导助剂包括：

(a)占主要成分的氨磺灵；

(b)特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物。

2.根据权利要求1所述的多倍体培育诱导助剂，其特征在于：所述诱导助剂中的以下各项基于所述诱导助剂的总量可按以下重量百分比存在于所述诱导助剂中：

(a)80～99.9wt％的占主要成分的氨磺灵；

(b)0.1～20wt％的特定重量比的米格列醇和诃黎勒酸的混合物；

其中，所述米格列醇和诃黎勒酸的特定重量比是25～26:1。

3.权利要求1或2中的多倍体培育诱导助剂在培育植物多倍体中的应用，其特征在于所述应用包括将植物种子和/或组织浸泡入所述多倍体培育诱导助剂溶的液中进行诱导的步骤。

4.权利要求1或2中的多倍体培育诱导助剂在培育香叶天竺葵多倍体中的应用，其特征在于所述应用包括将香叶天竺葵种子浸泡入所述多倍体培育诱导助剂的溶液中进行诱导的步骤。

5.一种香叶天竺葵多倍体的培育方法，其特征在于包括将香叶天竺葵种子浸泡入如权利要求1或2所述多倍体培育诱导助剂的溶液中进行诱导的步骤。

6.一种香叶天竺葵多倍体的培育方法，其特征在于包括：

配制：将权利要求1或2所述诱导助剂溶解于葡萄糖溶液中即得诱导溶液；

诱导：香叶天竺葵种子置于诱导溶液中诱导培养；

萌芽：诱导完成的香叶天竺葵种子转接到萌芽培养基中培养得多倍体幼苗；

扩繁：选取多倍体幼苗转接到增殖培养基中进行扩繁并鉴定；

生根：鉴定为多倍体的植株转接到生根培养基中生根培养得幼苗后移栽。

7.根据权利要求6所述的培育方法，其特征在于所述葡萄糖溶液中葡萄糖的质量分数是0.5～3wt％。

8.根据权利要求6或7所述的培育方法，其特征在于所述诱导溶液中诱导助剂的质量含量是25～80mg/L。

9.根据权利要求6所述的培育方法，其特征在于：所述诱导培育的条件是：保持所述种子始终处于液面下，黑暗、15～25℃温度、60～120r/min条件下。

10.根据权利要求6所述的培育方法，其特征在于：所述生根培养基组成如下：1/2MS+吲哚乙酸0.3mg/L+梓醇0.02mg/L+嫩柳汁30g/L，pH6.3～6.5。