CN109789162A - 具有降低的纤溶活性的人类血液源产品及其在止血障碍中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了具有降低的t‑PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液产品的纤溶活性的治疗产品，以及在治疗与遗传性或获得性出血障碍相关的出血中使用所述治疗产品的组合物、试剂盒和方法。本发明进一步提供了用于血液或血液产品血浆分离术旨在预防或治疗出血障碍的体外设备。

Description

具有降低的纤溶活性的人类血液源产品及其在止血障碍中的 用途

技术领域

本发明涉及凝血和输血医学技术领域。更具体地说，本发明提供了缺乏纤溶活性的特定血液源产品、其方法和用途。

背景技术

作为背景技术视为与本公开主题相关的参考文献列示如下。

Selighson U等人Classification,Clinical Manifestations&Evaluation ofDisorders of Hemostasis.在:Williams Hematology,第8版,2010,第2322-2330页。

Abdel-Wahab OI等人Effect of fresh-frozen plasma transfusion onprothrombin time and bleeding in patients with mild coagulationabnormalities.Transfusion 2006；46:1279-1285。

Holland LL等人Toward rational fresh frozen plasma transfusion:Theeffect of plasma transfusion on coagulation test results.Am J Clin Pathol2006；126:133-139。

Hijazi N等人Endogenous plasminogen activators mediate progressiveintracerebral hemorrhage after traumatic brain injury in mice.Blood,2015,125:2558-2567。

Pleines I等人Megakaryocyte-specific RhoA deficiency causesmacrothrombocytopenia and defective platelet activation in hemostasis andthrombosis.Blood 2012 119:1054-1063。

Higazi AA等人Lysis of plasma clots by urokinase-soluble urokinasereceptor complexes.Blood,1998,92:2075-2083。

Meheux CJ等人Efficacy of Intra-articular Platelet-Rich PlasmaInjections in Knee Osteoarthritis:A Systematic Review.Arthroscopy,2016,32,495-505。

Pap G等人Expression of stromelysin and urokinase type plasminogenactivator protein in resection specimens and biopsies at different stages ofosteoarthritis of the knee.Pathol.Res.Pract.2000,196:219-226。

美国专利第7,125,569号。

美国专利第3,998,946号。

本文中承认上述参考文献并不应被推断为意味着，这些参考文献以任何方式与本公开主题的专利性相关。

发明背景

正常止血是个非常微妙的平衡的系统。在其发挥其应有的功能时，血液在血管系统中维持流体状态，但在需要封闭损伤时快速凝固。在20世纪60年代，两个团队提出凝块形成模型，其设想一系列连续步骤，其中激活一种凝固(凝血)因子导致激活另一种因子，最终导致凝块形成。在这些凝血因子因连续激活而引起凝块形成时，进一步激活称为纤溶系统的对应系统成为凝块溶解(裂解)的原因。这个纤溶系统包括抗凝固蛋白(纤溶酶原激活剂、纤溶酶原和纤溶酶)，其在连续激活后导致凝块裂解(Selighson U等人)。

由于凝血因子缺乏所致的止血功能失效引起损害(或缺少)凝块形成。同样，过高纤溶活性的结果导致所形成凝块快速且不当的溶解。另一方面，过度刺激凝血级联或抑制纤溶系统会引起病理性凝块形成。因此，上述系统中每一种系统失效的结果都可能是出血或增加的凝血倾向。

置换疗法在治疗出血障碍中有效，但这种治疗可能还不够。根据新鲜冷冻血浆(FFP)会改善止血并会纠正和/或预防出血的假设，通常将其输注至出血患者或凝血测试延长的患者。在Massachusetts General Hospital进行的前瞻性稽核中，检查FFP对凝血参数(例如凝血酶原时间(PT)和国际标准化比值(INR))的影响(Abdel-Wahab OI等人)。数据显示，在这种环境下输注FFP在99％的患者中未能矫正PT，并且仅在15％的患者中INR矫正至正常值的至少一半。

类似地，Holland等人报道，FFP未能随时间改变INR。他们假设，FFP未能矫正INR是因为所输注FFP中存在的凝血因子被接受者的血浆稀释。

FFP含有凝血和纤溶系统的所有组分(蛋白质)，因此在理论上适合于治疗患有遗传性或获得性凝血因子缺乏的患者的出血。另外，这种产品应该可在手术程序之前、期间和之后在患有凝血病的受试者中预防出血。然而，由于这些血浆源产品除了凝血因子外还含有纤溶蛋白，其具有诱发在置换产品的凝血因子期间和之后形成的止血凝块的不需要的裂解(溶解)的可能。

美国专利第3,998,946号公开了用气相胶态二氧化硅处理血浆或相关产品以移除未聚合成纤维蛋白的纤维蛋白原、纤溶酶原和纤溶酶和其他化合物但保留凝血因子II的方法。由于缺乏纤维蛋白原，所得产品无法支持凝块形成，且因此无法用于治疗出血和止血障碍。

美国专利第7,125,569号及其相应申请和专利公开了使用非常特殊的树脂从蛋白质混合物仅移除纤溶酶(原)的特定方法。产生所得产品用于制备用作生物胶的无纤溶酶(原)纤维蛋白原的目的。然而，所得混合物仍含有tPA，且因此明显展现纤溶活性。更具体地说，产品中存在的tPA激活所治疗区域中的纤溶酶原，由此导致新形成的纤维蛋白网裂解。纤溶酶原通常以高浓度存于血液中(约2μM)，因此，在任何手术介入期间的任何血液渗漏都会增加血管外区域中的纤溶酶原浓度。此外，在于手术介入期间将这种胶施用在受伤血管上的情况下，生物胶中存在的tPA可接触血液中存在的纤溶酶原，并且因此可激活纤溶级联。因此，美国专利第7,125,569号中公开的无纤溶酶原产品可仅用于作为生物胶局部施用，并且与输血中的全身性使用或与治疗与纤溶或溶栓疗法相关的出血无关。

因此，特别是对于含有凝血因子但同时不含纤溶蛋白的产品存在长期需要，所述产品适合于输血和全身性使用。本发明人确定的对安全有效的止血产品的这种需要促使本发明人研发具有降低的纤溶活性的不同新产品，其可应用于全身性使用以及局部使用。

发明内容

在第一方面中，本发明涉及具有减少的纤溶活性的血液和/或血液源产品。本发明的产品包含至少一种凝血因子。在一些实施方案中，本发明的产品可为组织纤溶酶原激活剂(tPA)缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性。在一些具体实施方案中，本发明的产品是t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品。在又一些另外的实施方案中，本发明的产品可为t-PA缺乏性血液或血液源产品。在一些其他具体实施方案中，本发明的产品可为纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品。在又一些另外的具体实施方案中，本发明的产品可为t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品。

本发明进一步提供了组合物，其包含治疗有效量的具有减少的纤溶活性的血液和/或血液源产品作为活性成分。更具体地说，所述产品包含至少一种凝血因子。在一些实施方案中，所述产品可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性。任选地，本发明的组合物可进一步包含药学上可接受的载剂、赋形剂、添加剂、稀释剂和佐剂中的至少一种。

在另一个方面中，本发明涉及生物胶或密封剂，其包含显示或具有减少的纤溶活性的血液和/或血液源产品，所述产品包含至少一种凝血因子。在一些实施方案中，本发明的生物胶内所包含的产品可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性。更具体地说，所述产品可为以下中的至少一种：t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性新鲜血浆(FP)、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性富血小板血浆(PRP)、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性新鲜冷冻血浆(FFP)和t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性冷沉淀物。

本发明的另一方面涉及在有需要的受试者中治疗、预防、改善、抑制出血、止血障碍和与其相关的任何出血或病理状况或延迟其发作的方法。更具体地说，本发明的方法可包括向所述受试者给予治疗有效量的至少一种血液和/或血液源产品、或包含所述产品的任何组合物或生物胶或密封剂的步骤，所述产品具有减少的纤溶活性并包含至少一种凝血因子。本发明的方法所用的产品可为tPA缺乏性的和/或可缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性。

在另一方面中，本发明涵盖具有减少的纤溶活性的血液和/或血液源产品或其任何组合物或胶或密封剂，用于在有需要的受试者中治疗、防止、预防、改善、抑制出血、止血障碍和与其相关的任何出血或病理状况或延迟其发作。本发明的产品可包含至少一种凝血因子。仍进一步地，本发明的产品可为tPA缺乏性的和/或可缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性。

在另一方面中，本发明提供了试剂盒，其包含至少一种根据本发明的具有减少的纤溶活性的血液和/或血液源产品；和至少一种凝血促进剂。本发明的试剂盒所用的产品可包含至少一种凝血因子。仍进一步地，本发明的产品可为tPA缺乏性的和/或可缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性。本发明的试剂盒所用的产品可为以下中的至少一种：t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性全血、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性FP、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性PRP、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性FFP和t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性冷沉淀物。

又进一步地，本发明公开了制备至少一种具有减少的纤溶活性的血液和/或血液源产品的方法。通过本发明的方法制备的产品可包含至少一种凝血因子。仍进一步地，本发明的产品可为tPA缺乏性的和/或可缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性。更具体地说，所述方法包括以下步骤：使包含至少一种凝血因子的全血或血液源产品经历专用于t-PA和纤溶酶原中的至少一种的亲和耗尽程序；和回收在前一步骤中获得的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液源产品。

本发明的另外方面提供了在有需要的受试者中进行体外程序的方法。所述方法包括以下步骤：将受试者的血液转移至体外设备中；使所述血液经历专用于t-PA和/或纤溶酶原的亲和耗尽程序。所述耗尽可在将血液转移至和转移出所述设备之前、期间或之后进行，由此获得所述受试者的体外t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液或血浆。下一步骤包括将上一步骤中获得的t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液或血浆返回所述受试者。

在又另一个方面中，本发明提供了用于血液和血液产品分离术的体外设备。本发明的设备可包含或至少部分地涂布与tPA和/或纤溶酶原中的至少一种特异性结合的氨甲环酸。

本发明的这些和另外的方面将借助以下描述变得显而易见。

附图说明

为了更好地理解本文所公开的主题和例示如何在实践中实施所述主题，现在将参考附图仅借助非限制性实施例来描述实施方案，在所述附图中：

图1.氨甲环酸磁珠

所述图呈现了与氨甲环酸(TXA)缀合的固体载体或基质(具体地说，磁珠)的示意性结构。

图2.用经赖氨酸或赖氨酸类似物涂布的磁珠对人类血浆进行预处理抑制纤维蛋白溶解

通过以下方式从FFP产生t-PA缺乏性和/或纤溶酶原耗尽的血浆：与经赖氨酸(Lys处理)、6-氨基己酸(6AHA处理)或氨甲环酸(TXA处理)涂布的珠粒一起培养，随后将FFP呈送至磁场并分离无FFP珠粒，如实验程序中所详述。通过添加凝血酶形成血浆凝块(Higazi AA等人1998)。在添加tPA(10nM)后，测量血浆凝块的裂解并呈现为相对于在未经处理的血浆或经丙氨酸涂布的珠粒处理的血浆(阴性对照)中观察到的纤维蛋白溶解的纤维蛋白溶解百分比。

图3.用经氨甲环酸(TXA)涂布的磁珠预处理人类冷沉淀物抑制纤维蛋白溶解

通过与氨甲环酸涂布的珠粒一起培养，从FFP制备t-PA缺乏性和纤溶酶原耗尽的冷沉淀物，如图2和实验程序中所详述。在凝块形成和添加tPA后，测量血浆凝块的裂解并呈现为相对于在未经处理的冷沉淀物或经丙氨酸涂布的珠粒处理的冷沉淀物(阴性对照)中观察到的纤维蛋白溶解的纤维蛋白溶解百分比。

图4.用经氨甲环酸(TXA)涂布的磁珠预处理人类全血抑制纤维蛋白溶解

通过与氨甲环酸涂布的珠粒一起培养来制备缺乏t-PA和纤溶酶原的全血，如实验程序中所详述。在凝块形成和添加tPA后，测量血浆凝块的裂解并呈现为相对于在未经处理的血液或经丙氨酸涂布的珠粒处理的血液(阴性对照)中观察到的纤维蛋白溶解的纤维蛋白溶解百分比。

图5.用经赖氨酸或氨甲环酸涂布的磁珠预处理人类血液抑制通过凝血弹性描记法(TEG)监测的凝块裂解

通过TEG监测从未经处理(“未经处理”)或用经赖氨酸(Lys)或其合成类似物氨甲环酸(TXA)涂布的磁珠预处理的新鲜人类全血制备的凝块的裂解。通过添加tPA(10nM)来诱发凝块裂解。“对照”涉及在tPA不存在下，未经处理的人类血液的凝块形成和裂解。

图6A至图6C.用经氨甲环酸涂布的磁珠预处理人类血液增强凝血

通过TEG监测经预处理或未经处理的血浆的纤维蛋白溶解程度。通过TEG获得的R值代表直至检测到凝块第一次出现的时间。图6A显示了未经处理的血液的R值，图6B显示了经氨甲环酸涂布的磁珠预处理的血液的R值，并且图6C显示了在tPA存在下的R值。

图7A至图7B.用经赖氨酸或赖氨酸类似物涂布的磁珠对人类血浆进行预处理抑制小鼠中通过尾尖切断术诱发的出血倾向

在尾尖切断术后，将尾部浸没于盐水(盐水)、人类未经处理的FFP(FFP)或用经赖氨酸(FFP Lys)、6-氨基己酸(FFP 6AHA)、氨甲环酸(FFP TXA)或丙氨酸(FFP Ala)涂布的磁珠处理的FFP中持续30min。在30min后，通过测量盐水溶液和每一种FFP产品中的血红蛋白浓度来测定出血程度。

图8.

t-PA和纤溶酶原耗尽的血浆注射减少小鼠中通过尾尖切断术诱发的失血量。

向小鼠静脉内注射50μ1(血液总体积的5％)血浆正常血浆(即含有纤溶酶原)或经处理的血浆(即耗尽纤溶酶原和t-PA)或PBS。接着，切断小鼠尾部并从尾尖收集血液持续30min。直方图代表不同组的血红蛋白的量。对于每组，(N＝5)。

图9.

用经赖氨酸类似物(TXA)涂布的磁珠处理的血浆和市售产品都是纤溶酶原缺乏性的。

在向从用经赖氨酸类似物(TXA)涂布的磁珠处理的血浆形成的凝块或从市售产品形成的凝块添加外源tPA后观察到的纤维蛋白溶解水平。

图10.

与相比，用经赖氨酸类似物(TXA)涂布的磁珠处理的血浆也是tPA缺乏性的

在向从用经赖氨酸类似物(TXA)涂布的磁珠处理的血浆形成的凝块或从市售产品形成的凝块添加外源纤溶酶原后观察到的纤维蛋白溶解水平。

图11.

用经赖氨酸类似物(TXA)涂布的磁珠处理的血浆和中的tPA浓度的比较

在未经处理的血液、血浆或血清中，在中和在用经赖氨酸类似物(TXA)涂布的磁珠处理的血浆中，通过Elisa测定测量的tPA浓度。

图12.本发明的TXA-基质结合tPA

图显示了与从TEA-琼脂糖4B洗脱的蛋白质(Omrix，泳道3)相比，在从本发明TXA-磁珠洗脱的蛋白质(泳道2)中进行的蛋白质印迹分析。将印迹与抗tPA抗体一起培养。泳道1显示了分子量标记物。

具体实施方式

所提出的基于细胞的生理止血模型当激活因子VII(VIIa)结合至带有组织因子的细胞时启动，导致因子IX和X进一步激活，其继而切割(激活)因子II(凝血酶原)以形成凝血酶(IIa)。凝血酶激活因子XI，其继而激活其他因子，以产生更多凝血酶。然后凝血酶进一步裂解纤维蛋白原以形成初步的纤维蛋白凝块，然后其通过因子XIII的交联作用稳定化为坚固的止血凝块。响应于血管损伤，如上文激活凝血系统，导致交联纤维蛋白沉积于组织和血管中，由此妨碍血液流动。因此，需要另一系统，其可适当溶解纤维蛋白凝块，由此防止凝块超出生理需要的进一步生长，并在不再需要凝块时启动凝块裂解。这个系统由纤溶蛋白构成，然后纤溶蛋白被激活，通过丝氨酸蛋白酶纤溶酶的作用将纤维蛋白转化为其可溶降解产物。在生理条件下，通过激活剂、抑制剂和辅因子的衡量式参与精确调节纤维蛋白溶解。

纤溶酶原是纤溶系统的主要组分，主要在肝中合成。纤溶酶原在位置560-561的单一Arg-Val肽键处的裂解(激活)产生活性丝氨酸蛋白酶纤溶酶，其继而溶解纤维蛋白凝块。纤溶酶原的裂解由纤溶酶原激活剂介导。

主要的内源纤溶酶原激活剂是组织纤溶酶原激活剂(tPA)。在功能上，t-PA本身是纤溶酶原的弱激活剂。然而，在纤维蛋白存在下，tPA依赖性纤溶酶原激活的催化效率增加500倍。提高的纤溶酶活性还裂解凝血因子，并且因此可防止新凝块形成。

第二内源纤溶酶原激活剂是单链u-PA或尿激酶原。u-PA对纤维蛋白的亲和性比对tPA的亲和性低得多。尽管uPA在纤维蛋白存在或不存在下都是有效的纤溶酶原激活剂，但其纤溶酶原激活活性显著受纤维蛋白刺激。u-PA由若干种细胞表达，包括激活的内皮细胞、巨噬细胞、肾上皮细胞和一些肿瘤细胞。

纤溶系统通过纤溶蛋白的激活剂(如上文所详述)和抑制剂的作用非常平衡。纤溶酶的主要抑制剂是α₂抗纤溶酶-一种单链糖蛋白，其主要在肝中合成，且在血浆中以相对较高的浓度(2μM)循环。释放至流动血液中或凝块附近的纤溶酶在与α₂抗纤溶酶形成不可逆的1:1化学计量复合物后立即被中和。

在纤溶酶原激活剂的抑制剂中，纤溶酶原激活剂抑制剂-1(PAI-1)最普遍。其由内皮细胞、单核细胞、巨噬细胞、肝细胞、脂肪细胞和血小板释放。PAI-1是tPA和u-PA二者的最重要且快速作用的生理抑制剂。

纤溶酶原激活剂抑制剂2(PAI 2)是由人类胎盘合成。主要在妊娠期间在人类血浆中发现显著水平的PAI 2。

最后，凝血酶可激活的纤维蛋白溶解抑制剂(TAFI)是一种血浆羧肽酶，其对羧基末端的精氨酸和赖氨酸残基具有特异性，用作纤维蛋白溶解的有效抑制剂。

在自发出血事件、创伤和贯穿手术程序期间，治疗具有各种凝血异常的患者是必需的。在多数此类情况下，使用血液/血浆源产品(例如常规血浆或新鲜冷冻血浆-FFP)。这些产品含有凝血因子和纤溶蛋白，并且因此应该可通过诱发形成止血凝块来终止出血并纠正失去的或受损的凝血异常。通常，由于形成稳定止血凝块的能力不足，任何凝血因子的缺少或异常都可导致出血倾向。不受任何理论的束缚，本发明人假定，负责裂解止血凝块的纤溶蛋白的存在可导致凝块溶解和出血现象的加重。

因此，一旦在通过可用的血液/血浆源产品置换失去的凝血因子后已形成止血凝块，如果需要，通过纤溶系统来完成凝块溶解。然而，如果不需要凝块溶解并且需要较高相反活性，例如在出血情况中保持止血凝块或产生更多血液凝块，那么用由凝血因子组成但耗尽纤溶因子的血液/血浆源产品治疗是一种理想的解决方案。

本发明人首次假设对用于治疗或预防包括凝血病在内的先天性或获得性出血倾向中的出血的含有凝血因子但无纤溶因子的产品的这种需要，并且这种需要刺激本发明人研发可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性的血液和血液源产品，具体地t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性产品，特别是t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性新鲜血浆、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性FFP以及t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性冷沉淀物，以满足对无纤溶蛋白止血产品的长期需要。

具体地，本发明人假设，通过所输注凝血因子实现的凝块形成还激活纤溶系统，并加快新形成凝块的裂解。基于此，本发明公开，从血液和血浆产品提取t-PA并耗尽纤溶酶原或使其失活防止不利的纤维蛋白溶解并提高产品的功效，并且最大限度地减少给予患者的量。

因此，产生可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性的血液和血液源产品，具体地t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液，以及缺少纤溶活性的血浆产品，并且另外，这些产品富含内源纤溶酶抑制剂α₂抗纤溶酶。这些产品将适合于治疗活动性出血或预防患有凝血病的患者的预期出血。

使用t-PA缺乏性和无纤溶酶原血液或血浆产品降低内源纤溶系统的活性，改善出血患者的止血，同时产品中α₂抗纤溶酶的存在进一步增加终止或防止任何止血凝块消溶所需的内源抗纤溶活性，并且因此预防任何危及生命的出血。

本发明人采用的新治疗策略可导致研发出新产品，其同时展现促凝血和抗纤溶性质(如实施例中所示)。本发明的这些产品非常有价值，并且可在与出血相关的需要形成抵抗纤维蛋白溶解的凝块的情况下证实新治疗策略。如实施例所示，为了耗尽t-PA和纤溶酶原，将经赖氨酸或赖氨酸类似物涂布的珠粒施用至血液和血液源产品导致这些产品抑制纤维蛋白溶解，如通过凝块裂解测定(图2至图3)或通过凝血弹性描记法(图5至图6)所测定。具体地，在t-PA缺乏性和纤溶酶原耗尽的血浆(图2)、t-PA和纤溶酶原耗尽的冷沉淀物(图3)以及t-PA和纤溶酶原耗尽的全血(图4)的情况下观察到对纤维蛋白溶解的抑制。另外，从全血耗尽t-PA和纤溶酶原导致产品的组合促凝血特性：一方面增加凝血，另一方面减少纤维蛋白溶解，如通过TEG(图5至图6)所测定。此外，本发明的产品(t-PA和纤溶酶原耗尽的血浆)在鼠类尾尖模型中显著减少出血量(图7至图8)。最后，将本发明的产品与市售纤溶酶原缺乏性产品(即)相比较，并提供显著治疗优势。明确显示，即使在凝血酶存在下添加纤溶酶原后，本发明的产品仍显示增加的凝块稳定性(图10)。这种增强的稳定性归因于从本发明的血液产品耗尽tPA，如图11中所示。如图12所示，用于制备产品的可移除纤溶酶原的商业凝胶无法结合tPA，并且由此缺少从血液或血液产品耗尽tPA的能力。所得混合物(产品)仍含有tPA，并且因此可激活所治疗区域中存在的任何纤溶酶原，由此展现纤溶活性。因此，美国专利第7,125,569号中公开的无纤溶酶原产品可仅作为生物胶用于局部施用，并且与输血中的全身性使用或治疗与纤溶或溶栓疗法相关的出血无关。

实施例6中呈现的使用大鼠内出血模型进行的另一比较体内测定揭示，本发明的产品相对于商业产品甚至在局部施用中具有显著缩短出血时间的明显优势。

因此，本发明的第一方面涉及可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性的血液和血液源产品。应注意，本发明的产品包含至少一种凝血因子并具有降低的纤溶活性。

如本文所指示，在一些实施方案中，本发明的产品缺乏纤溶酶原和/或纤溶酶活性。纤溶酶原在激活形成活性纤溶酶时显示蛋白水解活性，具体地将蛋白质裂解或分解为较小的多肽或氨基酸。在这方面，本发明的产品缺乏纤溶酶原或纤溶酶蛋白水解活性。在一些具体实施方案中，纤溶酶和纤溶酶原的蛋白水解活性涉及纤维蛋白的裂解，由此溶解纤维蛋白凝块。应了解，术语“缺乏纤溶酶和纤溶酶原活性”意味着，与血液或血液产品(具体地，未经处理的血液或血液产品)中的活性纤溶酶或纤溶酶原的蛋白水解活性相比，本发明的产品缺少或显示“减少的”、“降低的”、“减轻的”、“受抑制的”或“减弱的”纤溶酶和纤溶酶原的蛋白水解活性，其程度为以下中的任一项：约1％至99.9％，具体地约1％至约5％、约5％至10％、约10％至15％、约15％至20％、约20％至25％、约25％至30％、约30％至35％、约35％至40％、约40％至45％、约45％至50％、约50％至55％、约55％至60％、约60％至65％、约65％至70％、约75％至80％、约80％至85％、约85％至90％、约90％至95％、约95％至99％、或约99％至99.9％或100％。

在一些具体实施方案中，本发明的产品可为t-PA缺乏性血液或血液源产品。在一些其他具体实施方案中，本发明的产品可缺乏纤溶酶原和/或纤溶酶活性。在又一些具体实施方案中，本发明的产品可为t-PA缺乏性的且缺乏纤溶酶原和/或纤溶酶活性。在又一些另外的实施方案中，本发明的产品可为t-PA缺乏性血液或血液源产品。在一些其他具体实施方案中，本发明的产品可为纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品。在又一些具体实施方案中，本发明所提供的产品可为t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液和血液源产品，其包含至少一种凝血因子并显示降低的纤溶活性。

如上所述，本发明的产品可为tPA缺乏性产品。应了解，本文所用关于组织纤溶酶原激活剂(也称为PLAT；酶条目EC 3.4.21.68,)的术语tPA涉及分泌的丝氨酸蛋白酶，其将前酶纤溶酶原转化并激活为有效纤溶性酶，即纤溶酶。tPA在血管内皮细胞中作为单一多肽链合成，其经历纤溶酶或胰蛋白酶在中心位置的精氨酸-异亮氨酸键的蛋白水解裂解，得到由N末端衍生的重链和C末端轻链构成的双链二硫键连接形式。tPA基因(DNA acc.NT 167187.1，定位至chr.8p11.21)含有14个外显子，其编码包括两个kringle区(K1和K2)和与生长因子同源的区域的重链结构域、以及包含丝氨酸蛋白酶催化位点的轻链结构域。tPA基因的可变剪接得到多种编码不同同种型的转录变体，所述同种型参与除了纤维蛋白溶解以外的多种生物过程，例如细胞迁移和组织重塑。增加的tPA活性引起纤维蛋白溶解亢进，表现为出血过多；降低的tPA活性导致纤维蛋白溶解低下，其可导致血栓形成或栓塞。tPA连锁表型包括家族性纤维蛋白溶解亢进(由于tPA释放增加所致)和家族性血栓形成倾向(由于tPA释放减少所致)(OMIM num.612348)。

如本文所用的“tPA缺乏性产品”或“无tPA产品”意味着，与未经处理的血液或血液产品相比，本发明的产品(根据一些实施方案，已通过用tPA结合剂和/或纤溶酶原结合剂处理血液或血液产品来制备)显示减少的、降低的、减弱的tPA的量(通常以约100％至50％存在)。更具体地说，具体地，在与未经处理的血液或血液产品相比时，或在一些实施方案中，与市售产品相比，从本发明的产品移除至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的tPA(参见图11)。换言之，本发明的产品可包含tPA，其量为其他产品或未经处理的血液或血液产品中tPA的量的约0.01％至约50％。具体地，与未经处理的血液或血液产品相比，tPA的量为约0.01％或更少、0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更少、甚至60％或70％。

在又一些另外的实施方案中，本发明的产品还可为纤溶酶原缺乏性的。如本文所用的纤溶酶原(也称为PLG，酶条目EC:3.4.21.7)是纤溶系统的主要组分，并且主要在肝中合成。人体中存在纤溶酶原的两个主要糖型-I型纤溶酶原含有两个糖基化部分(N连接至N289和O连接至T346)，而II型纤溶酶原仅含有单一O连接糖(O连接至T346)。II型纤溶酶原比I型糖型优先被募集至细胞表面。相反，I型纤溶酶原似乎更易被募集至血液凝块。在循环中，纤溶酶原采取封闭的激活抗性构象。在结合至凝块或结合至细胞表面后，纤溶酶原采取可通过多种酶转化为活性纤溶酶的开放形式，所述酶包括组织纤溶酶原激活剂(tPA)、尿激酶纤溶酶原激活剂(uPA)、激肽释放酶和因子XII(Hageman因子)。更具体地说，纤溶酶原在位置560-561的单一Arg-Val肽键处的裂解(激活)产生活性丝氨酸蛋白酶纤溶酶，其继而溶解纤维蛋白凝块。

全长纤溶酶原包含7个结构域。除了C末端糜蛋白酶样丝氨酸蛋白酶结构域以外，纤溶酶原还含有N末端Pan Apple结构域(PAp)以及5个kringle结构域(KR1-5)。Pan-Apple结构域含有用于维持纤溶酶原呈封闭形式的重要决定子，并且kringle结构域负责结合至受体和底物中存在的赖氨酸残基。

在一些实施方案中，本发明所提到的纤溶酶原可为人类纤溶酶原。在此类实施方案中，纤溶酶原基因(GenBank：AY192161.1，定位至chr6q26)跨越约52.5kb的DNA并且含有19个外显子(OMIM num173350)。

如本文所用的“纤溶酶原缺乏性产品”或“无纤溶酶原产品”意味着，与未经处理的血液或血液产品相比，本发明的产品(根据一些实施方案，已通过用tPA结合剂和/或纤溶酶原结合剂处理血液或血液产品来制备)显示减少的、降低的、减弱的纤溶酶原的量(约100％至50％)。更具体地说，具体地，在与未经处理的血液或血液产品相比时，从本发明的产品移除至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的血液或血液产品中通常存在的纤溶酶原。换言之，本发明的产品可包含纤溶酶原，其量为其他产品或未经处理的血液或血液产品中的纤溶酶原的量的约0.01％至约50％。具体地，与未经处理的血液或血液产品相比，纤溶酶原的量为约0.01％或更少、0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％或更少。

如上所述，由于缺少tPA和纤溶酶原，本发明的产品显示减少的纤溶活性。如本文所用的纤溶活性是指血液和血液源产品中的一些蛋白水解酶溶解纤维蛋白和血液凝块的能力。裂解纤维蛋白的主要蛋白水解酶是纤溶酶。在纤溶酶分解纤维蛋白时，形成纤维蛋白降解产物(FDP)。FDP与凝血酶竞争，并且因此通过防止纤维蛋白原转化为纤维蛋白来减慢凝块形成。

如上文所指示，本发明的血液产品显示减少的或降低的纤溶活性。应了解，如本文所提到的术语“减少的”、“降低的”、“减轻的”、“受抑制的”或“减弱”涉及，与包含tPA和/或纤溶酶原的血液或血液产品相比，与未经tPA和/或纤溶酶原结合化合物(例如，TXA)处理的血液或血液产品相比，与正常血液或血液产品相比，或与市售血液产品相比，某一过程(具体地，纤溶活性)的迟延、限制、降低或减少，其程度为以下中的任一项：约1％至99.9％，具体地约1％至约5％、约5％至10％、约10％至15％、约15％至20％、约20％至25％、约25％至30％、约30％至35％、约35％至40％、约40％至45％、约45％至50％、约50％至55％、约55％至60％、约60％至65％、约65％至70％、约75％至80％、约80％至85％、约85％至90％、约90％至95％、约95％至99％或约99％至99.9％或甚至100％。换言之，与未经处理的血液或血液产品的纤溶活性相比，这些产品显示无纤溶活性，或至多可忽略的且减少的纤溶活性，具体地约0.01％或更低、0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更低的纤溶活性。

在一些具体实施方案中，本发明的具有减少的纤溶活性的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液和血液源产品是全血、血浆、新鲜冷冻血浆(FFP)、富血小板血浆(PRP)和冷沉淀物中的至少一种。

在拯救生命中，输血仍是最重要的因素。在现代血库疗法中，输注血液组分而不是全血。

血液组分疗法是指将血液分离为组分，以容许仅向患者输注特定所需组分，从而避免使用不需要的组分。通过使用血液组分，可用来自一名捐献者的血液治疗若干名患者。

如本文所用的术语“新鲜冷冻血浆”(FFP)涉及主要血液组分，其为已在献血后冷冻并保藏并将用于输血的人类血液的无细胞液体部分。在献血后，将一单位人类血液离心，分离血液的细胞内容物，并将剩余的血浆在收集8小时内于-18℃(0°F)或更低温度下冷冻。

FFP含有凝血、纤溶和补体系统的所有组分(因子/蛋白质)。对于FFP在单一或多重凝血缺陷、以及在现有或预期出血(如在创伤或手术中所发生)中的使用，存在充分定义的指征。

如本文所用的“冷沉淀物”涉及通过在收集6-8hr内快速冷冻(如对FFP所进行)和在4℃下快速融化而从单一单位的新鲜血浆获得的经沉淀血浆蛋白质。冷沉淀物富含因子VIII、因子XIII、von Willebrand因子和纤维蛋白原。因此，这种组分适合于治疗或预防与上文所提到的凝血蛋白的缺少或受损相关的遗传性或获得性病症中的出血。如实施例2中所示的本发明人的数据指示，常规冷沉淀物含有可由纤溶酶原激活剂激活并由此促进凝块裂解的纤溶酶原，从而在接受者中发挥有害作用。缺少tPA和纤溶酶原的本发明的冷沉淀物具有降低的纤溶活性，并且因此特别适合于治疗与上文所提到的凝血蛋白的缺少或受损相关的遗传性或获得性病症。

“富血小板血浆”(PRP)血液组分是从一单位新鲜(捐献的)血液通过离心或血液分离术程序来制备。

除了从标准单位的全血制备以外，血液组分还可通过血液分离术程序获得。血液分离术是使用分离设备/机器来实施，所述设备/机器是半自动化血液分离仪器。在这个程序中，如果计划用血浆进行捐献，那么使捐献者的抗凝全血通过设备，在所述设备中将血液分离为红细胞、血浆和白细胞/血小板部分，然后将各部分返回受试者。只有所分离的血浆不返回受试者，而是进一步用于捐献。

若干种半自动化血细胞分离仪器可用于收集血小板、粒细胞、血液干细胞、单核细胞和血浆。所有这些仪器都使用离心来分离血液组分。一些血液分离术程序包括两次静脉穿刺术，其中血液从捐献者连续流经血细胞分离器；其他血液分离术程序可通过单次静脉穿刺术和间歇式取血和回血来完成。

在某些具体实施方案中，本发明提供了可包含纤维蛋白原的血液和血液源产品。在更具体的实施方案中，本发明的产品可进一步补充有外源纤维蛋白原。

纤维蛋白原(凝血因子I)是凝血级联的最后一种蛋白质。它由凝血酶(因子IIa)裂解，以产生初级不稳定纤维蛋白凝块，其进一步稳定化为坚固且稳定的凝块。纤维蛋白原是每种血液源产品的恒定成分，并且因此在需要使用纤维蛋白原的置换疗法的情况下，给予这些血液源产品以提供纤维蛋白原。更具体地说，如本文所用的纤维蛋白原(因子I)是一种可溶血浆糖蛋白，分子量为大约340kDa并作为纤维蛋白前体在血浆中循环。天然分子是同二聚体，其中两个亚基都由三种不同的多肽链(Aα、Bβ和γ)组成。亚基的所有三种多肽链以及二聚体都是通过二硫键连接。名为Aα、Bβ和γ的三对多肽链分别由610、461和411个氨基酸构成。纤维蛋白原是在肝中由肝细胞合成。纤维蛋白原在血浆中的浓度为200-400mg/dL(通常使用Clauss方法来测量)。

目前市场上可购得多种纤维蛋白原浓缩物和产品，仅举几例，Haemocomplettan(CSL Behring，德国马尔堡)、FIBRINOGENE T1和Clottagen(LFB，法国雷祖里(Les Ulis))、Fibrinogen HT(Benesis，日本大阪)和FibroRAAS(Shangai RAAS，中国上海)。然而，使用最广泛的是Haemocomplettan(在美国作为RiaSTAP商品化)，一种巴氏消毒的、高度纯化的、人类血浆源纤维蛋白原浓缩物。应了解，可将任何纤维蛋白原制剂(例如，上文公开的任何制剂)添加至本发明的无tPA和/或纤溶酶原产品。

应进一步了解，本发明的t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品还可用作纤维蛋白原的适合来源，并且可因此适合于需要用纤维蛋白原置换的情况中。

在又某些实施方案中，本发明的产品可进一步包含纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种或其任何组合的至少一种抑制剂。

在本公开中，本发明人利用抑制补充有或未补充外源纤维蛋白原的血液和血液源产品的纤溶活性的新方法，所述方法是基于对主要纤溶蛋白(具体地，tPA和纤溶酶原)的耗尽。

此外，可通过向t-PA缺乏性和纤溶酶原耗尽的血液和血液源产品中添加纤维蛋白溶解的另外抑制剂来进一步抑制本发明的产品的纤溶活性，所述另外抑制剂是例如纤溶酶抑制剂、纤溶酶原抑制剂和纤溶酶原激活剂抑制剂中的至少一种。

因此，根据具体实施方案，本发明的产品可特别适合于肠胃外使用。在肠胃外使用时，可将以下中的至少一种纤维蛋白溶解抑制剂添加至所述产品：TLCK盐酸盐(TLCK)、甲磺酸卡莫司他、苯甲脒HCl、α2-抗纤溶酶、tPA突变体、PAI-1、抑肽酶、PPACK二盐酸盐、生物素化(tTA抑制剂)、TAFI(凝血酶可激活的纤维蛋白溶解抑制剂)和赖氨酸类似物(像氨甲环酸)。

更具体地说，如本文所用的TLCK盐酸盐(TLCK)(CAS 4238-41-9)是一种活性位点定向剂，其不可逆地抑制胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，例如颗粒酶D和类胰蛋白酶。TLCK可通过与巯基的非选择性相互作用来抑制半胱氨酸蛋白酶和其他酶。为了防止蛋白水解降解，TLCK可用于蛋白质纯化方案中。已显示TLCK可选择性地使从溶组织梭菌(C.histolyticum)获得的梭菌蛋白酶失活。同样，已观察到TLCK可抑制其他蛋白酶，包括胰蛋白酶、纤溶酶原(纤溶酶)、凝血酶、木瓜蛋白酶和一些激酶(包括PKC)。

卡莫司他(INN)或FOY-305(CAS 59721-28-7)是一种胰蛋白酶样蛋白酶抑制剂，已知可抑制胰蛋白酶和多种炎性蛋白酶，包括纤溶酶、激肽释放酶和凝血酶。

苯甲脒(CAS 618-39-3)是胰蛋白酶、胰蛋白酶样酶和丝氨酸蛋白酶的可逆竞争性抑制剂。

PPACK二盐酸盐(CAS 142036-63-3)是凝血酶的高效、选择性且不可逆的抑制剂。其还可抑制tPA、因子VIIa和XIa。

凝血酶可激活的纤维蛋白溶解抑制剂(TAFI)也称为羧肽酶B2(CPB2)、羧肽酶U(CPU)、血浆羧肽酶B(pCPB)，是人类中由基因CPB2编码的酶。TAFI由肝合成并作为纤溶酶原结合的酶原在血浆中循环。当其在残基Arg92处由凝血酶/血栓调节蛋白复合物通过蛋白水解激活时，TAFI展现羧肽酶活性。激活的TAFI通过移除纤维蛋白C末端残基来减少纤维蛋白溶解，所述残基对于纤溶酶原的结合和激活是重要的。

如上所述，本发明的产品的主要优势在于其用于输血和全身性使用的适用性。因此，在另外的实施方案中，本发明的产品可适合于全身性给予。本发明的产品可根据良好医学实践通过本发明的方法来给予和用药。

如本文所用的词组“全身性给予”、“全身性地给予”意指将产品直接静脉内给予至中枢血液系统中，使得其进入患者的身体系统，并且因此经历代谢和其他类似过程。如本文所用的词组“肠胃外给予”和“肠胃外地给予”意指除了肠内和局部给予以外的给予方式，通常通过注射给予，并且包括静脉内注射或动脉内给予。

在一些另外的实施方案中，本发明的血液产品可源自自体人类来源(例如人类血液、血浆或任何其他血液产品)。

在又一些其他实施方案中，本发明的血液产品可源自同种异体人类来源(例如人类血液、血浆或任何其他血液产品)。

如本文所用的“自体”献血是这样一种概念，其中如果可预期对血液的需要并发展捐献计划，输血个体可献血用于其自身使用。这种情况在非急需手术中最常发生。用于输血的自体血液可通过术前储血来获得。在一些具体实施方案中，本发明的血液或血液产品可源自将使用相同产品治疗的人类受试者。

如本文所用的术语“同种异体血液”涉及从相同物种的无关供体收集的血液。更具体地说，在一些实施方案中，如果本发明的血液或血液产品是从至少一名或更多名人类受试者获得，同种异体来源意味着，所得产品可用于其他人类个体。

在一些实施方案中，可收集本发明的自体或同种异体血液或血液产品并维持在无菌容器中。在一些实施方案中，容器可由塑化材料制成，所述材料与血细胞生物相容并容许气体扩散，以提供最佳细胞保藏。这些血液容器是袋子与整体管道的组合，其容许将全血在封闭系统中分离为其组分，由此使细菌污染的机会降至最低，同时使得可能将所述组分储存数天或数周。然而应了解，本发明的产品可使用任何适合的容器。

仍进一步地，由于缺少tPA和/或纤溶酶以及所得的减少的纤溶活性，在一些实施方案中，本发明的产品可在适当保藏条件下进一步展现增加且延长的贮藏期限。

根据第二方面，本发明提供了组合物，其包含有效量的至少一种血液和血液源产品，所述产品可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性。应注意，这种产品可包含至少一种凝血因子并具有减少的纤溶活性。在一些另外的实施方案中，本发明的产品可为t-PA缺乏性血液或血液源产品。在一些其他具体实施方案中，本发明的产品可缺乏纤溶酶原和/或纤溶酶活性。在又一些具体实施方案中，本发明的产品可为t-PA缺乏性的且缺乏纤溶酶原和/或纤溶酶活性。在又一些另外的实施方案中，本发明的组合物所用的产品可为t-PA缺乏性血液或血液源产品。在一些其他具体实施方案中，本发明的组合物所用的产品可为纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品。在更具体的实施方案中，用于本发明的组合物的产品可为t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品。

在一些实施方案中，本发明的组合物可包含根据本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液源产品，不含另外的药学上可接受的载剂、赋形剂、添加剂、稀释剂和佐剂。在又一些另外的可选实施方案中，本发明的组合物可与药学上可接受的载剂、赋形剂、添加剂、稀释剂和佐剂中的至少一种共给予。

在又一些另外的任选实施方案中，本发明的组合物可任选地进一步包含药学上可接受的载剂、赋形剂、添加剂、稀释剂和佐剂中的至少一种。

在具体实施方案中，本发明的产品包含t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性全血、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血浆(或纤溶酶原缺乏性FFP)、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性冷沉淀物以及t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性PRP中的至少一种。

在一些实施方案中，本发明的组合物可包含如上文公开的任何实施方案中所定义的本发明的任何产品。在又一些另外的实施方案中，本发明的组合物可进一步补充有有效量的纤维蛋白原和/或任何另外的凝血因子。

在一些另外的实施方案中，本发明的组合物可适于肠胃外使用。在又另一个实施方案中，本发明的组合物可适用于局部使用。

仍进一步地，应了解，在某些实施方案中，本发明的产品可进一步适合用作药物组合物。更具体地说，本发明的组合物可包含作为活性成分的至少一种如上所述的本发明的产品或其任何组合，以及至少一种药学上可接受的载剂、稀释剂、赋形剂。

“药学上或治疗上可接受的载剂”是指不干扰活性成分的生物活性的有效性并且对宿主或患者没有毒性的载剂介质。如本文中所提到的，本发明提供的组合物任选地进一步包含至少一种药学上可接受的赋形剂或载剂。如本文所用的“药学上可接受的载剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、涂料、抗细菌和抗真菌剂等。此类介质和剂用于药物活性物质的用途为本领域所熟知。除非作为任何常规介质或剂与活性成分不相容，还期望其在治疗组合物中的用途。

在又另一个方面中，本发明涉及生物胶或密封剂，其包含可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性的血液和血液源产品。在又一些另外的实施方案中，本发明的胶所用的产品可为t-PA缺乏性血液或血液源产品。在一些其他具体实施方案中，本发明的胶所用的产品可缺乏纤溶酶原和/或纤溶酶活性。在又一些具体实施方案中，本发明的产品可为t-PA缺乏性的且缺乏纤溶酶原和/或纤溶酶活性。在更具体的实施方案中，本发明的生物胶中所用的产品可为t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液源产品。在又一些另外的具体实施方案中，本发明的胶可包含t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性FP、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性PRP、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性FFP和t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性冷沉淀物中的至少一种。

如本文所用的术语“生物胶”是指任何生物胶，其可提供活生物组织与合成或生物材料(例如贴剂)之间的粘附；由此提供所述组织与所述合成或生物材料之间的附着。

在一些实施方案中，本发明的生物胶/密封剂可由t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性PRP、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FFP以及t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性冷沉淀物中的至少一种产生。因此，本发明的生物胶/密封剂显示降低的纤溶活性，因为其缺乏主要纤溶蛋白t-PA和纤溶酶原。

在另外的实施方案中，生物胶/密封剂可由自体血浆、FFP、冷沉淀物和PRP产生。在又另一个实施方案中，生物胶/密封剂是由同种异体FP、FFP、冷沉淀物和PRP产生。

本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性生物胶/密封剂产品将使所产生的凝块抵抗由相邻组织中存在的纤溶酶原激活剂诱发的裂解。另外，t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性生物胶/密封剂产品可靶向其针对宿主相邻组织的纤溶组分的内源α₂抗纤溶酶抑制剂，由此进一步防止凝块被周围组织降解。

因此，根据一些具体实施方案，如本发明所述的t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性、具体地t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性产品/组合物(FP、FFP、冷沉淀物和PRP)可特别适合于制备随后将缺乏t-PA和纤溶酶原的纤维蛋白密封剂/胶。如本文所用的“生物胶/密封剂”是一种复杂的血液或血浆源产品，其逐渐用作生物可降解的组织粘合剂或密封剂以在许多手术情况下终止或控制出血，并防止不同组分从手术组织泄漏，如防止胃肠道(GI)、泌尿道、中枢神经系统或血管出血的情况下。这种产品通过用凝血酶裂解纤维蛋白原来模拟凝血级联的最后一步，导致形成纤维蛋白凝块。固化并粘附至施用部位的纤维蛋白凝块起流体密封剂的作用，能使组织或材料保持所需构型，并防止组分(组织组分，可包括器官的部分等)和血液泄漏，同时显示止血和愈合性质。

商业纤维蛋白密封剂产品的常用组分包括凝血因子，例如：纤维蛋白原、因子XIII、凝血酶以及纤溶蛋白纤溶酶原。然后，生物胶的内容物与分泌纤溶酶原激活剂的周围组织的相互作用将裂解胶内的纤溶酶原为纤溶酶，其继而将降解纤维蛋白凝块，从而有利于出血。因此，可包含tPA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性、具体地t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液和血液源产品的本发明的生物胶展现减少的纤溶活性，由此起有效胶/密封剂的作用。

在又一些另外的实施方案中，本发明的生物胶可进一步包含纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种的至少一种抑制剂。更具体地说，抑制剂可为纤维蛋白溶解抑制剂，例如α2-抗纤溶酶、tPA突变体、PAI-1、抑肽酶和赖氨酸类似物(像氨甲环酸)。在一些特定实施方案中，除了α₂-抗纤溶酶以外，本发明的生物胶还可进一步包含有效量的α-1抗胰蛋白酶(例如，1.5-3.5克/升)。α-1抗胰蛋白酶抑制众多蛋白酶并且因此防止组织降解。因此，可进一步使本发明的生物胶所用的不含tPA和纤溶酶原的血液、血液产品、血浆或血浆产品富含α-1抗胰蛋白酶。

α-1抗胰蛋白酶或α₁-抗胰蛋白酶(A1AT)是一种属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族的蛋白酶抑制剂。通常将其称为血清胰蛋白酶抑制剂。α1-抗胰蛋白酶还被称为α-1蛋白水解酶抑制剂(AIPI)，因为其抑制众多蛋白酶。其保护组织免受炎性细胞的酶(尤其是嗜中性粒细胞弹性蛋白酶)降解，并且在血液中的参考范围为1.5-3.5克/升，但浓度可在急性炎症时上升多倍。在其不存在时(例如在α1-抗胰蛋白酶缺乏时)，嗜中性粒细胞弹性蛋白酶自由分解有助于肺弹性的弹性蛋白，引发呼吸并发症，例如成人的气肿、或例如气肿、或例如气肿、或慢性阻塞性肺病(COPD)，以及成人或儿童的硬化。这种蛋白质的障碍包括α1-抗胰蛋白酶缺乏，一种常染色体共显性遗传病，其中缺乏α1-抗胰蛋白酶导致不受抑制的慢性组织分解。这尤其引发肺组织降解，并最终导致肺气肿的特征性表现。证据已显示，香烟烟雾可导致α₁-抗胰蛋白酶的甲硫氨酸358氧化(预处理形式中的382，所述预处理形式含有24个氨基酸的信号肽)，所述残基为结合弹性蛋白酶所必需；这被认为是吸烟(或二手烟)可导致气肿的主要机制之一。因为A1AT在肝中表达，编码所述蛋白质的基因中的某些突变可引起错误折叠和分泌受损，这可导致肝硬化。

因此，纤溶酶原缺乏性血浆或生物胶中的α-1抗胰蛋白酶应抑制可裂解生物胶的蛋白酶。α-1抗胰蛋白酶的存在将在炎症区域中特别相关，在所述炎症区域中释放诸如嗜中性粒细胞弹性蛋白酶等蛋白酶。此外，在胃肠道(GI)的手术介入中，α-1抗胰蛋白酶在本发明的生物胶或任何其他产品中的存在可抑制GI道的蛋白酶，并且因此可稳定生物胶，并防止手术后GI瘘。另外，α-1抗胰蛋白酶与a2-抗纤溶酶在无t-PA和无纤溶酶原的血浆中一起存在将使得可能治疗新的和旧的GI和泌尿道瘘。

与其他商业制剂相比，本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原耗尽的血浆源纤维蛋白密封剂/胶具有显著优势，因为从胶产品移除t-PA和纤溶酶原防止凝块裂解，如本发明在实施例1、2和5以及图5和图6中所公开。抵抗裂解的稳定凝块是相对于先前生物胶制剂的显著改良，特别是在需要治疗或预防出血的情况下。

仍进一步地，应了解，本发明的生物胶/密封剂可包含至少一种凝血促进因子(例如纤维蛋白原)以及纤维蛋白原裂解酶和钙中的至少一种。应注意，所述凝血促进剂可各自任选地提供于单独隔室内。在一些具体实施方案中，本发明的生物胶可进一步包含至少一种凝血促进剂，具体地纤维蛋白原、凝血酶或任何纤维蛋白原裂解酶以及钙中的至少一种。应注意，凝血促进剂可各自任选地提供于单独隔室内。

在一些实施方案中，纤维蛋白原转化为纤维蛋白可通过组织因子(TF)或高岭土来启动。本发明的生物胶可用的纤维蛋白原裂解酶可为立止血(reptilase)。在其他实施方案中，纤维蛋白原裂解酶可为凝血酶。

更具体地说，凝血酶是在其裂解后源自凝血酶原(因子II)的催化酶。凝血酶本身裂解多种凝血因子。其裂解来自纤维蛋白原的纤维蛋白肽A和B以形成纤维蛋白单体，所述单体自发聚合以形成初级纤维蛋白凝块。因此，在一些实施方案中，本发明的生物胶可进一步包含凝血酶。

立止血是在洞蛇属(Bothrops)蛇的毒液中发现的酶，活性类似于凝血酶。立止血与凝血酶的不同之处在于，在其裂解纤维蛋白原时，释放纤维蛋白肽A而不是纤维蛋白肽B。因此，立止血裂解的最终产物也是初级纤维蛋白凝块。在又一些另外的实施方案中，本发明的生物胶可进一步包含立止血。

如本文已经描述的，凝血酶或任何其他纤维蛋白原裂解酶与纤维蛋白原的相互作用的结果是纤维蛋白原立即裂解和形成初级纤维蛋白凝块。在一些实施方案中，初级纤维蛋白凝块可通过因子XIII和钙进一步稳定化。因此，生物胶的有效局部递送需要将凝血促进剂和纤维蛋白原裂解剂保持于分开的注射器、容器、管、器皿等中。一个容器(例如注射器)应含有凝血促进蛋白/剂作为活性产品，例如可进一步补充有含有或不含因子XIII的纤维蛋白原的本发明的血液或血液产品，而另一个注射器或容器应含有凝血促进蛋白/剂作为另一活性产品，所述凝血促进蛋白/剂可为纤维蛋白原裂解酶(例如立止血)、组织因子(TF)、高岭土或凝血酶和钙。以这种方式，在注射器内不形成凝块。在注射器外部、在组织表面上需要凝块形成时，每个单独注射器将其内容物释放至适合于局部施用的共用容器/管道/喷雾装置中。

因此，除了缺乏tPA和纤溶酶原的本发明的产品以外，本发明的生物胶还可包含保持于单独注射器或容器中的如上文所述的活性产品，同时这些活性产品可通过立即释放进一步递送至用于局部施用的共用容器/管道形式中。

在又另外的实施方案中，本发明的生物胶或密封剂可进一步包含纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种的至少一种抑制剂。更具体地说，这种抑制剂可为抑肽酶、氨甲环酸和∈-氨基己酸(EACA)中的至少一种。

应进一步了解，在一些实施方案中，本发明的生物胶或密封剂(例如，纤维蛋白胶/密封剂)可源自以下中的至少一种：t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性PRP、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性FFP和t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性冷沉淀物。在一些实施方案中，t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液产品、FP、PRP或FFP可补充有或未补充外源纤维蛋白原。在又一些另外的实施方案中，PRP、FFP和冷沉淀物具有自体人类或同种异体人类来源。在又一些另外的实施方案中，这种生物胶可进一步包含纤维蛋白原以及纤维蛋白原裂解酶和钙中的至少一种，其中所述纤维蛋白原裂解酶可为凝血酶和立止血中的至少一种。在一些具体实施方案中，还可使用组织因子或高岭土来激活非固有或固有凝血途径。

两种抗纤溶剂EACA和氨甲环酸是合成的赖氨酸类似物。纤维蛋白溶解(凝块裂解)通过纤溶酶原与纤维蛋白上的赖氨酸残基结合来加快。EACA和氨甲环酸通过竞争性阻断这种结合来抑制纤维蛋白溶解。

抑肽酶是从人类肺获得的天然存在的蛋白水解酶抑制剂。其通过与催化位点的相互作用抑制纤溶酶来表达其抗纤溶性质。

因此，一方面凝块裂解蛋白(具体地，t-PA和/或纤溶酶原)的耗尽和/或失活以及另一方面另外的抗纤溶剂的添加赋予所形成凝块改良的稳定性，由此提供治疗或预防局部出血或出血泄漏的更有效方式。泄漏可在胃肠(GI)或泌尿道的背景下，或在神经外科的情况下在脑脊液(CSF)的背景下。

应了解，在一些实施方案中，本发明的生物密封剂/胶可适于局部给予。“局部给予”意味着，本发明的纤维蛋白密封剂/胶或本发明的任何tPA和纤溶酶原缺乏性产品可局部给予。具体地，借助外部注射、喷雾或任何其他浅表施用将产品(本发明的胶或任何其他产品)施用至表面上。本发明的纤维蛋白密封剂/胶或任何其他tPA和纤溶酶原缺乏性产品可包括任何局部施用工具，或可设计为适于局部给予的形式，例如透皮贴剂、软膏剂、洗剂、乳膏剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉剂。仍进一步地，必须理解，术语“局部”是指局部施用，其并非全身性施用，尽管包括但不限于真皮或透皮施用。局部施用可通过使用导管、注射器或任何其他施药器或任何其他倾倒、深化、浸渍或涂布工具进一步局部施用在所治疗表面、器官或组织上。常规的药物载剂、水性剂、粉剂或油性基料、增稠剂等可为必需或合意的。

在又一些具体的非限制性实施方案中，本发明的胶可适于透皮递送。透皮递送能以多种方式来完成。本文中的“透皮”意指穿过皮肤进入受试者的血流中，借此提供全身性效果。虽然所述术语包括跨粘膜，即穿过粘膜组织以包括舌下、经颊、经阴道和经直肠递送，但通常透皮递送是穿过受试者的皮肤来实现。出于这个原因，为简洁起见，本文中通常仅提到皮肤，但应了解，本文所述的透皮递送也可以是跨粘膜的。

根据一些实施方案，可提供透皮递送系统，其包含本发明的生物密封剂/胶。这种胶能以多种不同方式呈现，典型的呈现是允许透皮递送的呈现。例如，纤维蛋白密封剂/胶可含于设计为贴在患者皮肤上的粘合贴剂内，或配制为易于破裂的胶囊剂或囊剂。其他配制物为技术人员已知，例如局部施用的凝胶剂。通常，本发明的生物密封剂/胶作为粘合透皮贴剂呈现。包含本发明的生物胶的此类贴剂构成用于透皮递送其中所含的本发明的组合物的递送系统。

本文中的贴剂或粘合贴剂意指适于粘附至受试者的皮肤或粘膜组织的材料。通常，本文中的贴剂具有相当大的刚性，并且在使用中包含暴露于环境的背衬层和在背衬层下方的本发明的生物密封剂/胶。然而，本发明的贴剂也可为非刚性的。

如上所述，生物粘合剂需要外源凝血酶的进一步贡献。可能需要另外的组分来进行凝血，包括钙离子、以及抗生素或生长因子。

市售生物粘合剂包括呈干燥形式的上文所引用的多数组分。然而，由凝血酶激活的蛋白质(例如纤维蛋白原和因子XIII)必须与凝血酶分离，因为在液体混合物中重构后，其结合会在几秒内产生纤维蛋白。

因此，生物胶试剂盒可包含至少两种组分，首先，一种批料基于由凝血酶激活的蛋白质；另一方面，一种批料基于凝血酶。

因此，适合于递送生物胶的装置可使得能重构并混合两种批料，例如用于直接施用的特定双注射器和针或喷雾器。

例如，适合的双注射器可由混合器鼻锥体构成，其顶部具有钝施药器针，附接至喷嘴以有利于两种注射器组分的混合。在压下共用活塞时，纤维蛋白密封剂溶液和凝血酶溶液在鼻锥体中等体积合并，以形成所得纤维蛋白密封剂，将其直接施用至指定组织。应注意，对于本发明的生物胶/密封剂的局部施用，可使用任何适合的施药器，例如上文所述的施药器或其任何改良形式。

本发明的另一方面涉及治疗、预防、改善、抑制出血、止血障碍和与其相关的任何出血或病理状况或延迟其发作的方法。在又一些另外的实施方案中，本发明的方法可适用于治疗障碍，包括与出血倾向相关的至少一种或任何病症。更具体地说，本发明的方法可包括以下步骤：向有需要的受试者给予有效量的至少一种可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性的血液和血液源产品、或包含所述产品的任何组合物或生物胶或密封剂。在又一些另外的实施方案中，本发明的方法所用的产品可为t-PA缺乏性血液或血液源产品。在一些其他具体实施方案中，本发明的方法所用的产品可缺乏纤溶酶原和/或纤溶酶活性。在又一些具体实施方案中，本发明的产品可为t-PA缺乏性的且缺乏纤溶酶原和/或纤溶酶活性。在一些具体实施方案中，本发明的方法可包括以下步骤：给予t-PA和/或纤溶酶原缺乏性血液或t-PA和纤溶酶原缺乏性血液源产品或包含所述血液或血液源产品的任何组合物或生物胶或密封剂。在一些具体实施方案中，本发明的方法所用的产品可为t-PA缺乏性血液或血液源产品。在一些其他具体实施方案中，本发明的方法所用的产品可为纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品。在又一些具体实施方案中，本发明的方法所用的产品可为t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品。

在一些具体实施方案中，本发明的方法采用向出血受试者或患有任何止血障碍的受试者给予治疗有效量的至少一种本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品或其任何组合，其中在一些具体实施方案中，所述产品可为以下中的至少一种：全血、血浆、新鲜冷冻血浆(FFP)、富血小板血浆(PRP)和冷沉淀物。在一些实施方案中，本发明的方法所用的血液和血液源产品可含有纤维蛋白原。在具体实施方案中，本发明的产品可进一步包含纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种或其任何组合的至少一种抑制剂。在一些实施方案中，本发明的血液产品可源自自体来源(例如，血液、血液产品、血浆)。在又其他实施方案中，本发明的方法所用的产品可源自同种异体来源。

迄今为止，某些实施方案提供了包括以下步骤的方法：向受试者给予治疗有效量的本发明的生物胶或密封剂，其包含t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液源产品。更具体地说，这种产品可为以下中的至少一种：t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性PRP、t-PA和纤溶酶原缺乏性FFP以及t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性冷沉淀物。

应了解，本发明的方法所用的生物胶/密封剂可包含至少一种凝血促进因子(例如纤维蛋白原)和至少一种纤维蛋白原裂解酶。所述凝血促进剂可各自任选地提供于单独隔室内。

在一些具体实施方案中，本发明的方法所用的胶或密封剂可进一步包含纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种的至少一种抑制剂，其中所述抑制剂为抑肽酶、氨甲环酸和∈-氨基己酸(EACA)中的至少一种。

在一些具体实施方案中，本发明的方法可适用于在有需要的受试者中治疗、防止、预防、改善、抑制出血、止血障碍和与其相关的任何出血或病理状况，所述方法包括以下步骤：向所述受试者给予治疗有效量的至少一种t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液源产品或包含所述产品的任何组合物或生物胶或密封剂。

又进一步地，本发明公开，所述产品可为以下中的至少一种：全血、血浆、新鲜冷冻血浆(FFP)、富血小板血浆(PRP)和冷沉淀物。在一些实施方案中，这种血液和血液源产品可含有纤维蛋白原。在具体实施方案中，本发明的方法所用的产品可进一步包含纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种或其组合的至少一种抑制剂。在一个具体实施方案中，这种抑制剂可为以下中的至少一种：α2-抗纤溶酶、tPA突变体和PAI-1、抗胰蛋白酶或赖氨酸类似物(像氨甲环酸)或抑肽酶。在一些实施方案中，本发明的血液产品源自自体来源(血液、血液产品、血浆等)。在又另一个实施方案中，所述产品可源自同种异体来源。

在又另外的实施方案中，通过本发明的方法给予的产品可适合于肠胃外给予。因此，在一些实施方案中，本发明的产品可以肠胃外地给予所治疗受试者。应注意，上文结合本发明的其他方面公开的任何产品可适用于本发明的任何方法中。

如本文所用的词组“肠胃外给予”和“肠胃外地给予”意指除了肠内和局部给予以外的给予方式，通常通过注射给予，包括皮下、肌内、腹膜内(IP)、静脉内(IV)和真皮内给予。所有此类化合物的性质、可用性和来源(包括在受试者中产生所需效果所需的有效量)都为本领域所熟知。

在某些实施方案中，本发明的方法可特别适用于患有止血障碍的受试者，所述止血障碍可为遗传性或获得性出血障碍。

止血障碍是归类为遗传性或获得性的出血障碍。获得性出血障碍是外部(获得性)原因诱发出血的障碍，所述原因是例如创伤、手术或纤溶治疗，如下文将讨论。

因遗传性缺乏一种或多种凝血因子引起的出血障碍是在全世界范围分布的罕见障碍。负责这些缺陷的突变型基因的纯合子或复合杂合子展现出血表现，所述出血表现具有不同严重性并且通常与特定凝血因子的活性降低程度相关。

在又另外的实施方案中，本发明的方法适用于治疗、预防、改善、抑制或延迟与遗传性止血障碍和不明确出血倾向相关的出血。

如本文所用的“遗传性止血障碍”涉及至少一种凝血因子的遗传性缺乏。更具体地说，已在编码凝血因子I、II、V、VII、X和XI的基因中鉴别出多种突变，其导致缺乏至少一种所述因子或损害其活性。这些突变的纯合子自发地或在创伤/手术后展现出血倾向。多种缺乏的杂合子很少显示出血倾向。

如本文所用的不明确出血倾向涉及出血倾向病症，但无法明确这种病症的准确诊断。

推荐评估轻度出血症状的一些患者具有未诊断的出血倾向，在诱发出血的激发事件(例如手术或分娩)发生之前无法识别所述出血倾向。关于出血表现的临床差异性在此类个体中常见，表明环境因素和其他遗传因素可改善出血风险。虽然在暴露于严重止血挑战(例如手术、拔牙、严重创伤、月经初潮或分娩)之前，轻度出血问题不会变明显，但对于这些个体尚未明确手术后出血的预测风险。性别对出血表现有影响。由于月经和/或分娩时麻烦的出血，更常推荐女性进行评估。另外，在拔牙后24小时或更长时间持续或成问题的出血增加出血障碍的可能性。无法在具有轻度粘膜皮肤出血的患者中明确诊断是实践中的常见问题。

正常实验室测试是诊断不明确出血倾向的标志。对于需要进行手术或分娩的患者，无法明确诊断可能会有问题。

对于患有不明确出血障碍的患者的轻度出血症状，使用∈-氨基己酸或氨甲环酸的纤溶抑制剂疗法可用于牙科和口腔手术，并且其可减少其他手术程序的出血。然而，在例如手术或分娩期间发生严重出血的情况下，需要血液或血液源组分。

因此，应了解，用本发明的抗纤溶t-PA缺乏性和纤溶酶原耗尽的产品治疗或预防出血的方法可特别适合于这组患者。

应了解，本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液和血液源产品以及组合物、以及本发明所述的方法可适用于任何形式的出血，所述出血伴随如本文所公开的由于缺乏因子XI、因子X、因子V、因子VII、因子II(凝血酶原)和因子I(纤维蛋白原)中的至少一种引起的遗传性止血障碍。

在又一些另外的实施方案中，本发明的方法可适用于治疗特征为凝血因子I、II、V、VII、X和XI的遗传性缺乏的障碍，包括至少一种或任何与其相关的出血倾向。

凝血因子I、II、V、VII、X和XI的遗传性缺乏是常染色体隐性出血障碍，其已在多数群体中加以描述。其相对频率在群体之间可变，这部分是由于自交群体中特定突变型基因的高频率所致。若干群体调查指示，这些出血障碍之间常见的是因子XI和VII缺乏，较不常见的障碍是因子V和X缺乏以及纤维蛋白原缺乏血症，并且最罕见障碍是因子II(凝血酶原)和因子XIII缺乏。突变型基因为纯合子或复合杂合子的受影响患者中出血表现的严重性可变，并且通常与缺乏程度相关。一些患者仅具有轻度擦伤或仅在创伤后显示出血过多。通常具有小于正常值1％的因子VII、XIII或X活性的其他患者可展现与患有严重血友病的患者类似的颅内出血和关节积血。

在一些具体实施方案中，本发明的方法可适用于治疗、预防、减少、减弱或抑制患有因子IX缺乏的患者中与遗传因子XI缺乏相关的出血、或任何获得性出血或止血病症。

遗传因子XI缺乏是作为常染色体隐性性状来遗传。所述障碍在纯合子或复合杂合子中展现为轻度至中度出血倾向，这主要与受伤相关。已在多数群体中描述了受影响受试者，但是在犹太人中，特别是阿什肯纳兹血统的犹太人，所述障碍是常见的。

由于功能障碍蛋白质所致的因子XI缺乏是罕见的，并且大多数患者具有降低的因子XI蛋白水平。总而言之，已在不同血统的非犹太和犹太患者中报道了超过150种突变，其中大部分是错义突变。

纯合子和复合杂合子中的多数出血表现与受伤相关。出血过多可在受伤时发生，或在创伤后数小时或数天开始。出血倾向取决于止血挑战和可变的受伤部位而变化。涉及具有高纤溶活性的组织(泌尿道、扁桃体、鼻子、牙槽)的手术程序通常与患有严重因子XI缺乏的患者的出血过多相关，与基因型无关。现在，根据因子XI在防止凝块裂解中所显示的功能可理解部位相关的出血倾向。因子XI缺乏本身与增加的纤维蛋白溶解相关，因此，在这些患者中在富含纤维蛋白溶解的部位手术的另外的出血风险可甚至进一步增加出血倾向。

患有因子XI缺乏的出血患者是通过FFP来治疗。对于必须进行手术程序的患有严重因子XI缺乏的患者，应谨慎评估并仔细做手术准备。在正在具有高局部纤溶活性的部位进行手术的患者中应考虑抗纤溶剂的使用。因此，在一些实施方案中，本发明提供的tPA和纤溶酶原缺乏性FFP可与治疗患有因子XI缺乏(具体地，上文所讨论的任何病症)的患者特别相关。

在其他实施方案中，本发明的方法可适用于治疗、预防、减少、减弱、抑制患有因子VII缺乏的患者中与遗传因子VII缺乏相关的出血、或任何获得性出血或止血病症。

因子VII的遗传性缺乏是一种罕见的常染色体隐性障碍，其已在多数群体中观察到。可容易地作出推定诊断，因为因子VII缺乏是产生延长的凝固时间测试凝血酶原时间(PT)的唯一凝血障碍。引起因子VII缺乏的多数突变是错义突变。

在因子VII缺乏的纯合子和复合杂合子中发生出血表现。因子VII活性小于正常值1％的患者通常呈现严重出血表现，例如导致严重关节病的关节积血和危及生命的脑出血。

具有略高因子VII水平(因子VII活性为正常值的5％或更高)的患者患有显著较轻的疾病，特征为鼻出血、牙龈出血、月经过多和容易擦伤。当在程序前没有设置在先疗法时，一些手术程序(例如拔牙、扁桃体切除术和涉及泌尿生殖道的程序)通常伴随出血。相比之下，诸如剖腹手术、疝缝手术、阑尾切除术和子宫切除术等手术程序已平安无事。这种明显差异可通过各自的受创伤组织展现的不同局部纤维蛋白溶解程度来解释。

在呈现严重出血(例如关节积血或脑出血)的患者中，使用FFP的置换疗法是必需的。在需要手术时，应考虑手术部位，因为拔牙、扁桃体切除术、鼻部手术和泌尿外科介入可能与局部纤维蛋白溶解所致的出血相关。因此，在一些实施方案中，本发明提供的tPA和纤溶酶原缺乏性FFP与治疗患有因子VII缺乏(具体地，上文所讨论的任何病症)的患者特别相关。

在又另外的实施方案中，本发明的方法可适用于治疗、预防、减少、减弱、抑制患有因子X缺乏的患者中与遗传因子X缺乏相关的出血、或任何获得性出血或止血病症。

遗传因子X缺乏是一种中度至重度出血倾向，其为常染色体隐性障碍。目前描述的95种引起因子X缺乏的突变包括大缺失、小移码缺失、无义突变和错义突变。因子X缺乏的临床表现与因子X的功能水平相关。患有严重因子X缺乏且功能因子X水平小于正常值1％的个体自发地和在创伤后出血。出血主要发生在关节和软组织中，但诸如月经过多等粘膜出血在女性中可能特别有问题。更不常见的出血是脑出血、壁内肠出血(其可产生与急腹症类似的症状)、泌尿道出血和伴随出血性假性囊肿或假性肿瘤发展的软组织出血。在患有轻度因子X缺乏的个体中，出血较不常见，通常仅发生在创伤后或手术期间或手术后。使用新鲜冷冻血浆来治疗患有因子X缺乏的患者。因此，在一些实施方案中，本发明提供的tPA和纤溶酶原缺乏性FFP可与治疗患有因子X缺乏(具体地，上文所讨论的任何病症)的患者特别相关。

在又另一个实施方案中，本发明可适用于治疗、预防、减少、减弱和抑制患有因子V缺乏的患者中与遗传因子V缺乏相关的出血、或任何获得性出血或止血病症。

遗传因子V缺乏属于较不常见的遗传性出血障碍，并且在纯合子或复合杂合子中表现为中度出血倾向。因子V缺乏是作为常染色体隐性性状而遗传。血浆因子V活性在正常值25％与60％之间范围内的杂合子通常无症状。因子V蛋白测定指示，多数纯合子和复合杂合子具有真实缺乏而不是功能障碍蛋白。已鉴别总共超过80种不同突变，其中四分之一是错义突变。因子V水平在正常值的小于1％至10％范围内的纯合或复合杂合患者展现终生出血倾向。常见表现包括瘀斑、鼻出血、牙龈出血、小撕裂伤后出血和月经过多。在多于50％的患有严重因子V缺乏的妊娠患者中发生产后出血。其他部位的出血较少见。创伤、拔牙和手术导致高出血过多风险。如果发生严重的自发出血或进行手术，应给予新鲜冷冻血浆置换。在计划血浆置换疗法时，重要的是考虑在具有高局部纤溶活性的部位(例如泌尿生殖道、口腔和鼻部)的手术程序，因为这些部位的手术会导致出血过多，并且产后出血是常见的。因此，在一些实施方案中，本发明提供的tPA和纤溶酶原缺乏性产品可与治疗患有因子V缺乏(具体地，上文所讨论的任何病症)的患者特别相关。

在某些实施方案中，本发明的方法可特别适用于治疗、预防、减少、减弱、抑制患有因子II缺乏的患者中与遗传因子II缺乏相关的出血、或任何获得性出血或止血病症。

遗传因子II(凝血酶原)缺乏是最罕见的凝血因子缺乏之一。其以两种形式存在：I型，真实缺乏(低凝血酶原血症)；和II型，其中产生功能障碍凝血酶原(异常凝血酶原血症)。这些常染色体隐性障碍在遗传上是异质性的，并且特征为轻度至中度出血倾向。

凝血酶原异常以常染色体隐性方式遗传。在患有I型缺乏的个体中，杂合子展现为正常值的大约50％的凝血酶原水平，而纯合子显示通常为正常值的小于10％的水平。已鉴别多于50种引起凝血酶原缺乏的突变，其中多数是错义突变。

遗传性I型和II型缺乏的特征为轻度至中度粘膜皮肤和软组织出血，其通常与功能性凝血酶原缺乏程度相关。在凝血酶原水平为正常值的大约1％时，出血可自发地或在创伤后发生。手术出血可较严重。可发生月经过多、鼻出血、牙龈出血、容易擦伤以及皮下血肿。

在患有遗传性凝血酶原缺乏的患者中的置换疗法由给予FFP组成。因此，在一些实施方案中，本发明提供的tPA和纤溶酶原缺乏性FFP可与治疗患有因子II缺乏(具体地，上文所讨论的任何病症)的患者特别相关。

在又另一个实施方案中，本发明可适用于治疗、预防、减少、减弱、抑制患有遗传性纤维蛋白原缺乏的患者中与遗传性纤维蛋白原缺乏相关的出血、或任何获得性出血或止血病症。

如本文所用的“纤维蛋白原(因子I)缺乏”涉及遗传性纤维蛋白原异常，包括纤维蛋白原缺乏血症(完全不存在纤维蛋白原)、异常纤维蛋白原血症和低异常纤维蛋白原血症。纤维蛋白原的遗传性障碍是罕见的，并且可细分为I型和II型障碍。I型障碍(纤维蛋白原缺乏血症和低纤维蛋白原血症)影响循环中的纤维蛋白原数量。II型障碍(异常纤维蛋白原血症和低异常纤维蛋白原血症)影响循环纤维蛋白原的质量。纤维蛋白原缺乏血症是纤维蛋白原缺乏的最严重形式，其特征为常染色体隐性遗传以及血浆中完全不存在纤维蛋白原。

异常纤维蛋白原血症定义为存在正常水平的功能异常的血浆纤维蛋白原。低异常纤维蛋白原血症定义为低水平的功能障碍蛋白。这些障碍是由三个纤维蛋白原编码基因中的多种不同突变引起的异质性障碍。异常纤维蛋白原血症和低异常纤维蛋白原血症是常染色体显性障碍。多数受影响患者关于三个纤维蛋白原基因之一的编码区中的错义突变是杂合的。因为所分泌纤维蛋白原六聚体含有三个纤维蛋白原链各自的两个拷贝，并且所得纤维蛋白网络含有所述分子的多个拷贝，一个突变型等位基因的杂合性即足以损害纤维蛋白凝块的结构和功能。

由于纤维蛋白原缺乏血症所致的出血通常在新生儿期表现，其中85％的病例呈现脐带出血，但较大年龄的发作也较常见。出血可发生在皮肤、胃肠道、生殖泌尿道或中枢神经系统中，其中颅内出血是主要死因。在纤维蛋白原缺乏血症患者中存在吸引人的脾自发破裂的易感性。月经期女性可经历月经频多。另外，在纤维蛋白原缺乏血症女性中，早期流产较常见。这些患者还可患有产前和产后出血。还观察到黄体破裂后的腹腔积血。

使用含有纤维蛋白原的商业产品的置换疗法是治疗患有遗传性纤维蛋白原缺乏的患者的唯一选择。因此，在一些实施方案中，本发明的方法可与治疗患有纤维蛋白原缺乏(具体地，上文所讨论的任何病症)的患者特别相关。特别地，在一些实施方案中，本发明所用的产品补充有纤维蛋白原。

与用于治疗遗传性凝血因子缺乏的血液源产品的商业制剂相比，本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原耗尽的血浆源产品具有显著优势，因为除了提供失去的因子(促凝血特性)以外，从产品移除t-PA和纤溶酶原赋予它们在出血情况下防止进一步凝块裂解所必需的抗纤溶特性。

在一些实施方案中，本发明的方法可适用于治疗获得性止血障碍。获得性止血障碍可为以下中的至少一种：手术诱发的出血、创伤诱发的出血、急性胃肠道出血、烧伤相关出血、出血性中风、与气肿和慢性阻塞性肺病(COPD)相关的肺部损伤、分娩相关出血、弥漫性血管内凝血(DIC)和纤溶或溶栓疗法所致的出血。

在一些具体实施方案中，本发明的方法可适用于治疗、预防、减少、减弱和抑制与手术程序(具体地，小或大手术程序)相关的出血。

手术程序是对止血系统的重大挑战，尤其是当在富含纤溶蛋白的位置进行手术时。甚至未患或患有轻度至中度出血障碍的患者也会在手术后出血过多。除了手术创伤的程度以外，还必须考虑手术部位处纤溶活性的量值。

应理解，如果手术程序是选择性的、预期的或非紧急的(例如，剖腹产手术或容许足够时间进行术前准备的任何其他大手术)，可使用本发明的产品进行术前治疗，以有利于预防或减少手术介入期间的出血过多。因此，在一些实施方案中，本发明可提供预防性方法，特别可用于患有遗传病的患者、患有纤维蛋白溶解亢进的患者和/或预期要进行手术的患者。

在另一具体实施方案中，本发明的方法适合于治疗创伤诱发的出血(创伤性出血)。

创伤性出血可由任何类型的损伤引起，例如由工伤事故和车祸、战斗或跌倒引起的任何损伤。有不同类型的创伤性伤口可引起出血。通常，创伤引起血管受损，其继而引起血液向外流到体外或向内流入身体器官(例如脑、肺、肝、肾、脾)中，或流入体腔(例如胸部和腹部)中。

除了终止出血的物理措施外，通常给予血液和血液源组分以启动血液凝固，从而最终将导致出血停止。

本发明的tPA和纤溶酶原缺乏性血液和血液源产品显示优于商业血液源产品的优势，因为其提供另外的抗纤溶特性，这会防止已形成的凝块溶解，这可能是快速停止出血所必需的。

在一些具体实施方案中，补充有或未补充外源纤维蛋白原的本发明的血液源产品(包含t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血浆、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性FFP以及t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血浆源胶/密封剂)以及所述产品的使用方法可适合于治疗急性或慢性胃肠道出血。

如本文所用的“胃肠道(GI)出血(gastrointestinal(GI)bleeding)”也称为胃肠道出血(gastrointestinal hemorrhage)，涉及从口到直肠的胃肠道中所有形式的出血。“急性胃肠道出血”意味着，短时间内存在大量失血，引起急性失血和出血性休克。症状可包括呕吐(呕血)红色血液或黑色血液(由于已消化血液所致，也称为“咖啡渣”)、血便或黑便(已消化血液，称为黑粪症)。相反，慢性胃肠道出血是长时间少量出血。在这种情况下，症状属于缺铁性贫血。

GI出血通常分为两种主要类型：上胃肠道出血和下胃肠道出血。上GI出血的病因尤其包括：消化性溃疡病、食管静脉曲张，在一些实施方案中，其可由于肝硬化和癌症而发生。下GI出血的病因尤其包括：痔疮、癌症和炎性肠病。下胃肠道和上胃肠道的内窥镜检查可定位出血区域。如果内窥镜检查不清晰，可使用医学成像。

急性上GI出血比下GI出血更常见。每年每100,000名成人中有50至150名发生上GI出血。据估计，每年每100,000人中有20至30人发生下GI出血。在美国，其一年导致约300,000例住院。GI出血的死亡风险介于5％与30％之间。出血风险在男性中更常见并且随年龄而增加。

上胃肠道出血的最常见来源是消化性溃疡。食管炎症和糜烂性疾病是次最常见病因。在患有肝硬化的患者中，50％-60％的出血是由于食管静脉曲张所致。大约一半的消化性溃疡患者具有幽门螺旋杆菌(H.pylori)感染。其他病因包括胃或十二指肠溃疡、马洛里-魏斯撕裂(Mallory-Weiss tears)、癌症和血管发育不良。发现多种药物可引起上GI出血：NSAID、COX-2抑制剂、SSRI、皮质类固醇和抗凝剂。

下胃肠道出血通常来自结肠、直肠或肛门。下胃肠道出血的常见病因包括痔疮、癌症、血管发育不良、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病(Crohn's disease)和主动脉消化道瘘。

急性胃肠道出血的治疗最初集中于复苏术，以气道管理和使用静脉内液体和血液的液体复苏开始。

结肠镜检查可用于诊断和治疗下GI出血。可采用多种技术，包括：夹持、烧灼和硬化疗法。尽管很少用手术来治疗上GI出血，但仍常用手术通过切除引起问题的肠部分来管理下GI出血。血管造影栓塞可用于上下GI出血。

本发明人发现本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性产品具有降低的纤溶活性(实施例)，这非常有价值，并且可用于治疗急性胃肠道出血。具体地，由于本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液以及t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FFP能防止已形成凝块溶解，将这些产品肠胃外给予呈现急性胃肠道出血的患者可通过更快停止出血而提供另外的益处(图5，图6A至图6C)。另外，如果在患有急性胃肠道出血的患者中存在使用生物胶终止局部出血的临床指征，本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液或血浆源胶/密封剂的实现方式可由于其抗纤溶特性而在快速终止出血中提供另外的止血价值。

在其他特定实施方案中，本发明的产品和方法可适合于治疗烧伤，且具体地烧伤相关出血。

烧伤是一类由热、冷、电、化学品、摩擦或辐射造成的皮肤或其他组织的损伤。多数烧伤是由于热液、固体或火焰的热量所致。在世界上多个地区的女性中，所述风险与使用开放式烹饪火焰或不安全的烹饪炉相关。酒精中毒和吸烟是其他风险因素。

仅影响浅表皮肤层的烧伤被称为浅表烧伤或一度烧伤。其呈红色，没有水疱和疼痛，通常持续3天左右。在损伤延伸至一些底层皮肤层时，其为部分厚度烧伤或二度烧伤。通常存在水疱，并且通常很疼。愈合可能需要长达八周，并且可发生结疤。在全厚度烧伤或三度烧伤中，损伤延伸至所有皮肤层。通常没有疼痛并且烧伤区域僵硬。愈合通常不会自行发生。四度烧伤另外涉及更深层组织(例如肌肉、肌腱或骨)的损伤。

治疗取决于烧伤的严重性。浅表烧伤可仅用简单止疼药来管理，而严重烧伤可能需要在专门的烧伤中心进行长时间的治疗。用自来水冷却可帮助止痛并减少损伤；然而，长时间冷却可导致低体温。部分厚度烧伤可需要用肥皂和水清洁，之后包扎。并不明确如何管理水疱，但可能合理的是，如果水疱较小，使其保持完整；如果水疱较大，对其进行引流。全厚度烧伤通常需要手术治疗，例如植皮术。由于毛细管液体渗漏和组织肿胀，大面积烧伤通常需要大量静脉内液体。最常见的烧伤并发症包括感染。

烧伤是由多种外部来源引起，归类为热(热相关)、化学、电和辐射。在美国，最常见的烧伤原因是：火或火焰(44％)、烫伤(33％)、热物体(9％)、电(4％)和化学品(3％)。多数(69％)烧伤发生在家里或工作时(9％)，并且多数为意外，有2％是由于他人袭击所致，并且有1％-2％是由于企图自杀所致。这些来源可引起对气道和/或肺的吸入性损伤，以约6％发生。

在高于44℃(111°F)的温度下，蛋白质开始失去其三维形状并开始分解。这导致细胞和组织损伤。烧伤的许多直接健康影响继发于皮肤正常功能的破坏。其包括对以下的破坏：皮肤的感觉、防止水蒸发损失的能力、以及控制体温的能力。细胞膜的破坏导致细胞失去钾至细胞外空间中，并吸收水和钠。

在大面积烧伤(超过总体表面积的30％)中，存在严重的炎症反应。这导致液体从毛细管渗漏增加，并且随后导致组织水肿。这引起总体血液体积损失，并且剩余血液经受显著血浆损失，使血液变得更稠。到诸如肾和胃肠道等器官的较差血液流动可导致肾衰竭和胃溃疡。

在血红蛋白水平降至6-8g/dL以下时，建议在需要时输血。给予血浆作为胶体体积膨胀液。

因此，在存在指征时使用血液或血浆和相关产品用于在有需要的受试者中治疗烧伤。因此，本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液或t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血浆产品是比常规血液产品更适当的替代品，并且因此，在一些实施方案中，所述本发明的产品可用于治疗受如上文所讨论的任何烧伤影响的受试者。

在又另外的实施方案中，本发明的产品和本发明提供的方法可适用于治疗出血性中风或任何其他脑损伤或创伤。

如本文所用的“出血性中风”涉及直接发生在脑实质中的出血。认为常见机制是因长期高血压而受损的脑内小动脉渗漏。患有脑出血的患者比患有缺血性中风的患者更有可能发生头痛、精神状态改变、癫痫发作、恶心和呕吐、和/或明显高血压。即使如此，这些发现也都无法可靠地区分出血性中风与缺血性中风。具体症状可源自局灶性神经功能缺损。缺损类型取决于所涉及的脑区。如果涉及优势半球(通常为左半球)，可导致由以下组成的综合征：右侧轻偏瘫、右侧偏身感觉缺失、左侧注视偏好、右侧视野裁剪和失语症。如果涉及非优势半球(通常为右半球)，可导致由以下组成的综合征：左侧轻偏瘫、左侧偏身感觉缺失、右侧注视偏好和左侧视野裁剪。

脑成像是评估疑似出血性中风的决定性步骤，并且必须在紧急情况下获得。脑成像帮助诊断出血，并且其可鉴别诸如脑室内出血、脑水肿或脑积水等并发症。非对比计算机断层摄影术(NCCT)扫描或磁共振成像(MRI)是选择的形式。

如果针对出血性中风指示用血液产品进行治疗，使用从血库获得的血液、FFP和血小板。考虑到本发明(实施例)的t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液产品的促血栓和抗纤溶特性，似乎在患有出血性中风的患者中，其是比常规血液产品更适当的出血停止剂。

在一些具体实施方案中，本发明的方法可适合于治疗与气肿和COPD相关的肺损伤。在更具体的实施方案中，本发明的方法可包括向所治疗受试者给予治疗有效量的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FFP的步骤。在一些具体实施方案中，本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FP或t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FFP由于富含α-1抗胰蛋白酶而使其更适用于治疗患有气肿和COPD的受试者。在这些疾病中，白细胞蛋白酶破坏肺的弹性，导致肺胀大并且因此发生肺气肿和慢性阻塞性肺病(COPD)。因此，本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FFP内的α-1抗胰蛋白酶可抑制白细胞蛋白酶的活性，并且借此恢复肺组织的弹性。

气肿是一种慢性(长期)肺病形式。患有气肿的人因呼出空气受限而呼吸困难。气肿有多种病因，但迄今吸烟是最常见病因。

气肿是慢性阻塞性肺病(COPD)的一种主要类型。其被称为“阻塞性”，因为患有气肿的人呼气时如同有东西阻塞了气流一样。另一种形式的COPD是慢性支气管炎，其也可由吸烟引起。

在肺中气囊的柔嫩衬里受损至无法修复时，导致气肿。最常见地，香烟烟雾中的毒素造成损伤。随着气囊之间的脆弱组织被破坏和肺中的气穴发展，气肿的肺部变化经多年缓慢进展。空气被滞留在受损肺组织的这些空间中。肺缓慢扩大，并且需要更努力地呼吸。

气肿的这个问题被称为气流受限。在肺功能测试期间，患气肿者排空肺的时间远长于未患气肿者。

除了吸烟以外，气肿的另一主要已知病因是α-1抗胰蛋白酶缺乏。然而，与吸烟相比，这是次要病因。α-1抗胰蛋白酶是在人类血液中循环的天然蛋白。其主要功能是防止白细胞损伤正常组织。因此，用富含α-1抗胰蛋白酶的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FP或t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FFP治疗患有气肿的受试者可抑制蛋白酶的活性，并且由此恢复肺组织的弹性。

慢性阻塞性肺病(COPD)是一类阻塞性肺病，特征为长期气流不畅。主要症状包括呼吸短促和咳嗽生痰。COPD通常随时间而恶化。最终，会难以走上楼或搬东西。慢性支气管炎和气肿是用于不同类型COPD的旧术语。术语“慢性支气管炎”仍用于定义在两年中每年存在至少三个月的排痰性咳嗽。

COPD是这样一类阻塞性肺病，其中存在慢性不完全可逆的气流不畅(气流受限)和不能完全呼气(空气滞留)。气流不畅是肺组织破坏(称为气肿)和小气道疾病(称为阻塞性细支气管炎)的结果。这两种因素的相对贡献因人而异。小气道的严重破坏可导致形成称为大疱的大气穴，其替代肺组织。这种形式的疾病称为大疱性气肿。

吸烟是COPD的最常见病因，诸如空气污染和遗传等多种其他因素具有较小作用。在发展中国家，常见空气污染源之一是通风较差的加热和烹饪火焰。长期暴露于这些刺激物引起肺中的炎症反应，导致小气道变窄和肺组织破坏。诊断是基于如通过肺功能测试测量的气流不畅。与哮喘相反，使用支气管扩张药无法显著改善气流减少。

COPD的最常见症状是生痰、呼吸短促和排痰性咳嗽。这些症状长时间存在，并且通常随时间而恶化。尚不清楚是否存在不同类型的COPD。尽管先前已分为气肿和慢性支气管炎，但气肿只是对肺部变化的描述，而不是疾病本身，并且慢性支气管炎只是COPD可能发生或可能不发生的症状的描述词。

晚期COPD导致肺动脉高压，其使右心室紧张并导致右心室衰竭。这种情况称为肺源性心脏病，并导致腿部肿胀和颈静脉膨出的症状。COPD比任何其他肺病都更常成为肺源性心脏病的病因。因为使用补充供氧，肺源性心脏病已变得较不常见。

因此，本发明的t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性FP或t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FFP作为COPD的补充治疗可是有益的，因为其富含α-1抗纤溶酶可抑制白细胞的蛋白酶，并且由此修复受损肺组织的弹性特性。

在某些具体实施方案中，本发明的方法可适合于治疗、预防、减少、减弱和抑制与大手术相关的出血。

大手术定义为涉及麻醉或呼吸辅助的任何手术程序。在大手术期间出血的情况下，治疗包括用商业FP、FFP或冷沉淀物置换失去的或非功能性凝血因子。然而，这可能不够，因为上述产品内tPA和纤溶酶原的存在可介导手术损伤部位的纤溶活性，并且由此促进所形成用于终止或防止出血的凝块溶解。因此，给予显示显著减少的纤溶活性的本发明的t-PA和纤溶酶原缺乏性产品是比商业产品更好更有效的治疗选择，因为除了用本发明的产品补充凝血因子以外，其抗纤溶活性(如通过实施例所示)可减少或防止商业产品中存在的因纤溶蛋白诱发的凝块裂解所致的出血。

在特定实施方案中，本发明的方法适用于心脏直视手术。可预期一些手术程序会引起严重出血，例如心脏直视手术。在这些手术中，使用体外循环(心肺转流术-CPB)。

心血管(心脏直视)手术是由心外科医生对心脏或大血管进行的手术。通常，进行所述手术以治疗缺血性心脏病(例如，冠状动脉旁路移植术)的并发症，纠正先天性心脏病，或治疗各种病因的瓣膜性心脏病，所述病因包括心内膜炎、风湿性心脏病和动脉粥样硬化。其还包括心脏移植。在心脏直视手术期间，心脏暂时停止跳动。将经历心脏直视手术的患者置于心肺转流术上，也就是为他们泵送其血液和氧的机器。机器的功能永远无法与正常的心脏和肺相同，因此，与许多手术程序类似，将处于这种机器上的时间保持到最短。这种人工方法提供旁路，以临时满足患者对心肺功能的需要。在这些手术中发生的出血现象是由于手术期间使用的抗凝血药所致，其故意诱发凝血缺乏。另外，源自血液流经体外循环的血小板功能障碍促进出血倾向。

应认识到，本发明的方法可特别适用于通过CPB经历心脏直视手术的受试者。本发明的产品、组合物和方法可赋予这些患者如下双重有益效果：

1.在心脏直视手术期间，血液将流经加至心肺机(CPB机器)的管，而所述管经氨甲环酸涂布以从血液耗尽t-PA和/或纤溶酶原(如实验程序中所详述)。泵将引导血液从CPB机器流至患者。在流经此管的同时，使耗尽t-PA和纤溶酶原的血液返回患者的循环。

通过这种方式，返回的血液的纤溶活性较低且富含抗纤溶活性，由此提供针对出血倾向的保护。

2.如果由于上文所提到的原因发生出血，则可用本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原耗尽的血液或血液源产品治疗患者以终止出血，预期所述产品由于其抗纤溶特性而在停止出血中更有效(另外如图7中所示)。

在另外的实施方案中，本发明的方法适合于在治疗与肝移植手术相关的出血中实施。肝在止血和血栓形成中起关键作用。肝实质细胞是多数凝血因子、凝血生理抑制剂和纤溶系统的必要组分的合成部位。肝还通过从循环清除激活的凝血因子和酶抑制剂复合物来调节止血和纤维蛋白溶解。因此，在患有肝病的患者中发生肝功能障碍时，跟着发生并发的止血紊乱，其可导致出血。

在移除病肝的肝移植第一阶段(无肝阶段)期间，可发生显著止血变化。因为未从循环移除激活的凝固因子，其消耗可与血小板的消耗以及继发性纤维蛋白溶解亢进一起发展。此外，由于tPA的清除不全，还发生原发性纤维蛋白溶解亢进。肝移植期间的最严重止血变化发生在供体肝再灌注之后。血小板滞留于移植物中，导致血小板减少症加重，并因诱发内皮细胞凋亡而引起移植物损伤。从再灌注移植物释放组织因子和tPA进一步引起纤维蛋白溶解。因此，认为纤维蛋白溶解亢进在无肝和再灌注期间显著促进受损止血。此外，移植物释放可抑制凝血的肝素样物质。另外，诸如低体温、代谢性酸中毒和血液稀释等其他因素对此期间的止血造成不良影响。肝移植是具有大面积手术伤口表面的冗长程序，包括侧支静脉的潜在事项处理。改进的手术技术和麻醉护理已导致在肝移植期间显著减少失血。在发生不受控制的出血时，可输注浓集的红细胞、血小板和新鲜冷冻血浆。使用合成抗纤溶剂是一般惯例，例如氨甲环酸(赖氨酸类似物)和抑肽酶(丝氨酸蛋白酶抑制剂)。

因此应了解，本发明所述的本发明的产品、组合物和方法由于其抗纤溶特性可特别适用于停止肝移植手术诱发的与纤维蛋白溶解亢进状态相关的出血。应了解，本发明的方法可适用于涉及任何器官或组织移植(例如肝、肾、肺、心脏、胰腺、皮肤、血管等)的任何手术。

在又另一个实施方案中，本发明的产品可适用于治疗纤溶/溶栓疗法诱发的出血。

纤溶/溶栓疗法主要在患有急性心肌梗塞(急性冠状动脉血栓形成)的患者中或在患有急性中风(急性脑动脉血栓形成)的患者中给予。纤溶/溶栓疗法的目标是在阻塞血管中快速恢复血流，这是通过加快血栓的纤溶蛋白水解来实现的。纤溶疗法通常导致纤溶状态，因为纤溶酶原激活并不限于血栓。这些效应复杂并且包括纤维蛋白原水平降低、纤维蛋白原降解产物增加以及凝血因子减少。纤溶疗法的并发症是出血。出血并发症在使用纤溶疗法时比使用抗凝剂疗法时更常见，并且需要快速诊断和管理。两个问题促进出血过多。第一，纤溶效应并不限于血栓形成部位，通常是全身性的。因此，在脑、胃肠道或其他地方，在由治疗所需导管引起的血管损伤部位或在病理性病灶内，防止出血所需的任何止血栓也易于溶解。最严重并发症是颅内出血，其在大约1％患者中发生，并且与高死亡率和存活者的严重失能相关。最常见出血并发症与侵入性血管程序(例如放置动脉和静脉导管)相关。在这些部位的一些出血是常见的并且如果其可通过局部施压或其他简单措施来管理，所述出血不应成为中断治疗的原因。所述问题可通过限制静脉和动脉穿刺以及通过提前设置局部措施来降至最低。严重出血还可因预先存在的病灶(例如胃肠道溃疡或生殖泌尿病灶)所致。

治疗纤维蛋白溶解/溶栓后的出血并发症涉及引导至局部部位的措施以及全身性低凝状态的纠正，包括置换疗法以纠正全身性纤溶酶血症引起的止血缺陷。通常需要纤维蛋白原置换，并且可通过给予冷沉淀物来完成，并且可使用新鲜冷冻血浆来置换其他止血蛋白。

应注意，纤溶/溶栓疗法涉及使用抗凝剂或抗凝血剂。如本文所用的，术语“抗凝剂”旨在意指干扰血液凝固的任何剂。一些抗凝剂(例如香豆素衍生物双羟香豆素(双香豆素)和华法林(warfarin)(可密定(Coumadin)))抑制凝血酶原(一种凝块形成物质)和其他凝固因子的合成。抗凝剂可包括但不限于用作以下的化合物：β2肾上腺素能受体拮抗剂、神经肽V2拮抗剂、前列腺环素类似物、血栓素合酶抑制剂、钙激动剂、香豆素衍生物、弹性蛋白酶抑制剂、非甾类抗炎性凝血酶抑制剂、脂氧合酶抑制剂、因子ViIa抑制剂、因子Xa抑制剂、磷酸二酯酶III抑制剂、肝素和纤维蛋白原糖蛋白Ilb/IIIa拮抗剂。

香豆素是维生素K拮抗剂。这个类别的重要成员是华法林(可密定)。这些抗凝剂用于治疗患有深静脉血栓形成(DVT)、肺栓塞(PE)的患者，并用于预防患有心房颤动(AF)和人工假体心脏瓣膜的患者的栓塞。其他实例是醋硝香豆醇、苯并香豆素、黑毛桩菇毒素(atromentin)和苯茚二酮。

肝素是一种生物物质，通常从猪肠制得。其通过激活阻断凝血酶凝固血液的抗凝血酶III来发挥作用。更高加工度的产品低分子量肝素是有用的，因为其不需要监测APTT凝血参数并且具有更少副作用，如例如依诺肝素(克赛(Clexane))。

磺达肝素是肝素中由五个糖构成的合成糖(五糖)，其结合至抗凝血酶并且是因子Xa的抑制剂。其是比低分子量肝素更小的分子。另一实例是艾屈肝素钠(Idraparinuxsodium)，其具有与磺达肝素类似的化学结构和作用方法。

诸如利伐沙班、阿哌沙班和依度沙班(edoxaban)等药物通过直接抑制因子Xa来起作用(与通过抗凝血酶激活来起作用的肝素和磺达肝素不同)。

另外的实例包括但不限于来自Portola Pharmaceuticals的贝曲沙班(betrixaban)、来自Astellas的达瑞沙班(darexaban)(YM150)和更新的来自Takeda的莱塔沙班(letaxaban)(TAK-442)以及来自Pfizer的伊利巴沙班(eribaxaban)(PD0348292)。

另一类型的抗凝剂是直接凝血酶抑制剂。这个类别的当前成员包括但不限于二价药物水蛭素、来匹卢定和比伐卢定；以及单价药物阿加曲班和达比加群。

抗凝血酶蛋白本身用作蛋白质治疗性抗凝剂，其可从人类血浆纯化或以重组方式产生(例如，Atryn，其是在遗传修饰山羊的乳中产生)。

如上文所指示，抗凝剂给予(例如肝素)是适用于急性静脉血栓形成，适用于在手术后(尤其整形外科)和固定患者中预防血栓形成，并且适用于冲洗静脉内管线以维持通畅性的标准抗血栓形成疗法。然而，由于其效力，肝素和LMWH具有缺点。由于简单的运动压力和伴随的与物体的接触或在手术部位所致的不受控的出血是严重并发症。另外，大约5％(范围高达30％)经肝素治疗的患者以及约2％接受未分级肝素(UFH)的患者发生免疫介导的血小板减少症(HIT)，其可并发出血(由于血小板计数减小)或由于血管内血小板凝集所致的动脉和静脉血栓形成。本发明的产品和方法可防止这些抗凝血剂的此类不需要的作用。

应进一步认识到，使用本发明的产品和组合物的治疗方法由于其抗纤溶效应(实施例2和3)而特别适用于治疗溶栓/纤溶疗法诱发的出血表现。如本文已经描述的，从本发明的产品和组合物耗尽纤溶蛋白、tPA和纤溶酶原赋予其优于商业血液源产品(FFP、冷沉淀物)的另外的优势，因为其具有另外的抗纤溶特性，并且因此提供针对凝块溶解的进一步保护。

在又一些另外的具体实施方案中，本发明提供了适用于治疗、防止、预防、改善、抑制与DIC相关的任何出血的方法。更具体地说，弥漫性血管内凝血(DIC)是一种病理过程，特征为凝固级联的广泛激活，其导致在遍布全身的小血管中形成血液凝块。这导致组织血液流动受损，并且最终可导致多器官受损。另外，随着凝血过程消耗凝固因子和血小板，正常凝固被破坏并且可从各个部位发生严重出血。

在又一些另外的实施方案中，本发明提供了适用于治疗、防止、预防、改善、抑制与分娩或妊娠相关的任何出血(例如产后出血(PPH))的方法。产后出血症或产后出血(PPH)通常定义为在分娩后最初24小时内损失多于500ml或1,000ml血液。体征和症状最初可包括：心率增加、站立时感到虚弱和呼吸速率增加。所述状况可在分娩后发生长达6周。最常见病因是分娩后子宫收缩较差、并非所有胎盘都被分娩的事实、子宫撕裂或血液凝固较差。

产后出血的病因是子宫乏力、创伤、滞留胎盘和凝血病，通常称为“四T”：

张力(Tone)：子宫乏力是子宫不能收缩并且可导致连续出血。滞留胎盘组织和感染可促进子宫乏力。子宫乏力是产后出血的最常见病因。

创伤(Trauma)：包括子宫、宫颈、阴道和会阴在内的产道损伤，即使适当监测分娩，所述损伤也可能发生。出血是大量的，因为所有这些器官在妊娠期间都变得血管更多。

组织(Tissue)：来自胎盘或胎儿的组织的滞留可导致出血。

凝血酶(Thrombin)：在凝固失败时，例如患有称为凝血病的疾病时，发生出血障碍。

应了解，在一些实施方案中，本发明的无tPA和/或纤溶酶原的产品以及使用所述产品的任何方法可适用于如上文所讨论的PPH的治疗和预防。

在又一些另外的实施方案中，本发明的方法还可适用于治疗GPS。肺出血肾炎综合征(GPS)是一种罕见的自体免疫疾病，其中抗体攻击肺和肾中的基膜，导致因肺和肾衰竭而出血。根据本发明从常规用于治疗所述患者的任何血液产品耗尽tPA和/或纤溶酶原可支持治疗。

在又一些另外的实施方案中，本发明的方法可适用于治疗由血管破裂引起的出血。

仍进一步地，如上文所述，本发明提供了适用于使用体外设备治疗、防止、预防、改善、抑制任何出血倾向的方法。

在一个具体实施方案中，体外设备是分离设备。

在这个特定实施方案中，分离设备用作产生本发明的t-PA缺乏性和/或纤溶酶原耗尽的产品的装置，所述产品要进一步用于本发明的方法中，所述方法适合于治疗出血。

如实验程序中所详述，将血液从受试者的循环转移至梯度分离容器。使全血或血液组分流经管，所述管直接或间接(例如，通过至少一个接头)涂布有氨甲环酸或者含有经氨甲环酸涂布的磁珠、或任何其他金属珠、或任何其他基质或固体载体(可通过对容器施加磁场来提取)，以耗尽t-PA和纤溶酶原，并且然后使t-PA缺乏性和/或纤溶酶原耗尽的产品返回受试者的循环中。

在另外的实施方案中，体外设备可为心肺转流术(CPB)机器。

如上文所述，血液流经加至CPB机器的经氨甲环酸涂布的管或含有经氨甲环酸涂布的磁珠的容器(所述磁珠可通过将容器呈送至磁场来提取)，以耗尽纤溶酶原(如实验程序中所详述)，并且使t-PA缺乏性和纤溶酶原耗尽的血液返回患者的循环。

在这个特定实施方案中，CPB设备用作产生本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原耗尽的产品的装置，所述产品要用于本发明的方法中，所述方法适合于治疗出血障碍。

在又一些另外的实施方案中，本发明提供的本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性或t-PA缺乏性和/或无纤溶酶原的产品，具体地t-PA缺乏性和无纤溶酶原的血液、血浆、FFP、PRP和冷沉淀物，可用作安全且有利的产品，替代常规用于治疗特定病理状况的血浆或富血小板血浆(其不缺乏t-PA和纤溶酶原)。

在一些具体实施方案中，关节内注射血浆或富血小板血浆用于治疗患有膝骨关节炎(OA)的患者。已显示，PRP注射至膝盖导致显著临床改进(Meheux CJ等人)。另一方面，认为降解多种细胞外基质组分(例如胶原和聚集蛋白聚糖核心蛋白)的尿激酶型纤溶酶原激活剂(PA)的表达在OA发展中具有特殊重要性(Pap G等人)。基质溶素和尿激酶型纤溶酶原激活蛋白在膝骨关节炎的不同阶段的切除样本和活组织检查中的表达(Pap G.等人)。因此，注射无t-PA和无纤溶酶原的PRP可预防有害作用并改善结果。因此，在一些实施方案中，本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性或无纤溶酶原的产品，具体地t-PA缺乏性和无纤溶酶原的血液、血浆、FFP、PRP和冷沉淀物，可用于治疗骨关节炎，特别是膝OA。

本发明进一步提供了在有需要的受试者中治疗、防止、预防、改善、抑制出血、止血障碍和与其相关的任何出血或病理状况的方法，所述方法包括以下步骤：向所述受试者局部给予治疗有效量的至少一种可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性的血液和/或血液源产品或包含所述产品的任何组合物或生物胶或密封剂。

在某些实施方案中，本发明提供了包括以下步骤的方法：向受试者给予治疗有效量的本发明的生物胶或密封剂，其包含t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液源产品，其中所述产品是t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性PRP、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FFP以及t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性冷沉淀物中的至少一种。

在另外的实施方案中，本发明的生物胶或密封剂包含至少一种凝血促进因子(例如纤维蛋白原)和至少一种纤维蛋白原裂解酶或任何其他直接或间接激活纤维蛋白原的剂、以及钙，其中所述凝血促进剂各自任选地提供于单独隔室内。

在又另外的实施方案中，纤溶酶抑制剂、纤溶酶原抑制剂和纤溶酶原激活剂抑制剂中的至少一种可包括但不限于抑肽酶、氨甲环酸和∈-氨基己酸(EACA)，可将其添加至本发明的生物胶。

在一些实施方案中，本发明的生物胶/密封剂可特别适合于局部给予。

因此，在某些具体实施方案中，局部给予的本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性产品可为生物(例如，纤维蛋白)胶或密封剂，用于根据本发明的方法治疗、预防、抑制、减少、消除、防止出血或血液或任何其他器官或组织组分从内源器官泄漏、或延迟其发作。

在某些具体实施方案中，本发明的方法可适合于在出血或预防预期出血、出血倾向和出血风险的治疗中使用生物胶或密封剂。在更具体的实施方案中，本发明的方法可用于在具有高出血风险的患者中预防预期出血。

在又一些特定的非限制性实施方案中，本发明进一步提供了使用本发明的生物胶/密封剂用于局部治疗或预防与手术、创伤和纤溶或溶栓疗法相关的出血的方法。

在一些另外的实施方案中，本发明的方法可适合于作为生物胶/密封剂局部用于治疗、预防、改善、抑制由大外科手术或小外科手术诱发的出血、或延迟其发作。

与大手术(如上文所详述，涉及任何涉及麻醉或呼吸辅助的手术程序)相比，小手术是涉及在活体中用仪器切开用以修复损伤或阻止疾病的医学程序。由于小手术包括在具有出血倾向的受试者中切开或切割，其为用锐边穿透或打开人体任何部位的动作，这个程序可诱发严重出血。

因此，本发明的方法特别适用于本发明的生物胶/密封剂在治疗、预防、改善、抑制大手术程序和小手术程序诱发的出血或延迟其发作中的局部使用。

在又一些其他特定实施方案中，本发明的方法使得能在与心脏直视手术相关的出血症状的治疗、预防、改善、抑制或其发作的延迟中局部使用本发明的生物胶/密封剂。

仍进一步地，在一些实施方案中，本发明的方法使得能在肝移植手术诱发的出血的治疗、预防、改善、抑制或其发作的延迟中局部使用本发明的生物胶/密封剂。

在一些特定实施方案中，本发明的方法可适合于在经诊断患有遗传性止血障碍的受试者的与外科手术相关的出血的治疗、预防、改善、抑制或其发作的延迟中局部使用本发明的生物胶/密封剂。

在患有遗传性止血障碍的患者中，可预期手术程序会引起严重出血。这些患者可在手术期间或手术后出血过多。应了解，关于患有遗传性止血障碍的患者，除了手术创伤的程度以外，还必须考虑手术部位处纤溶活性的量值。因此，在富含纤溶活性的部位(例如口腔、鼻咽腔和泌尿生殖系统，特别是前列腺床)处的手术程序可因患有遗传性止血障碍的患者出血过多而终止。

因此，涉及本发明的生物胶/密封剂在手术(尤其在纤溶活性增加的区域中)诱发出血的治疗、预防、改善、抑制或其发作的延迟中的局部使用的本发明的方法在患有遗传病的患者中具有特别价值。应理解，尽管本发明的胶可用于管理出血，但其还可用于连接和结合组织，或提供载体或支架，例如结缔组织(例如，肌肉、肌腱等)。这种载体可适用于例如肌腱损伤或疝气中。

考虑到其抗纤溶特性，本发明的局部生物胶/密封剂产品比缺少这种特性的商业制剂更适合于经历手术程序的患有遗传性止血障碍的患者。

在又一些某些实施方案中，本发明的方法可适用于作为本发明的生物胶/密封剂局部用于治疗、预防、改善、抑制经诊断患有凝血因子缺乏和不明确出血倾向的受试者的出血、或延迟其发作。

在一个具体实施方案中，本发明的方法使得能在经诊断患有因子XI缺乏的受试者的出血的治疗、预防、改善、抑制或其发作的延迟中使用本发明的局部生物胶/密封剂。

在一个更具体的实施方案中，本发明的方法使得能在经诊断患有因子X缺乏的受试者的出血的治疗、预防、改善、抑制或其发作的延迟中使用本发明的局部生物胶/密封剂。

在又另一实施方案中，本发明的方法使得能在经诊断患有因子VII缺乏的受试者的出血的治疗、预防、改善、抑制或其发作的延迟中使用本发明的局部生物胶/密封剂。

在一个特定实施方案中，本发明的方法使得能在经诊断患有因子V缺乏的受试者的出血的治疗、预防、改善、抑制或其发作的延迟中使用本发明的局部生物胶/密封剂。

在一个实施方案中，本发明的方法使得能在经诊断患有因子II缺乏的受试者的出血的治疗、预防、改善、抑制或其发作的延迟中使用本发明的局部生物胶/密封剂。

在另一个实施方案中，本发明的方法使得能在经诊断患有纤维蛋白原缺乏的受试者的出血的治疗、预防、改善、抑制或其发作的延迟中使用本发明的局部生物胶/密封剂。

应注意，在一些实施方案中，本发明的方法和无tPA和/或纤溶酶原的产品可不用于患有tPA缺乏的患者。在又一些另外的实施方案中，本发明的方法和无tPA和/或纤溶酶原的产品可不用于患有纤维蛋白溶解低下的患者。

如上文所指示，本发明提供了治疗出血、止血障碍和与其相关的任何病症的方法。如本文所用的，“疾病”、“障碍”、“病症”等，在其关于受试者的健康时，可互换使用并且具有归于每一个和所有此类术语的含义。

应理解，可互换使用的术语“相关”和“有关”在涉及本文中的病理学时，意指符合以下中的至少一项的疾病、障碍、病症或任何病理：共享因果关系，以高于巧合的频率共存，或其中至少一种疾病、障碍、病症或病理引起第二疾病、障碍、病症或病理。

如上所述，本发明提供了治疗如上文所指定的障碍的方法。如本文所用的术语“治疗”是指给予治疗量的本发明的组合物，其有效改善与疾病相关的不需要的症状，防止此类症状在其发生前表现，减慢疾病进展，减慢症状恶化，促进缓解期的开始，减慢疾病慢性进展阶段中引起的不可逆损伤，延迟所述进展阶段的开始，减轻严重性或治愈疾病，提高存活率或更快恢复，或预防疾病发生，或上述两项或更多项的组合。治疗可在止血病症最初发展时进行，或可为连续给予，例如以下给予：每天多于一次、每1天至7天、每7天至15天、每15天至30天、每个月至两个月、每两个月至6个月、或甚至更多，以实现上文所列的治疗效果。

术语“预防”是指防止或减少研究者、兽医、内科医生或其他临床医师寻求在组织、系统、动物或人类中防止的生物或医学事件的发生(具体地，出血相关障碍的发生或复发)的风险，并且术语“预防有效量”旨在意指可实现此目标的药物组合物的量。因此，在特定实施方案中，本发明的方法在预防(即防止)出血障碍相关病症中特别有效。因此，给予所述组合物的受试者较不可能经历与所述出血障碍相关的症状，所述出血障碍在过去已经历其的受试者中也较不可能复发。

如本文所提到的术语“改善”涉及由根据本发明的组合物和方法带来的症状减少以及受试者状况的改进，其中所述改进可表现为以下形式：抑制与本文所述的出血障碍相关的病理过程、显著减少其量值、或改进患病受试者的生理状态。

术语“抑制”和这个术语的所有变体都旨在涵盖对病理性症状的进展和恶化或病理性过程进展的限制或阻止，所述病理性过程症状或过程与相关。

术语“消除”涉及任选地根据下文所述的本发明的方法基本根除或移除病理性症状和可能的病理性病因。

术语“延迟”、“延迟发作”、“推迟”和其所有变体旨在涵盖减慢与蛋白质错误折叠或蛋白质聚集相关的障碍(具体地，出血障碍)及其症状的进展和/或恶化，减慢其进展、进一步恶化或发展，以使其比在根据本发明的治疗不存在下更晚出现。

如上所述，治疗或预防包括预防或延缓疾病发展、预防或延缓症状发展、和/或降低将要发展或预计要发展的此类症状的严重性。这些进一步包括改善现有症状、预防其他症状和改善或预防症状的潜在代谢病因。应了解，如本文所提到的术语“抑制”、“减轻”、“减少”或“减弱”涉及将过程(具体地，出血障碍)推迟、限制或减少，其程度为以下中的任一项：约1％至99.9％，具体地约1％至约5％、约5％至10％、约10％至15％、约15％至20％、约20％至25％、约25％至30％、约30％至35％、约35％至40％、约40％至45％、约45％至50％、约50％至55％、约55％至60％、约60％至65％、约65％至70％、约75％至80％、约80％至85％、约85％至90％、约90％至95％、约95％至99％或约99％至99.9％。

如上文所指示，本发明的方法包括给予治疗有效量的本发明的缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性的tPA缺乏性血液和血液源产品。用于本文所公开目的的“有效量”是根据如本领域中可已知的等考虑因素来确定。所述量必须有效实现如上所述的所需治疗效果，尤其取决于所治疗疾病的类型和严重性以及治疗方案。有效量通常是在适当设计的临床试验(剂量范围研究)中确定，并且本领域熟练技术人员将了解如何正确实施此类试验以确定有效量。众所周知，有效量取决于多种因素，包括在体内的分布概况、多种药理学参数，例如体内的半衰期，取决于不需要的副作用(如果存在)，取决于诸如年龄和性别等因素，等等。

更具体地说，可给予包含本发明提供的t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液或t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血浆(冷冻且新鲜)、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性冷沉淀物或t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性PRP或其任何组合或混合物的产品、组合物或试剂盒，用于预防性和/或治疗性治疗。在治疗性应用中，向已受出血障碍影响或将在诱发出血的不同情况下表现出血症状的患者给予组合物，具体地给予的量足以治愈或至少部分地阻止所述出血及其并发症。足以完成此目标的量定义为“治疗有效剂量”。这个用途的有效量将取决于患者病症的严重性和一般状态，并且因此可包括一个或多个单位的根据本发明的血液或血液产品。因此，对于输血目的，有效量可取决于患者的情况并且可在24hr内1至20和更多血液单位之间的范围内，具体地1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多。

可实施每天、每周或每月单次或多次给予的时间表，并且由治疗医师选择剂量水平和模式。更具体的实施方案涉及通常每周2-3个剂量的使用。

本发明涉及对有需要的受试者或患者的治疗。“患者”或“有需要的受试者”意指可能被上文所提到的病原体感染并且需要本文所述的防止性和预防性产品、试剂盒和方法的任何生物体，包括人类、驯养和非驯养的哺乳动物，例如犬和猫受试者、牛、猿猴、马和鼠类受试者、啮齿类动物、驯养鸟类、养殖水产、鱼和引进的观赏鱼。应了解，所治疗的受试者还可为任何爬行动物或动物园动物。

更具体地说，本发明的tPA和/或纤溶酶原缺乏性产品、组合物、试剂盒和方法旨在预防哺乳动物的病理状况。“哺乳动物受试者”意指需要所提出疗法的任何哺乳动物，包括人类、马、犬和猫受试者，最具体地人类。应注意，特别是在非人类受试者的情况下，本发明的方法可使用以下来进行：注射给予(静脉内(IV)、动脉内(IA)、肌内(IM)或皮下(SC))、饮用水、饲料、喷雾、口服灌洗液和直接给予至有需要的受试者的消化道中。

仍进一步地，本发明的tPA和纤溶酶原缺乏性产品、组合物和试剂盒及其任何组分可作为单一日剂量或多个日剂量来施用，优选地每1至7天施用。尤其预期，这种施用可每天实施一次、两次、三次、四次、五次或六次，或可每天一次、每2天一次、每3天一次、每4天一次、每5天一次、每6天一次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次或甚至一个月一次地进行。本发明的tPA和纤溶酶原缺乏性产品、组合物和试剂盒或其任何组分的施用可持续长达1天、2天、3天、4天、5天、6天、一周、两周、三周、四周、一个月、两个月、三个月或甚至更久。具体地，施用可持续一天至一个月。最具体地，施用可持续1天至7天。

应了解，本发明的方法并不限于任何给予途径。具体地，tPA和纤溶酶原缺乏性产品、组合物和试剂盒可全身地或局部地(locally)(例如局部地(topically))给予。如本文所用的词组“全身性给予”、“全身性地给予”意指以除了直接给予至中枢血液系统中以外的方式给予化合物、药物或其他材料(例如，本发明的tPA和纤溶酶原缺乏性产品)，使得其进入患者的身体系统，并且因此经历代谢和其他类似过程。

在另一方面中，本发明涵盖可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性的血液和血液源产品或其任何组合物或胶或密封剂，用于在有需要的受试者中治疗、防止、预防、改善、抑制出血、止血障碍和与其相关的任何出血或病理状况、或延迟其发作。在一些另外的实施方案中，用于本发明的产品可为t-PA缺乏性血液或血液源产品。在一些其他具体实施方案中，用于本发明的产品可缺乏纤溶酶原和/或纤溶酶活性。在又一些具体实施方案中，用于本发明的产品可为t-PA缺乏性的且缺乏纤溶酶原和/或纤溶酶活性。仍进一步地，在一些另外的实施方案中，用于本发明的产品可为t-PA缺乏性血液或血液源产品。在一些其他具体实施方案中，用于本发明的产品可为纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品。在又一些具体实施方案中，用于本发明的产品可为t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品。

因此，在另外的实施方案中，本发明的产品可与在有需要的受试者中出血的治疗中的用途相关。应注意，本发明的产品包含至少一种凝血因子并且显示减少的纤溶活性。

在一些具体实施方案中，本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品可适用于在有需要的受试者中治疗本发明公开的出血或任何止血疾病或病症。在一些实施方案中，所述产品可包含至少一种凝血因子并且显示减少的纤溶活性。

在某些实施方案中，用于根据本发明使用的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品可为以下中的至少一种：t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性全血、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血浆、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FFP、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性PRP以及t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性冷沉淀物。

本发明的一个具体实施方案包括含有纤维蛋白原的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性产品。

在又一些另外的具体实施方案中，用于根据本发明使用的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性产品可进一步包含纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种或其组合的至少一种抑制剂。

在一些具体实施方案中，本发明的产品适用于肠胃外使用。在又更具体的实施方案中，至少一种纤维蛋白溶解抑制剂。非限制性实例可包括但不限于TLCK盐酸盐(TLCK)、甲磺酸卡莫司他、苯甲脒HCl、α2-抗纤溶酶、tPA突变体、PAI-1、抑肽酶、PPACK二盐酸盐、RG1192、生物素化(tTA抑制剂)、TAFI和赖氨酸类似物(像氨甲环酸)，可添加至肠胃外使用的本发明的产品。

在另外的实施方案中，本发明的产品可源自自体或同种异体来源(例如，血液、血液产品或血浆)。

本发明的仍另外的实施方案提供了具有减少的纤溶活性的血液源t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性生物胶/密封剂，其用于在有需要的受试者中治疗、防止、预防、改善、抑制出血、止血障碍和与其相关的任何出血或病理状况或延迟其发作。

根据一些实施方案，本发明的tPA缺乏性和纤溶酶原缺乏性生物胶/密封剂可为以下中的至少一种：t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FP或FFP、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性冷沉淀物以及t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性PRP。在又一些另外的实施方案中，FP、FFP、冷沉淀物和PRP可源自自体人类来源或同种异体人类来源(血液、血浆或血液产品)。

仍进一步地，用于根据本发明使用的生物胶/密封剂可包含至少一种凝血促进因子(例如纤维蛋白原)和至少一种纤维蛋白原裂解酶以及钙。在一些实施方案中，纤维蛋白原裂解酶可为凝血酶或立止血或任何其他酶中的至少一种，如上文结合本发明的其他方面所讨论。

在一些具体实施方案中，可将纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种的至少一种抑制剂添加至用于根据本发明使用的生物胶/密封剂。更具体地说，这种抑制剂可为抑肽酶、氨甲环酸和∈-氨基己酸(EACA)中的至少一种。

应了解，在一些实施方案中，用于根据本发明使用的本发明的生物胶/密封剂可适于局部使用。

在又一些另外的实施方案中，用于根据本发明使用的生物胶可适用于在经诊断患有遗传性或获得性止血障碍并且具有创伤诱发出血或手术诱发出血的患者受试者中治疗出血和止血障碍。应理解，上文关于本发明的其他方面公开的任何障碍或病症也可适用于本方面。

在一些具体实施方案中，用于根据本发明使用的t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液或血液源产品可适用于在有需要的受试者中治疗出血或与其相关的任何病理状况。在更具体的实施方案中，所述产品包含至少一种凝血因子并且显示减少的纤溶活性。

在某些实施方案中，本发明提供了以下中的至少一种：t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性全血、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血浆、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性FFP、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性PRP和t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性冷沉淀物，用于如上文所讨论来使用。

本发明的一个具体实施方案包括含有纤维蛋白原的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性产品，用于如上文所讨论来使用。

本发明的又另外的具体实施方案提供了用于根据本发明使用的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性产品，其中所述产品可进一步包含纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种或其组合的至少一种抑制剂。

在一个具体实施方案中，本发明的产品可适用于肠胃外使用。在又更具体的实施方案中，可将以下中的至少一种纤维蛋白溶解抑制剂添加至本发明的肠胃外使用的产品：α2-抗纤溶酶、抗胰蛋白酶、tPA突变体和PAI-1或赖氨酸类似物(像氨甲环酸)。

在另外的实施方案中，本发明的产品可源自自体或同种异体来源。

在仍另外的实施方案中，用于根据本发明使用的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液源产品可尤其适合于治疗与遗传性或获得性出血障碍相关的出血。更具体地说，遗传性止血障碍可为因缺乏至少一种凝血因子和不明确出血倾向中的至少一种所致的障碍。在又一些另外的实施方案中，至少一种凝血因子的所述缺乏可为以下中的至少一项的缺乏：因子XI、因子X、因子V、因子VII、因子II(凝血酶原)和因子I(纤维蛋白原)，如上文所讨论。

根据一些另外的实施方案，本发明的产品可用于治疗与获得性止血障碍相关的出血。在更具体的实施方案中，这种获得性止血障碍可为以下中的至少一种：手术诱发的出血、创伤诱发的出血、急性胃肠道出血、烧伤、出血性中风和纤溶或溶栓疗法所致的出血。

在一些具体实施方案中，所述手术诱发的出血是大手术或小手术诱发的出血。在更具体的实施方案中，大手术可为心脏直视手术。在又一些其他实施方案中，大手术可为肝移植手术。

在又一些另外的特定实施方案中，本发明的产品可提供用于治疗胃肠道出血、烧伤和出血性中风中的至少一种。

在又一些另外的实施方案中，本发明的产品可特别适用于治疗与气肿和COPD相关的肺部损伤。

在一些具体实施方案中，本发明的t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液源产品可尤其适合于治疗与遗传性或获得性出血障碍相关的出血，其中所述产品适于肠胃外给予。

在又一些其他实施方案中，本发明的t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性产品可提供用于治疗获得性出血障碍。在这种情况下，可使用体外设备进行给予。更具体地，体外设备可为血液分离设备或心肺转流术(CPB)机器。

在一些具体实施方案中，如上文所详述可通过血液分离设备获得的本发明的t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性产品可特别适合于自体或同种异体捐献。

在又另一实施方案中，如上文所详述通过心肺转流术(CPB)获得的本发明的t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性产品特别适合于心脏直视手术。

在另一方面中，本发明涵盖t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液源产品或其任何组合物或胶或密封剂在制备用于治疗、防止、预防、改善、抑制出血、止血障碍和与其相关的任何出血或病理状况、或延迟其发作的药物中的用途。因此，在另外的实施方案中，本发明的产品可为用于在有需要的受试者中治疗出血的药物的相关制剂。在一些实施方案中，所述产品可包含至少一种凝血因子并且显示减少的纤溶活性。在一些实施方案中，所述产品可适于局部使用。

在某一实施方案中，本发明提供了以下中的至少一种的用途：t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性全血、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血浆、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性FFP、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性PRP和t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性冷沉淀物，其中所述t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性产品包含纤维蛋白原。

本发明的又另一具体实施方案提供了本发明的tPA缺乏性和纤溶酶原缺乏性产品的用途，所述产品可进一步包含纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种或其组合的至少一种抑制剂。

仍进一步地，本发明的另外的实施方案提供了具有减少的纤溶活性的血液源tPA缺乏性和纤溶酶原缺乏性生物胶/密封剂在制备用于在有需要的受试者中治疗、防止、预防、改善、抑制出血、止血障碍和与其相关的任何出血或病理状况或延迟其发作的药物中的用途。

根据一些特定实施方案，本发明所用的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液源产品可为生物胶/密封剂。本发明的这种胶/密封剂可包含以下中的至少一种：t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FP、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FFP、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性冷沉淀物以及t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性PRP。在又一些另外的实施方案中，FFP、冷沉淀物和PRP可源自自体人类或同种异体人类来源。

仍进一步地，本发明所用的生物胶/密封剂可包含至少一种凝血促进因子(例如纤维蛋白原)和至少一种纤维蛋白原裂解酶以及钙。在一些实施方案中，纤维蛋白原裂解酶可为凝血酶或立止血中的至少一种。

在一些具体实施方案中，可将纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种的至少一种抑制剂添加至本发明所用的生物胶/密封剂。更具体地说，这种抑制剂可为抑肽酶、氨甲环酸和∈-氨基己酸(EACA)中的至少一种。

本发明的仍另外的实施方案提供了血液源t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性产品或其任何组合物或胶或密封剂在制备用于在有需要的受试者中治疗、防止、预防、改善、抑制出血、止血障碍和与其相关的任何出血或病理状况或延迟其发作的药物中的用途。在一些实施方案中，所述产品可包含至少一种凝血因子。在又一些另外的实施方案中，这种产品具有减少的纤溶活性。仍进一步地，在一些实施方案中，本发明的产品可局部给予，是生物胶或密封剂。

本发明涉及包含t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液源产品的本发明的生物胶或密封剂的用途，其中所述产品是以下中的至少一种：t-PA和纤溶酶原缺乏性PRP、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FFP以及t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性冷沉淀物，其中所述PRP、FFP和冷沉淀物具有自体人类或同种异体人类来源。

仍进一步地，本发明所用的生物胶/密封剂可包含至少一种凝血促进因子(例如纤维蛋白原)和至少一种纤维蛋白原裂解酶以及钙。更具体地说，纤维蛋白原裂解酶可为立止血和凝血酶中的至少一种。

在一些具体实施方案中，可将纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种的至少一种抑制剂添加至本发明所用的生物胶/密封剂。这种抑制剂可为抑肽酶、氨甲环酸和∈-氨基己酸(EACA)中的至少一种。

在仍另外的实施方案中，本发明的胶或密封剂可用于制备旨在终止或预防与遗传性或获得性出血障碍相关的出血的药物。具体地，这种出血可由创伤或手术诱发。

仍进一步地，本发明的另外的实施方案提供了具有减少的纤溶活性的本发明的血液源t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性生物胶/密封剂在制备用于在有需要的受试者中治疗、防止、预防、改善、抑制出血和与其相关的任何出血或病理状况或延迟其发作的药物中的用途。

应理解，在任何种类的创伤(如上文所详述)后以及在任何种类的手术(小手术或大手术，特别是在富含纤溶蛋白的部位进行的手术)期间或之后，经诊断患有遗传性或获得性止血障碍的患者具有特别高的出血风险。

因此，对于尤其在纤溶活性增加的部位的创伤或手术诱发的出血的治疗，本发明的生物胶/密封剂由于其抗纤溶活性而提供比商业胶制剂更好的替代品，如上文所详述。

应了解，本发明提供了上文结合本发明的其他方面所公开的任何产品在本文所述的任何方法中的用途，所述方法用于治疗本发明结合本发明的其他方面公开的任何障碍。

在又另一方面中，本发明提供了试剂盒。在一些实施方案中，本发明的试剂盒可包含：(i)至少一种可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性的血液和血液源产品；以及(ii)至少一种凝血促进剂。在又一些另外的实施方案中，本发明的试剂盒可包含：(i)t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性PRP、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性FFP和t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性冷沉淀物中的至少一种；以及(ii)至少一种凝血促进剂。

在更具体的实施方案中，本发明的试剂盒可包含：(i)t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性PRP、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FFP及t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性冷沉淀物中的至少一种；以及(ii)至少一种凝血促进剂。

在某些实施方案中，本发明的试剂盒内包含的凝血促进剂可为至少一种纤维蛋白原和至少一种纤维蛋白原裂解酶。具体地，纤维蛋白原裂解酶可为凝血酶和立止血中的至少一种。在一些具体实施方案中，本发明的试剂盒可进一步包含钙。

任选地，所述凝血促进剂可各自提供于单独隔室中。这可促进用可分开保持并任选地给予的活性成分的组合治疗疾病和病症。本发明的试剂盒可进一步提供治疗所需的化合物和相关组分的不同成分的便捷模块形式，并且容许治疗程序中的所需灵活性。

仍进一步地，在一些实施方案中，本发明的试剂盒中的以下中的至少一种可进一步包含纤维蛋白原：t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性全血、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血浆、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性FFP、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性冷沉淀物、t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性PRP。

根据一些具体实施方案，本发明的试剂盒可特别适合于肠胃外使用。在一些实施方案中，在肠胃外使用时，本发明的试剂盒可进一步包含纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种的至少一种抑制剂。更具体地说，这种抑制剂可为α2-抗纤溶酶、tPA突变体和PAI-1或赖氨酸类似物(像氨甲环酸)中的至少一种。

应了解，本发明的试剂盒中的每一种血液或血液源产品可源自自体人类或同种异体人类来源。

根据一些实施方案，本发明的试剂盒旨在在患有与如上文所述的任何遗传性或获得性出血倾向相关的出血障碍的受试者中实现治疗效果。应进一步了解，本发明的试剂盒还可用于在具有增加的出血风险的受试者中预防所述出血。

实现治疗效果意指例如，其中所述试剂盒旨在用于治疗特定出血障碍，例如凝血因子的遗传性缺乏或与具有出血倾向的获得性障碍相关的任何病症。

因此，在一些实施方案中，本发明的试剂盒使得能将活性成分用于治疗、预防、抑制、减少、消除、防止与出血倾向相关的病理性病症或障碍或延迟其发作的方法中。

更具体地说，所述试剂盒可进一步包含用于含有单独产品的容器装置，例如分开的瓶子或分开的箔包。然而，单独产品也可含于单一未分开的容器内。通常，所述试剂盒包括单独组分的给予说明。如上所述，在单独组分优选地以不同剂型(例如，肠胃外相对于局部)给予时，以不同剂量间隔给予时，或在开方医师需要滴定组合中的个别组分时，试剂盒形式可特别有利。

根据一些实施方案，本发明的试剂盒旨在用于在患有与出血相关的障碍的受试者中实现治疗效果。实现治疗效果意指例如，其中所述试剂盒旨在用于在有需要的受试者中治疗特定障碍，例如出血或与其相关的遗传性或获得性病理状况。应进一步注意，施用本发明的试剂盒或其任何组分可形成用于患有如上文所讨论的任何病理性障碍或疾病(具体地，结合本发明的其他方面公开的那些)的受试者的补充治疗方案。仍进一步地，在一些实施方案中，本发明进一步涵盖试剂盒，其包含本发明结合本发明的其他方面公开的任何产品。

应了解，本发明所述的本发明的产品、试剂盒、生物胶或密封剂和方法可适用于任何形式的出血障碍，具体地本文所公开的任何形式的出血倾向。

本发明的另一方面涉及制备至少一种可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性的血液和血液源产品的方法。更具体地说，本发明的方法可包括以下步骤：使包含至少一种凝血因子的全血或血液源产品经历专用于tPA和纤溶酶原中的至少一种的亲和耗尽程序。在此程序期间，回收t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液源产品。这种产品缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性，并且因此显示减少的纤溶活性。

仍进一步地，在一些实施方案中，制备至少一种t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液源产品的方法采用基于亲和力的纤溶酶原和/或t-PA耗尽程序，其中所述血液源产品与至少一种特异性结合纤溶酶原和/或t-PA的分子接触。

应了解，在制备至少一种t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液源产品的采用基于亲和力的t-PA和纤溶酶原耗尽程序的方法中，特异性结合t-PA和/或纤溶酶原的分子覆盖设备内的装置、容器或管。在一些特定实施方案中，所述设备可为体外设备，例如血液分离设备或心肺转流术(CPB)机器。

在又一些特定实施方案中，特异性结合tPA和纤溶酶原并且覆盖装置、容器或管的分子可为以下中的至少一种：4-(氨基甲基)-环己烷-甲酸(氨甲环酸)、或∈-氨基己酸或赖氨酸或抗纤溶酶原抗体、或抗tPA抗体或其任何组合。

在一些特定实施方案中，特异性结合tPA和纤溶酶原中的至少一种的分子或剂可包括氨甲环酸。如本文所用的氨甲环酸(TXA)是用于在严重出血病症中治疗或预防失血过多的药物。TXA也称为反式-4-(氨基甲基)环己烷甲酸和传明酸(Tranexamsaeure)，其具有157.213g/mol的分子量和C₈H₁₅NO₂的化学式。氨甲环酸在不同国家销售并以如下商品名为人所知：Lysteda、Cyklokapron、Cyclo-F、Femstrual、Transcam、Traxyl、Pause、Espercil、Nicolda、Exacyl、Kapron、Hemostan和Hexakapron。应注意，本发明的方法可使用任何市售制剂或TXA产品。在又一些另外的实施方案中，本发明可使用任何TXA，前提是本发明所用的TXA不识别并且仅结合纤溶酶原和/或纤溶酶。仍进一步地，本发明可使用任何TXA，前提是所述TXA并非不耗尽tPA的TXA。在又一些另外的实施方案中，本发明可使用识别并结合tPA与纤溶酶原二者的任何TXA。

如上所述，对于从血液和血液产品耗尽tPA和纤溶酶原中的至少一种，本发明的方法可使用特异性结合tPA和纤溶酶原中的至少一种的剂，例如TXA。在一些实施方案中，为了有利于从本发明的产品分离并清除tPA和纤溶酶原，可将结合剂连接至固体载体。如本文所用的，“固体载体”在本文中也称为“基质”，定义为分子可通过共价键或非共价键附接的任何表面。因此，有用的固体载体包括固体和半固体基质，例如气凝胶和水凝胶、树脂、珠粒、生物芯片(包括薄膜涂布的生物芯片)、微流体芯片、硅芯片、多孔板(也称为微量滴定板或微量板)、膜、管、容器、过滤器、导电和不导电金属、玻璃(包括显微镜载玻片)和磁性载体。有用的固体载体的更具体实例包括硅胶、聚合膜、颗粒、衍生塑料薄膜、玻璃珠、棉花、塑料珠、氧化铝凝胶、尼龙、胶乳珠、磁珠、顺磁珠、超顺磁珠、淀粉等。这还包括但不限于微球颗粒，例如Lumavidin.TM.或LS珠、磁珠、带电纸、LB膜(Langmuir-Blodgett film)、功能化玻璃、锗、硅、PTFE、聚苯乙烯、砷化镓、金和银。还考虑了本领域中已知能具有纳入其表面上的官能团(例如氨基、羧基、巯基或羟基)的任何其他材料。这包括具有任何拓扑学的表面，包括但不限于球形表面和具沟表面。因此，在一些具体实施方案中，本发明的方法所用的tPA和纤溶酶原结合剂(具体地，TXA)可连接至、偶联或覆盖磁珠、金属珠或任何其他可离心颗粒，以及任何容器，例如管、器皿、注射器或设备，由此对本发明的血液产品进行基于亲和力的tPA和/或纤溶酶原耗尽。必须了解，在一些实施方案中，本发明的方法可使用任何固体载体、基质或珠粒，前提是在连接(直接或间接)至所述固体载体、基质或珠粒时，TXA不识别并仅结合纤溶酶原和/或纤溶酶。仍进一步地，可使用任何固体载体、基质或珠粒，前提是TXA在连接(直接或间接)至所述固体载体、基质或珠粒时，TXA并非不耗尽tPA的TXA。在又一些另外的实施方案中，本发明可使用任何固体载体、基质或珠粒，其在连接至TXA时，TXA识别并结合tPA与纤溶酶原二者。

在一些具体实施方案中，本发明的方法可使用但不限于磁珠或颗粒作为tPA和纤溶酶原结合剂(具体地，TXA)的固体载体。磁性颗粒是一类可使用磁场操纵的颗粒。此类颗粒一般由两种组分组成，由磁性材料(通常是铁、镍和钴)制成的核心，以及具有官能度的化学组分。术语“磁珠”和“磁性颗粒”在本文中可互换使用，并且是指可在溶液中分散或悬浮的任何颗粒，其可通过施加磁场来吸引或引导。磁性颗粒的非限制性实例包括铁磁性、顺磁性或超顺磁性材料的微球、缀合物、胶束、胶体、脂质体、聚集体或复合物。

应了解，在某些实施方案中，本发明的方法所用的固体载体可包括一种或多种(具体地，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种)类型的磁性颗粒。所用磁性颗粒的大小、组成和涂层可不同。在一些实施方案中，在本发明的方法中尤其用作tPA和/或纤溶酶原结合剂的固体载体的磁性颗粒可包括具有生物相容性涂层的磁性核心。生物相容性涂层可包括聚合物，例如聚苯乙烯、葡聚糖、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯亚胺(PEI)、二氧化硅、硫酸葡聚糖、淀粉、柠檬酸盐、PEG/胺等。在一些实施方案中，可减少、最小化或避免本发明所用的珠粒的任何聚集的任何涂层可用于涂布所述珠粒。

在又一些具体实施方案中，本发明的方法可使用任何大小的任何磁性颗粒。在又一些具体实施方案中，本发明的方法可使用直径介于约10μm至1000μm之间的范围内、具体地100μm至1000μm的磁珠。具体地，100μm、150μm、200μm、250μm、300μm、350μm、400μm、450μm、500μm、550μm、600μm、650μm、700μm、750μm、800μm、850μm、900μm、950μm和1000μm。在又一些另外的具体实施方案中，直径介于约400μm至450μm之间的磁珠特别可用于本发明的方法中。

在一些具体实施方案中，本发明的方法可使用直径约400聚苯乙烯至450聚苯乙烯的经聚苯乙烯涂布的磁珠。

在一些实施方案中，本发明的方法所用的磁性颗粒可缀合、附接、连接至少一种结合tPA与纤溶酶原中的至少一种的剂(具体地，氨甲环酸(TXA))，与其混合，囊封于其内，或将其囊封。术语“缀合”或“结合”可与术语“夹带”、“附接”、“连接”、“包埋”、“吸附”等互换使用，并且考虑了本发明所用的磁性颗粒固持至少一种结合tPA与纤溶酶原中的至少一种的剂(具体地，TXA)的任何方式。这可包括例如物理、化学或非化学附接至载剂。在一些实施方案中，化学附接可通过接头进行。

接头可由包括寡聚链和聚合链的任何原子组合体构成，其用于将一个或多个磁珠连接至tPA和纤溶酶原结合剂，具体地TXA。

如本文所述，磁珠或如上文所讨论的任何其他固体载体或基质可与氨甲环酸结合。在一些实施方案中，磁珠与氨甲环酸之间的结合是通过至少一个化学键来实现。也就是说，磁珠和氨甲环酸可通过键合(例如共价键合、离子键合、氢键合、范德华(van derWaals)键合、配位键合等)固持在一起。

如本文所用的，术语“结合”或其任何语言变体是指将两个实体固持在一起的化学或物理力。这种力可为本领域技术人员已知的任何类型的化学或物理键合相互作用。此类结合相互作用的非限制性实例是共价键合、离子键合、配位键合、络合作用、氢键合、范德华键合、疏水性-亲水性相互作用等。如本文所述，固体载体或基质(具体地，磁珠)与氨甲环酸的结合还被称为固体载体或基质(具体地，磁珠)经氨甲环酸涂布。在一些实施方案中，所述结合是通过共价键合实现。在一些实施方案中，磁珠共价键合至氨甲环酸。

磁珠或任何其他固体载体与氨甲环酸之间的结合可通过至少一个接头来实现。如本文所用的，术语“激活的磁珠”或“激活的固体载体或基质”是指可共价键合至氨甲环酸或接头的磁珠或任何其他固体载体或基质。激活的珠粒是通过用具有使得能进行共价结合的活性部分的适合材料预涂布所述珠粒来获得。换言之，为了磁珠与氨甲环酸直接或通过至少一个接头共价结合，对磁珠进行预涂布以包括使得能进行此共价结合的反应性基团。

在一些实施方案中，可例如通过用任何涂布材料预涂布来激活磁珠。这种材料的非限制性实例包括例如氨基酸、蛋白质、环氧树脂、甲苯磺酸基、羧酸、羧化聚乙烯醇。在提到“预涂布”时应理解，作为初步步骤，其导致用活性材料涂布磁珠，所述活性材料继而使得所述珠粒能与氨甲环酸(即直接)或通过至少一个接头共价结合。在一些实施方案中，用氨基酸、肽或其任何衍生物对磁珠进行预涂布。经预涂布的磁珠可包含例如伯胺(-NH2)、羧基(-COOH)、硫氢基(-SH)或羰基(-CHO)作为活性基团。在一些实施方案中，对磁珠进行预涂布以包括可与伯氨基或仲氨基反应的部分。在一些其他实施方案中，用聚赖氨酸涂布磁珠。

在一些另外的实施方案中，氨甲环酸通过氨甲环酸的氨基共价结合至磁珠。在一些实施方案中，用具有游离羧基末端的氨基酸样化合物涂布磁珠，所述羧基末端继而结合至氨甲环酸的氨基或结合至接头。在又一些另外的实施方案中，涂层可通过进行化学反应而存在游离羧基。在一些其他实施方案中，经预涂布的磁珠通过羧酸(羧基)结合至氨甲环酸的氨基。

在一些实施方案中，经预涂布的磁珠通过接头、优选地双功能交联剂结合氨甲环酸。如本文所用的，术语“交联剂”是指含有两个或更多个反应性末端的试剂，所述反应性末端能以化学方式附接至氨基酸、肽、蛋白质或其他分子上的特定官能团(例如，伯胺、羧基、硫氢基等)。

如所了解，交联剂可具有不同长度，取决于多种实验需求。长度是指交联剂的分子跨度，即所缀合分子之间的距离。在一些实施方案中，交联剂是可裂解的(即，在需要时连接是否可逆或可断裂，例如EDC)。在一些实施方案中，交联剂是零长度交联剂。在一些实施方案中，交联剂引起直接缀合而不变成最终交联共价键的一部分。

在一些其他实施方案中，交联剂具有约1°A至约20°A的长度。在一些其他实施方案中，交联剂具有小于5°A的长度。在一些其他实施方案中，交联剂具有约1°A至约5°A的长度。在一些其他实施方案中，交联剂具有约2°A至约4°A的长度。在一些其他实施方案中，交联剂具有约9°A至约20°A的长度。在一些其他实施方案中，交联剂具有约9°A至约15°A的长度。

交联剂可为同型双功能交联剂或异型双功能交联剂。同型双功能交联剂是在任一端具有相同类型的反应性基团的试剂。胺交联剂(即结合胺反应性基团)可例如选自戊二醛、双(亚氨酸酯)或双(琥珀酰亚胺酯)(也称为NHS酯)。根据一些实施方案，同型双功能交联剂(例如但不限于庚二亚氨酸二甲酯(DMP)或戊二醛)可结合至磁珠上的NH₂基团(伯基)和氨甲环酸的NH₂基团。硫氢基交联剂可例如选自马来酰亚胺或吡啶基二硫醇。

在一些实施方案中，接头是异型双功能交联剂。异型双功能交联剂是在任一端具有不同类型的反应性基团的试剂，例如但不限于胺-至-硫氢基或胺-至-羧基。

胺-至-硫氢基交联剂可在每一端具有NHS酯和马来酰亚胺，或在每一端具有NHS酯和吡啶基二硫醇。可结合胺和硫氢基的异型双功能交联剂的实例选自但不限于N-琥珀酰亚胺基3-[2-吡啶基二巯基]-丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)或琥珀酰亚胺基-4-(对马来酰亚胺基苯基)丁酸酯(SMPB)。

胺-至-羧基交联剂可具有碳二亚胺。这种碳二亚胺交联剂激活用于与伯胺自发反应的羧基。这些交联剂可将羧基(谷氨酸酯、天冬氨酸酯，C-末端)缀合至伯胺(赖氨酸，N-末端)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)。可结合胺与羧基的异型双功能交联剂的实例选自但不限于二环己基碳二亚胺(DCC)和(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDAC)。这些交联剂用于将羧基(谷氨酸酯、天冬氨酸酯，C-末端)缀合至伯胺(赖氨酸，N-末端)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，用于稳定激活用于胺缀合的羧酸酯。

在一些实施方案中，接头是芳香族体系。非限制性实例包括苯甲酸或经取代苯甲酸、苯磺酰氯、苯甲醛、氯甲基苯。

在一些具体实施方案中，所用接头是(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺。

必须了解，在一些实施方案中，可根据本发明的方法使用任何接头将TXA连接至固体载体、基质或珠粒，前提是通过所述接头结合至固体载体的TXA不识别并且仅结合纤溶酶原和/或纤溶酶。在又一些另外的实施方案中，本发明可使用以使TXA识别并结合tPA和纤溶酶原二者的方式呈送TXA的任何接头。

在一些特定的非限制性实施方案中，对于从血液和血液产品耗尽并移除tPA和纤溶酶原，本发明的方法可使用直径约400-450μm的聚苯乙烯磁珠，其具有0.7-1.2毫摩尔/克的氨甲环酸(TXA)。

如上文所指示，本发明提供了制备至少一种t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液源产品的方法，其中所述血液源产品是以下中的至少一种：全血、血浆、新鲜冷冻血浆(FFP)、富血小板血浆(PRP)和冷沉淀物。

应理解，本发明进一步涵盖已通过本发明的任何方法制备的任何产品，具体地可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性的血液和血液源产品。在又一些另外的实施方案中，本发明进一步涵盖本文所公开的任何产品，在一些实施方案中，所述产品可通过本发明的任何方法来制备。

在又另一方面中，本发明提供了在有需要的受试者中进行体外程序以制备可为tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性的血液和血液源产品(具体地，具有自体来源)的方法。更具体地说，本发明的方法可包括将所述受试者的血液转移至体外设备中的步骤。然后使所述血液经历专用于t-PA和纤溶酶原的亲和耗尽程序，其中所述耗尽程序是在将血液转移至和转移出所述设备之前、期间或之后进行，由此获得所述受试者的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液或血浆；然后将其返回所述受试者。

在本发明的一个实施方案中，在有需要的受试者中进行体外程序的方法采用心肺转流术机器(CPB)，其中进行基于亲和力的纤溶酶原耗尽程序。本发明的这个程序可特别适用于通过CPB机器经历心脏直视手术的患者。如上文已描述，CPB程序可与严重出血相关。因此，采取诸如从血液耗尽纤溶酶原并且由此降低其纤溶活性等预防性措施可显著减少出血倾向。

在另一个实施方案中，在有需要的受试者中进行体外程序的方法采用血液分离设备/机器。在这个程序中，将全血转移至血液分离设备中。然后将血液分离为如上文所详述的组分，并且所分离的血浆和血小板可进一步经历基于亲和力的纤溶酶原耗尽程序。所产生的t-PA缺乏性和纤溶酶原耗尽的血浆和血小板可进一步用于自体或同种异体捐献。

在计划的手术之前进行自体捐献的情况下，本发明的这个程序可使得能获得足量的具有降低的纤溶活性的t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液产品，所述产品应该比商业产品更有效地防止凝块裂解，并且由此控制与手术相关的出血。

在又一些某些实施方案中，在有需要的受试者中通过体外程序进行的获得本发明的t-PA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液或血液产品的方法可采用CPB和血液分离术。产生本发明的tPA缺乏性和纤溶酶原缺乏性血液产品的程序包括通过使血液与至少一种特异性结合纤溶酶原的分子接触，基于亲和力耗尽tPA和纤溶酶原。

在一些另外的具体实施方案中，特异性结合(直接或间接)tPA和纤溶酶原的分子可为氨甲环酸、∈-氨基己酸、赖氨酸或其他赖氨酸类似物(例如6-氨基己酸)、抗纤溶酶原抗体和抗tPA抗体或其任何组合。应注意，可用于本发明的方法中的tPA和/或纤溶酶原结合剂可直接或间接结合tPA和纤溶酶原中的至少一种，由此有利于从本发明的经处理血液、血浆或血液产品耗尽tPA和纤溶酶原。

在又另一个方面中，本发明提供了用于血液和血液产品分离术的体外设备。本发明的设备可包含或至少部分地涂布与tPA和/或纤溶酶原中的至少一种特异性结合的氨甲环酸。应注意，在一些实施方案中，本发明的设备可用于制备本发明的任何产品。仍进一步地，本发明的设备可用于所公开任何障碍的治疗中。应注意，在一些实施方案中，本发明提供的体外设备可产生具有降低的纤溶活性的血液或血液产品。在一些实施方案中，此类产品是t-PA缺乏性的和/或纤溶酶原缺乏性的，其可返回患者。如果返回供体，将产品视为自体的。在又一些另外的实施方案中，其中可将所得血液产品作为同种异基因产品给予接受者。仍进一步地，在一些实施方案中，如本文所用的血液分离单元可纳入聚乙烯管道，其从患者抽吸血液并移动其经过还含有氨甲环酸的连接至固体载体(例如，珠粒)的离心机和/或过滤器，以分离血液产品。然后将血液通过管道返回患者，或收集于袋中，通常从极点悬浮，以供捐献或丢弃。显示和控制面板容许操作者对所述单元进行编程并查看进程和/或警报。安全性特征包括压力传感器、超声波气泡检测器、光学液位检测器和干热液体加热器。加热器帮助防止因输注低温液体而引起的低体温。所述单元可具有轮子或可将其置于板车上。

除非另有说明，否则本文中所用的所有科学术语和技术术语都具有本领域中常用的含义。本文提供的定义用于帮助理解本文中常用的某些术语，并且不欲限制本公开的范围。

如本文所定义和使用的所有定义都应理解为优先于辞典定义、通过引用并入的文件中的定义和/或所定义术语的普通含义。

如本文所用的术语“约”指示可高于或低于所提到的值偏离至多1％、更具体地5％、更具体地10％、更具体地15％、在一些情况下至多20％的值，包括整数值以及(如果适用)非整数值的偏离范围构成连续范围。如本文所用的，术语“约”是指±10％。

除非明确指示相反含义，否则如本文在说明书和权利要求书中所用的不定冠词“一个/种(a)”和“一个/种(an)”应理解为意指“至少一个/种”。必须注意，除非内容明确指示其他含义，否则如在本说明书和所附的权利要求书中所用，单数形式“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“所述(the)”包括复数个/种指示物。

如本文在说明书和权利要求书中所用的词组“和/或”应理解为意指如此联合的要素中的“任一者或二者”，即要素在一些情况下连结存在，并且在其他情况下分开存在。用“和/或”列示的多个/种要素应以相同方式解释，即如此联合的要素中的“一个/种或多个/种”。除了通过“和/或”条款明确标识的要素以外，其他要素可任选地存在，不论与那些明确标识的要素是否相关。因此，作为非限制性实例，在结合诸如“包含(comprising)”等开放式语言使用时，提到的“A和/或B”在一个实施方案中可仅是指A(任选地，包括除了B以外的要素)；在又另一个实施方案中，仅是指B(任选地，包括除了A以外的要素)；在又另一个实施方案中，是指A和B二者(任选地，包括其他要素)；等等。

如本文在说明书和权利要求书中所用的，“或”应理解为具有与如上文所定义的“和/或”相同的含义。例如，在分离列表中的项目时，“或”或者“和/或”应解释为包括性的，即包括多个/种要素或要素列表中的至少一个/种要素，但也包括多于一个/种要素，以及任选地其他未列示项目。只有明确指示相反含义的术语，例如“……中的仅一个/种(only oneof)”或“……中确切的一个/种(exactly one of)”，或在权利要求书中使用时“由……组成(consisting of)”将是指包括多个/种要素或要素列表中确切的一个/种要素。通常，当跟在排他性术语(例如“任一(either)”、“……中的一个/种(one of)”、“……中的仅一个/种(only one of)”或“……中确切的一个/种(exactly one of)”、“基本上由……组成(Consisting essentially of)”)后时，如本文所用的术语“或”应仅解释为指示排他性备选方案(即，“一个/种或另一个/种，但并非二者(one or the other but not both)”)，在用于权利要求书中时，其应具有如在专利法领域中使用的普通含义。

如本文在说明书和权利要求书中所用的，在关于一个/种或多个/种要素的列表时，词组“至少一个/种”应理解为意指选自所述要素列表中的任何一个/种或多个/种要素的至少一个/种要素，但不一定包括所述要素列表内明确列示的每一要素的至少一个/种，并且不排除所述要素列表中的要素的任何组合。这个定义还容许除了词组“至少一个/种”所涉及的要素列表内明确标识的要素以外的要素可任选地存在，不论与那些明确标识的要素是否相关。因此，作为非限制性实例，“A和B中的至少一个/种”(或等效地，“A或B中的至少一个/种”，或等效地“A和/或B中的至少一个/种”)在一个实施方案中可是指至少一个/种(任选地包括多于一个/种)A，不存在B(并且任选地包括除了B以外的要素)；在又另一个实施方案中，是指至少一个/种(任选地包括多于一个/种)B，不存在A(并且任选地包括除了A以外的要素)；在又另一个实施方案中，是指至少一个/种(任选地包括多于一个/种)A、以及至少一个/种(任选地包括多于一个/种)B(并且任选地包括其他要素)；等等。

还应理解，除非明确指示相反含义，否则在本文要求保护的包括多于一个步骤或动作的任何方法中，所述方法的步骤或动作的顺序并不一定限于列举所述方法的步骤或动作的顺序。

贯穿本说明书和实施例和之后的权利要求书，除非上下文另有要求，否则所有过渡性词组(例如“包含(comprising)”、“包括(including)”、“携带(carrying)”、“具有(having)”、“含有(containing)”、“涉及(involving)”、“保持(holding)”、“由……构成(composed of)”等)应理解为开放式的，即意指包括但不限于。只有过渡性词组“由……组成(consisting of)”和“基本上由……组成(consisting essentially of)”应分别为封闭式或半封闭式过渡性词组，如美国专利局专利审查程序手册(United States PatentOffice Manual of Patent Examining Procedures)中所述。更具体地说，术语“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“包括(includes)”、“包括(including)”、“具有(having)”及其同根词意指“包括但不限于”。术语“由……组成(consisting of)”意指“包括且限于”。术语“基本上由……组成(consisting essentially of)”意指组合物、方法或结构可包括另外的成分、步骤和/或部分，但前提是所述另外的成分、步骤和/或部分不实质性改变所要求保护的组合物、方法或结构的基础和新颖特征。

应注意，本发明的多个实施方案能以范围形式呈现。应理解，以范围形式描述仅为了方便简洁，不应被解释为对本发明范围的硬性限制。因此，对范围的描述应视为已明确公开所有可能的子范围以及所述范围内的各个数值。例如，对诸如1至6的范围的描述应视为已明确公开诸如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等子范围，以及所述范围内的各个数值，例如1、2、3、4、5和6。这不管范围的宽度如何都适用。无论何时在本文中指示数值范围，其意欲包括所指示范围内的任何所引用数字(分数或整数)。词组“范围介于(ranging/rangesbetween)”第一指示数字与第二指示数字之间和“范围从(ranging/ranges from)”第一指示数字“至(to)”第二指示数字在本文中可互换使用，并且意欲包括第一和第二指示数字以及其间的所有分数和整数。

如本文所用的，术语“方法”是指用于完成给定任务的方式、手段、技术和程序，包括但不限于为化学、药理学、生物学、生物化学和医学领域从业者已知或易于从已知的方式、手段、技术和程序开发的那些方式、手段、技术和程序。

应了解，为了清楚起见在单独实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征也可组合地提供于单一实施方案中。相反，为了简洁起见在单一实施方案的上下文中描述的本发明的多个特征也可分开地或以任何适合的子组合或适合地在本发明的任何其他所述实施方案中提供。在多个实施方案的上下文中描述的某些特征不应视为那些实施方案的必需特征，除非所述实施方案在没有那些要素的情况下无效。

如上文所述且如下文权利要求书部分中所要求保护的本发明的多个实施方案和方面在以下实施例中得到实验支持。

应理解，所公开和描述的本发明并不限于本文所公开的特定实施例、方法步骤和组合物，因为此类方法步骤和组合物可略有变化。还应理解，本文所用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并不旨在是限制性的，因为本发明的范围将仅受限于随附的权利要求及其等效物。

以下实施例代表本发明人在实施本发明的各方面中采用的技术。应了解，虽然这些技术例示了实践本发明的优选实施方案，但本领域技术人员根据本公开将认识到，可在不背离本发明的精神和既定范围的情况下做出许多修改。

实施例

无需进一步详细阐述，相信本领域技术人员可使用前述描述最大限度地利用本发明。因此，以下优选具体实施方案应仅被解释为说明性的，并且不以任何方式限制所要求保护的发明。

大体上遵循本文中未明确描述的本领域中已知的标准分子生物学方案，基本上如以下文献中所述：Sambrook等人,Molecular cloning:A laboratory manual,ColdSprings Harbor Laboratory,New-York(1989,1992)，以及Ausubel等人,CurrentProtocols in Molecular Biology,John Wiley and Sons,Baltimore,Maryland(1988)。

大体上遵循本文中未明确描述的本领域中已知的标准有机合成方案，基本上如在以下文献中所述：Organic syntheses:第1-79卷,编辑不同,J.Wiley,New York,(1941-2003)；Gewert等人,Organic synthesis workbook,Wiley-VCH,Weinheim(2000)；Smith&March,Advanced Organic Chemistry,Wiley-Interscience；第5版(2001)。

大体上遵循本文中未明确描述的本领域中已知的标准药物化学方法，基本上如在以下丛书中所述：“Comprehensive Medicinal Chemistry”,多位著者和编辑,由PergamonPress出版。

无需进一步详细阐述，相信本领域技术人员可使用前述描述最大限度地利用本发明。因此，以下优选具体实施方案应仅被解释为说明性的，并且不以任何方式限制所要求保护的发明。

大体上遵循本文中未明确描述的本领域中已知的标准分子生物学方案，基本上如在以下文献中所述：Vanderkerken K The 5T2MM murine model of multiple myeloma:maintenance and analysis[Methods Mol.Med.113:191-205(2005)；Epstein J.TheSCID-hu myeloma model.Methods Mol.Med.113:183-90(2005)]。

材料和试剂

直径约400-450μm的聚苯乙烯珠粒，购自Polysciences,Inc.。

氨甲环酸，购自Tess Pharmaceuticals Co.,Ltd.、Sendi Biotechnology CO.,Ltd.。

-纤维蛋白密封剂，购自J&J。

纤溶酶原移除凝胶，28-4109-03，购自J&J。

实验程序

经氨基酸涂布的磁珠的制备

结合至顺磁性氧化铁纳米颗粒的氨基酸是使用EDC作为偶联试剂，通过氨基酸的氨基与纳米颗粒的羧基之间的偶联反应来获得。简单来说，将5mg磁性纳米颗粒(珠粒)与2ml含有2.5mg戊二酸酐的溶液(乙腈)混合。在2小时后，将磁珠离心并弃去上清液，用乙腈洗涤沉淀(两次)，离心并弃去上清液。使沉淀再悬浮于1.5ml含有赖氨酸(Lys)(0.5mg/ml)、6-氨基己酸、氨甲环酸(TXA)(0.5mg/ml)或丙氨酸(ALA)(0.5mg/ml)和0.5mg EDC的磷酸盐缓冲盐水中，并在恒定搅拌下反应。将颗粒悬浮液呈送至磁场并用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤三次。还可使用离心代替磁场来沉淀磁性纳米颗粒。本发明的磁珠的示意性图解说明公开于图1中。

纤溶酶原和/或tPA缺乏性全血(PDWB)的制备

使用标准程序将人类全血收集至含有柠檬酸盐-磷酸盐-葡萄糖CPD抗凝剂的收集袋中。缺乏纤溶酶原的全血是通过将全血与含有经氨甲环酸涂布的磁珠的盐水混合来制备。将混合物在温和振荡下培养10-30min。在培养结束时，使混合物暴露于磁场以沉淀磁珠，并收集上清液以供临床使用。

纤溶酶原和/或tPA缺乏性富血小板血浆(PDPRP)的制备

使用标准程序将人类全血收集至含有柠檬酸盐-磷酸盐-葡萄糖CPD抗凝剂的收集袋中。通过两次离心将富血小板血浆(PRP)与其余组分分离，每次在室温下以1000g离心6min。然后使用PRP来产生PDPRP。

从PRP部分移除纤溶酶原是通过将PRP转移至含有盐水溶液中的经氨甲环酸涂布的磁珠的无菌塑料袋中来进行。将混合物在室温下温和振荡10-30min。在培养后，通过暴露于磁场使珠粒沉淀，并收集上清液以供临床使用。

纤溶酶原和/或tPA缺乏性血浆(PDP)的制备

通过静脉切开术使用标准程序将人类血液收集至含有柠檬酸盐-磷酸盐-葡萄糖CPD抗凝剂的收集袋中。通过以2,000x g离心15分钟移除血液的细胞组分(包括血小板)。然后将上清液中保留的血浆与盐水溶液中的经氨甲环酸涂布的磁珠一起培养，以产生耗尽纤溶酶原的血浆(PDP)。通过暴露于磁场或通过以2,000x g离心5-15分钟使珠粒沉淀。在操作时将PDP维持在2℃-8℃下。如果不立即使用血浆，根据标准程序将其冷冻并储存(新鲜冷冻血浆-FFP)。

纤溶酶原和/或tPA缺乏性冷沉淀物(PDCP)的制备

如上文所详述产生FFP。冷沉淀物是通过在4℃下解冻从FFP制备。通过以4000(RPM)离心5min从冷沉淀物移除冷不溶性蛋白质。

将冷沉淀物与含有经氨甲环酸涂布的磁珠的生理盐水混合。将混合物温和振荡10-30min。通过暴露于磁场或通过以2,000x g离心5-15分钟使珠粒沉淀。收集含有纤溶酶原缺乏性冷沉淀物(PDCP)的上清液以供临床使用。

通过血液分离设备从血液耗尽纤溶酶原和/或tPA

所述程序包括从个体循环移除血液并在分离为若干种组分后将其返回该个体的商业设备。所述方法用于治疗或捐献目的。更具体地说，所述方法可用于获得无tPA和/或纤溶酶原的自体血液或血液产品，或可选地，用于在接受者中同种异体使用的无tPA和/或纤溶酶原的血液或血液产品。将抗凝血液从循环转移通过体外的分流系统，同时所述分流系统连接至梯度分离容器。在容器内通过离心将血细胞与血浆分离，并且将除血小板以外的血细胞返回循环，同时通过流经涂布有氨甲环酸的管来处理血浆和血小板以耗尽纤溶酶原，或通过流经含有经氨甲环酸涂布的磁珠的容器来处理。在含有经氨甲环酸涂布的磁珠的容器的情况下，通过将容器呈送至磁场或使用防止珠粒并入循环血浆中的过滤器来提取珠粒。血浆连续流动，其中提取珠粒。然后保留t-PA缺乏性和/或纤溶酶原耗尽的血浆和血小板用于自体或同种异体捐献。在一些实施方案中，使全血在不分离的情况下通过经氨甲环酸涂布的管或通过含有经氨甲环酸涂布的磁珠或任何其他基质的容器以耗尽tPA和/或纤溶酶原，然后将纤溶酶原耗尽的血液返回循环。为了提高耗尽系统的效能，在经涂布管或磁珠的情况下，可通过用含有可溶氨甲环酸的盐水洗涤从经氨甲环酸涂布的管或磁珠定期移除tPA和/或纤溶酶原。通过这种方式，系统将再生并将能够耗尽更多纤溶酶原。应注意，在一些实施方案中，本发明所提供的系统中的一些元件可为一次性的(例如，用于单次使用)。

在体外循环期间的纤溶酶原和/或tPA移除

心肺转流术(CPB)机器是一种在心脏直视手术中用于在手术程序期间支持身体的装置。

CPB机器连接至心脏附近的大血管静脉和动脉。CPB机器由三个主要组件组成，即泵、氧合器和储器。心肺机的三个组件相互连接并通过部分由手术团队放置的一系列管连接至患者。

在心脏直视手术期间，血液流经加至心肺机的经TXA涂布的管，如在血浆分离术方法中。在流经这个管时，耗尽血液中的纤溶酶原并且然后将经耗尽血液或血浆返回循环。可通过用含有可溶氨甲环酸的盐水洗涤从经氨甲环酸涂布的管释放tPA和/或纤溶酶原。可选地，血液可流经含有经氨甲环酸涂布的磁珠的容器。通过将容器呈送至磁场或通过使用防止磁珠并入返回循环的血液或血浆的过滤器来从血液提取经氨甲环酸涂布的磁珠。血液连续流动，其中进一步提取和释放磁珠以供进一步使用。

可对细胞回收器设备进行相同改进，所述设备是经设计用于自体血液回收的系统，用于其中发生中至高体积的失血(例如创伤情况)的程序。其能递送适度血细胞比容和帮助移除痕量的不需要的组分(例如游离血红蛋白)。

所述想法还可用于指定独立设备用于失血或内部或外部出血的临床病例中。此外，可使用相同的独立系统来制备耗尽纤溶酶原和/或tPA的血液或血液产品。

凝块裂解测定

如先前所报道进行凝块裂解测定(Higazi AA等人(1998))。首先，通过将凝血酶(0.4NIH U/mL终浓度)添加至未经处理或经涂布有氨甲环酸的磁珠处理的血液、FFP或冷沉淀物来产生凝块。然后通过在37℃下将含有WT-tPA(10nM)的磷酸盐缓冲盐水(PBS)添加至凝块表面持续1小时来测量血浆凝块的裂解。然后用PBS洗涤凝块，与0.2％锥虫蓝一起培养过夜，用PBS冲洗，并拍照。使用Hoefer GS 300密度计(Amersham Pharmacia Biotech，新泽西州皮斯卡塔韦)扫描照片。使用National Institutes of Health Image程序计算裂解区域大小，并且如先前所报道测定纤维蛋白溶解的程度(Higazi AA等人Blood(1998))。

通过凝血弹性描记法(TEG)监测凝块裂解

凝块是通过添加高岭土从未经处理或用经氨甲环酸或赖氨酸涂布的磁珠处理的人类全血制备。通过WT-tPA(10nM)诱发凝块裂解。在添加PBS后观察到的裂解用作对照。如先前所报道使用TEG 5000凝血弹性描记器测量凝块形成和凝块裂解参数(Higazi N等人(2015))。

尾部出血测定

使用尾部出血倾向方法，对先前所述模型进行了略微改进(Pleines I等人)。简单来说，切断经麻醉小鼠的2mm尾尖。在切断前，将尾部在37℃下浸没于盐水中10分钟。将切断的尾部浸没于含有500μl用或未用经涂布磁珠处理的人类FFP的Eppendorf管中，所述Eppendorf管含有1/10体积/体积的9份FFP和1份经以下氨基酸中的每一种涂布的珠粒：赖氨酸、6-氨基己酸(6AHA)、氨甲环酸或丙氨酸。在30min结束时，收集Eppendorf管。对于在FFP中形成的血液凝块的溶解，在37℃下添加tPA(100nM)持续60min。如先前所报道测定反映出血量的血红蛋白浓度(Higazi N.等人(2015))。

内出血大鼠模型

在实验前通过腹膜内注射氯胺酮(75mg/ml)和赛拉嗪(5mg/ml)麻醉成年雄性8至10周龄Sprague-Dawley大鼠(平均体重250-280g)。在剃毛和清洁后，进入腹部以切除肝左叶的下边缘，如(World J Gastroenterol.2008年1月7日；4:81-84)中所述。

实施例1

t-PA和纤溶酶原耗尽的血液产品防止纤维蛋白溶解

如前文所提到的，本发明人的概念是证实，从血浆产品耗尽纤溶蛋白(即纤溶酶原和t-PA)将增强其促凝血性质。因此，本发明人采用基于亲和力的方法从血浆产品(全血、FFP和冷沉淀物)耗尽纤溶酶原和t-PA，以产生具有受抑制的且显著降低的纤溶活性的血液产品。TXA是氨基酸赖氨酸的合成衍生物，能以高亲和力结合纤溶酶原分子并防止其激活。使用交联方法，本发明人已证明产生TXA缀合的磁珠，如图1中所图解说明。

图2图解说明，经携带赖氨酸或其类似物6AHA或TXA的磁珠处理的血浆可抵抗纤维蛋白溶解。数据还显示，所获得的抗纤溶效应为纤溶酶原和t-PA的赖氨酸介导耗尽所特有，因为经丙氨酸处理的血浆未能展现对纤维蛋白溶解的抑制。此外，数据还指示，TXA在从血浆耗尽纤溶酶原中比赖氨酸或6AHA显著更有效。

与这些发现一致，用经赖氨酸类似物(TXA)涂布的磁珠预处理另一人类血液产品冷沉淀物导致抑制纤维蛋白溶解(图3)。

图3中呈现的数据还指示，从未经处理或经丙氨酸处理的冷沉淀物形成的凝块可易于通过外部添加的tPA溶解，表明这些凝块易发生纤维蛋白溶解。与图2中获得的结果类似，图3中显示的发现揭示，所获得的抗纤溶效应为赖氨酸类似物TXA所特有。

与先前图中显示的结果类似，图4中显示的发现为本发明的以下概念提供额外支持：用经赖氨酸或赖氨酸类似物涂布的磁珠预处理人类血液抑制纤维蛋白溶解。图4中呈现的数据指示，使用经TXA涂布的磁珠耗尽纤溶酶原使血液凝块可抵抗纤维蛋白溶解。如在图2和图3，图4中的数据也显示，所述效应为赖氨酸类似物所特有，因为在经丙氨酸处理的血液的情况下未观察到抑制效应。

实施例2

使用凝血弹性描记法(TEG)证明源自缺乏纤溶酶原和t-PA的血液产品的凝块裂解抑制

凝血弹性描记法已成为众所周知的对于大手术、创伤和出血障碍中的止血和输血管理的监测策略。凝血弹性描记法是在全血中进行并在低剪切条件下评价凝块形成的粘弹性。凝血弹性描记法提供凝块形成和凝块裂解变量，其在临床情况下不同，并且因此可用于诊断和治疗出血障碍。因此，本发明人已使用这种方法明确显示，通过用经赖氨酸或氨甲环酸涂布的磁珠预处理人类血液来从人类血液耗尽纤溶酶原和t-PA导致对凝块裂解的抑制(图5)。

相反，从未经处理的人类血液制备的凝块的裂解不受抑制。因此，如在先前图中，图5中的数据指示，使用经赖氨酸或TXA涂布的磁珠耗尽纤溶酶原和t-PA使血液凝块可抵抗纤维蛋白溶解。TEG实验中的R值代表直至检测到凝块第一次出现的时间。图5还显示，直至检测到凝块形成第一次出现的时间(表示为较短R值)在用经TXA涂布的磁珠处理的血液中较短。这些数据指示，用经TXA涂布的磁珠处理血液刺激凝血过程。如在先前图中，图5中的数据指示，使用经赖氨酸或TXA涂布的磁珠耗尽纤溶酶原和t-PA使血液凝块可抵抗纤维蛋白溶解。

经TXA处理的血液的这种促凝血效应在图6中进一步强调。图6A显示，未经处理的血液中的R值为4.2min，而在用经TXA涂布的磁珠预处理的血液中，R显著较短，为1.8min(图6B)，指示直至凝块形成第一次出现的时间减少。

为了排除图6B中所见R值减小是由于纤维蛋白溶解减少所致的可能性，本发明人测定了在纤维蛋白溶解启动剂存在下的R值(图6C)。除了增加纤维蛋白溶解以外，tPA的存在还通过将纤溶酶原转化为纤溶酶来促进纤溶酶原耗尽。图6C显示，尽管在tPA存在下见到纤维蛋白溶解增加，但R值为2.8min，指示在这种情况下R值不受纤维蛋白溶解的影响。总的来说，在用经TXA涂布的磁珠预处理的血液中见到的结果明确证明本发明的产品在减少凝块裂解中的可行性。

实施例3

从人类血浆耗尽纤溶酶原和t-PA抑制小鼠模型中由尾尖切断术诱发的出血倾向

置换疗法是治疗出血障碍的主要依靠。然而，由于FFP中纤溶活性的存在，通过FFP置换凝血因子可能不足以终止出血。因此，本发明的概念是通过具有促凝血活性但缺乏纤溶活性的FFP提供置换在出血情况下更有益。

使用小鼠的尾尖模型(图7)，本发明人证明，与盐水相比，将切断的尾部浸没于FFP中显著增加出血量。这个发现排除了凝血因子的稀释导致出血过多的可能性，并且表明，FFP促凝血效应不足以终止出血，可能是由于其抵消纤溶活性所致。为了证实FFP中存在的纤溶活性导致不足以停止出血的概念，将切断的尾部浸没于预先用经赖氨酸(Lys)、6-氨基己酸(6AHA)、氨甲环酸(TXA)或丙氨酸(Ala)涂布的磁珠处理的FFP中。如在图7中所图解说明的结果明确指示，与未经处理或经丙氨酸处理的FFP相比，只有通过用经赖氨酸、6AHA或TXA涂布的磁珠处理来耗尽纤溶酶原和t-PA的FFP才显著减少出血量。

实施例4

用t-PA和纤溶酶原耗尽的血浆为小鼠输血减少出血过多

从C57黑色小鼠收集血浆，之后将血浆转移经过经TXA涂布的磁珠。向C57黑色雄性小鼠静脉内注射50μl的：PBS(对照)、正常血浆和经处理血浆，之后切断那些小鼠的尾尖并容许小鼠出血30min。如在图8中可见，与经PBS处理的小鼠相比，正常血浆未能减少小鼠损失的血量。相反，t-PA和纤溶酶原耗尽的血浆减少出血超过40％。这个实验确立了全身性(i.v.)使用本发明的产品治疗止血障碍的可行性。

实施例5

从用经赖氨酸类似物(TXA)涂布的磁珠处理的血液和血浆组分耗尽tPA

分析将外源tPA添加至从用经赖氨酸类似物(TXA)涂布的磁珠处理的血浆形成的凝块或从市售产品(纤维蛋白密封剂，Ethicon，美国专利第7,125,569号的相应产品)形成的凝块的影响。

凝块是如先前所报道通过添加凝血酶来形成(Higazi AA等人1998)。然后添加tPA(10nM)并且将血浆凝块的裂解测量为纤维蛋白溶解相对于在tPA不存在下血浆的纤维蛋白溶解的百分比。图9显示，与未经处理的血浆相比，将tPA外部添加至两种产品诱发极差的纤维蛋白溶解，表明两种产品都是纤溶酶原缺乏性的。

之后，检查将外源纤溶酶原添加至从用经TXA涂布的磁珠处理的血浆形成的凝块或从与上文相同的市售产品形成的凝块的影响。

凝块也是通过添加凝血酶来形成。将纤溶酶原(3μM)添加至凝块，并且如上文所述评估纤维蛋白溶解。图10显示，将纤溶酶原添加至来自根据本发明的用经TXA涂布的磁珠处理的血浆的凝块导致无显著纤溶效应。相反，将纤溶酶原添加至来自商业产品的凝块导致纤维蛋白溶解显著增加。这些结果明确指示，用经TXA涂布的磁珠处理的血浆缺乏tPA，相比之下，商业产品含有大量tPA，这可导致纤维蛋白溶解。

此外，使用商业ELISA试剂盒(Technozym，奥地利维也纳)直接测定tPA在两种产品中的浓度。图11显示，商业产品含有1.5ng/ml的tPA，与之相比，在用经TXA涂布的磁珠处理的血浆中发现是0.013ng/ml。应注意，tPA在中的浓度显著高于在血液、血浆或血清中的浓度(图11)。

为了进一步分析与经TXA涂布的市售基质[TEA-琼脂糖4B，Omrix，纤溶酶原移除凝胶(28-4109-03，J&J)]相比，本发明的基质(TXA-磁珠)从溶液(例如，血液和血液产品)洗脱tPA的能力，比较两种产品结合溶液中存在的tPA的能力。更具体地说，将经TXA涂布的磁珠(本发明的基质)以及TEA-琼脂糖4B(Omrix)二者以等于足以清除1cc人类血浆中的纤溶酶原(100μl)的量的量与PBS中的市售tPA(Boehringer Ingelheim)(0.1mg/ml)一起在室温下培养15min。在与tPA一起培养之前，用PBS将两种制剂洗涤3次。为了移除未结合的tPA，将两种经培养基质用PBS洗涤3次[每次洗涤l ml，之后离心(5000RPM持续5min)]。在第三次洗涤后，使所得每种制剂再悬浮于1ml PBS中，并且各自使用25μl进行蛋白质印迹。使用市售单克隆抗tPA抗体[抗TPA组织纤溶酶原激活剂抗体[T-1](ab82249)，以1:1,000稀释]作为第一抗体。使用多克隆山羊抗小鼠免疫球蛋白辣根过氧化物酶(DAKO)作为第二抗体用于增强的化学发光反应。

图12明确显示，与结合tPA的本发明的TXA-磁珠相比，结合至TEA-琼脂糖4B(Omrix基质)的tPA的量无法检测。这些结果支持TEA-琼脂糖4B(Omrix)仅针对纤溶酶原的特异性，如例如在美国专利7,125,569中所声明。此外，这些结果明确证明本发明的基质(例如，TXA磁珠)从任何溶液(例如血液或任何血液产品)耗尽tPA的有效能力。

实施例6

无纤溶酶原和tPA的血浆对内出血的影响

受到体外比较性数据确立本发明的tPA缺乏性产品相对于现有技术产品的优越性的鼓励，本发明人之后检查了两种产品对体内内出血大鼠模型的影响，如实验程序中所述。简单来说，将40只切除肝左叶下边缘的成年雄性8至10周龄Sprague-Dawley大鼠分为以下4组(每组10只大鼠)：

第1组：纤维蛋白密封剂组，由10只大鼠组成。

肝表面涂布有纤维蛋白密封剂(Omrix，以色列)，其含有人类纤维蛋白原(1ml)与人类凝血酶的混合物。纤维蛋白密封剂是使用L施用装置并根据制造商的说明书来施用。

第2组：未经处理的血浆组。

肝表面如前一组中进行涂布，但有一处变化；1ml人类纤维蛋白原由1ml人类血浆代替。

第3组：本发明的无纤溶酶原和tPA的血浆产品。肝表面如先前组中进行涂布，但有一处变化；1ml人类纤维蛋白原由1ml用经氨甲环酸涂布的珠粒处理的人类血浆代替。

第4组：未经处理组。

在所有组中测定出血时间，如(World J Gastroenterol.2008年1月7日；14:81-84)中所述。

更具体地说，在未经处理组中，出血时间为145.3±37.2秒。在经纤维蛋白密封剂处理的大鼠中，出血时间为92.41±41.9秒。在经未经处理的血浆处理的大鼠中，出血时间为206.73±64.2秒。然而，在经本发明的经处理血浆处理的大鼠中，出血时间为41.82±29.2秒。这些结果显示了本发明的产品的明显优势和优越性，以及其在内出血的局部应用中的适用性。

Claims (45)

1.一种具有减少的纤溶活性的血液和/或血液源产品，所述产品包含至少一种凝血因子，其中所述产品是组织纤溶酶原激活剂(tPA)缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性。

2.根据权利要求1所述的产品，其中所述血液和血液源产品是tPA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性产品。

3.根据权利要求1所述的产品，其中所述血液源产品进一步包含纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种或其任何组合的至少一种抑制剂。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的产品，其中所述血液源产品是全血、血浆、新鲜冷冻血浆(FFP)、富血小板血浆(PRP)和冷沉淀物中的至少一种。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的产品，其中所述血液、血浆或任何血液产品具有自体或同种异体来源。

6.一种组合物，其包含有效量的至少一种具有减少的纤溶活性的血液和/或血液源产品，所述产品包含至少一种凝血因子，其中所述产品是tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性，所述组合物任选地进一步包含药学上可接受的载剂、赋形剂、添加剂、稀释剂和佐剂中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述tPA缺乏性血液或血液源产品是如权利要求2至5中任一项所定义。

8.根据权利要求7所述的组合物，其进一步补充有纤维蛋白原和/或任何其他凝血因子。

9.一种生物胶或密封剂，其包含具有减少的纤溶活性的血液和/或血液源产品，所述产品包含至少一种凝血因子，其中所述产品是tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性，其中所述产品是以下中的至少一种：tPA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血浆、tPA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性PRP、tPA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性FFP和tPA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性冷沉淀物。

10.根据权利要求9所述的生物胶或密封剂，其进一步包含至少一种凝血促进剂，所述剂为纤维蛋白原、凝血酶或任何纤维蛋白原裂解酶和钙中的至少一种，其中所述凝血促进剂各自任选地提供于单独隔室内。

11.根据权利要求9和10中任一项所述的生物胶或密封剂，其进一步包含纤溶酶、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂中的至少一种的至少一种抑制剂。

12.一种在有需要的受试者中治疗、防止、预防、改善、抑制出血、止血障碍和与其相关的任何出血或病理状况的方法，所述方法包括向所述受试者给予治疗有效量的至少一种具有减少的纤溶活性的血液和/或血液源产品或包含所述产品的任何组合物或生物胶或密封剂的步骤，所述产品包含至少一种凝血因子，其中所述产品是tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述tPA缺乏性血液和血液源产品是如权利要求2至5中任一项所定义。

14.根据权利要求12所述的方法，其中所述胶或密封剂是如权利要求9至11中任一项所定义。

15.根据权利要求12和13中任一项所述的方法，其中所述产品是tPA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液源产品并且肠胃外地给予。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述止血障碍是遗传性或获得性出血障碍。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述遗传性止血障碍是因缺乏至少一种凝血因子和不明确出血倾向中的至少一种所致的障碍。

18.根据权利要求17所述的方法，其中至少一种凝血因子的所述缺乏是缺乏因子XI、因子X、因子V、因子VII、因子II(凝血酶原)和因子I(纤维蛋白原)中的至少一种。

19.根据权利要求16所述的方法，其中所述获得性止血障碍是以下中的至少一种：手术诱发的出血、创伤诱发的出血、急性胃肠道出血、烧伤相关出血、出血性中风、由于气肿和COPD所致的肺部损伤、分娩相关出血以及纤溶或溶栓疗法所致的出血。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述手术诱发的出血是小手术或大手术诱发的出血。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述大手术是心脏直视手术或肝移植手术。

22.根据权利要求16所述的方法，其中所述获得性止血障碍是纤溶或溶栓疗法所致的出血。

23.根据权利要求19至21中任一项所述的方法，其中所述给予是使用体外设备来进行。

24.根据权利要求12至14中任一项所述的方法，其中所述产品是适于局部给予的tPA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液源产品，其中所述产品是生物胶或密封剂。

25.根据权利要求24所述的方法，其中将所述胶或密封剂给予患有以下中的至少一种的受试者：出血、出血倾向和出血风险增加。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述出血或出血风险增加是以下中的至少一种：手术诱发的出血、创伤诱发的出血以及纤溶或溶栓疗法所致的出血。

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述手术诱发的出血是大外科手术或小外科手术诱发的出血。

28.根据权利要求26至27中任一项所述的方法，其中所述外科手术是在经诊断患有遗传性止血障碍的受试者中进行。

29.一种血液和/或血液源产品或其任何组合物或胶或密封剂，其用于在有需要的受试者中治疗、防止、预防、改善、抑制出血、止血障碍和与其相关的任何出血或病理状况或延迟其发作，其中所述产品具有减少的纤溶活性并且包含至少一种凝血因子，所述产品是tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性。

30.用于根据权利要求29所述使用的产品，其中所述产品是如权利要求2至5中任一项所定义。

31.用于根据权利要求29和30中任一项所述使用的产品，其中所述止血障碍是遗传性或获得性出血障碍。

32.用于根据权利要求31所述使用的产品，其中所述产品或包含所述产品的任何组合物适于肠胃外给予。

33.用于根据权利要求32所述使用的产品，其中所述给予是使用体外设备来进行。

34.用于根据权利要求29所述使用的产品，其中所述产品适于局部使用，并且其中所述产品是如权利要求9至11中任一项所定义的生物胶或密封剂。

35.用于根据权利要求34所述使用的产品，其中将所述胶或密封剂给予经诊断患有遗传性或获得性止血障碍并且具有创伤或手术诱发的出血的受试者。

36.一种试剂盒，其包含：

(i)至少一种具有减少的纤溶活性的血液和/或血液源产品，所述产品包含至少一种凝血因子，其中所述产品是tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性，其中所述产品是以下中的至少一种：t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性PRP、t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性FFP和t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性冷沉淀物；以及

(ii)至少一种凝血促进剂。

37.根据权利要求36所述的试剂盒，其中：

(a)所述凝血促进剂中的至少一种是纤维蛋白原、凝血酶和钙中的至少一种，任选地所述凝血促进剂各自提供于单独隔室内；并且

(b)所述t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液源产品中的至少一种是如权利要求2至5中任一项所定义。

38.根据权利要求36至37中任一项所述的试剂盒，其用于在有需要的受试者中治疗、防止、预防、改善、抑制出血、止血障碍和与其相关的任何出血或病理状况。

39.一种制备至少一种具有减少的纤溶活性的血液和/或血液源产品的方法，所述产品包含至少一种凝血因子，其中所述产品是tPA缺乏性的和/或缺乏纤溶酶原或纤溶酶活性，所述方法包括以下步骤：

(i)使包含至少一种凝血因子的全血或血液源产品经历专用于t-PA和纤溶酶原的亲和耗尽程序；以及

(ii)回收在步骤(i)中获得的所述t-PA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液源产品。

40.根据权利要求39所述的方法，其中特异性结合tPA和/或纤溶酶原的所述分子是以下中的至少一种：4-(氨基甲基)-环己烷-甲酸(氨甲环酸)、∈-氨基己酸、赖氨酸、抗纤溶酶原抗体和抗tPA抗体。

41.一种在有需要的受试者中进行体外程序的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)将所述受试者的血液转移至体外设备中；

(ii)使所述血液经历专用于tPA和/或纤溶酶原的亲和耗尽程序，其中所述耗尽是在将血液转移至和转移出所述设备之前、期间或之后进行，由此获得所述受试者的体外tPA缺乏性和/或纤溶酶原缺乏性血液和血液源产品；以及

(iii)使在步骤(ii)中获得的所述t-PA和/或纤溶酶原缺乏性血液或血浆返回所述受试者。

42.根据权利要求41所述的方法，其中所述体外设备是心肺转流术机器(CPB)，并且其中所述体外设备是血浆分离术机器。

43.根据权利要求41所述的方法，其中tPA和/或纤溶酶原的所述亲和耗尽程序是通过使所述血液与至少一种特异性结合tPA和/或纤溶酶原中的至少一种的分子来进行。

44.根据权利要求43所述的方法，其中特异性结合tPA和/或纤溶酶原中的至少一种的所述分子是以下中的至少一种：氨甲环酸、赖氨酸、6-氨基己酸和任何赖氨酸类似物。

45.一种用于血液和血液产品分离术的体外设备，所述设备包含或至少部分地涂布特异性结合tPA和/或纤溶酶原中的至少一种的氨甲环酸。