CN109824721A - 含硫亚磷酰亚胺酯、其制备方法及其应用 - Google Patents
含硫亚磷酰亚胺酯、其制备方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109824721A CN109824721A CN201910093041.2A CN201910093041A CN109824721A CN 109824721 A CN109824721 A CN 109824721A CN 201910093041 A CN201910093041 A CN 201910093041A CN 109824721 A CN109824721 A CN 109824721A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dimethoxy
- ethyl
- alkylol
- preparation
- nitrobenzophenone
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
本发明提出一种含硫亚磷酰亚胺酯、其制备方法及其应用，属于化学合成技术领域，能够解决现有光响应核酸端基巯基化试剂合成时操作繁琐、反应不温和且效率差的技术问题。该技术方案提供的含硫亚磷酰亚胺酯如式(I)所示：其中，n值的范围为1‑15。本发明能够应用于光响应核酸端基巯基化试剂的制备中。
Description
技术领域
本发明属于化学合成技术领域，尤其涉及一种含硫亚磷酰亚胺酯、其制备方法及其应用。
背景技术
巯基修饰的核酸(DNA、RNA及其他各种人工核酸)在生物探针制备、生物材料设计、化学生物学以及分子生物学中均具有重要的意义。随着核酸合成技术的成熟及核酸自动合成仪的商业化，人们开发出了多种可用于核酸端基修饰的巯基化试剂，实现了端基含硫核酸的规模化制备。
由于固相合成中巯基不能裸露，因此人们需要对巯基进行保护，目前硫醇修饰的端基化试剂多采用三苯甲基(Trit)或4,4-二甲氧基三苯甲基(DMT) 保护巯基，该类试剂在使用过程中需要使用三氟乙酸或者三氯乙酸等强有机酸脱除保护基。然而，三氟乙酸和三氯乙酸均具有较强的酸性和腐蚀性，极易切除核酸中嘌呤和糖苷之间的化学键，造成核酸序列的脱嘌呤现象，增加了核酸纯化难度和纯化成本。为避免使用强腐蚀性试剂，简化操作流程，降低操作成本，本领域技术人员希望开发含有可以温和脱除保护基的核酸修饰单元，来弥补现有硫醇类端基修饰试剂的缺陷。
发明内容
本发明提出一种含硫亚磷酰亚胺酯、其制备方法及其应用,解决了现有光响应核酸端基巯基化试剂合成时操作繁琐、反应不温和且效率差的技术问题。
为了达到上述目的，本发明提供了一种含硫亚磷酰亚胺酯，具有如式(I) 所示的结构式：
其中，n值的范围为1-15。
本发明还提供了一种如上技术方案所述的含硫亚磷酰亚胺酯的制备方法，包括以下步骤：
以n-巯基-1-烷基醇为起始原料，将其与4,5-二甲氧基-2-硝基苯基- 乙基氯在有机碱的作用下反应生成n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚 -1-烷基醇，随后将其与2-O-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺在有机碱的作用下反应生成n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O-氰乙基-N, N-二异丙基亚磷酰胺烷基醇酯)，得到含硫亚磷酰亚胺酯。
作为优选，4,5-二甲氧基-2-硝基苯基-乙基氯的制备步骤如下：
将六水合三氯化铁分散于乙醇中，冰浴搅拌下一次性加入粉末状活性炭，升至室温下充分搅拌，随后加入35％水合肼和4,5-二甲氧基-2-硝基苯乙酮，将反应液于室温下充分搅拌后滴加1M盐酸溶液，滤除不溶物后将滤液浓缩并重新溶于乙酸乙酯中，加入饱和食盐水洗涤，分出有机相、无水硫酸钠干燥后，旋转蒸发有机相，得到(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙醇；
将所得(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙醇溶于氯仿中，冰浴搅拌下滴加二氯亚砜，室温下充分搅拌后加热回流，旋蒸除去溶剂，得到4,5-二甲氧基 -2-硝基苯基-乙基氯的油状液体。
作为优选，加入的六水合三氯化铁、活性炭和4,5-二甲氧基-2-硝基苯乙酮的质量比为1:20:80，溶于乙醇中的六水合三氯化铁的浓度为0.25mg/mL, 加入的乙醇和35％水合肼的体积比为20:1。
作为优选，以n-巯基-1-烷基醇为起始原料，将其与4,5-二甲氧基-2- 硝基苯基-乙基氯在有机碱的作用下反应生成n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇的具体步骤如下：
将n-巯基-1-烷基醇和三丁胺溶于氯仿中，冰浴搅拌下滴加(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基氯体系中，充分搅拌下，加入饱和碳酸氢钠水溶液，充分搅拌，分离出有机相，再向其中加入饱和氯化铵水溶液，继续搅拌，分出有机相后无水硫酸钠干燥，得到粗产品，然后将粗产品经硅藻土过滤，得到n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇。
作为优选，加入的n-巯基-1-烷基醇、三丁胺和(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基氯的质量比为3:5:5。
作为优选，将n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇与 2-O-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺在有机碱的作用下反应生成n-(4, 5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O-氰乙基-N,N-二异丙基亚磷酰胺烷基醇酯)的具体步骤如下：
将n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇和无水三乙胺溶于无水四氢呋喃中，冰浴搅拌下滴加2-O-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺，反应于冰浴下搅拌1小时后于室温下再继续搅拌2小时，滤除不溶物，滤液用饱和碳酸钠溶液洗涤，将有机相用无水硫酸钠干燥后，得到n-(4,5- 二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O-氰乙基-N,N-二异丙基亚磷酰胺烷基醇酯)。
作为优选，加入的n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇、无水三乙胺和2-O-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺的质量比为5:3:4。
本发明还提供了一种利用如上技术方案所述的含硫亚磷酰亚胺酯制备含有光敏单元的核酸在核酸端基修饰中的应用。
与现有技术相比，本发明的优点和积极效果在于：
本发明以n-巯基-1-烷基醇为原料，以(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)乙基作为光可降解单元，经过醚化和酯化等多步合成操作得到一类含有光可降解基团的亚磷酰亚胺酯化合物。该方法路线简明，操作便捷，中间体及产物的纯化方式简单，可以实现高效大量制备目标产物，为核酸的5’端巯基修饰提供了一种成本可控，简单高效的亚磷酰亚胺酯试剂合成方法。
制备得到的含硫亚磷酰亚胺酯试剂对核酸合成中的各种试剂都有较好的化学耐受性，同时对紫外光照敏感，可在较短时间内以较高效率脱除，可在室温下稳定存在，表现出了良好的化学稳定性和光响应性，可直接用于多种核酸固相合成仪上，具有良好的普适性和稳定性。同时修饰巯基后的核酸序列可在紫外光照射下以很高的效率脱除保护基，释放出高活性的巯基，为核酸端基修饰提供了新的选择。
附图说明
图1为本发明实施例提供的含硫亚磷酰亚胺酯的核磁共振氢谱图；
图2为本发明实施例提供的含硫亚磷酰亚胺酯的核磁共振碳谱图；
图3为本发明实施例提供的含硫亚磷酰亚胺酯的质谱图；
图4为本发明实施例提供的含有光敏单元的核酸的核磁共振氢谱图；
图5为本发明实施例提供的含有光敏单元的核酸的核磁共振碳谱图；
图6为本发明实施例提供的含有光敏单元的核酸的质谱图；
图7为本发明含有光敏单元的核酸光照前后以及对照核酸的不同核酸序列的HPLC谱图；
图8为本发明含有光敏单元的核酸光照前的质谱图；
图9为本发明含有光敏单元的核酸光照后的质谱图；
图10为本发明不含有光敏单元的对照核酸的质谱图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例提供了一种含硫亚磷酰亚胺酯，具有如式(I)所示的结构式：
其中，n值的范围为1-15。
本发明实施例还提供了一种如上实施例所述的含硫亚磷酰亚胺酯的制备方法，包括以下步骤：
以n-巯基-1-烷基醇为起始原料，将其与4,5-二甲氧基-2-硝基苯基- 乙基氯在有机碱的作用下反应生成n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚 -1-烷基醇，随后将其与2-O-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺在有机碱的作用下反应生成n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O-氰乙基-N, N-二异丙基亚磷酰胺烷基醇酯)，得到含硫亚磷酰亚胺酯。
上述实施例提供的制备方法通过简单的醚化和酯化等标准的有机单元反应即可制备n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O-氰乙基-N,N- 二异丙基亚磷酰胺烷基醇酯)，反应操作不涉及强酸、强碱、强氧化剂及强还原剂的使用，最终产物具有良好的化学稳定性，可直接用于核酸自动合成仪上，极大简化了核酸末端巯基化的操作。需要说明的是，n的取值范围为1-15 范围内的正整数，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14等。
在一优选实施例中，4,5-二甲氧基-2-硝基苯基-乙基氯的制备步骤如下：
将六水合三氯化铁分散于乙醇中，冰浴搅拌下一次性加入粉末状活性炭，升至室温下充分搅拌，随后加入35％水合肼和4,5-二甲氧基-2-硝基苯乙酮，将反应液于室温下充分搅拌后滴加1M盐酸溶液，滤除不溶物后将滤液浓缩并重新溶于乙酸乙酯中，加入饱和食盐水洗涤，分出有机相、无水硫酸钠干燥后，旋转蒸发有机相，得到(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙醇；
将所得(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙醇溶于氯仿中，冰浴搅拌下滴加二氯亚砜，室温下充分搅拌后于70℃加热回流，旋蒸除去溶剂，得到4,5- 二甲氧基-2-硝基苯基-乙基氯的油状液体。
上述实施例中以4,5-二甲氧基-2-硝基苯乙酮为原料，经由两步反应得到4,5-二甲氧基-2-硝基苯基-乙基氯，从而对后续操作中的n-巯基-1-烷基醇进行醚化保护，上述反应中选择在冰浴条件下分别加入粉末状活性炭来增强三氯化铁催化水合肼的还原能力，同时避免生成泥装铁盐沉淀，简化后续操作步骤；低温下加入二氯亚砜可使得羟基高效转化为相应氯化物，同时避免复杂的后处理和纯化过程。需要说明的是，本实施例得到的4,5-二甲氧基 -2-硝基苯基-乙基氯可不经纯化直接用于下一步反应中。
在一优选实施例中，加入的六水合三氯化铁、活性炭和4,5-二甲氧基 -2-硝基苯乙酮的质量比为1:20:80，溶于乙醇中的六水合三氯化铁的浓度为 0.25mg/mL,加入的乙醇和35％水合肼的体积比为20:1。本实施例中对上述反应中的具体参数条件进行了限定，目的在于通过参数限定可准确获得所预期制备得到的中间产物。
在一优选实施例中，以n-巯基-1-烷基醇为起始原料，将其与4,5-二甲氧基-2-硝基苯基-乙基氯在有机碱的作用下反应生成n-(4,5-二甲氧基-2- 硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇的具体步骤如下：
将n-巯基-1-烷基醇和三丁胺溶于氯仿中，冰浴搅拌下滴加(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基氯体系中，充分搅拌下，加入饱和碳酸氢钠水溶液，充分搅拌，分离出有机相，再向其中加入饱和氯化铵水溶液，继续搅拌，分出有机相后无水硫酸钠干燥，得到粗产品，然后将粗产品经硅藻土过滤，得到n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇。
上述实施例给出了4,5-二甲氧基-2-硝基苯基-乙基氯在有机碱作用下对n-巯基-1-烷基醇的醚化保护，基于在一优选实施例中，加入的n-巯基-1- 烷基醇、三丁胺和(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基氯的质量比为3:5:5这一参数限定以及冰浴条件下加入中间产物，可避免(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基氯再较高温度下可能导致的分解，有助于简化后续的纯化步骤，降低操作成本。需要说明的是，本实施例中所使用的有机碱优选为三丁胺，当然，如果操作允许，本领域技术人员可对有机碱进行合理替换。
在一优选实施例中，将n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇与2-氰乙基-O-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺在有机碱的作用下反应生成 n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O-氰乙基-N,N-二异丙基亚磷酰胺烷基醇酯)的具体步骤如下：
将n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇和无水三乙胺溶于无水四氢呋喃中，冰浴搅拌下滴加2-O-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺，反应于冰浴下搅拌1小时后于室温下再继续搅拌2小时，滤除不溶物，滤液用饱和碳酸钠溶液洗涤，将有机相用无水硫酸钠干燥后，得到n-(4,5- 二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O-氰乙基-N,N-二异丙基亚磷酰胺烷基醇酯)。
上述实施例中列出了利用n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1- 烷基醇在有机碱作用下通过与2-O-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺发生酯化反应，该反应条件温和，基于在一优选实施例中，加入的n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇、无水三乙胺和2-O-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺的质量比为5:3:4这一参数限定以及反应条件限定，可准确得到目标产物。该反应后处理几乎不产生废弃物，可直接用于核酸合成仪，并且可以在低功率紫外光照下实现良好的保护基脱除，具有良好的商业化前景。
上述实施例制备n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O-氰乙基-N,N-二异丙基亚磷酰胺烷基醇酯)的反应流程示意如下：
本发明实施例还提供了一种利用如上实施例所述的含硫亚磷酰亚胺酯制备含有光敏单元的核酸在核酸端基修饰中的应用。
上述实施例中提供的应用具体为利用含硫亚磷酰亚胺酯制备含有光敏单元的核酸方法，该方法具体为：
取上述含硫亚磷酰亚胺酯溶于无水乙腈作为端基修饰位试剂与核酸合成，得到合成中间产物；
取合成中间产物经分散于甲氨水溶液中，55-75℃下密闭加热后，离心除去不溶物，取溶液经浓缩处理，得到含有光敏单元的核酸。
上述制备含有光敏单元的核酸的反应流程示意为：
为了更清楚详细地介绍本发明实施例所提供的含硫亚磷酰亚胺酯、其制备方法及其应用，下面将结合具体实施例进行描述。
实施例1
含硫亚磷酰亚胺酯的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：制备4,5-二甲氧基-2-硝基苯基-乙基氯
50毫克六水合三氯化铁分散于200毫升乙醇中，冰浴搅拌下一次性加入 1.0克粉末状活性炭，升至室温下搅拌2小时。随后加入10毫升35％水合肼和 4.0克4,5-二甲氧基-2-硝基苯乙酮，反应液在室温下搅拌1小时后向其中滴加20毫升1M盐酸溶液，滤除不溶物。滤液浓缩后重新溶于50毫升乙酸乙酯中，加入200毫升饱和食盐水洗涤，分出有机相，无水硫酸钠干燥。旋转蒸发有机相，得到4.0克(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙醇(淡黄色固体)，收率96％；
将4.0克(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙醇溶于50毫升氯仿中，冰浴搅拌下滴加2.4克二氯亚砜，室温下搅拌1小时后加热回流2小时，旋蒸除去溶剂，剩余油状液体不经纯化可直接用于下一步反应。
步骤二：制备n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇
2.4克6-巯基-1-己醇和4.0克三丁胺溶于50毫升氯仿中，冰浴搅拌下滴加4.0克(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基氯于20毫升氯仿中的溶液，搅拌 12小时。向体系中加入300毫升饱和碳酸氢钠水溶液，搅拌1小时。分离出有机相，再向其中加入100毫升饱和氯化铵水溶液，继续搅拌1小时，分出有机相后无水硫酸钠干燥。粗产品经硅藻土过滤(1厘米厚)，滤液浓缩结晶即可得到 3.1克淡黄色粉末状固体，收率50％。
步骤三：制备n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O-氰乙基 -N,N-二异丙基亚磷酰胺烷基醇酯)
2.5克6-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-己醇和1.5克无水三乙胺溶于50毫升无水四氢呋喃中，冰浴搅拌下滴加2.1克2-O-氰乙基-N,N- 二异丙基氯代亚磷酰胺。反应于冰浴下搅拌1小时候再于室温下继续搅拌2小时，滤除不溶物，滤液以饱和碳酸钠溶液洗涤。有机相无水硫酸钠干燥。得到 6-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O-氰乙基-N,N-二异丙基亚磷酰胺己醇酯)，2.7克，收率66％。
上述制备的含硫亚磷酰亚胺酯，即上述式(I)化合物的核磁共振氢谱检测结果如图1所示：
1H-NMR(CDCl3,400MHz):δ＝1.22-1.47(m,CH2,8H),1.53-1.58 (m,CH3,3H),2.18-2.34(m,CH2,2H),3.54-3.58(m,CH2O,2H),3.89 (s,CH3O,1H)，3.95(s,CH3O,2H)，4.82-4.85(m,CH,1H),7.31(s, ArH,1H),7.41(s,ArH,1H).
上述制备的含硫亚磷酰亚胺酯，即上述式(I)化合物的核磁共振碳谱检测结果如图2所示：
13C-NMR(CDCl3,100MHz):δ＝23.23,25.29,28.60,29.24, 31.80,32.60,38.65,52.50,62.90,107.22,110.53,134.56,141.56, 147.57,151.36.
上述制备的含硫亚磷酰亚胺酯，即上述式(I)化合物的质谱检测结果如图3所示：
ESI-MS:C16H25NO5S,calc343.1453,found 382.1278(M+K+), 383.1366(M+K++H+)。
实施例2
含有光敏单元的核酸的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：取700毫克6-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O- 氰乙基-N,N-二异丙基亚磷酰胺己醇酯)溶于10毫升无水乙腈中，氮气保护下转移至ABI 394核酸合成仪的端基修饰位试剂瓶中。输入核酸序列：5’CCT AGA TTC AGT TCA ACT TA 3’，采用DMT保留的合成模式，执行1μmol量级的合成。
步骤二：合成完毕后将固相载体取出，分散在1毫升5％-32％甲氨水溶液中， 55-75℃下密闭加热1-4小时，离心去除不溶物，溶液浓缩即得到粗产物。
目标产物通过高效液相色谱分离，并通过MALDI-TOF进行结构信息表征。
上述制备的含有光敏单元的核酸的核磁共振氢谱检测结果如图4所示：
1H-NMR(CDCl3,400MHz):δ＝1.22-1.47(m,CH2+CH3,14H), 1.53-1.58(m,CH3,3H),2.18-2.34(m,CH2,2H),2.67-2.76(m, CH2CN,2H),3.19-3.52(m,CH2OP,2H),3.54-3.58(m,CH2O,2H), 3.89(s,CH3O,1H)，3.95-4.10(m,CH,2H),3.95(s,CH3O,2H)， 4.82-4.85(m,CH,1H),7.31(s,ArH,1H),7.41(s,ArH,1H).
上述制备的含有光敏单元的核酸的核磁共振碳谱检测结果如图5所示：
13C-NMR(CDCl3,100MHz):δ＝19.37,20.05,22.96,23.21, 25.57,28.66,29.13,30.16,31.66,38.50,45.35,46.29,56.50,58.19, 59.92,60.44,63.61,66.24,107.22,110.49,116.97,134.41,137.41, 141.56,147.59,153.35.
上述制备的含有光敏单元的核酸的质谱检测结果如图6所示：
ESI-MS:C25H42N3O6PS,calc543.2532,found 562.2545 (M+H++NH4 +),566.2207(M+Na+)。
含有光敏单元的核酸的光敏性检测试验：
试验方法：将按照实施例2的方法获取到含有光敏单元的核酸序列溶解在0.01-0.1M、pH 4.8-8.5的磷酸钠缓冲溶液中，配制成1-500μM的浓度，置于离心管中。采用中教金源公司CEL-HXF300型氙灯，加装350-380nm滤光片，光功率密度为20mW/cm2，照射时间2分钟后，分别检测含有光敏单元的核酸光照射前后(其DNA序列依次如SEQ ID No.1和SEQ IDNo.2所示)，以及以未进行端基修饰的核酸(其序列如SEQ ID No.3所示)的质谱(如图8-10所示)和HPLC谱图(如图7所示)。
含有光敏单元的核酸光解过程如下：
计算上述三组中分子量，数据结果如表1所示：
表1分子量数据结果
上述内容中，有机分子的结构和纯度均由核磁共振氢谱(1H-NMR)、碳谱 (13C-NMR)和电喷雾电离(ESI-MS)来确定，脱氧核糖核酸的结构信息及光降解过程由基质辅助激光电离解析-飞行时间质谱(MALDI-TOF)来确定，反应效率由高效液相色谱(HPLC)来确定。
核磁型号为Bruker AMX 400 Spectrometer(400MHz)，所用溶剂为氘代二甲亚砜(CDCl3)，带TMS内标；ESI质谱型号为Agilent 6510Q-TOF，检测模式为阴离子模式；MALDI-TOF质谱型号为Shimadazu Biotech Axima Performance，检测模式为阴离子模式；高效液相色谱型号为Waters 2695，检测柱型号为XBriage Oligonucleotides BEH C18(2.1mm×50mm；Column 2.5μm)，淋洗条件如表2所示：
表2淋洗条件
试验结果：
如图7所示，含有光敏单元的核酸光照前、后及对照核酸的HPLC谱图中，其出峰时间依次为20.29分钟、8.87分钟和11.44分钟。
Claims (9)
1.含硫亚磷酰亚胺酯，其特征在于，具有如式(I)所示的结构式：
其中，n值的范围为1-15。
2.根据权利要求1所述的含硫亚磷酰亚胺酯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
以n-巯基-1-烷基醇为起始原料，将其与4,5-二甲氧基-2-硝基苯基-乙基氯在有机碱的作用下反应生成n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇，随后将其与2-O-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺在有机碱的作用下反应生成n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O-氰乙基-N,N-二异丙基亚磷酰胺烷基醇酯)，得到含硫亚磷酰亚胺酯。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，4,5-二甲氧基-2-硝基苯基-乙基氯的制备步骤如下：
将六水合三氯化铁分散于乙醇中，冰浴搅拌下一次性加入粉末状活性炭，升至室温下充分搅拌，随后加入35％水合肼和4,5-二甲氧基-2-硝基苯乙酮，将反应液于室温下充分搅拌后滴加1M盐酸溶液，滤除不溶物后将滤液浓缩并重新溶于乙酸乙酯中，加入饱和食盐水洗涤，分出有机相、无水硫酸钠干燥后，旋转蒸发有机相，得到(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙醇；
将所得(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙醇溶于氯仿中，冰浴搅拌下滴加二氯亚砜，室温下充分搅拌后加热回流，旋蒸除去溶剂，得到4,5-二甲氧基-2-硝基苯基-乙基氯的油状液体。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，加入的六水合三氯化铁、活性炭和4,5-二甲氧基-2-硝基苯乙酮的质量比为1:20:80，溶于乙醇中的六水合三氯化铁的浓度为0.25mg/mL,加入的乙醇和35％水合肼的体积比为20:1。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，以n-巯基-1-烷基醇为起始原料，将其与4,5-二甲氧基-2-硝基苯基-乙基氯在有机碱的作用下反应生成n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇的具体步骤如下：
将n-巯基-1-烷基醇和三丁胺溶于氯仿中，冰浴搅拌下滴加(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基氯体系中，充分搅拌下，加入饱和碳酸氢钠水溶液，充分搅拌，分离出有机相，再向其中加入饱和氯化铵水溶液，继续搅拌，分出有机相后无水硫酸钠干燥，得到粗产品，然后将粗产品经硅藻土过滤，得到n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，加入的n-巯基-1-烷基醇、三丁胺和(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基氯的质量比为3:5:5。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，将n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇与2-O-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺在有机碱的作用下反应生成n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O-氰乙基-N,N-二异丙基亚磷酰胺烷基醇酯)的具体步骤如下：
将n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇和无水三乙胺溶于无水四氢呋喃中，冰浴搅拌下滴加2-O-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺，反应于冰浴下搅拌1小时后于室温下再继续搅拌2小时，滤除不溶物，滤液用饱和碳酸钠溶液洗涤，将有机相用无水硫酸钠干燥后，得到n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-(2-O-氰乙基-N,N-二异丙基亚磷酰胺烷基醇酯)。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，加入的n-(4,5-二甲氧基-2-硝基苯基)-乙基硫醚-1-烷基醇、无水三乙胺和2-O-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺的质量比为5:3:4。
9.利用根据权利要求1所述的含硫亚磷酰亚胺酯制备含有光敏单元的核酸在核酸端基修饰中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910093041.2A CN109824721A (zh) | 2019-01-30 | 2019-01-30 | 含硫亚磷酰亚胺酯、其制备方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910093041.2A CN109824721A (zh) | 2019-01-30 | 2019-01-30 | 含硫亚磷酰亚胺酯、其制备方法及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109824721A true CN109824721A (zh) | 2019-05-31 |
Family
ID=66863093
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910093041.2A Pending CN109824721A (zh) | 2019-01-30 | 2019-01-30 | 含硫亚磷酰亚胺酯、其制备方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109824721A (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100081140A1 (en) * | 2008-08-08 | 2010-04-01 | President And Fellows Of Harvard College | Chemically cleavable phosphoramidite linkers for sequencing by ligation |
| CN102898464A (zh) * | 2012-05-23 | 2013-01-30 | 北京大学 | 光敏感基团保护的功能基团亚磷酰胺及其制备方法和应用 |
| CN105693772A (zh) * | 2016-02-24 | 2016-06-22 | 中国石油大学(华东) | 一种化合物及其在dna端基修饰中的应用 |
| CN107674094A (zh) * | 2017-09-18 | 2018-02-09 | 中国石油大学(华东) | 一种亚磷酰胺硫辛醇酯及其合成方法和用途 |
| CN107698641A (zh) * | 2017-09-18 | 2018-02-16 | 中国石油大学(华东) | 一种端基含硫修饰的dna及其制备方法 |
| CN109879922A (zh) * | 2019-01-30 | 2019-06-14 | 中国石油大学(华东) | 含有光敏单元的核酸、其制备方法及其应用 |
-
2019
- 2019-01-30 CN CN201910093041.2A patent/CN109824721A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100081140A1 (en) * | 2008-08-08 | 2010-04-01 | President And Fellows Of Harvard College | Chemically cleavable phosphoramidite linkers for sequencing by ligation |
| CN102898464A (zh) * | 2012-05-23 | 2013-01-30 | 北京大学 | 光敏感基团保护的功能基团亚磷酰胺及其制备方法和应用 |
| CN105693772A (zh) * | 2016-02-24 | 2016-06-22 | 中国石油大学(华东) | 一种化合物及其在dna端基修饰中的应用 |
| CN107674094A (zh) * | 2017-09-18 | 2018-02-09 | 中国石油大学(华东) | 一种亚磷酰胺硫辛醇酯及其合成方法和用途 |
| CN107698641A (zh) * | 2017-09-18 | 2018-02-16 | 中国石油大学(华东) | 一种端基含硫修饰的dna及其制备方法 |
| CN109879922A (zh) * | 2019-01-30 | 2019-06-14 | 中国石油大学(华东) | 含有光敏单元的核酸、其制备方法及其应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| W REN. ET AL: ""Light Activation of Protein Splicing with a Photocaged Fast Intein"", 《J. AM. CHEM. SOC》 * |
| 安秋凤等: "《橡塑加工助剂》", 31 July 2004, 化学工业出版社 * |
| 张铸勇: "《精细有机合成单元反应》", 31 August 2003, 华东理工大学出版社 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Haralambidis et al. | Preparation of base-modified nucleosides suitable for non-radioactive label attachment and their incorporation into synthetic oligodeoxyribonucleotides | |
| EP0438203B1 (fr) | Dérivés de nucléosides et leur utilisation pour la synthèse d'oligonucléotides | |
| Murov et al. | Mechanisms of photochemical reactions in solution. LIV. A new mechanism of photosensitization | |
| CN110092773B (zh) | 一种氧杂蒽类衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN106279340A (zh) | 一种合成糠酸莫米松或其一水合物的方法 | |
| CN109232626A (zh) | 一种基于二氟硼氧基香豆素的so2比率型荧光探针 | |
| CN109879922A (zh) | 含有光敏单元的核酸、其制备方法及其应用 | |
| CN113512068B (zh) | 一种双配体的亚硝酰钌配合物及其制备方法和应用 | |
| CN108610360B (zh) | 亚磷酰胺酯及其制备方法和用途 | |
| CN109824721A (zh) | 含硫亚磷酰亚胺酯、其制备方法及其应用 | |
| CN106674038A (zh) | 一种合成和纯化玛咖酰胺的方法 | |
| CN107474091B (zh) | 光敏保护基保护的5-醛基胞嘧啶亚磷酰胺单体及其制备方法和寡聚核苷酸的合成和应用 | |
| CN107674094A (zh) | 一种亚磷酰胺硫辛醇酯及其合成方法和用途 | |
| CN108484708B (zh) | 含有光敏单元的核酸及其制备方法 | |
| CN108794489B (zh) | 一种衍生化试剂及其制备方法与应用 | |
| Pasternak et al. | Photoligation of self-assembled DNA constructs containing anthracene-functionalized 2′-amino-LNA monomers | |
| CN107698641B (zh) | 一种端基含硫修饰的dna及其制备方法 | |
| CN113735752B (zh) | 一种基于取代碘苯制备异硫脲化合物的方法 | |
| CN115850357A (zh) | 一种荧光开启型核苷及其制备方法和应用 | |
| CN109970832A (zh) | 一种炔基修饰的脱氧腺苷亚磷酰胺单体及其制备方法 | |
| CN109810141B (zh) | 含硫亚磷酰亚胺酯、其制备方法及其应用 | |
| CN109762041A (zh) | 含有光敏单元的核酸、其制备方法及其应用 | |
| CN108117587B (zh) | 光敏肽核酸单体及其合成方法 | |
| Husain et al. | Synthesis of photoaffinity labeling derivatives of d-glucose and d-galactose | |
| CN107698612B (zh) | 一种鸟嘌呤荧光探针及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190531 |