CN103583361A - 一种沙枣组织培养方法 - Google Patents
一种沙枣组织培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103583361A CN103583361A CN201310547387.8A CN201310547387A CN103583361A CN 103583361 A CN103583361 A CN 103583361A CN 201310547387 A CN201310547387 A CN 201310547387A CN 103583361 A CN103583361 A CN 103583361A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- arrow
- leaved oleaster
- medium
- tissue
- elaeagnus angustifolia
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
一种沙枣组织培养方法，它涉及一种沙枣培养方法。它解决了目前沙枣组织培养扩培数量少、倍数低，或者利用愈伤组织进行繁殖生根率低，成活率低的缺陷。组织培养方法：一、枝条水培，嫩芽剪下处理，而后将带有节间的茎段进行除培养初始培养；二、选初始培养长出的无菌苗叶的叶柄进行培养；三、将步骤二长出的幼芽移植培养，得到沙枣试管苗，然后经过炼苗，即完成沙枣的组织培养。本发明可用于沙枣的种植领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种沙枣培养方法。
背景技术
沙枣（Elaeagnus angustifolia L.）属胡颓子科胡颓子属，为落叶或常绿灌木或小乔木。别名：银柳胡颓子（东北木本植物图志）、桂香柳（河南）、银柳（辽宁）等。该树种在我国的西北荒漠、半荒漠地区、华北、山东及东北地区均有分布，沙枣也是极少能在戈壁滩上生存下来的树种之一，被誉为沙漠和盐碱地的“宝树”。
沙枣全身是宝：叶含蛋白质4%、粗脂肪2.4%、糖15.7%，是优质的饲料。沙枣果肉粉含粗蛋白7.94%、粗脂肪1.34%、糖51.15%，可用于副食品加工，也可以代替粮食。沙枣花馥郁清香，可提取芳香油，又是很好的蜜源。沙枣根有根瘤菌，可固氮改善土壤。沙枣种子中子仁含油量20.69%，可用于生产清洁燃料（生物柴油）在未来能源逐渐短缺的背景下，开发利用生物质能源已成为一种必然的发展趋势。沙枣树可营造沙枣经济林、防护林，并能育成风景林，绿化美化城市。
因此，扩大沙枣的栽种面积和数量有助于环境改善和农民增收，沙枣产量的提高更有利于提高国民身体素质。
依靠沙枣种子进行种植，不但生长周期长，而且成功率低。目前广泛采用组织培养的方法栽种沙枣，但是，采用沙枣腋芽或顶芽进行组织培养存在扩培数量少、倍数低的问题；而采用组织培养出的叶片或叶柄进行诱导获得愈伤组织，或者采用长出腋芽的茎段诱导获得愈伤组织进行繁殖，又存在生根率低，成活率低的缺陷。
发明内容
本发明是为了解决目前沙枣组织培养扩培数量少、倍数低，或者利用愈伤组织进行繁殖生根率低，成活率低的缺陷，而提供的一种沙枣组织培养方法。
沙枣组织培养按以下步骤进行：
一、采集沙枣当年生枝条，反复冲洗后进行水培，嫩芽长到2～3cm长用剪刀剪下放在烧杯中，烧杯口用纱布盖住，清水滴浇2h±0.1h，然后取出嫩芽浸入浓度为75%的酒精中45s，再用无菌水冲洗3次，之后放入浓度为6%的NaClO溶液中处理6min，再用无菌水清洗3～5次，吸干水分后无菌操作将嫩芽上的叶片剪除，并将嫩芽的茎剪切成长度为1±0.2cm、带有节间的茎段，再将茎段接种于不含任何植物激素的MS培养基中，在25℃、每日光照16h、光照强度为2000lux的环境中初始培养10天；
二、选初始培养长出的无菌苗叶的叶柄部分切成0.5cm×0.5cm大小，然后转移至每升含有0.5mg6-苄氨基嘌呤和1.5mg萘乙酸的MS培养基中25℃培养60天；然后将愈伤块在无菌条件下切割成0.2cm×0.2cm×0.2cm大小转移至每升含1.0mg萘乙酸和0.5mg6-苄氨基嘌呤的MS培养基中25℃培养30天，长出幼芽；
三、将步骤二长出的幼芽移植于每升含有1.0mg萘乙酸和10mg多效唑的1/2MS培养基中培养20天，得到沙枣试管苗，然后经过炼苗，即完成沙枣的组织培养；
其中步骤一MS培养基中蔗糖浓度为30g/L、琼脂浓度为5.5g/L，MS培养基的pH值为5.8。
本发明将步骤一嫩芽上的叶片剪除，然后利用嫩芽的茎段长出的再生叶片的叶柄培养获得沙枣愈伤组织，该愈伤组织能够提高沙枣的生根率；本发明利用愈伤块进行繁殖，将扩培倍数提高到125倍以上，而且试管苗的生根率可达到了92%，生根数可达到4～6根，根平均长度为1.7cm，保证了沙枣的存活率，为加快沙枣的推广种植奠定了技术和物质基础。
本发明方法对来自新疆的阿勒泰、呼图壁，甘肃的张掖、武威，宁夏的中卫，哈萨克斯坦的那乌尔祖母国家自然保护区等不同种源的沙枣都适用，组织培养的效果和数据基本相同。
附图说明
图1是具体实施方式一中步骤二长出的幼芽图片。图2是具体实施方式一步骤三得到的沙枣试管苗图片。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式沙枣组织培养按以下步骤进行：
一、采集沙枣当年生枝条，反复冲洗后进行水培，嫩芽长到2～3cm长用剪刀剪下放在烧杯中，烧杯口用纱布盖住，清水滴浇2h±0.1h，然后取出嫩芽浸入浓度为75%的酒精中45s，再用无菌水冲洗3次，之后放入浓度为6%的NaClO溶液中处理6min，再用无菌水清洗3～5次，吸干水分后无菌操作将嫩芽上的叶片剪除，并将嫩芽的茎剪切成长度为1±0.2cm、带有节间的茎段，再将茎段接种于不含任何植物激素的MS培养基中，在25℃、每日光照16h、光照强度为2000lux的环境中初始培养10天；
二、选初始培养长出的无菌苗叶的叶柄部分切成0.5cm×0.5cm大小，然后转移至每升含有0.5mg6-苄氨基嘌呤和1.5mg萘乙酸的MS培养基中25℃培养60天；然后将愈伤块在无菌条件下切割成0.2cm×0.2cm×0.2cm大小转移至每升含1.0mg萘乙酸和0.5mg6-苄氨基嘌呤的MS培养基中25℃培养30天，长出幼芽；
三、将步骤二长出的幼芽移植于每升含有1.0mg萘乙酸和10mg多效唑的1/2MS培养基中培养20天，得到沙枣试管苗，然后经过炼苗，即完成沙枣的组织培养；
其中步骤一MS培养基中蔗糖浓度为30g/L、琼脂浓度为5.5g/L，MS培养基的pH值为5.8。
本实施方式选用分化能力强的叶柄部分进行诱导。
本实施方式选用的是锦绣1号沙枣进行试验和数据统计。
本实施方式采集沙枣优良单株的当年生枝条；嫩芽长到2～3cm长一般需要水培12～15天。
本实施方式步骤二培养过程中每日光照均为16h、光照强度均为2000 lux。
将本实施方式获得的试管苗经过炼苗转移到以蛭石和珍珠岩为基质的营养土中进行移栽，其中蛭石与珍珠岩的体积比为2:1。
本实施方式在室内进行催芽，可减少嫩芽表面灰尘和细菌的数量，从而降低NaClO溶液的使用浓度，缩短处理时间，减少褐化比例的同时减少污染比例，提高外植体的存活率。
本实施方式步骤一茎段接种于不含任何植物激素的MS培养基中培养10天，其成活率达97%。
本实施方式初始培养长出的无菌苗叶叶柄部分0.5cm×0.5cm大小的叶片培养60天便能形成大小为1.0～2cm3的愈伤块。初始培养的沙枣苗叶叶柄部分具有分化能力强，愈伤组织生长速度快，增殖达125倍以上等优点；而且，其愈伤块再培养长出的幼芽（再生芽）萌发早，生长迅速，伸长明显，幼芽苗高平均为2cm、较粗壮，如图1所示。
本实施方式用愈伤组织进行组织培养有利于工业化大规模生产。
本实施方式步骤三得到的沙枣试管苗（如图2所示）的生根率达到92%，生根数可达到4～6根，根平均长度为1.7cm。将生根的试管苗移栽到蛭石和珍珠岩为基质的营养土中，成活率为87%。
本实施方式在沙枣组织培养各步骤培养基中加入不同种类、不同剂量的激素，以激发沙枣植物体内的生长因子，从而促进组织的生长，也激发根的生长发育，提高生根率，达到最佳的组织培养效果。而且沙枣的组织培养方法不同于一般的花卉或草本植物，而本实施方式方法又不同于已有的沙枣组织培养方法。本实施方式将步骤一嫩芽上的叶片剪除，进而改变沙枣外植体内的激素，改变沙枣的发育分化和体内激素的种类与水平，从而提高了各阶段的成活率，以及愈伤组织的生根率，使沙枣的组织扩大培养有了几何级的扩大。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一反复冲洗后将枝条剪成30±0.5cm长，枝条放入透明玻璃瓶中基部浸入清水中2～4cm进行水培，每天更换1次清水，并且每天用无菌纯净水喷洒枝条表面3～20次。其它步骤及参数与实施方式一相同。
每天用无菌纯净水喷洒枝条表面能保持枝条的湿润。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式二的不同点是：步骤一水培在朝阳的室内进行，室温保持在24±0.5℃。其它步骤及参数与实施方式二相同。
Claims (3)
1.一种沙枣组织培养方法，其特征在于沙枣组织培养按以下步骤进行：
一、采集沙枣当年生枝条，反复冲洗后进行水培，嫩芽长到2～3cm长用剪刀剪下放在烧杯中，烧杯口用纱布盖住，清水滴浇2h±0.1h，然后取出嫩芽浸入浓度为75%的酒精中45s，再用无菌水冲洗3次，之后放入浓度为6%的NaClO溶液中处理6min，再用无菌水清洗3～5次，吸干水分后无菌操作将嫩芽上的叶片剪除，并将嫩芽的茎剪切成长度为1±0.2cm、带有节间的茎段，再将茎段接种于不含任何植物激素的MS培养基中，在25℃、每日光照16h、光照强度为2000lux的环境中初始培养10天；
二、选初始培养长出的无菌苗叶的叶柄部分切成0.5cm×0.5cm大小，然后转移至每升含有0.5mg6-苄氨基嘌呤和1.5mg萘乙酸的MS培养基中25℃培养60天；然后将愈伤块在无菌条件下切割成0.2cm×0.2cm×0.2cm大小转移至每升含1.0mg萘乙酸和0.5mg6-苄氨基嘌呤的MS培养基中25℃培养30天，长出幼芽；
三、将步骤二长出的幼芽移植于每升含有1.0mg萘乙酸和10mg多效唑的1/2MS培养基中培养20天，得到沙枣试管苗，然后经过炼苗，即完成沙枣的组织培养；
其中步骤一MS培养基中蔗糖浓度为30g/L、琼脂浓度为5.5g/L，MS培养基的pH值为5.8。
2.根据权利要求1所述的一种沙枣组织培养方法，其特征在于步骤一反复冲洗后将枝条剪成30±0.5cm长，枝条放入透明玻璃瓶中基部浸入清水中2～4cm进行水培，每天更换1次清水，并且每天用无菌纯净水喷洒枝条表面3～20次。
3.根据权利要求2所述的一种沙枣组织培养方法，其特征在于步骤一水培在朝阳的室内进行，室温保持在24±0.5℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310547387.8A CN103583361B (zh) | 2013-11-07 | 2013-11-07 | 一种沙枣组织培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310547387.8A CN103583361B (zh) | 2013-11-07 | 2013-11-07 | 一种沙枣组织培养方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103583361A true CN103583361A (zh) | 2014-02-19 |
| CN103583361B CN103583361B (zh) | 2015-05-20 |
Family
ID=50073852
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310547387.8A Active CN103583361B (zh) | 2013-11-07 | 2013-11-07 | 一种沙枣组织培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103583361B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111955345A (zh) * | 2020-07-17 | 2020-11-20 | 上海培林生物科技有限公司 | 一种使用叶片培养胡颓子属植株组织的方法和培养基 |
| CN111990253A (zh) * | 2020-07-17 | 2020-11-27 | 上海培林生物科技有限公司 | 一种使用茎段进行胡颓子属植株组织培养的方法 |
| CN116784236A (zh) * | 2023-07-21 | 2023-09-22 | 新疆林业科学院 | 一种适用于工厂化生产大果沙枣苗木组织培养的方法 |
-
2013
- 2013-11-07 CN CN201310547387.8A patent/CN103583361B/zh active Active
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 智旭丹: "翅果油树组织培养及其器官发生的细胞学研究", 《湖南农业大学硕士学位论文》 * |
| 杨育红等: "沙枣组织脱分化培养与快繁体系建立的研究", 《植物研究》 * |
| 董晓刚等: "沙枣组织培养与快速繁殖", 《吉林林业科技》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111955345A (zh) * | 2020-07-17 | 2020-11-20 | 上海培林生物科技有限公司 | 一种使用叶片培养胡颓子属植株组织的方法和培养基 |
| CN111990253A (zh) * | 2020-07-17 | 2020-11-27 | 上海培林生物科技有限公司 | 一种使用茎段进行胡颓子属植株组织培养的方法 |
| CN116784236A (zh) * | 2023-07-21 | 2023-09-22 | 新疆林业科学院 | 一种适用于工厂化生产大果沙枣苗木组织培养的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103583361B (zh) | 2015-05-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101816283B (zh) | 一种春兰杂交和种子无菌播种育苗方法 | |
| CN101536674B (zh) | 粗肋草的组织培养繁殖方法 | |
| CN101347097A (zh) | 木薯体细胞胚胎发生再生植株快繁方法 | |
| CN103444552A (zh) | 一种诱导茄子花药再生单倍体植株的方法 | |
| CN103988777B (zh) | 一种小叶矮生型广玉兰的嫩茎段离体培养方法 | |
| CN109220791A (zh) | 一种利用鳞茎繁育朱顶红的组培方法 | |
| CN102577969A (zh) | 灰毡毛忍冬渝蕾1号组培种苗的繁育方法 | |
| CN106538392B (zh) | 一种白樱花组织培养与快速繁殖方法 | |
| CN102499088A (zh) | 一种利用广西金线莲蒴果快速繁育其种苗的方法 | |
| CN104160956A (zh) | 一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法 | |
| CN102210267B (zh) | 玫瑰再生为完整植株的方法 | |
| CN106613961A (zh) | 一种楸树微繁殖的培育方法 | |
| CN102228005A (zh) | 半夏组织培养一步成种法 | |
| CN100429972C (zh) | 晚春含笑的组织培养繁殖方法 | |
| CN103477988B (zh) | 轮叶蒲桃离体培养和快速繁殖的方法 | |
| CN103583361B (zh) | 一种沙枣组织培养方法 | |
| CN103535166A (zh) | 一种金银花苗木快速繁殖方法 | |
| CN112715367B (zh) | 一种利用硝酸镧进行毛梾组培继代增殖的方法 | |
| CN107027627A (zh) | 一种多花黄精幼胚培养的微块茎繁殖方法 | |
| CN102907325B (zh) | 利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的方法 | |
| CN101743908A (zh) | 红花银桦组培快繁及栽培方法 | |
| CN103782906B (zh) | 一种香樟品种涌金植株再生的方法 | |
| CN114600772B (zh) | 一种深山含笑的组培方法和快速繁殖方法 | |
| CN105379621A (zh) | 一种大岛樱成年优良单株“小乔”樱的高效离体植株再生方法 | |
| CN109874667A (zh) | 一种香叶天竺葵多倍体的培育方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |