CN109810198A - 利用免疫球蛋白片段的位点特异性glp-2缀合物 - Google Patents

利用免疫球蛋白片段的位点特异性glp-2缀合物 Download PDF

Info

Publication number
CN109810198A
CN109810198A CN201910158317.0A CN201910158317A CN109810198A CN 109810198 A CN109810198 A CN 109810198A CN 201910158317 A CN201910158317 A CN 201910158317A CN 109810198 A CN109810198 A CN 109810198A
Authority
CN
China
Prior art keywords
glp
immunoglobulin
derivative
conjugate
segments
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910158317.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109810198B (zh
Inventor
金承洙
林世荣
郑圣烨
权世昌
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hanmi Holdings Co Ltd
Original Assignee
Hanmi Holdings Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hanmi Holdings Co Ltd filed Critical Hanmi Holdings Co Ltd
Priority to CN201910158317.0A priority Critical patent/CN109810198B/zh
Publication of CN109810198A publication Critical patent/CN109810198A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109810198B publication Critical patent/CN109810198B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明涉及利用免疫球蛋白片段的位点特异性GLP‑2缀合物。本发明涉及胰高血糖素‑样肽‑2(GLP‑2)缀合物，其包括经非肽基聚合物共价连接的天然GLP‑2或其衍生物和免疫球蛋白Fc片段，其中天然GLP‑2或其衍生物具有在其C‑末端引入的巯基基团，并且非肽基聚合物的一端连接至GLP‑2的氨基酸残基而不是其N‑末端氨基基团；用于制备GLP‑2缀合物的方法；包括其的药学组合物；和通过使用其用于治疗或预防肠道疾病、肠道损伤或胃病的方法。因为本发明的GLP‑2缀合物具有针对GLP‑2受体显著增加的结合亲和力，所以其显示延长的体内半衰期和改进的体内持久性和稳定性。

Description

利用免疫球蛋白片段的位点特异性GLP-2缀合物
本申请是分案申请，原申请的申请日为2012年12月28日，申请号为201280071002.9，发明名称为“利用免疫球蛋白片段的位点特异性GLP-2缀合物”。
技术领域
本发明涉及胰高血糖素-样肽-2(GLP-2)缀合物，其中在其C-末端具有引入的巯基基团的GLP-2或其衍生物通过非肽基聚合物共价连接至免疫球蛋白Fc片段，其中非肽基聚合物和免疫球蛋白Fc片段位点-特异性地连接至GLP-2或其衍生物的氨基酸残基而不是其N-末端氨基基团；用于制备GLP-2缀合物的方法；包括其的药学组合物；和通过使用其治疗或预防肠道疾病、肠道损伤或胃病的方法。
背景技术
胰高血糖素-样肽-2(GLP-2)是33个氨基酸的肽激素，其在养分摄取时由肠道内分泌L细胞产生。GPL-2刺激小肠和大肠中的粘膜生长(DG Burrin等，Am J PhysiolGastrointest Liver Physiol 279(6):G1249-1256，2000)并且抑制肠道细胞和隐窝细胞的细胞凋亡(Bernardo Yusta等，Gastrpenterology 137(3)：986-996，2009)。此外，GLP-2增强小肠中养分的吸收(PALLE BJ等，Gastrpenterology 120：806-815，2001)并且降低肠道通透性(Cameron HL等，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 284(6)：G905-12，2003)。另外，GLP-2抑制胃排空和胃酸分泌(Meier JJ等，Gastrpenterology 130(1)：44-54，2006)，同时增加肠道血液流速(Bremholm L等，Scand J Gastroenterol.44(3)：314-9，2009)和松弛肠道平滑肌(Amato A等，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.296(3)：G678-84，2009)。
因为GLP-2能够吸收和保持能量并且激活肠道细胞的功能，已经在肠道疾病和损伤的各种体内模型中显示高的治疗潜能。作为调节养分吸收的激素，GLP-2具有很大的希望用于治疗短肠综合症(SBS)的疗法。SBS由先天的原因或后天的原因，比如外科手术去除肠造成，并且导致由于小肠吸收面积下降而引起的营养不足。已经报道GLP-2改善具有SBS的大鼠模型的消化道中养分摄取和吸收(Ljungmann K等，Am J Physiol GastrointestLiver Physiol.281(3)：G779-85，2001)。
此外，克罗恩病是慢性炎症肠道疾病，其可在消化道从口至肛门范围的任何区域产生。至今不知道克罗恩病的原因，但是认为是由于身体对消化道中正常存在的细菌细胞过度的炎症反应以及环境和遗传原因引起的。已知GLP-2可防止或减轻当由于化疗或遗传原因发展粘膜炎、结肠炎或炎症肠道疾病时粘膜上皮细胞的伤害(Qiang Xiao等，Am JPhysiol Regul Integr Comp Physiol.278(4)：R1057-R1063，2000)。
化学疗法诱导的腹泻(CID)是限制抗癌剂剂量的因素之一并且是抗癌化学疗法的最常见副作用。大约10％的患者具有晚期癌症。大约80％的具有晚期癌症接受5-FU(5-氟尿嘧啶，Adrucil)/伊立替康(Camptosar)单个/组合疗法的患者经历CID并且他们的大约30％显示3至5级的严重腹泻症状。另外，如果粘膜炎或嗜中性细胞减少症在具有的CID患者中同时发生，有死亡的危险。在CID诱导的大鼠模型中，GLP-2显示减轻由5-FU诱导的肠重量、绒毛高度和隐窝深度减小的影响，从而表明其用于CID治疗的治疗潜能(A.Tavakkolizadeh等，J Surg Res.91(1)：77-82，2000)。
尽管该高的治疗潜能，GLP-2仍具有开发成为商用药物的局限性。肽比如GLP-2可由于低稳定性而容易转化，容易被体内蛋白酶降解并且丧失活性，并且由于它们相对小的尺寸而容易通过肾清除。所以，为了维持肽药物的最佳血液浓度和滴度，需要更频繁施用肽药物。但是，大部分肽药物以各种类型的注射施用，并且需要频繁的注射以维持肽药物的血液浓度，其造成患者的严重疼痛。在这点上，已经进行许多尝试以解决这些问题，其中之一已经开发了增加肽药物的膜通透性的方法，其使得肽药物通过口服或鼻途径递送至身体。但是该方法与其注射相比具有低肽药物递送效率的局限性，并且因此仍难以保持足够的用于治疗用途的肽药物的生物活性。
尤其，GLP-2具有非常短的体内半衰期(7分钟或更短)，原因在于其被二肽基肽酶-IV(DPP IV)失活，所述二肽基肽酶-IV在GLP-2的2位(Ala)和3位(Asp)氨基酸之间切割(Bolette H.等，The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism.85(8)：2884-2888，2000)。已经尝试通过氨基酸替代增加GLP-2的体内半衰期。
目前，NPS药物公司(美国)正在开发GLP-2类似物“Teduglutide”，作为用于克罗恩病、SBS和胃肠道疾病的治疗剂，其中在天然GLP-2的2位氨基酸(Ala)被天冬酰胺(Asp)替代。通过在2位氨基酸的替代Teduglutide抵抗DPPIV的切割，其反过来增加稳定性和效力。但是，因为对DPPIV切割的抵抗力的增加不足以延长Teduglutide的体内半衰期。因此，Teduglutide也需要通过注射每天施用一次，其对患者仍是大的负担(WO 2005/067368)。
Zealand Pharma(丹麦)目前正通过替代在天然GLP-2的3、8、16、24、28、31、32和33位的一个或多个氨基酸来开发GLP-2类似物。这些替代不仅仅增强肽的稳定性和效力，而且也允许通过根据替代的位置使得小肠中相对于结肠中的生长促进活性更高而选择性治疗症状或反之亦然。另外，Zealand Pharma正在开发作为GLP-2类似物的Elsiglutide(ZP1846)，其靶向胃肠道(GI)-粘膜炎和CID，并且Elsiglutide正在进行I期临床试验。但是，上述类似物也不具有足够的体内半衰期，并且因此其需要通过每天注射一次施用(WO2006/117565)。
聚乙二醇(PEG)非特异性结合靶肽的特异性位点或不同位点并且增加其分子量，从而预防靶肽的肾清除和水解，而不产生任何副作用。例如，美国专利号4,179,337描述了用PEG连接降钙素，以增强降钙素的体内半衰期和膜通透性的方法。WO 2006/076471描述了通过连接PEG用于增加已经用作充血性心力衰竭的治疗剂的B-型利钠肽(BNP)体内半衰期的方法。另外，美国专利号6,924,264公开了通过用其赖氨酸残基连接PEG增加艾塞那肽-4(exendin-4)体内半衰期的方法。尽管这些方法可通过增加待与其连接的PEG的分子量延长肽药物的体内半衰期，但是有许多问题，在于随着PEG的分子量增加，肽药物的滴度下降并且PEG与肽药物的反应性也降低，导致产率下降。
WO 02/46227描述了制备GLP-1、艾塞那肽-4(exendin-4)或其类似物与人血清白蛋白或免疫球蛋白Fc区的融合蛋白的方法。美国专利号6,756,480也描述了制备甲状旁腺激素(PTH)或其类似物与免疫球蛋白Fc区的融合蛋白的方法。这些方法可克服聚乙二醇化的问题比如低产率和非特异性，但是增加药物肽体内半衰期的作用不如预期的显著，并且有时其滴度也仍然低。为了使增加药物肽体内半衰期的作用最大化，可使用各种肽接头，但是有诱导免疫应答的风险。此外，如果使用具有二硫键的肽药物比如BNP，则错折叠的可能性很大。最后，如果使用包括非天然存在的氨基酸的肽药物，则不可能通过遗传重组产生其融合蛋白。
在之前的研究中，本发明人已经开发了制备具有延长的体内半衰期的GLP-2缀合物的方法，其中GLP-2缀合物通过经非肽基聚合物共价连接GLP-2或其衍生物至免疫球蛋白Fc片段制备。在该方法中，GLP-2衍生物，比如β-羟基-咪唑并-丙酰基GLP-2，其中GLP-2的N-末端氨基用羟基替代；脱-氨基-组氨酰GLP-2，其中其N-末端氨基缺失；和咪唑并-乙酰-GLP-2，其中第一个组氨酸的α碳和与其连接的N-末端氨基缺失，显示对DPPIV切割增加的抗性同时保持它们生物活性并且因此GLP-2缀合物的体内半衰期显著增加。
但是，在免疫球蛋白Fc片段位点-特异性地连接至这些GLP-2衍生物的赖氨酸残基的情况下，因此获得的GLP-2缀合物显示对GLP-2受体显著降低的结合亲和力并且因此具有体内效力和其持久性将下降的问题。
就此研究可增加血液中GLP-2体内半衰期和最大化体内效力持久性的方法而言，本发明人已经通过共价连接将在其C-末端引入巯基基团的GLP-2衍生物缀合至非肽基聚合物和免疫球蛋白Fc片段而开发了GLP-2缀合物，并且发现GLP-2缀合物展示对GLP-2受体增加的结合亲和力和显著增加的体内效力持久性。尤其，已经发现当非肽基聚合物和免疫球蛋白Fc片段位点-特异性地连接至被引入其中第一个组氨酸的α-碳和与其连接的N-末端氨基缺失的咪唑并-乙酰-GLP-2的C-末端的半胱氨酸残基时，导致对DPPIV抗性的增加，咪唑并-乙酰-GLP-2缀合物的体外效力显著增加。
发明内容
技术问题
因此，本发明的目标是提供具有增强的体内治疗效力和稳定性的GLP-2缀合物。
本发明的另一目标是提供制备GLP-2缀合物的方法。
本发明的仍另一目标是提供药学组合物，其包括GLP-2缀合物作为活性成分，用于预防或治疗肠道疾病、肠道损伤或胃病。
技术方案
在一个方面，本发明提供胰高血糖素-样肽-2(GLP-2)缀合物，其包括经非肽基聚合物共价连接的天然GLP-2或其衍生物和免疫球蛋白Fc片段，其中所述天然GLP-2或其衍生物具有在其C-末端引入的巯基基团，并且非肽基聚合物的一端连接至GLP-2的氨基酸残基而不是其N-末端氨基基团。
在另一方面，本发明提供制备根据本发明的GLP-2缀合物的方法，包括：
1)共价连接在两个末端具有活性基团的非肽基聚合物至GLP-2或其衍生物的氨基或巯基基团，所述活性基团选自醛(aldehyde)、马来酰亚胺和琥珀酰亚胺衍生物，其中所述GLP-2或其衍生物具有在其C-末端引入的巯基基团；
2)从步骤(1)的反应混合物分离复合物，其中非肽基聚合物共价连接至GLP-2或其衍生物的氨基或巯基基团；
3)共价连接复合物中非肽基聚合物的另一末端至免疫球蛋白Fc片段；和
4)从步骤3)的反应混合物分离GLP-2缀合物，其中非肽基聚合物的两个末端分别连接至免疫球蛋白Fc片段和GLP-2或其衍生物。
在仍另一方面，本发明提供药学组合物，其包括根据本发明的GLP-2缀合物作为活性成分，用于预防或治疗选自肠道疾病、肠道损伤和胃病的一种或多种疾病。
在仍又另一方面中，本发明提供用于预防或治疗一种或多种选自肠道疾病、肠道损伤和胃病的疾病的方法，包括施用本发明的GLP-2缀合物至需要其的患者。
本发明的优势效果
本发明的GLP-2缀合物具有对GLP-2受体显著高的结合亲和力，从而显示持久的体内治疗效力和延长的体内半衰期。所以，本发明的GLP-2缀合物可有效用于以显著低的施用频率治疗或预防肠道疾病、肠道损伤或胃病。
附图说明
图1显示通过使用Source Phe柱纯化的CGLP-2(A2G，34C)-10K PEG-免疫球蛋白Fc缀合物的纯化图谱。
图2显示通过使用Source 15Q柱纯化的CGLP-2(A2G，34C)-10K PEG-免疫球蛋白Fc缀合物的纯化图谱。
图3显示通过使用Source ISO柱纯化的CGLP-2(A2G，34C)-10K PEG-免疫球蛋白Fc缀合物的纯化图谱。
图4显示用于分析CAGLP-2(A2G，34C)-10K PEG-免疫球蛋白Fc缀合物纯度的反相HPLC的结果。
图5显示测量对GLP-2衍生物和天然GLP-2的GLP-2受体的结合亲和力的体外结果。
具体实施方式
在本发明的一个方面，本发明提供胰高血糖素-样肽-2(GLP-2)缀合物，其包括通过非肽基聚合物共价连接的GLP-2或其衍生物和免疫球蛋白Fc片段，其中GLP-2或其衍生物具有引入其C-末端的巯基基团，并且非肽基聚合物共价连接至GLP-2或其衍生物的氨基酸残基而不是其N-末端氨基基团。
如本文所使用，术语“胰高血糖素-样肽-2(GLP-2)”指由小肠分泌的激素，通常促进胰岛素的生物合成和分泌，抑制胰高血糖素的分泌，并且促进细胞中的葡萄糖吸收。GLP-2具有通过结合GLP-2受体治疗或预防肠道疾病、肠道损伤或胃病的功能。GLP-2由33个氨基酸组成，天然GLP-2的氨基酸序列如下：
GLP-2(1-33)
HADGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD(SEQ ID NO：1)
本发明的GLP-2包括GLP-2的天然形式，其激动剂、衍生物、片段或变体等等。
如本文所使用，术语“GLP-2激动剂”指可结合GLP-2受体的物质而无论其与GLP-2的结构相似性，并且诱导如天然GLP-2相同或类似的生理学活性。
如本文所使用，术语“GLP-2片段”指一个或多个氨基酸添加至或从天然GLP-2的N-末端或C-末端缺失的肽，其中添加的氨基酸可以是非天然存在的氨基酸(例如D-氨基酸)。
在优选的实施方式中，本发明的GLP-2包括巯基基团引入其C-末端的GLP-2，其中巯基基团可通过添加半胱氨酸残基至GLP-2的C-末端引入，但不限于此。
如本文所使用，术语“GLP-2变体”指具有一个或多个氨基酸与天然GLP-2的不同的肽。对于此，可产生用非天然存在的氨基酸以及天然存在的氨基酸替代。
如本文所使用，术语“GLP-2衍生物”指与天然GLP-2相比具有至少80％氨基酸序列同源性的肽，并且指其中部分氨基酸残基可以是化学取代的(例如α-甲基化、α-羟化)、缺失(例如脱氨基)，或修饰(例如N-甲基化)的肽。优选地，本发明的GLP-2衍生物可通过天然GLP-2的N-末端的替代、缺失或修饰而制备，并且其可选自具有GLP-2功能的肽、片段和其变体。
更优选地，本发明的GLP-2衍生物可选自：
咪唑并-乙酰-GLP-2(CA-GLP2)，其中在天然GLP-2的N-末端处第一组氨酸残基的α-碳和与其连接的N-末端氨基缺失；
脱-氨基-组氨酰GLP-2(DA-GLP2)，其中天然GLP-2的N-末端氨基缺失；
β-羟基-咪唑并-丙酰基GLP-2(OH-GLP-2)，其中天然GLP-2的N-末端氨基用羟基基团替代；
二甲基组氨酰GLP-2(DM-GLP-2)，其中天然GLP-2的N-末端氨基被修饰为二甲基基团；和
β-羧基-咪唑并-丙酰基GLP-2(CX-GLP2)，其中天然GLP-2的N-末端氨基用羧基基团替代。
甚至更优选地，GLP-2衍生物可以是CA-GLP-2，其中天然GLP-2的N-末端第一个氨基酸，组氨酸的α-碳和与其连接的N-末端氨基缺失。
在优选的实施方式中，本发明的GLP-2或其衍生物可以是这样的的肽，其中半胱氨酸残基被引入至天然GLP-2的C-末端，其N-末端的α-碳和与其连接的氨基缺失，并且任选地，第二个氨基酸，丙氨酸被甘氨酸替代。
根据本发明的天然GLP-2和GLP-2衍生物可使用固相合成方法或重组技术合成。
如本文所使用，术语“非肽基聚合物”指生物相容性聚合物，其包括通过任何共价键而不是肽键彼此连接的至少两个重复单元。适于本发明的非肽基聚合物可选自聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、聚氧乙烯化多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯基乙醚、生物可降解聚合物如聚乳酸(PLA)和聚乳酸-乙醇酸(PLGA)、脂质聚合物、几丁质、透明质酸和其组合，并且优选的是聚乙二醇。另外，本发明的非肽基聚合物的范围包括本领域熟知的或可由本领域技术人员容易制备的上述列举聚合物的衍生物。
在通过常规的框内(in-frame)融合方法制备的融合蛋白中使用的肽接头的缺点是它们可容易被蛋白水解酶切割，并且因此由于载体的使用，其难以实现生理活性多肽体内半衰期的显著增加。但是，本发明采用对这种蛋白水解酶具有抗性的聚合物，并且因此生理活性多肽的体内半衰期可保持与载体的体内半衰期类似。
所以，任何非肽基聚合物可用于本发明而没有限制，只要其是具有对蛋白水解酶抗性的聚合物。适于本发明的非肽基聚合物的分子量范围从1至100kDa，并且优选地在1至20kDa的范围。而且，连接至免疫球蛋白Fc片段的本发明的非肽基聚合物可由一种类型的聚合物或不同类型聚合物的组合组成。
本发明的非肽基聚合物具有末端活性基团，所述末端活性基团可在其两个末端结合免疫球蛋白Fc片段和肽药物。在非肽基聚合物的两个末端的末端活性基团优选地选自活性醛基、丙醛基、丁醛基、马来酰亚胺基团和琥珀酰亚胺衍生物。琥珀酰亚胺衍生物的例子可以是琥珀酰亚胺基丙酸酯、羟基琥珀酰亚胺基、琥珀酰亚胺基羧甲基和琥珀酰亚胺基碳酸酯。在非肽基聚合物的两个末端的末端活性基团可以彼此相同或可以不同。例如，非肽聚合物可在其一个末端具有马来酰亚胺基团，和在其另一端具有醛基、丙醛基或丁醛基。在两个末端具有羟基基团的聚乙二醇(PEG)用作非肽基聚合物的情况下，羟基基团可通过常规的化学反应被活化成各种活性基团。另外，商业上可得的具有修饰活性基团的PEG可用于制备本发明的GLP-2缀合物。
尤其，当采用在一端具有具有醛基并且在另一端具有马来酰亚胺基团的非肽基聚合物时，可能使非特异性反应最小化并且有效地诱导GLP-2或其衍生物和免疫球蛋白Fc片段结合至非肽基聚合物的每个末端。经还原烷基化通过醛键产生的终产物比通过酰胺键产生的更稳定。在低pH水平下醛基选择性结合N-末端，但是在高pH水平，比如pH9.0，其结合赖氨酸残基以形成共价键。
在优选的实施方式中，本发明的非肽基聚合物可在一端具有马来酰亚胺基团并且在另一末端具有醛基，更优选地其可以是在一端具有马来酰亚胺基团和在另一末端具有醛基的聚乙二醇。
在本发明中，免疫球蛋白(Ig)Fc片段适于用作药物载体，因为其是体内生物可降解的。而且，Fc片段对于具有肽药物的复合物的制备、纯化和产率是有益的，因为其相对于整个免疫球蛋白分子具有小的分子量。此外，因为去除了由于抗体之间氨基酸序列的不同而显示高的非同质性的Fab区域，Fc片段具有大大增加的物质同质性和诱导血清抗原性的低可能性。
术语“载体”如本文所使用，指连接至药物的物质。典型地，包括连接至载体的药物的复合物大大降低了药物的生理学活性。但是，就本发明的目标而言，本发明中采用载体以便使连接至载体的感兴趣药物的生理学活性的下降最小化，并且降低载体的免疫原性，从而增强药物的体内稳定性。为了实现这些目标，本发明采用通过非肽聚合物修饰的Fc片段作为载体。
如本文所使用，术语“免疫球蛋白G(IgG)”共同指通过选择性针对抗原作用参与身体保护免疫性的蛋白质。免疫球蛋白由两条相同的轻链和两条相同的重链构成。轻链和重链包括可变区和恒定区。基于它们恒定区的氨基酸序列的差异，有五种不同类型的重链：γ、μ、α、δ和ε型，和重链包括下列子类：γ1、γ2、γ3、γ4、α1和α2。而且，基于它们恒定区氨基酸序列的差异，有两种类型的轻链：κ和λ型(Coleman等，Fundamental Immunology，第二版，1989，55-73)。根据重链恒定区的特征，免疫球蛋白分为五种同种型：IgG、IgA、IgD、IgE和IgM。IgG分成IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚类。
已知免疫球蛋白产生数种结构不同的片段，其包括Fab、F(ab')、F(ab')2、Fv、scFv、Fd和Fc。免疫球蛋白片段中，Fab包含轻链和重链的可变区，轻链的恒定区和重链的第一恒定区(CH1)，并且具有单个抗原-结合位点。就在重链CH1结构域的C-末端(羧基末端)包含一个或多个半胱氨酸残基的铰链区而言，F(ab')片段与Fab片段不同。通过在F(ab')片段的铰链区的半胱氨酸残基之间形成的二硫键，F(ab')2片段作为一对F(ab')片段产生。Fv是仅仅包含重链可变区和轻链可变区的最小抗体片段。scfv(单链Fv)片段包括通过肽接头彼此连接的重链可变区和轻链可变区并且因此存在于单条多肽链中。而且，Fd片段仅仅包括重链的可变区和CH1结构域。
如本文所使用，术语“免疫球蛋白Fc片段”在免疫球蛋白(Ig)分子用木瓜蛋白酶消化时产生，并且是除轻链的可变区(VL)和恒定区(CL)以及重链的可变区(VH)和恒定区1(CH1)之外的免疫球蛋白分子的区域。Fc片段可进一步包括在重链恒定区的铰链区。而且，Fc片段可基本上与天然形式相同，或可以是包含部分或完整重链恒定区1(CH1)和/或轻链恒定区1(CL1)的延长的Fc片段，只要其具有改进的作用。另外，Fc片段可以是在CH2和/或CH3的相对长部分的氨基酸序列具有缺失的片段。优选的Fc片段是IgG或IgM-衍生的Fc片段。IgG-衍生的Fc片段是更优选的，并且IgG2Fc和IgG4Fc片段是特别优选的。
根据本发明修饰的Fc片段可以是从IgG、IgA、IgD、IgE和IgM衍生的Fc片段的组合或混合。术语“组合”意思是这样的二聚体或多聚体多肽，其中相同起源的单链Fc片段被连接至不同起源的单链Fc片段以形成二聚体或多聚体。术语“混合”意思是这样的多肽，其中不同起源的两个或更多个结构域存在于单链Fc片段中。例如，混合可由选自IgG1Fc，IgG2Fc，IgG3Fc和IgG4Fc中包含的CH1、CH2、CH3和CH4结构域的一个至四个结构域构成。
根据本发明修饰的Fc片段可源自人或其他动物，包括母牛、山羊、猪、小鼠、兔子、仓鼠、大鼠和豚鼠，并且优选人。人-衍生的Fc片段比非人衍生的Fc片段是优选的，所述非人衍生的Fc片段可作为人体中的抗原起作用并且造成不期望的免疫应答，如产生针对该抗原的新抗体。
根据本发明修饰的Fc片段包括天然氨基酸序列和其序列突变体(变体)。“氨基酸序列突变体”意思是由于天然氨基酸序列的一个或多个氨基酸残基的缺失、插入、非保守或保守替代或其组合而具有不同的序列。蛋白质和肽中通常不改变蛋白质或肽的活性的氨基酸交换是本领域已知的(H.Neurath，R.L.Hill，The Proteins，Academic Press，New York，1979)。最常见发生的交换是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Thy/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly，在两个方向上。另外，Fc片段，如果期望，可通过磷酸化、硫酸化、丙烯酸酯化、糖基化、甲基化、法呢酰化、乙酰化、酰胺化等等修饰。
氨基酸变体可以是具有与天然蛋白质相同的生物活性的功能等价物，或，如果期望，可通过改变天然形式的性质而制造。例如，变体可具有增加的抵抗热、pH等的结构稳定性，或增加的溶解度改变和其天然氨基酸序列的修饰。例如，在IgG Fc片段中，已知对于结合重要的氨基酸残基，在214至238、297至299、318至322或327至331位，可用作用于修饰的适当的靶标。另外，其他各种衍生物是可能的，包括这样的衍生物，其中缺失能够形成二硫键区域，或在天然Fc形式的N-末端的某些氨基酸残基消失或向其添加甲硫氨酸残基。此外，为了去除效应器功能，缺失可发生在补体-结合位点，比如C1q-结合位点和ADCC位点。国际专利出版号WO97/34631和WO96/32478等公开了制备此类免疫球蛋白Fc片段序列衍生物的技术。
根据本发明修饰的Fc片段可获自从人和其他动物分离的天然形式，或可通过重组技术获自转化的动物细胞或微生物。
根据本发明修饰的Fc片段可以是具有天然糖链的形式，与天然形式相比糖链增加，或与天然形式相比糖链减少，或可以是去糖基化的形式。糖基化Fc片段由于其比无糖基化形式更强的补体-依赖性细胞毒性(CDC)活性而具有诱导免疫应答的高风险。因此，就本目标而言，无糖基化或去糖基化Fc片段是优选的。
如本文所使用，术语“去糖基化Fc片段”指其中糖部分被人工去除的Fc片段，而术语“无糖基化Fc片段”意思是通过原核生物，优选地大肠杆菌，以非糖基化形式产生的Fc片段。Fc片段的糖链的增加、减少或去除可通过本领域常见的方法来实现，如化学方法、酶学方法和使用微生物的基因工程方法。
重组体Fc片段由于与其天然形式的三维结构不同而具有增加的酶敏感性。而且，当与天然IgG相比时，无糖基化IgG对蛋白水解酶(胃蛋白酶、糜蛋白酶)高度敏感(Morrison等，J.Immunology 143：2595-2601，1989)。重组Fc片段对FcRn具有与通过木瓜蛋白酶处理产生的天然Fc相同的结合亲和力，但是天然Fc片段的血清半衰期比重组Fc片段的长2至3倍(Eur.J.Immunology 29：2819-2825，1999)。在根据本发明修饰的Fc片段中，酶切割位点由非肽聚合物保护。该保护防止Fc片段对水解酶的高度敏感性并且具有降低的体内半衰期。
本发明中使用的GLP-2可在不同位点连接至非肽基聚合物。当GLP-2连接至对于肽的生理学活性重要的N-末端之外的位点时，活性巯基基团可被引入至天然GLP-2的氨基酸序列中待修饰的氨基酸残基并且然后可在GLP-2的巯基基团和非肽基聚合物的马来酰亚胺基团或醛基之间形成共价键。
当使用非肽基聚合物的醛基时，其可与在N-末端或赖氨酸残基的氨基基团反应。此时，修饰形式的GLP-2可用于选择性增加反应产率。例如，可能仅仅保持一个氨基，其能够通过保护GLP-2的N-末端与在期望位点的非肽基聚合物反应，用其他氨基酸替代赖氨酸残基，并且将氨基引入其C-末端，从而增加聚乙二醇化和偶联反应的产率。保护N-末端的方法可包括二甲基化、甲基化、脱氨基、乙酰化等，但不限于此。
在本发明优选的实施方式中，为了诱导在GLP-2的C-末端氨基酸残基的选择性聚乙二醇化，半胱氨酸残基被引入GLP-2衍生物的C-末端，并且然后具有马来酰亚胺基团的PEG连接至GLP-2的C-末端半胱氨酸残基。尤其，已发现GLP-2缀合物，其中免疫球蛋白Fc片段被位点-特异性地连接至咪唑并-乙酰-GLP-2(CA-GLP-2)的C-末端——其第一个组氨酸的α碳和与其连接的N-末端氨基缺失，与其中免疫球蛋白Fc片段连接至原始赖氨酸残基的长持久性GLP-2衍生物相比，显示了对GLP-2受体提高的结合亲和力(见图5)。
在另一实施方式中，本发明提供制备GLP-2缀合物的方法，包括下述步骤：
1)共价连接在其两个末端具有活性基团的非肽基聚合物至天然GLP-2或其衍生物的氨基或巯基基团，其中活性基团选自醛、马来酰亚胺和琥珀酰亚胺衍生物，并且其中巯基基团被引入GLP-2或其衍生物的C-末端；
2)从步骤1)的反应混合物分离包括非肽基聚合物和GLP-2或其衍生物的复合物，其中非肽基聚合物共价连接至GLP-2或其衍生物的氨基酸残基而不是N-末端氨基基团；和
3)共价连接免疫球蛋白Fc片段至步骤2)中分离的复合物的非肽基聚合物的另一末端，从而产生GLP-2缀合物，其包括免疫球蛋白Fc区、非肽基聚合物和GLP-2或其衍生物，其中非肽基聚合物的一端共价连接至免疫球蛋白Fc片段而其另一末端共价连接至GLP-2或其衍生物。
如本文所使用，术语“复合物”指彼此共价连接的非肽基聚合物和GLP-2衍生物之间的中间产物。随后，没有连接至GLP-2衍生物的非肽基聚合物的另一末端连接至免疫球蛋白Fc片段。
步骤(1)是将GLP-2或其衍生物共价连接至非肽基聚合物的一端。优选地，GLP-2或其衍生物可以是具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的天然GLP-2或具有引入GLP-2或其衍生物的C-末端的巯基基团的其N-末端衍生物。优选地，GLP-2衍生物可以是CA-GLP-2、DA-GLP2、OH-GLP2、DM-GLP-2，或CX-CLP-2。更优选地，GLP-2衍生物可以是CA-GLP-2，其中半胱氨酸残基被引入其C-末端。
在步骤1)中，在非肽基聚合物的两个末端的活性基团可以相同或不同。优选地，非肽基聚合物的一端可具有马来酰亚胺基团而其另一末端可具有醛基。
此外，步骤1)中的非肽基聚合物共价连接至GLP-2或其衍生物的氨基酸残基而不是其N-末端，优选地引入GLP-2或其衍生物的C-末端的半胱氨酸残基的巯基基团。为了选择性位点特异性地连接非肽基聚合物至GLP-2或其衍生物的巯基基团，步骤1)中GLP-2或其衍生物和非肽基聚合物之间的反应可在pH 2至4，优选地pH 3下进行。此时，该反应中GLP-2或其衍生物与非肽基聚合物的摩尔比可在1:2至1:10的范围，但不限于此。
如果必要，步骤1)的反应可在存在还原剂的情况下进行，这取决于非肽基聚合物的两个末端的活性基团的类型。适于反应的还原剂可包括氰基硼氢化钠(NaCNBH3)、硼氢化钠、硼酸二甲胺或硼酸吡啶。
步骤2)是从步骤1)的反应混合物分离GLP-2-非肽基聚合物的复合物，其中GLP-2或其衍生物被共价连接至非肽基聚合物的一端。考虑靶蛋白的物理性质，如纯度、分子量和净电荷，可通过适当选择本领域已知的用于蛋白质纯化和分离的常规方法进行步骤2的分离。例如，可使用各种常规的方法——包括尺寸排阻色谱和离子交换色谱，并且如果必要，它们可被组合用于增加纯化的靶产物的产率。
步骤3)进行步骤2)中分离的复合物(GLP-2-非肽基聚合物)和免疫球蛋白Fc片段之间的反应，从而共价连接免疫球蛋白Fc片段至复合物包括的非肽基聚合物的另一末端。
步骤3)中，GLP-2-非肽基聚合物的复合物和免疫球蛋白Fc片之间的反应段可在pH5.0至8.0，优选地在pH 6.0下进行。此时，在该反应中GLP-2-非肽基聚合物的复合物与免疫球蛋白Fc片段的摩尔比的范围可从1:2至1:10，优选地1:4至1:8。
如果必要，步骤3)的反应可在存在还原剂的情况下进行，这取决于非肽基聚合物的两个末端的活性基团的类型。适于反应的还原剂可包括氰基硼氢化钠(NaCNBH3)、硼氢化钠、硼酸二甲胺或硼酸吡啶。
在优选的实施方式中，用于制备根据本发明的GLP-2缀合物的方法包括下述步骤：
1)共价连接在一个末端具有马来酰亚胺基团和在另一末端具有醛基的非肽基聚合物至天然GLP-2或其衍生物的巯基基团，并且其中巯基基团被引入其C-末端；
2)从步骤1)的反应混合物分离包括非肽基聚合物和GLP-2或其衍生物的复合物，其中非肽基聚合物共价连接至GLP-2或其衍生物的巯基基团；和
3)共价连接免疫球蛋白Fc片段至步骤2)中分离的复合物的非肽基聚合物的另一末端，从而产生包括免疫球蛋白Fc区、非肽基聚合物和GLP-2或其衍生物的GLP-2缀合物，其中非肽基聚合物的一端共价连接至免疫球蛋白Fc片段而其另一末端共价连接至GLP-2或其衍生物。
在仍另一方面中，本发明提供包括GLP-2缀合物作为活性成分的药学组合物。
本发明的药学组合物可用于预防或治疗选自肠道疾病、肠道损伤和胃病的一种或多种疾病。具体而言，本发明的药学组合物可用于预防或治疗的疾病包括但不限于包括SBS的GI疾病、炎性肠炎(IBD)、克罗恩病、结肠炎、胰腺炎、回肠炎、炎性肠梗塞、癌症化疗和/或放疗引起的粘膜炎、全肠胃外营养或局部缺血引起的胃萎缩、骨缺损、儿科胃肠道(GI)紊乱——包括诱导新生儿坏死性肠炎的肠道衰竭，等等。
如本文所使用，术语“预防(prevention)”或“预防(preventing)”旨在包括通过施用本发明的药学组合物阻止或延迟上述提到的疾病如肠道疾病、肠道损伤和胃病疾病的发生或进展的所有动作。
在该背景下，术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”包括通过施用本发明的药学组合物改进或有利改变上述提到的疾病如肠道疾病、肠道损伤和胃病疾病的症状的所有动作。
本发明的药学组合物包括作为活性成分的根据本发明的持久性GLP-2缀合物，其具有延长的体内半衰期和改进的体内效力和稳定性，并且因此其可明显减少药物的施用剂量并且展示改进的药物依从性，而无血糖水平的波动。所以，本发明的药学组合物可有效用于预防和治疗肠道疾病、肠道损伤或胃病。
本发明的药学组合物此外可包括药学上可接受的载体。对于口服施用，药学上可接受的载体可包括粘合剂、润滑剂、崩解剂、赋形剂、增溶剂、分散剂、稳定剂、悬浮剂、着色剂和香料。对于可注射的施用，药学上可接受的载体可包括缓冲剂、防腐剂、镇痛剂、增溶剂、等渗剂和稳定剂。为了局部施用，药学上可接受的载体可包括碱、赋形剂、润滑剂和防腐剂。
本发明的药学组合物可与前述药学上可接受的载体组合配制成各种剂型。例如，为了口服施用，药学组合物可配制成片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬液、糖浆剂或圆片。为了注射施用，药学组合物可配制成作为单剂量剂型或单位剂型的安瓿，如多剂量容器。药学组合物也可配制成溶液、悬液、片剂、丸剂、胶囊和长效制剂。
另一方面，适于本发明的药学组合物的载体、赋形剂和稀释剂可包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶橡胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。另外，本发明的药学组合物可进一步包括填充剂、抗凝结剂、润滑剂、保湿剂、香料和抗菌剂。
本发明的药学组合物可经任何一种常见途径施用，只要其能够达到期望的组织。考虑施用的各种模式，包括腹膜内、静脉内、肌内、皮下、皮内、口服、局部、鼻内、肺内和直肠内，但不限于此。
但是，因为在口服施用时肽被消化，所以用于口服施用的药学组合物的有效成分应被包被或配制用于保护在胃中免于降解。优选地，本发明的药学组合物可以可注射的形式施用。另外，本发明的药学组合物可使用能够将有效成分运输至靶细胞的某些装置施用。
本发明的药学组合物的施用频率和剂量可通过数个相关的因素确定，包括待治疗疾病的类型、施用途径、患者年龄、性别、体重和疾病的严重性，以及作为有效成分的药物类型。但是，剂量可根据施用途径、疾病的严重性，和患者的性别、体重和年龄而增加或下降，并且因此不限制本发明的范围。显示卓越的体内持续性和滴度，本发明的药学组合物可显著降低施用频率。因为本发明的药学组合物具有卓越的体内持久性和稳定性，具有延长的体内半衰期，其可显著降低药物的施用频率和剂量。
根据仍进一步方面，本发明提供预防或治疗肠道疾病、肠道损伤或胃病的方法，包括以治疗有效量施用长效GLP-2缀合物至需要其的对象。
如本文所使用，术语“施用(administration)”或“施用(administering)”指以适当的方式将有效成分引入患者。只要其允许有效成分到达靶组织，可采用任何施用。施用途径的例子包括腹膜内、静脉内、肌内、皮下、皮内、口服、局部、鼻内、肺内和直肠内施用，但不限于此。但是，因为在口服施用时肽被消化，所以用于口服施用的组合物的有效成分应包被或配制用于保护在胃中免于降解。优选地，有效成分可配制成注射液。另外，长效缀合物可在将有效成分传递至靶细胞的任何设备的帮助下施用。
待治疗的对象的例子包括人、无尾猴、母牛、马、绵羊、猪、小鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔子和豚鼠，但不限于此。优选的对象是哺乳动物，尤其是人。
如在有效成分的背景下所使用，术语“治疗有效量”指以为了适用于医学治疗合理的获益/风险比足够用于预防或治疗疾病，即，肠道疾病、肠道损伤或胃病的量。
本发明的长效GLP-2缀合物显示延长的体内半衰期和改进的体内持久性和稳定性。因此，本发明的长效GLP-2缀合物可以显著低的剂量施用并且展示药物依从性的改善，而不影响血糖水平。因此，本发明的长效GLP-2缀合物可有效用于预防或治疗肠道疾病、肠道损伤或胃病。
具体实施方式
通过下列实施例进一步描述本发明。但是，应理解这些实施例仅仅用于具体阐释本发明，而不是理解它们用于以任何形式限制本发明。
实施例1：咪唑并-乙酰-GLP-2的聚乙二醇化
咪唑并-乙酰GLP-2(CA-GLP-2，A2G，34C，American Peptide，美国)与10K MAL-PEG-ALD PEG(在每个末端具有马来酰亚胺和醛基的杂双官能PEG，NOF Inc.，Japan)反应，以便使CA-GLP-2的第34位半胱氨酸残基(Cys34)聚化。这里乙二醇，CA-GLP-2与PEG的摩尔比是1:3，并且反应在室温下进行3小时，肽浓度是3.5mg/mL。此外，反应在50mM Tris-HCl缓冲液中在存在20mM氰基硼氢化钠(SCB)作为还原剂的情况下进行。在反应结束之后，在下列条件下通过色谱使用SOURCE S柱(LRC25，Pall Corporation)纯化所得产物，单-聚乙二醇化CA-GLP-2-PEG复合物。
柱子：SOURCE S(LRC25，Pall Corporation)
流速：4.0ml/min
梯度：洗脱液B 0％→40％，240min(A：20mM柠檬酸，pH 2.0+45％乙醇，B：A+1MKCl)
实施例2：咪唑并-乙酰-GLP-2(A2G，34C)-PEG-免疫球蛋白Fc缀合物的制备
上面纯化的单-聚乙二醇化CA-GLP-2(A2G，34C)复合物与免疫球蛋白(IgG)Fc片段(韩国专利号10-725315)以1:6的摩尔比混合，随后它们在4℃下反应20小时，其中肽浓度为20mg/ml。此时，反应在100mM钾磷酸缓冲液(pH 6.0)中在存在20mM SCB作为还原剂的情况下进行。在反应结束之后，反应混合物使用Source Phe柱(XK16，GEHealthcare)，SOURCE15Q柱(LRC25，Pall Corporation)和SOURCE ISO(HR16，GE Healthcare)柱在下列条件下进行三-步色谱。
柱：SOURCE Phe(XK16，GE Healthcare)
流速：2.0ml/min
梯度：洗脱液B 100％→0％(A：20mM Tris，pH 8.0；B：A+2.6M NaCl)
柱：SOURCE 15Q(LRC25，Pall Corporation)
流速：5.0ml/min
梯度：洗脱液B 0→30％，120min(A：20mM Tris-HCl，pH 8.0，B：A+1M NaCl)
柱：SOURCE ISO(HR16，GE Healthcare)
流速：2.0ml/min
梯度：洗脱液B 100％→0％，100min(A：20mM Tris-HCl，pH 8.0，B：A+1.1M硫酸铵)
SOURCE Phe柱、SOURCE 15Q柱和SOURCE ISO柱的每个纯化图谱分别显示在1、2和3中。作为反相HPLC分析的结果，CA-GLP-2(A2G，34C)-10K PEG-Fc缀合物被纯化,纯度为94.2％(图4)，并且其产率是12.5％。
实施例3：CA-GLP-2(A2G，34C)-10K PEG-Fc缀合物对GLP-2受体的体外结合亲和力 的测量
为了测量实施例2中制备的CA-GLP-2(A2G，34C)-10K PEG-Fc缀合物(下文，“GLP-2缀合物”)的效力，如下使用测量体外细胞活性的方法。在该方法中，使用转化中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系，CHO/hGLP-2R，以表达编码人GLP-2受体的基因。
CHO/hGLP-2R细胞一周次培养2至3次，并且以1×105个细胞/孔的浓度接种在96-孔板上，随后培养24小时。因此培养的CHO/hGLP-2R细胞分别用以下进行处理:天然GLP-2以1000至0.002nM的浓度；天然GLP-2的长效制剂(GLP-2-PEG-Fc缀合物，LAPS-GLP-2)以10000至0.02nM的浓度；经赖氨酸特异性缀合的GLP-2衍生物的长效制剂(LAPS-DA-GLP-2，LAPS-CA-GLP-2，LAPS-OH-GLP-2)以10000至0.02nM的浓度；和经C-末端半胱氨酸特异性缀合的GLP-2衍生物的长效制剂(LAPS-CA-GLP-2(A2G，34C))以10000至0.02nM的浓度。通过使用cAMP测试试剂盒(MD，USA),在用每种化合物处理的CHO/hGLP-2R细胞中测量作为用于信号转导的第二信使的cAMP的细胞内水平，并且通过VICTOR LIGHT光度计(PerkinElmer LifeSciences)测定荧光酶素活性。还测量每种化合物的EC50值。
如在图5中显示，经赖氨酸特异性缀合的GLP-2衍生物的长效制剂(LAPS-DA-GLP-2，LAPS-CA-GLP-2，LAPS-OH-GLP-2)显示比天然GLP-2的长效制剂(LAPS-GLP-2)更低的体外活性(2.6-7.5％对8.6％)。相反，经C-末端半胱氨酸特异性缀合的GLP-2衍生物的长效制剂(LAPS-CA-GLP-2(A2G，34C))显示比天然GLP-2长效制剂(LAPS-GLP-2)更高的体外活性(与天然GLP-2相比9.9％)。
这些结果已经确认GLP-2缀合物——其中非肽基聚合物的一端共价连接至GLP-2衍生物的C-末端而其另一末端共价连接至免疫球蛋白Fc片段——与之前的GLP-2缀合物相比显示对GLP-2受体增强的结合亲和力，从而延长体内半衰期并且提高体内持久性和稳定性。
给出本说明书中使用的具体术语仅仅描述具体的实施方式并且不旨在限制本发明。本说明书中使用的单数形式包括复数形式，除非它们明确表示相反的意思。本说明书中使用的“包括”或“具有”的意思旨在使具体的性质、区域、整数、步骤、操作、要素和/或组分具体化，而不旨在排除存在或添加其他的性质、区域、整数、步骤、操作、要素和/或组。
工业适用性
本发明的GLP-2缀合物具有对GLP-2受体显著高的结合亲和力，从而显示持久的体内治疗效力和延长的体内半衰期。因此，本发明的GLP-2缀合物可有效用于以显著低的施用频率治疗或预防肠道疾病、肠道损伤或胃病。
<110> 韩美科学株式会社
<120> 利用免疫球蛋白片段的位点特异性GLP-2缀合物
<130> OPA12175
<150> KR10-2011-0147684
<151> 2011-12-30
<160> 1
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 33
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
His Ala Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr Ile Leu Asp Asn
1 5 10 15
Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Asn Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr
20 25 30
Asp

Claims (20)

1.胰高血糖素-样肽-2(GLP-2)缀合物，其包括经非肽基聚合物共价连接的GLP-2衍生物和免疫球蛋白Fc片段，其中所述GLP-2衍生物具有在其C-末端引入的巯基基团，和所述非肽基聚合物的一端连接至所述GLP-2的氨基酸残基而不是其N-末端氨基基团，
其中所述GLP-2衍生物的所述巯基基团通过使半胱氨酸结合至天然GLP-2或其衍生物的C-末端而引入，并且其中所述非肽基聚合物共价连接至所述GLP-2衍生物的所述巯基基团。
2.根据权利要求1所述的GLP-2缀合物，其中所述GLP-2衍生物通过天然GLP-2的N-末端氨基的替代、缺失或修饰而制备并且具有结合GLP-2受体的功能。
3.根据权利要求2所述的GLP-2缀合物，其中所述GLP-2衍生物选自：通过去除作为所述天然GLP-2的所述N-末端的第一个氨基酸的组氨酸的α-碳和与其结合的N-末端氨基而制备的GLP-2衍生物；通过缺失所述天然GLP-2的N-末端氨基而制备的GLP-2衍生物；通过用羟基基团替代所述天然GLP-2的N-末端氨基而制备的GLP-2衍生物；通过用二甲基基团修饰所述天然GLP-2的N-末端氨基而制备的GLP-2衍生物；和通过用羧基基团替代所述天然GLP-2的N-末端氨基而制备的GLP-2衍生物。
4.根据权利要求1所述的GLP-2缀合物，其中所述非肽基聚合物的一端共价连接至所述免疫球蛋白Fc片段而其另一末端共价连接至所述GLP-2衍生物的所述巯基基团。
5.根据权利要求1所述的GLP-2缀合物，其中所述非肽基聚合物选自聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、聚氧乙烯化多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯基乙醚、生物可降解聚合物、脂质聚合物、几丁质、透明质酸和其组合。
6.根据权利要求1所述的GLP-2缀合物，其中所述非肽基聚合物在其两个末端具有活性基团，其选自醛基、丙醛基、丁醛基、马来酰亚胺基团和琥珀酰亚胺衍生物。
7.根据权利要求6所述的GLP-2缀合物，其中所述琥珀酰亚胺衍生物选自琥珀酰亚胺基丙酸酯、琥珀酰亚胺基羧甲基、羟琥珀酰亚胺基和琥珀酰亚胺基碳酸酯。
8.根据权利要求6所述的GLP-2缀合物，其中所述非肽基聚合物在一个末端具有马来酰亚胺基团和在另一末端具有醛基。
9.根据权利要求1所述的GLP-2缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段是非糖基化的。
10.根据权利要求1所述的GLP-2缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段由选自CH1、CH2、CH3和CH4结构域的1至4个结构域构成。
11.根据权利要求10所述的GLP-2缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段进一步包括铰链区。
12.根据权利要求1所述的GLP-2缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段衍生自IgG、IgA、IgD、IgE或IgM。
13.根据权利要求12所述的GLP-2缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段的每个结构域是源自选自IgG、IgA、IgD、IgE和IgM的不同免疫球蛋白的结构域的混合。
14.根据权利要求12所述的GLP-2缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段是由包括源自相同免疫球蛋白的结构域的糖基化免疫球蛋白组成的二聚体或多聚体。
15.根据权利要求12所述的GLP-2缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段是IgG4Fc片段。
16.根据权利要求15所述的GLP-2缀合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段是人非糖基化的IgG4Fc片段。
17.制备根据权利要求1至16中任一项所述的GLP-2缀合物的方法，包括：
1)共价连接在两个末端具有活性基团的非肽基聚合物至GLP-2衍生物的巯基基团，所述活性基团选自醛、马来酰亚胺和琥珀酰亚胺衍生物，其中所述GLP-2衍生物具有在其C-末端通过使半胱氨酸结合至天然GLP-2或其衍生物的C-末端而引入的巯基基团；
2)从步骤(1)的反应混合物分离复合物，其中所述非肽基聚合物共价连接至所述GLP-2或其衍生物的所述氨基或巯基基团；
3)共价连接所述复合物中所述非肽基聚合物的另一末端至免疫球蛋白Fc片段；和
4)从步骤3)的反应混合物分离GLP-2缀合物，其中所述非肽基聚合物的两个末端分别连接至所述免疫球蛋白Fc片段和GLP-2或其衍生物，
其中步骤(1)中的所述非肽基聚合物共价连接至所述GLP-2衍生物的C末端巯基基团。
18.根据权利要求17所述的方法，其中步骤(1)中的所述GLP-2衍生物和非肽基聚合物以1:2至1:10的摩尔比在pH 2至4的条件下反应。
19.药学组合物，其包括根据权利要求1至16中任一项所述的GLP-2缀合物作为活性成分，用于预防或治疗选自肠道疾病、肠道损伤和胃病的一种或多种疾病。
20.权利要求1至16中任一项所述的GLP-2缀合物在制备预防或治疗选自肠道疾病、肠道损伤和胃病的一种或多种疾病的药物中的应用。
CN201910158317.0A 2011-12-30 2012-12-28 利用免疫球蛋白片段的位点特异性glp-2缀合物 Active CN109810198B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910158317.0A CN109810198B (zh) 2011-12-30 2012-12-28 利用免疫球蛋白片段的位点特异性glp-2缀合物

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020110147684A KR101895047B1 (ko) 2011-12-30 2011-12-30 면역글로불린 단편을 이용한 위치 특이적 글루카곤 유사 펩타이드-2 약물 결합체
KR10-2011-0147684 2011-12-30
CN201280071002.9A CN104144697A (zh) 2011-12-30 2012-12-28 利用免疫球蛋白片段的位点特异性glp-2缀合物
CN201910158317.0A CN109810198B (zh) 2011-12-30 2012-12-28 利用免疫球蛋白片段的位点特异性glp-2缀合物
PCT/KR2012/011748 WO2013100704A1 (en) 2011-12-30 2012-12-28 A site-specific glp-2 conjugate using an immunoglobulin fragment

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201280071002.9A Division CN104144697A (zh) 2011-12-30 2012-12-28 利用免疫球蛋白片段的位点特异性glp-2缀合物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109810198A true CN109810198A (zh) 2019-05-28
CN109810198B CN109810198B (zh) 2023-06-06

Family

ID=48698036

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201280071002.9A Pending CN104144697A (zh) 2011-12-30 2012-12-28 利用免疫球蛋白片段的位点特异性glp-2缀合物
CN201910158317.0A Active CN109810198B (zh) 2011-12-30 2012-12-28 利用免疫球蛋白片段的位点特异性glp-2缀合物

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201280071002.9A Pending CN104144697A (zh) 2011-12-30 2012-12-28 利用免疫球蛋白片段的位点特异性glp-2缀合物

Country Status (9)

Country Link
US (1) US9504757B2 (zh)
EP (1) EP2797621B1 (zh)
JP (1) JP6131490B2 (zh)
KR (1) KR101895047B1 (zh)
CN (2) CN104144697A (zh)
AR (1) AR089506A1 (zh)
ES (1) ES2725805T3 (zh)
TW (1) TWI666219B (zh)
WO (1) WO2013100704A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115697375A (zh) * 2020-04-03 2023-02-03 韩美药品株式会社 预防或治疗放疗、化疗或其组合引发的粘膜炎的包含glp-2衍生物或其长效缀合物的药物组合物

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
US9949927B2 (en) 2012-04-10 2018-04-24 The Regents Of The University Of California Bis-polymer lipid-peptide conjugates and nanoparticles thereof
WO2015042252A1 (en) * 2013-09-19 2015-03-26 The Regents Of The University Of California Methods of treatment using bis-polymer lipid-peptide conjugates and nanoparticles thereof
JP6426103B2 (ja) * 2013-10-15 2018-11-21 国立大学法人 東京大学 ｃ−Ｍｅｔタンパク質アゴニスト
JP6572497B2 (ja) 2013-12-18 2019-09-11 ザ・スクリップス・リサーチ・インスティテュート 修飾された治療剤、ステープル留めされたペプチド脂質複合体、及びそれらの組成物
ES2897935T3 (es) * 2014-03-31 2022-03-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Método para mejorar la solubilidad de proteína y péptido mediante el uso del enlace a un fragmento Fc de inmunoglobulina
KR101825048B1 (ko) 2014-12-31 2018-02-05 주식회사 제넥신 GLP 및 면역글로불린 하이브리드 Fc 융합 폴리펩타이드 및 이의 용도
KR20240006077A (ko) 2016-07-11 2024-01-12 옵코 바이오로직스 리미티드 지속성 응고 인자 vii 및 그 제조 방법
CN107987170B (zh) * 2016-10-27 2018-12-18 浙江道尔生物科技有限公司 一种用于治疗肠道疾病的融合蛋白
KR102174436B1 (ko) * 2017-08-17 2020-11-04 주식회사 엘지화학 불용성 안료 화합물의 정성분석방법
US20200199192A1 (en) 2017-08-22 2020-06-25 Shire-Nps Pharmaceuticals, Inc. Glp-2 fusion polypeptides and uses for treating and preventing gastrointestinal conditions
TWI794897B (zh) * 2017-09-28 2023-03-01 南韓商韓美藥品股份有限公司 Ｇｌｐ-２衍生物之長效接合物
BR112020008936A2 (pt) * 2017-11-06 2020-10-20 Shire-Nps Pharmaceuticals, Inc. análogos e pepticorpos de glp-2 para administração antes, durante ou após a cirurgia
AU2019365212A1 (en) * 2018-10-24 2021-04-29 Shire-Nps Pharmaceuticals, Inc. GLP-2 fusion polypeptides and uses for treating and preventing gastrointestinal conditions
EP3924369A1 (en) * 2019-02-11 2021-12-22 OPKO Biologics Ltd. Long-acting glp-2 analogs
JP2023508175A (ja) * 2019-12-24 2023-03-01 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド Ｇｌｐ－２又はその結合体を含む、代謝性骨疾患の予防又は治療用薬学的組成物
CN111560062A (zh) * 2020-05-26 2020-08-21 成都圣诺生物制药有限公司 一种Elisiglutide的制备方法
WO2022159555A1 (en) * 2021-01-20 2022-07-28 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for treating graft-versus-host disease using glp-2 agonists and analogues thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1483041A (zh) * 2000-12-07 2004-03-17 Glp-1融合蛋白
WO2008082274A1 (en) * 2007-01-05 2008-07-10 Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. An insulinotropic complex using an immunoglobulin fragment
WO2010108153A2 (en) * 2009-03-20 2010-09-23 Amgen Inc. Carrier immunoglobulins and uses thereof

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
EP0904107B1 (en) 1996-03-18 2004-10-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
US6924264B1 (en) 1999-04-30 2005-08-02 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Modified exendins and exendin agonists
US6756480B2 (en) 2000-04-27 2004-06-29 Amgen Inc. Modulators of receptors for parathyroid hormone and parathyroid hormone-related protein
CA2436399A1 (en) * 2001-02-16 2002-08-29 Conjuchem Inc. Long lasting glucagon-like peptide 2 (glp-2) for the treatment of gastrointestinal diseases and disorders
CN1705681A (zh) * 2002-10-14 2005-12-07 诺沃挪第克公司 Glp－2化合物、制剂及其用途
US20070060512A1 (en) 2003-03-04 2007-03-15 Homayoun Sadeghi Dipeptidyl-peptidase protected protein
WO2005047334A1 (en) 2003-11-13 2005-05-26 Hanmi Pharmaceutical. Co., Ltd. Igg fc fragment for a drug carrier and method for the preparation thereof
SI1704234T1 (sl) 2003-11-21 2012-08-31 Nps Pharma Inc Proizvodnja glukagonu podobnih peptidov 2 in analogov
US20080207505A1 (en) 2005-01-12 2008-08-28 James Kenneth D Bna Conjugates and Methods of Use
NZ591178A (en) 2005-05-04 2012-06-29 Zealand Pharma As Glucagon-like-peptide-2 (glp-2) analogues
BRPI0617515A2 (pt) * 2005-10-24 2011-07-26 Centocor Inc mimeticorpos, polipeptÍdeos, composiÇÕes, mÉtodos e usos de glp-2
AU2010225523B2 (en) * 2009-03-20 2012-05-24 Hanmi Science Co., Ltd. Method for preparing a site-specific physiologically active polypeptide conjugate
KR101746686B1 (ko) 2010-10-26 2017-06-15 한미사이언스 주식회사 면역글로불린 단편을 이용한 글루카곤 유사 펩타이드―２（ｇｌｐ―２）약물 결합체

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1483041A (zh) * 2000-12-07 2004-03-17 Glp-1融合蛋白
WO2008082274A1 (en) * 2007-01-05 2008-07-10 Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. An insulinotropic complex using an immunoglobulin fragment
CN101646451A (zh) * 2007-01-05 2010-02-10 韩美药品工业株式会社 使用免疫球蛋白片段的促胰岛素缀合物
WO2010108153A2 (en) * 2009-03-20 2010-09-23 Amgen Inc. Carrier immunoglobulins and uses thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HORNBY 等: "The therapeutic potential of targeting the glucagon-like peptide-2 receptor in gastrointestinal disease", 《EXPERT OPINION ON THERAPEUTIC TARGETS》 *
高智慧: "一种新的胰高血糖素样肽-1类似物及其缓释技术的研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(博士) 医药卫生科技辑》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115697375A (zh) * 2020-04-03 2023-02-03 韩美药品株式会社 预防或治疗放疗、化疗或其组合引发的粘膜炎的包含glp-2衍生物或其长效缀合物的药物组合物

Also Published As

Publication number Publication date
ES2725805T3 (es) 2019-09-27
WO2013100704A1 (en) 2013-07-04
KR20130078634A (ko) 2013-07-10
JP6131490B2 (ja) 2017-05-24
EP2797621A1 (en) 2014-11-05
CN104144697A (zh) 2014-11-12
US20140377290A1 (en) 2014-12-25
EP2797621B1 (en) 2019-03-06
CN109810198B (zh) 2023-06-06
TWI666219B (zh) 2019-07-21
US9504757B2 (en) 2016-11-29
AR089506A1 (es) 2014-08-27
KR101895047B1 (ko) 2018-09-06
TW201333032A (zh) 2013-08-16
EP2797621A4 (en) 2015-09-02
JP2015503554A (ja) 2015-02-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109810198A (zh) 利用免疫球蛋白片段的位点特异性glp-2缀合物
JP6903086B2 (ja) オキシントモジュリン誘導体を含む高脂血症の治療のための組成物
US20180237490A1 (en) Composition For Treating Diabetes Or Diabesity Comprising Oxyntomodulin Analog
CA2795291C (en) An insulin conjugate using an immunoglobulin fragment
EP3248611A1 (en) Novel long-acting glucagon conjugate and pharmaceutical composition comprising the same for the prevention and treatment of obesity
CA2960657A1 (en) Use of a long acting glp-1/glucagon receptor dual agonist for the treatment of non-alcoholic fatty liver disease
TWI795443B (zh) Ｇｌｐ-２衍生物之長效接合物
CN110075277A (zh) 用于预防或治疗非酒精性脂肪肝疾病的药学组合物
KR101746686B1 (ko) 면역글로불린 단편을 이용한 글루카곤 유사 펩타이드―２（ｇｌｐ―２）약물 결합체
US20230159607A1 (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating mucositis induced by radiotherapy, chemotherapy, or combination thereof, comprising glp-2 derivatives or long-acting conjugate of same
AU2021324792A1 (en) Pharmaceutical composition comprising long-acting conjugate of triple glucagon/GLP-1/GIP receptor agonist
NZ742400A (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant