CN109846776A - 一种积雪草提取液及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种积雪草提取液及其制备方法和应用。该方法包括如下步骤：(1)将新鲜积雪草进行粉碎，得到积雪草粉末；(2)将步骤(1)中得到的积雪草粉末置于球磨机中，同时向球磨机内注入臭氧，开机进行超微破壁研磨并同时进行臭氧灭菌，得到积雪草破壁微粉；(3)将溶剂加入到步骤(2)中得到的积雪草破壁微粉中进行提取，然后固液分离，取液体，得到积雪草破壁液；再将积雪草破壁液进行膜分离和浓缩，得到积雪草提取液。本发明制备工艺简单可行，适合于工业化生产，获得的提取物具有促进皮肤胶原蛋白合成及抗衰老的作用，适用于日用化妆品领域。

Description

一种积雪草提取液及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于属于中药提取技术及日用化妆品应用领域，特别涉及一种积雪草提取液及其制备方法和应用。

背景技术

积雪草为多年生匍匐草本植物，常卷缩成团状，其茎细长，结节生根，密生成，原产于印度，现广泛分布于世界热带、亚热带区，在我国主要分布于长江以南各省，为中国药典收载的常用中药，性寒、味苦、辛，具有清热利湿、解毒消肿的功效，主要应用于湿热黄疸、中暑腹泻、砂淋血淋、痈肿疮毒等，临床上多用于跌打损伤、皮肤病等的治疗。其主要有效成分为积雪草苷和羟基积雪草苷，研究表明，该有效成分具有抗氧化、抗菌、促进伤口愈合、修复皮肤瘢痕、抗过敏、抑制黑色素、抗胃溃疡等功能，在外用领域主要用于治疗顽固性创伤，皮肤结核等皮肤疾病。鉴于积雪草强大的生物功能，其活性成分的分离和纯化引起国内外研究者们的强烈关注。

目前，对积雪草有效成分的研究主要集中在对积雪草总苷类的提取、分离及工艺优化。用传统提取分离积雪草活性成分的方法缺点主要有提取效率低下、能耗偏高、工序繁琐和生产周期长等。为了克服传统提取方法中的缺点，越来越多种新的提取方法用于积雪草提取研究中，包括：超临界二氧化碳萃取法、微波辅助提取法、超声提取法、酶提取法等。但上述方法均存在一定问题。如超临界二氧化碳提取成本高，难于产业化推广；酶法添加非植物本身物质，不可控的风险物质增多；溶剂法导致溶剂残留等。

化妆品领域对于中草药活性成分的应用要求有区别于医药领域，主要是由于有效成分的吸收途径以及作用靶点位置不一样。比如，医药方面主要是通过消化道吸收，对药物物质分子量大小无特殊要求；而化妆品领域主要通过透皮吸收，小分子物质更容易透过皮肤吸收起作用。因此，研发出一种适合于化妆品领域应用的积雪草提取物尤为重要。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种积雪草提取液的制备方法。

本发明的另一目的在于提供所述方法制备得到的积雪草提取液。

本发明的又一目的在于提供所述积雪草提取液的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种积雪草提取液的制备方法，包括如下步骤：

(1)将新鲜积雪草进行粉碎，得到积雪草粉末；

(2)将步骤(1)中得到的积雪草粉末置于球磨机中，同时向球磨机内注入臭氧，开机进行超微破壁研磨并同时进行臭氧灭菌，得到积雪草破壁微粉；

(3)将溶剂加入到步骤(2)中得到的积雪草破壁微粉中进行提取，然后固液分离，取液体，得到积雪草破壁液；再将积雪草破壁液进行膜分离和浓缩，得到积雪草提取液。

步骤(1)中所述的新鲜积雪草为经过清洗和挑选后的新鲜积雪草。

步骤(1)中所述的粉碎为采用万能粉碎机进行粉碎。

步骤(1)中所述的积雪草粉末的粒径大小为10～100目。

步骤(2)中所述的球磨机中的研磨球为不锈钢研磨球；优选为直径为10～20mm的不锈钢研磨球。

步骤(2)中所述的球磨机中的研磨球与积雪草粉末的重量比为1～3：1～2。

步骤(2)中所述的超微破壁研磨的条件为：研磨速度1000～2000rpm，研磨时间30～90min，出料粒径＜10μm。

步骤(3)中所述的溶剂为醇和水中的一种或两种混合物；优选为乙醇和水中的一种或两种混合物；更优选为水或重量百分比为50～80％的乙醇水溶液。

步骤(3)中所述的积雪草粉末与溶剂的重量比为1：5～30；优选为1：15～30。

步骤(3)中所述的提取为常温提取或加热提取。

所述的常温提取的条件为：室温下提取60～120分钟；优选为：室温下提取90～120分钟；更优选为：室温下搅拌提取90～120分钟。

所述的加热提取的条件为：60℃～100℃下提取60～120分钟；优选为：60℃～100℃下提取60～100分钟；更优选为：60℃～100℃下搅拌提取60～100分钟。

步骤(3)中所述的固液分离为采用离心或过滤的方式进行固液分离。

步骤(3)中所述的膜分离为采用陶瓷膜进行膜分离；优选为采用500～1000nm的陶瓷膜进行膜分离；更优选为采用500～800nm的陶瓷膜进行膜分离。

步骤(3)中所述的浓缩为采用纳滤膜进行膜分离；优选为采用1～10nm纳滤膜进行浓缩；更优选为采用2～10nm纳滤膜进行浓缩。

步骤(3)中所述的浓缩为浓缩至比重为1.00～1.50(即相对密度为1.00～1.50)；优选为浓缩至比重为1.02～1.05。

一种积雪草提取液，通过上述任一项所述的方法制备得到。

所述的积雪草提取液在日化产品中的应用，该积雪草提取液能促进皮肤胶原蛋白合成，锁住皮肤水分，增加皮肤弹性，改善抚平皮肤皱纹，因此，可将其用在日化产品中。

所述的日化产品包括化妆品；优选为具有抗衰老、和/或修复作用的化妆品，可以为溶液、悬浮液、乳状液、霜剂、软膏剂、凝胶、奶液、粉、香皂、油、干粉、粉底液、湿粉或喷剂中的任一种形式。

所述的日化产品中还可以含有其他的组分，如油性成分、pH调节剂、药效成分、防腐剂、保湿剂、糖类、抗氧化剂、美白剂、维生素类和水中的至少一种。

所述的积雪草提取液的添加量占日化产品质量的1～50％；优选为5～15％。

一种含积雪草提取物的抗皱霜，包含如下按质量百分数计的组分：

A相：石蜡4％，聚乙二醇硬脂酸酯6％，氢化蓖麻油0.8％，凡士林5％，羊毛脂8％，液体石蜡4％，椰子油2％，苯氧乙醇0.5％；

B相：上述积雪草提取物5～15％；

C相：甘油5％，丙二醇1％，脂肪醇磷酸酯8％，乙氧基化羊毛脂4％，硼砂0.8％，甘油三硬脂酸酯3％，水补足至100％。

A相所述的羊毛脂为油溶性羊毛脂。

B相所述的积雪草提取物优选为占所述抗皱霜质量的10％。

所述的B相中还含有香精。

所述的香精优选为柠檬香精。

所述的香精的添加量优选为占所述抗皱霜质量的0.1％。

所述的含积雪草提取物的抗皱霜的制备方法，包括如下步骤：

(I)将A相中的各组分混合后加热至85℃，搅拌溶解，使其混合均匀，得到A相混合物；

(II)将C相中的各组分混合后加热至85℃，搅拌溶解，使其混合均匀，得到B相混合物；

(III)将将A相混合物加入C相混合物中，搅拌乳化均匀后冷却至40℃，再加入B相中的组分，继续搅拌使其混合均匀，得到含积雪草提取物的抗皱霜。

步骤(III)所述的继续搅拌的时间优选为30分钟。

一种含积雪草提取物的祛皱唇膏，包含如下按质量百分数计的组分：

A相：蜂蜡19％，地蜡16％，小烛树蜡11％，羊毛脂3％，氢化蓖麻油1％，二丁基羟基甲苯0.1％；

B相：聚甲基丙烯酸甲酸2％，钛白粉2.6％，蓖麻油和红色氧化铁混合物2.5％；

C相：上述积雪草提取物5～15％，水补足至100％。

A相所述的羊毛脂为油溶性羊毛脂。

B相所述的蓖麻油和红色氧化铁混合物为蓖麻油和红色氧化铁按质量比5：1混合得到的混合物。

C相所述的积雪草提取物优选为占所述祛皱唇膏质量的5％。

所述的含积雪草提取物的祛皱唇膏的制备方法，包括如下步骤：

(i)将A相中的各组分混合后加热至80℃，搅拌混合均匀后再加入B相中的组分，得到AB相混合物；

(ii)将C相中的组分加热至80℃，然后加入到步骤(i)中得到的AB相混合物中，搅拌混合均匀，冷却，得到含积雪草提取物的祛皱唇膏。

一种积雪草提取液面膜，包含如下按质量百分数计的组分：聚乙烯醇15％，羧甲基纤维素2％，山梨糖醇酐单月桂酸酯1％，山梨醇5％，苯甲酸钠0.2％，聚醋酸乙烯酯胶乳13％，上述积雪草提取液5～15％，水补足至100％。

所述的积雪草提取液面膜还含有香精。

所述的香精优选为柠檬香精。

所述的香精的添加量优选为占所述积雪草提取液面膜质量的0.1％。

所述的积雪草提取物优选为占所述积雪草提取液面膜质量的15％。

所述的积雪草提取液面膜的制备方法，包括如下步骤：

(a)将部分聚乙烯醇加入到聚醋酸乙烯酯胶乳中，搅拌均匀，得到混合溶液A；

(b)将剩余的聚乙烯醇与苯甲酸钠加入到适量水中，并加热至80度，搅拌混合均匀，冷却，得到混合溶液B；

(c)将积雪草提取液与羧甲基纤维素混合搅拌均匀，得到混合溶液C；

(d)将山梨糖醇酐单月桂酸酯，山梨醇及剩余水混合搅拌均匀，得到混合溶液D。

(e)将混合溶液B倒入混合溶液A中，搅拌均匀后再倒入将混合溶液C和混合溶液D，继续搅拌混合均匀，得到积雪草提取液面膜。

步骤(b)中所述的搅拌的时间优选为2小时。

步骤(e)所述的继续搅拌的时间优选为2小时。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

1、随着回归自然理念以及对产品安全有效的要求，真正有功效的天然提取物在化妆品应用己越来越多，其中积雪草作为安全性和功效性比较高的传统中药材，已成为护肤品中的标志性原料成分。研究表明，积雪草提取物能促进血液循环，改善痤疮性皮肤，防止色素沉淀，促进皮肤的胶原蛋白生成、改善皮肤弹性，延缓肌肤老化，紫外线照射后的晒后修复都被证实有显著效果。因此，积雪草提取物在日化领域具有广阔的市场前景。本发明把新鲜积雪草药材进行破壁处理后用溶剂提取制备其活性成分，其有效成分最接近植物本身的自然成分比例；用膜分离去除大分子等无效杂质后进一步浓缩，有效成分得到浓缩同时也最大限度的富集了植物本身的小分子活性物质，更适合于日用化妆品系列产品。

2、本发明制备工艺简单可行，适合于工业化生产，解决了现有的提取制备方法溶剂残留、提取工艺繁杂、不适合化妆品应用的问题。体外安全性试验表明，本发明制备获得的积雪草提取物不含刺激性成分，可适用于几乎任何皮肤类型和皮肤状况。功效实验表明，本发明提取物能促进皮肤胶原蛋白合成，锁住皮肤水分，增加皮肤弹性，改善抚平皮肤皱纹，是一款安全有效的抗衰老天然原料。

3、本发明的中药细胞破壁提取技术，可以增加药物吸收率，节约药材的使用量，大大提高中药的经济效益和社会效益。该技术可以通过物理或化学作用，把细胞壁破坏，从而让细胞内的有效成分充分暴露，在无细胞壁屏障的阻碍下，所加入的溶剂就能最大限度的甚至以饱和状态溶解药材中的有效成分。

附图说明

图1为高效液相色谱法测定积雪草苷和羟基积雪草苷含量图(图中：编号12的峰为羟基积雪草苷，编号16的峰为积雪草苷)。

图2为皮肤细纹分析检测结果图。

图3为水分含量测试结果图。

图4为皮肤细纹分析检测时试验组0天效果图。

图5为皮肤细纹分析检测时试验组28天效果图。

图6为皮肤弹性测试结果图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。下列实施例中未注明具体实验条件的试验方法，通常按照常规实验条件或按照制造厂所建议的实验条件。除非特别说明，本发明所用试剂和原材料均可通过市售获得；其中本发明所用新鲜积雪草购自上善若水中药材有限公司。

实施例1

将新鲜积雪草进行清洗和挑选前处理后用万能粉碎机进行粉碎，粉碎至粒径100目，得到积雪草粉末；然后将1kg积雪草粉末置于振动式球磨机(振动球磨机，型号ZM 3-10L)球磨罐中，在室温下开机进行破壁研磨30分钟(不锈钢研磨球Φ10mm，研磨球：物料＝1：1(重量比)，研磨速度为2000rpm，出料粒径＜5μm)，并同时开启臭氧灭菌(即同时向球磨机内注入臭氧，开机进行超微破壁研磨的同时进行臭氧灭菌)，获得积雪草破壁微粉；往破壁积雪草粉中加入20kg纯水，60℃搅拌提取100分钟，离心除去药渣，即得到积雪草破壁液；把破壁液经过500nm陶瓷膜分离后经2nm纳滤膜浓缩，浓缩至比重为1.02(即在25℃下的相对密度为1.02)，即为本发明积雪草提取液。

实施例2

将新鲜积雪草进行清洗、挑选前处理后用万能粉碎机进行粉碎，粉碎至粒径40目，得到积雪草粉末；然后将1kg积雪草粉末置于振动式球磨机(型号ZM3-5L)球磨罐中，在室温下开机进行超微破壁研磨60分钟(不锈钢研磨球Φ10mm，研磨球：物料＝2：1(重量比)，研磨速度为1500rpm，出料粒径＜5μm)，并同时开启臭氧灭菌，获得积雪草破壁微粉；往破壁积雪草粉中加入15kg 50％乙醇水溶液(W/W)，室温搅拌提取120分钟，离心除去药渣，即得到积雪草破壁液；把破壁液经过800nm陶瓷膜分离后经10nm纳滤膜浓缩，浓缩至比重1.03(即在25℃下的相对密度为1.03)，即为本发明积雪草提取液。

实施例3

将新鲜积雪草进行清洗、挑选前处理后用万能粉碎机进行粉碎，粉碎至粒径10目，得到积雪草粉末；然后将1kg积雪草粉末置于振动式球磨机(型号ZM3-5L)球磨罐中，在室温下开机进行超微破壁研磨90分钟(不锈钢研磨球Φ20mm，研磨球：物料＝1：1(重量比)，研磨速度为1000rpm，出料粒径＜5μm)，并同时开启臭氧灭菌，获得积雪草破壁微粉；往破壁积雪草粉中加入10kg乙醇，室温搅拌提取90分钟，离心除去药渣，即得到积雪草破壁液；把破壁液经过600nm陶瓷膜分离后经2nm纳滤膜浓缩，浓缩至比重1.05(即在25℃下的相对密度为1.05)，即为本发明积雪草提取液。

实施例4

将新鲜积雪草进行清洗、挑选前处理后用万能粉碎机进行粉碎，粉碎至粒径80目，得到积雪草粉末；然后将1kg积雪草粉末置于振动式球磨机(型号ZM3-5L)球磨罐中，在室温下开机进行超微破壁研磨50分钟(不锈钢研磨球Φ10mm，研磨球：物料＝3：1(重量比)，研磨速度为1800rpm，出料粒径＜5μm)，并同时开启臭氧灭菌，获得积雪草破壁微粉；往破壁积雪草粉中加入30kg纯水，100℃搅拌提取60分钟，离心除去药渣，即得到积雪草破壁液；把破壁液经过800nm陶瓷膜分离后经2nm纳滤膜浓缩，浓缩至比重1.04(即在25℃下的相对密度为1.04)，即为本发明积雪草提取液。

实施例5

将新鲜积雪草进行清洗、挑选前处理后用万能粉碎机进行粉碎，粉碎至粒径60目，得到积雪草粉末；然后将1kg积雪草粉末置于振动式球磨机(型号ZM3-5L)球磨罐中，在室温下开机进行超微破壁研磨50分钟(不锈钢研磨球Φ20mm，研磨球：物料＝1：2(重量比)，研磨速度为1500rpm，出料粒径＜10μm)，并同时开启臭氧灭菌，获得积雪草破壁微粉；往破壁积雪草粉中加入15kg 80％乙醇水溶液，室温搅拌提取120分钟，离心除去药渣，即得到积雪草破壁液；把破壁液经过800nm陶瓷膜分离后经2nm纳滤膜浓缩，浓缩至比重1.03(即在25℃下的相对密度为1.03)，即为本发明积雪草提取液。

实施例6

将新鲜积雪草进行清洗、挑选前处理后用万能粉碎机进行粉碎，粉碎至粒径100目，得到积雪草粉末；然后将1kg积雪草粉末置于振动式球磨机(型号ZM 3-5L)球磨罐中，在室温下开机进行超微破壁研磨60分钟(不锈钢研磨球Φ10mm，研磨球：物料＝1：2(重量比)，研磨速度为1000rpm，出料粒径＜10μm)，并同时开启臭氧灭菌，获得积雪草破壁微粉；往破壁积雪草粉中加入20kg纯水，60℃搅拌提取100分钟，离心除去药渣，即得到积雪草破壁液；把破壁液经过500nm陶瓷膜分离后经2nm纳滤膜浓缩，浓缩至比重1.02(即在25℃下的相对密度为1.02)，即为本发明积雪草提取液。

对比例1

同实施例2，区别在于把药材直接粉碎成40目粉末后提取，膜分离浓缩。

将新鲜积雪草进行清洗、挑选和干燥(40℃)等前处理后用万能粉碎机进行粉碎，粉碎至粒径40目，得到积雪草粉末；然后将1kg积雪草粉末中加入15kg50％乙醇水溶液(W/W)，室温搅拌提取120分钟，离心除去药渣，即得到积雪草初提液；把初提液经过800nm陶瓷膜分离后经10nm纳滤膜浓缩，浓缩至比重1.03(即在25℃下的相对密度为1.03)，即为积雪草提取液。

对比例2

同实施例2，区别在于把药材直接粉碎破壁后提取浓缩，不过膜处理。

将新鲜积雪草进行清洗、挑选和干燥(40℃)等前处理后用万能粉碎机进行粉碎，粉碎至粒径40目，得到积雪草粉末；然后将1kg积雪草粉末置于振动式球磨机(型号ZM 3-5L)球磨罐中，在室温下开机进行超微破壁研磨60分钟(不锈钢研磨球Φ10mm，研磨球：物料＝2：1，研磨速度为1500rpm，出料粒径＜5μm)，并同时开启臭氧灭菌，获得积雪草破壁微粉；往破壁积雪草粉中加入15kg 50％乙醇水溶液(W/W)，室温搅拌提取120分钟，离心除去药渣，离心液浓缩(减压浓缩：温度80℃，-0.09MPa)至比重1.03(即在25℃下的相对密度为1.03)，即为积雪草提取液。

对比例3

同实施例2，区别在于所用药材为市售干药材，购自广州南北行中药饮片有限公司。

将药材(干)用万能粉碎机进行粉碎，粉碎至粒径40目，得到积雪草粉末；然后将1kg积雪草粉末置于振动式球磨机(型号ZM 3-5L)球磨罐中，在室温下开机进行超微破壁研磨60分钟(不锈钢研磨球Φ10mm，研磨球：物料＝2：1(重量比)，研磨速度为1500rpm，出料粒径＜5μm)，并同时开启臭氧灭菌，获得积雪草破壁微粉；往破壁积雪草粉中加入15kg 50％乙醇水溶液(W/W)，室温搅拌提取120分钟，离心除去药渣，即得到积雪草破壁液；把破壁液经过800nm陶瓷膜分离后经10nm纳滤膜浓缩，浓缩至比重1.03(即在25℃下的相对密度为1.03)，即为积雪草提取液。

实施例7 HPLC检测积雪草苷和羟基积雪草苷

方法参考：《中国药典》2015年版(一部)积雪草含量测定项。

仪器：Waters 2695高效液相色谱仪。

色谱条件：

色谱柱：Hypersil BDS C18(250mm×4.6mm，5μm)；

流动相：乙腈-2mmol/L倍他环糊精溶液(24：76)；

波长：205nm；

流速：1.0ml/min；

柱温：室温。

对照品溶液的制备：取积雪草苷对照品、羟基积雪草苷对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每lm l各含0.2mg积雪草苷或羟基积雪草苷的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取样品液(即实施例1～6及对比例1～3制备的积雪草提取液)用流动相稀释100倍后，过0.22μm膜，即得。

分析检测：分别精密吸取对照品溶液l0μl与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

对实施例1～6所得产品进行含量测定，结果如图1和表1所示。

表1 HPLC含量测定结果

实施例8

一种含积雪草提取物的抗皱霜，由以下按质量百分数计的组分组成：

A相：石蜡4％；聚乙二醇硬脂酸酯6％；氢化蓖麻油0.8％；凡士林5％；羊毛脂8％；液体石蜡4％；椰子油2％；苯氧乙醇0.5％；

B相：积雪草提取物10％(实施例1制备)；柠檬香精(芬美意)0.1％；

C相：甘油5％；丙二醇1％；脂肪醇磷酸酯8％；乙氧基化羊毛脂4％；硼砂0.8％；甘油三硬脂酸酯3％；纯化水余量；

其中，羊毛脂为旭星，油溶性羊毛脂。

制法：

(1)将A相中的各组分混合后加热至85℃，搅拌溶解，使其混合均匀，得到A相混合物；

(2)将C相中的各组分混合后加热至85℃，搅拌溶解，使其混合均匀，得到B相混合物；

(3)在搅拌下，将A相混合物加入C相混合物中，乳化均匀后冷却至40℃时加入B相中的组分，搅拌混合30分钟，即可。

实施例9

一种含积雪草提取物的祛皱唇膏，由以下按质量百分数计的组分组成：

A相：蜂蜡19％，地蜡16％，小烛树蜡11％，羊毛脂3％，氢化蓖麻油1％，二丁基羟基甲苯0.1％；

B相：聚甲基丙烯酸甲酸2％，钛白粉2.6％，蓖麻油和红色氧化铁混合物(质量比5：1)2.5％；

C相：积雪草提取物5％(实施例3方法制备获得)，纯化水补足至100％；

其中，羊毛脂为旭星，油溶性羊毛脂。

制法：将A相中的各组分搅拌加热至80℃，混合均匀后加入B相中的组分，搅拌混合均匀，得到AB相混合物。将C相中的组分加热至80℃，搅拌下加入AB相混合物中，均速搅拌，避免形成气泡，缓慢搅拌冷却至约75℃时，注入模具，即得。

实施例10

一种积雪草提取液面膜，由以下按质量百分数计的组分组成：

配方如下(百分比)：

聚乙烯醇(分子量118000～124000)15％，羧甲基纤维素2％，山梨糖醇酐单月桂酸酯1％，山梨醇5％，苯甲酸钠0.2％，聚醋酸乙烯酯胶乳(分子量5万)13％，积雪草提取液5％(实施例3制备)，柠檬香精(芬美意)0.1％，纯化水余量。

制法：

(1)将10％聚乙烯醇加入到聚醋酸乙烯酯胶乳中，搅拌均匀，得到混合溶液A，待用；

(2)将剩余的聚乙烯醇与苯甲酸钠加入到纯化水中，混合搅拌，并加热至80度，搅拌2小时，冷却，得到混合溶液B，待用；

(3)将积雪草提取液与羧甲基纤维素混合搅拌均匀，得到混合溶液C，待用；

(4)将山梨糖醇酐单月桂酸酯，山梨醇及剩余纯化水和香精混合，搅拌均匀，得到混合溶液D，待用。

(5)将混合溶液B倒入混合溶液A中，搅拌均匀后再将混合溶液C和混合溶液D倒入，搅拌混合2小时即得成品。

实施例11人体斑贴实验

参照化妆品安全技术规范(2015版)

试验组1：实施例2制备的积雪草提取液(未进行稀释)。

试验组2：对比例2制备的积雪草提取液(未进行稀释)。

对照组：纯水。

试验过程：

1.按化妆品安全技术规范(2015版)-人体皮肤斑贴试验标准对受试者进行筛选，合格者共30例(男女平均)。

2.选用合格斑试材料，将受试物放入斑试器(永兴同邦医药科技泰州有限公司，斑贴试剂盒)内，用量约为0.03ml。将加有受试物的斑试器用无刺激胶带贴敷于受试者的前臂内侧，一侧为对照区，一侧为试验区，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。

3.去除受试物斑试器后间隔30min，待压痕消失后观察皮肤反应。如结果为阴性，于斑贴试验后24h和48h分别再观察一次。按化妆品安全技术规范(2015版)皮肤反应分级标准记录反应结果。

试验结果：如表2、3所示。

表2试验组1人体皮肤斑贴试验结果

结论：受试物积雪草提取液的人体皮肤斑贴试验结果显示，30例受试者皮肤全部呈现阴性反应(评分等级为0)。根据化妆品安全技术规范(2015版)人体皮肤斑帖试验判断标准，受试物积雪草提取液对人体皮肤无不良反应。

同样人群，按上述方法进行试验组2人体皮肤斑贴试验，其中试验组1、2提前编号，采用双盲法(测试者、实验操作者双盲)

表3试验组2人体皮肤斑贴试验结果

结论：对比例2获得的物积雪草提取液的人体皮肤斑贴试验结果显示，受试者皮肤1级不良反应的为4例、2级1例。根据化妆品安全技术规范(2015版)人体皮肤斑帖试验判断标准，该受试物积雪草提取液对人体皮肤有刺激性。

实施例12功效验证实验

(一)保湿实验

在饱和氯化钠溶液(25℃，相对湿度RH＝76％)中，放置试验样品24小时后分别称量样品放置前质量(W₁)和放置后质量(W₂)。根据公式计算保湿率：(W₂-W₁)/W₁×100％。结果如表4所示。

实施例1～6及对比例1～3的样品：浓度5％(W/W)，纯水稀释后进行保湿效果验证实验。

从表4可看出，在25℃、相对湿度76％条件下，实施例1～6提取物均具有较好的保湿效果，与对比例提取物的保湿效果有显著性差异。

表4在25℃RH＝76％中实施例及对比例的保湿率

(二)清除DPPH自由基能力测定

试剂：DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)，无水乙醇(分析醇)。

仪器：分光光度计。

DPPH贮备液的制备：准确称取DPPH试剂3.0mg，用无水乙醇溶解，并定量转入10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至10mL；然后取2mL至100ml容量瓶中，并定容至100mL，摇匀得浓度为0.006mg/mL DPPH贮备液，置于冰箱中冷藏备用。

样品液的配制：实施例1～6及对比例1～3中制备的提取物分别用纯水稀释至浓度为5％(W/W)。

测量：

A₀值的测量：取DPPH贮备液2mL加入到试管中，加无水乙醇1mL，充分混合，于519nm处测A₀值。

A值的测量：取DPPH贮备液2mL加入到试管中，加样品液300μL，再加(300～1000)μL无水乙醇，混合，静置30分钟后，于519nm处测A值。

清除率的计算公式：(A₀-A)/A₀×100％。

结果：结果如表5所示。

表5 DPPH自由基清除率结果

表5为试样在浓度5％(W/W)下的试验结果，表明在添加浓度为5％(W/W)情况下，上述实施例1～6制备的积雪草提取物具有80％以上的DPPH自由基清除率效果，而对比例1～3效果与实施例1～6有显著性差异。

(三)人体皮肤纹理、水分含量测定实验

实验组样品：实施例10制备的面膜液(实施例3的积雪草提取液5％)。

对照组样品：实施例10中的配方去除积雪草提取液后以纯水补足余量，制法同实施例10。

试验方法：

在受试者(6人，20～50岁，男女平均)左右眼角选取2cm×2cm大小面积作为实验部位。由实验人员使用皮肤水分流失测试仪(型号TM300-MDD)和MicroSkinⅡ多功能皮肤镜图像分析系统测定实验部位涂抹化妆品前的水分含量和皮肤纹理度。作为初始空白值。

受试者在左右眼角实验部位涂抹试样(试验样品)，每天涂抹一次。实验期间，受试者在实验部位不能涂抹任何化妆品、药品。受试者在连续使用化妆品一周、两周、三周和四周后，受试者将涂抹部位洗净，由测试者使用皮肤水分流失测试仪(型号TM300-MDD)和MicroSkinⅡ多功能皮肤镜图像分析系统测定实验部位涂抹化妆品前的水分含量和皮肤纹理度。统计受试者实验部位每次测得的数值，分析其皮肤变化规律。

皮肤纹理分析：见图2及表6。从图2可看出，两组呈下降趋势，但实验组样明显对比对照组下降副度明显，说明实验组具有明显的祛除细纹效果。采用t检验方法对表6实验数据进行显著性分析，经统计学分析结果表明：在测试周期内，样品使用效果与空白(0天)相比，存在显著性差异，即皮肤粗糙度明显下降。对照组与空白(0天)相比，略有下降，主要是基质液作用原因，但与实验组相对，纹理下降不明显。说明经实施例10制备的积雪草面膜液具有明显改善皮肤纹理，达到抗衰老效果。

表6皮肤纹理分析

注：纹理的量化指标在用仪器检测时以粗糙度表示。

水份含量分析：见图3及表7。

水分含量变化反映在测试周期内，实验区域水分含量随时间变化规律。其值越大，水分含量越大，反之，水分含量越小。从图3可看出，在实验21天周期内，实验组能明显增加皮肤水分含量，从而达到锁水补水效果。采用t检验方法对实验数据进行显著性分析，经统计学分析结果表明：在测试周期内，试验组样品使用后水分含量有显著性差异，即试验组样品的水分含量在使用周期内能显著增加皮肤水分含量。而对照组，在测试期间，无统计学分析意义，即在测试周期内，对照样品使用后水分含量无显著性差异，即对照样品的水分含量在使用周期内无显著变化。

表7皮肤水分含量测试

(四)人体皮肤弹性指数测定实验

试验设备：德国DJM皮肤检测仪，型号metis。

试验方法：

志愿者：8例，25～50岁，健康女性；

试验样品：测试样品为实施例8中制备的产品；

阴性对照：实施例8中的基质(即去除积雪草提取液，用水补足去除积雪草后的量，其余成分比例相同，制法相同)；

试验方法：对8名志愿受试者进行分组，4人/组，分别使用试验样品和阴性对照品，实验过程用志愿者及测试实验人员双盲法，所提供测试产品以代号表示，使用DJM皮肤检测仪，先对测试者进行空白测试，确定空白值，记A，并在开始涂抹后3、7、14、28天测定皮肤弹性，记B。按式1计算出皮肤弹性的增加率。结果见图4～6和表8。

式1：皮肤弹性增加率％＝(B-A)÷A×100％

表8皮肤弹性指数测定结果

由检测结果可知，本发明实施例8的产品能使皮肤的弹性增加，同组志愿者变化趋势大致相同，均为曲折上升。而阴性对照组几乎不增加皮肤弹性，说明实施例8的产品(含有积雪草提取物)能明显增加皮肤弹性。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种积雪草提取液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将新鲜积雪草进行粉碎，得到积雪草粉末；

(2)将步骤(1)中得到的积雪草粉末置于球磨机中，同时向球磨机内注入臭氧，开机进行超微破壁研磨并同时进行臭氧灭菌，得到积雪草破壁微粉；

(3)将溶剂加入到步骤(2)中得到的积雪草破壁微粉中进行提取，然后固液分离，取液体，得到积雪草破壁液；再将积雪草破壁液进行膜分离和浓缩，得到积雪草提取液。

2.根据权利要求1所述的积雪草提取液的制备方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的球磨机中的研磨球与积雪草粉末的重量比为1～3：1～2；

步骤(2)中所述的超微破壁研磨的条件为：研磨速度1000～2000rpm，研磨时间30～90min，出料粒径＜10μm；

步骤(3)中所述的膜分离为采用500～1000nm的陶瓷膜进行膜分离；

步骤(3)中所述的浓缩为采用1～10nm纳滤膜进行浓缩。

3.根据权利要求1所述的积雪草提取液的制备方法，其特征在于：

步骤(3)中所述的溶剂为醇和水中的一种或两种混合物；

步骤(3)中所述的积雪草粉末与溶剂的重量比为1：5～30。

4.根据权利要求1所述的积雪草提取液的制备方法，其特征在于：

步骤(3)中所述的提取为常温提取或加热提取；

所述的常温提取的条件为：室温下提取60～120分钟；

所述的加热提取的条件为：60℃～100℃下提取60～120分钟。

5.根据权利要求1所述的积雪草提取液的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的积雪草粉末的粒径大小为10～100目；

步骤(2)中所述的球磨机中的研磨球为直径10～20mm的不锈钢研磨球；

步骤(3)中所述的固液分离为采用离心或过滤的方式进行固液分离。

6.一种积雪草提取液，其特征在于：通过权利要求1～5任一项所述的方法制备得到。

7.权利要求6所述的积雪草提取液在日化产品中的应用。

8.一种含积雪草提取物的抗皱霜，其特征在于，包含如下按质量百分数计的组分：

A相：石蜡4％，聚乙二醇硬脂酸酯6％，氢化蓖麻油0.8％，凡士林5％，羊毛脂8％，液体石蜡4％，椰子油2％，苯氧乙醇0.5％；

B相：权利要求6所述的积雪草提取物5～15％；

C相：甘油5％，丙二醇1％，脂肪醇磷酸酯8％，乙氧基化羊毛脂4％，硼砂0.8％，甘油三硬脂酸酯3％，水补足至100％。

9.一种含积雪草提取物的祛皱唇膏，其特征在于，包含如下按质量百分数计的组分：

A相：蜂蜡19％，地蜡16％，小烛树蜡11％，羊毛脂3％，氢化蓖麻油1％，二丁基羟基甲苯0.1％；

B相：聚甲基丙烯酸甲酸2％，钛白粉2.6％，蓖麻油和红色氧化铁混合物2.5％；

C相：权利要求6所述的积雪草提取物5～15％，水补足至100％。

10.一种积雪草提取液面膜，其特征在于，包含如下按质量百分数计的组分：聚乙烯醇15％，羧甲基纤维素2％，山梨糖醇酐单月桂酸酯1％，山梨醇5％，苯甲酸钠0.2％，聚醋酸乙烯酯胶乳13％，权利要求6所述的积雪草提取液5～15％，水补足至100％。