CN109757466A - 尿液保存液、尿液采集容器、方法及试剂盒 - Google Patents
尿液保存液、尿液采集容器、方法及试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109757466A CN109757466A CN201811268170.2A CN201811268170A CN109757466A CN 109757466 A CN109757466 A CN 109757466A CN 201811268170 A CN201811268170 A CN 201811268170A CN 109757466 A CN109757466 A CN 109757466A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- urine
- liquid
- storehouse
- preservation
- saves
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
本发明提供了一种用于从尿液中获取上皮细胞的尿液保存液，其包含酸碱平衡缓冲体系、多种离子成分、多种氨基酸成分以及细菌或真菌的抑制剂，并且不包含动物源性成分。本发明还提供了一种尿液采集容器，其包括：瓶身，包含中间隔板以将瓶身分为上部的样本仓和下部的保存液仓，保存液仓中预充了尿液保存液；瓶盖，设置在尿液采集容器的顶部；以及旋动装置，被配置成封闭或打开中间隔板的孔来关断或打开样本仓与保存液仓的连通。本发明还提供了一种采集和保存尿液以用于培养上皮细胞的方法，以及相应的试剂盒。这样，简化了尿液样本的采集，延长了尿液中的上皮细胞的保存时间，方便从尿液中获取上皮细胞。
Description
技术领域
本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种可实际用于从尿液中获取上皮细胞的尿液保存液、尿液采集容器、以及采集和保存尿液的方法及试剂盒。
背景技术
近年来，多能诱导干细胞技术是干细胞研究领域的重要突破，该技术采用自体细胞通过重编程技术制备，不仅规避了干细胞应用的伦理学问题，也解决了细胞治疗的免疫排斥问题，从而有望成为将来的疾病治疗手段。采集提取患者的样本细胞作为重编程的细胞是多能诱导干细胞制备的起始工作，目前大多使用患者皮肤组织分离的皮肤成纤维细胞和外周血分离的单个核细胞。但是，上述细胞采集提取方法存在诸多问题：采集皮肤组织为有创操作，部分患者难以接受，并且采集步骤对环境要求较高，限制了其临床应用；血液细胞由于重编程效率极低，需使用昂贵的试剂或仪器，一般单位难以有效开展。相比较而言，通过尿液分离上皮细胞，是一种无创采集方式，患者易于接受；并且通过尿液分离的上皮细胞重编程效率高，所以，该技术成为目前用于制备多能诱导干细胞起始细胞的新方向。但是，尿液中的上皮细胞处于尿液低渗透压、高尿素等毒性物质、非生理性酸碱度环境中，要求采集后务必立即分离，如保存时间稍长即可造成细胞大量死亡以及细菌和真菌滋长，限制了其在临床和基础研究中的应用。
总之，现有技术中，仍无法以可以实际操作的方式从尿液中获取上皮细胞。
发明内容
为了解决现有技术中存在的尿液采集后必须立即分离细胞且易发生细菌、真菌污染等问题，本发明的目的是提供一种可以实际操作的方式从尿液中获取上皮细胞的尿液保存液，以及尿液采集容器以及采集和保存尿液的方法及试剂盒，以长时间保存尿液中的上皮细胞，为实际获取上皮细胞提供足够的操作时间。
为此，在本发明的第一方面，提供了一种用于从尿液中获取上皮细胞的尿液保存液，其中，所述尿液保存液包含酸碱平衡缓冲体系、离子成分、氨基酸成分以及细菌或真菌的抑制剂。
在本发明的第二方面，提供了一种尿液采集容器，其包括：
瓶身，其包含中间隔板以将所述瓶身分为上部的样本仓和下部的保存液仓，所述中间隔板设置有孔来连通所述样本仓与所述保存液仓，所述保存液仓被配置用于预充尿液保存液，所述样本仓被配置用于采集尿液以及混合尿液和尿液保存液；
旋动装置，被配置成封闭或打开所述中间隔板的孔来关断或打开所述样本仓与所述保存液仓的连通；以及
瓶盖，被设置在所述尿液采集容器的顶部以用于封闭所述瓶身的上端开口。
在本发明的第三方面，提供了一种采集和保存尿液以用于培养上皮细胞的方法，其中采用上述第二方面所述的尿液采集容器来采集尿液，在初始状态下，所述尿液采集容器在所述保存液仓中预充有上述第一方面所述的尿液保存液，所述样本仓与所述保存液仓的连通被关断，所述方法包括以下步骤：
a.使所述尿液采集容器处于直立状态，打开所述尿液采集容器的顶部的瓶盖，参照所述样本仓的外表面的刻度指示收集中段尿，然后将所述瓶盖封闭所述瓶身的上端开口；
b.倒置所述尿液采集容器，随后旋松所述旋动装置的旋动手柄，通过所述旋动装置的传动旋杆带动所述旋动装置的橡胶塞与所述中部隔板分离，使得所述样本仓与所述保存液仓连通，以便所述保存液仓中的尿液保存液流入所述样本仓与尿液混合；以及
c.参照所述样本仓的外表面的刻度指示，当所述样本仓中的混合液的体积达到尿液的体积的一倍时，旋紧所述旋动手柄，使得所述橡胶塞与所述中部隔板贴合，随后上下颠倒所述尿液采集容器数次，以使尿液与尿液保存液充分混合后保存在所述样本仓中。
在本发明的第四方面，提供了一种从尿液中获取上皮细胞的试剂盒，包括：
尿液采集容器，其包括：
瓶身，其包含中间隔板以将所述瓶身分为上部的样本仓和下部的保存液仓，所述中间隔板设置有孔来连通所述样本仓与所述保存液仓，所述保存液仓中预充了上述第一方面所述的尿液保存液，所述样本仓被配置用于采集尿液以及混合尿液和尿液保存液；
旋动装置，被配置成封闭或打开所述中间隔板的孔来关断或打开所述样本仓与所述保存液仓的连通；以及
瓶盖，被设置在所述尿液采集容器的顶部以用于封闭所述瓶身的上端开口；
其中在瓶身的下部的保存液仓中，充有一种本发明的尿液保存液，其中，所述尿液保存液包含酸碱平衡缓冲体系、离子成分、氨基酸成分以及细菌或真菌的抑制剂。
本发明的尿液保存液可以与尿液混合，为尿液中的上皮细胞提供了适宜的保存环境，防止了尿液被细菌和真菌污染，有效延长了细胞的保存时间，为可操作地获得上皮细胞提供足够的作业时间。
本发明的尿液采集容器便于采集尿液及使尿液与尿液保存液混合，有效地简化了操作，避免了样本受到从采集到细胞分离之间的操作(诸如，采集、分装、添加尿液保存液和保存等操作)带来的潜在污染，方便从尿液中获取上皮细胞。
本发明的采集和保存尿液以用于培养上皮细胞的方法可以简便地采集尿液样本，并且延长了尿液中的上皮细胞的保存时间，可以确保从尿液中获得可以使用的上皮细胞。
本发明的从尿液中获取上皮细胞的试剂盒可以方便地从尿液中获得可以使用的上皮细胞，为操作提供足够的作业时间。
附图说明
现将参照附图详细地描述本发明的优点、特征，在附图中，各部件未必按比例绘制，其中：
图1例示了根据本发明的一个实施方案的尿液采集容器的剖面视图；
图2例示了根据本发明的一个实施方案的尿液采集容器的旋动装置的剖面视图；
图3例示了根据本发明的一个实施方案的采集和保存尿液的方法的流程图；
图4示出了在尿液采集0小时后分离的细胞的生长示意图，刻度尺：500μm；
图5示出了原始尿液与加入根据本发明的一个实施例的尿液保存液后尿液中的上皮细胞的克隆数量随分离时间变化的柱状图；以及
图6示出了原始尿液与加入根据本发明的一个实施例的尿液保存液后尿液培养基中污染数量随分离时间变化的柱状图。
具体实施方式
通过下面的具体实施方式，在此描述的这些产品和/或装置和/或方法和/或其他发明主题的其他方面、特征和优点将变得显而易见。
在描述本发明时，各个部件的位置按照其在实际使用时的定位确定上下方向和方位。
如无相反说明，则所有操作均在室温、常压条件完成。
在本发明的第一方面，提供了一种尿液保存液，其中，所述尿液保存液可以包含酸碱平衡缓冲体系、离子成分、氨基酸成分以及细菌或真菌的抑制剂。
根据本发明的一个优选实施方案，所述酸碱平衡缓冲体系的pH值在7.35至7.45之间。例如，所述酸碱平衡缓冲体系优选可以采用选自碳酸盐缓冲系统、磷酸盐缓冲系统和4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲系统之一或者它们的混合体系。通过酸碱平衡缓冲体系可以使得尿液保存液与尿液混合后的pH值仍在7.35至7.45之间。优选地，可以通过在所述尿液保存液中预充二氧化碳来调节保存液的pH值。通过所述酸碱平衡缓冲体系可以平衡并维持适于尿液中的上皮细胞的活性的酸碱度。
根据本发明的一个优选实施方案，所述碳酸盐缓冲系统可以包含碳酸氢盐，优选地，碳酸氢钠，更优选地，所述尿液保存液中可以包含2438.0mg/L的碳酸氢钠(NaHCO3)。
根据本发明的一个优选实施方案，所述磷酸盐缓冲系统可以包含磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，优选地，所述尿液保存液中可以包含106.51mg/L的磷酸氢二钠(Na2HPO4)和62.5mg/L的磷酸二氢钠(NaH2PO4-H2O)。
根据本发明的一个优选实施方案，所述尿液保存液中可以包含95.2mg/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)。
根据本发明的一个优选实施方案，所述离子成分可以包含氯的碱金属盐，例如氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)，硫酸的二价金属的盐，例如硫酸镁(MgSO4)、硫酸锌(ZnSO4-7H2O)和硫酸亚铁(FeSO4-7H2O)。通过在所述尿液保存液所包含的离子成分，可以补充尿液的渗透压，并且将其维持在适于尿液中的上皮细胞的活性的范围内。优选地，所述尿液保存液中可以包含7000mg/L的氯化钠(NaCl)、155.9mg/L的氯化钾(KCl)、24.42mg/L的硫酸镁(MgSO4)、0.216mg/L的硫酸锌(ZnSO4-7H2O)和0.208mg/L的硫酸亚铁(FeSO4-7H2O)。通过在所述尿液保存液所包含的多种离子成分，可以补充尿液的渗透压，并且将其维持在适于尿液中的上皮细胞的活性的范围内。
根据本发明的一个优选实施方案，所述氨基酸成分可以包括甘氨酸、L-精氨酸和L-赖氨酸等多种细胞生长所需要的必须及非必须氨基酸成分。例如，优选地，所述氨基酸成分可以包括18.75mg/L的甘氨酸、147.5mg/L的L-精氨酸和45.63mg/L的L-赖氨酸。这些细胞生长所需要的必须及非必须氨基酸成分可以补充并维持适于尿液中的上皮细胞的活性的能量和营养成分。
根据本发明的一个优选实施方案，所述氨基酸成分可以进一步包括人甲状腺素、人重组内皮细胞生长因子、胰岛素以及人转铁蛋白等多种组份。例如，优选地，所述氨基酸成分可以包括10nM的人甲状腺素、20ng/ml的人重组内皮细胞生长因子、5μg/mL的胰岛素以及10μg/mL的人转铁蛋白等多种组份。这些组份可以促进并维持尿液中的上皮细胞的代谢活性。
根据本发明的一个优选实施方案，所述细菌或真菌的抑制剂可以包括500U/L的青霉素、500μg/L的链霉素、5mg/L的左氧氟沙星和250μg/L的两性霉素B。这些细菌或真菌的抑制剂可以保证尿液保存的无菌环境。
根据本发明的一个优选实施方案，所述尿液保存液不包含动物源性成分。因此，所述尿液保存液不会影响后续应用于人体操作。
可以理解的是，只要不损害尿液中的上皮细胞的活性，本发明的尿液保存液还可以还有其他成分，例如其他离子、氨基酸、细菌或真菌的抑制剂等。
在本发明的第二方面，提供了一种尿液采集容器，其包括：
瓶身，其包含中间隔板以将所述瓶身分为上部的样本仓和下部的保存液仓，所述中间隔板设置有孔来连通所述样本仓与所述保存液仓，所述保存液仓被配置用于预充尿液保存液，所述样本仓被配置用于采集尿液以及混合尿液和尿液保存液；
瓶盖，被设置在所述尿液采集容器的顶部以用于封闭所述瓶身的上端开口；以及
旋动装置，被配置成封闭或打开所述中间隔板的孔来关断或打开所述样本仓与所述保存液仓的连通。
根据本发明的一个优选实施方案，所述旋动装置可以包括：
旋动手柄，被设置在所述尿液采集容器的底部；
传动旋杆，其与所述旋动手柄一起由塑料一体成型，并且在与所述旋动手柄连接的一端设置有密封螺纹；以及
橡胶塞，其具有圆形片状结构并且被设置在所述传动旋杆的与所述旋动手柄相对的一端；
其中所述瓶身在底面设置有一个圆孔，所述密封螺纹与所述底面的圆孔通过螺纹接合来密封所述底面，并且所述中间隔板的孔的直径大于所述传动旋杆的直径并且小于所述橡胶塞的直径，所述传动旋杆穿过所述保存液仓使得所述橡胶塞恰在所述中间隔板的孔上方，所述旋动手柄的旋转通过所述传动旋杆转换为所述橡胶塞与所述中间隔板的贴合或分离，从而封闭或打开所述中间隔板的孔。
根据本发明的一个优选实施方案，所述瓶身、所述瓶盖、所述旋动手柄和所述传动旋杆均由高分子医用塑料制成，所述橡胶塞由医用橡胶制成，所述瓶身是透明的，并且所述样本仓的外表面设置有刻度指示，所述瓶盖具有螺纹以与所述瓶身的螺纹接合来封闭所述瓶身的上端开口。所述瓶盖的螺纹可以是内螺纹也可以是外螺纹。可以理解的是，所述瓶身也可以不是透明的。
根据本发明的一个优选实施方案，所述尿液采集容器可以为圆柱形，并且所述中间隔板的孔、所述底面的圆孔和所述传动旋杆都位于所述尿液采集容器的中心轴线上。
根据本发明的一个优选实施方案，在初始状态下，所述橡胶塞与所述中间隔板贴合，并且所述保存液仓中预充了尿液保存液。例如，优选地，所述保存液仓中预充了300ml的尿液保存液。
可以理解的是，所述中间隔板的孔可以具有任何适用的形状，例如圆形。
在本发明的第三方面，提供了一种采集和保存尿液以用于培养上皮细胞的方法，其中采用上述第二方面所述的尿液采集容器来采集尿液，在初始状态下，所述尿液采集容器在所述保存液仓中预充有上述第一方面所述的尿液保存液，所述样本仓与所述保存液仓的连通被关断，所述方法包括以下步骤：
a.使所述尿液采集容器处于直立状态，打开所述尿液采集容器的顶部的瓶盖，参照所述样本仓的外表面的刻度指示收集中段尿，然后再将所述瓶盖封闭所述瓶身的上端开口；
b.倒置所述尿液采集容器，随后旋松所述旋动装置的旋动手柄，通过所述旋动装置的传动旋杆带动所述旋动装置的橡胶塞与所述中部隔板分离，使得所述样本仓与所述保存液仓连通，以便所述保存液仓中的尿液保存液流入所述样本仓与尿液混合；以及
c.参照所述样本仓的外表面的刻度指示，当所述样本仓中的混合液的体积达到尿液的体积的一倍时，旋紧所述旋动手柄，使得所述橡胶塞与所述中部隔板紧密贴合，随后上下颠倒所述尿液采集容器数次，以使尿液与尿液保存液充分混合后保存在所述样本仓中。
根据本发明的一个优选实施方案，在初始状态下，所述尿液采集容器在所述保存液仓中预充了300ml的尿液保存液，并且在步骤a中，收集100-300ml的中段尿。
在本发明的第四方面，提供了一种从尿液中获取上皮细胞的试剂盒，包括：
尿液采集容器，其包括：
瓶身，其包含中间隔板以将所述瓶身分为上部的样本仓和下部的保存液仓，所述中间隔板设置有孔来连通所述样本仓与所述保存液仓，所述保存液仓被配置用于预充尿液保存液，所述样本仓被配置用于采集尿液以及混合尿液和尿液保存液；
旋动装置，被配置成封闭或打开所述中间隔板的孔来关断或打开所述样本仓与所述保存液仓的连通；以及
瓶盖，被设置在所述尿液采集容器的顶部以用于封闭所述瓶身的上端开口；
其中在瓶身的下部的保存液仓中，充有一种本发明的尿液保存液，其中，所述尿液保存液包含酸碱平衡缓冲体系、离子成分、氨基酸成分以及细菌或真菌的抑制剂。
以下结合附图，对本发明的具体实施方案作说明，但是，本发明不受这些具体实施方案的限制。
图1例示了根据本发明的一个实施方案的尿液采集容器的剖面视图。如图1所示，圆柱形的尿液采集容器1包括：透明的瓶身2，其包含中间隔板以将瓶身2分为上部的样本仓21和下部的保存液仓22，该中间隔板在中心设置了孔来连通样本仓21与保存液仓22，保存液仓22用于存储尿液保存液，样本仓21的外表面设置有刻度指示以便定量采集尿液以及混合尿液和尿液保存液；瓶盖3，被设置在尿液采集容器1的顶部，其具有内螺纹以与瓶身2的外螺纹接合来封闭瓶身2的上端开口；以及旋动装置4，被配置成封闭或打开中间隔板的孔来关断或打开样本仓21与保存液仓22的连通。
图2例示了根据本发明的一个实施方案的尿液采集容器的旋动装置的剖面视图。如图2所示，旋动装置4包括：由塑料一体成型的旋动手柄41和传动旋杆42，以及橡胶塞43。传动旋杆42在与旋动手柄41连接的一端设置有密封螺纹44，橡胶塞43具有圆形片状结构并且被设置在传动旋杆42的与旋动手柄41相对的一端。
再次参考图1，旋动手柄41被设置在尿液采集容器1的底部，并且瓶身2在底面的中心设置了一个圆孔，传动旋杆42的密封螺纹44与该圆孔通过螺纹接合，使得传动旋杆42遵循密封螺纹44旋转并且密封该底面。此外，中间隔板的孔的直径大于传动旋杆42的直径并且小于橡胶塞43的直径，传动旋杆42从尿液采集容器1的中心轴线穿过保存液仓22使得橡胶塞43恰在中间隔板的孔上方。当旋松旋动手柄41时，传动旋杆42带动橡胶塞43与中间隔板的分离，从而打开中间隔板的孔，样本仓21与保存液仓22连通；当旋紧旋动手柄41时，传动旋杆42带动橡胶塞43与中间隔板的贴合，从而封闭中间隔板的孔，样本仓21与保存液仓22隔离。
优选地，瓶身2、瓶盖3、旋动手柄41和传动旋杆42均由高分子医用塑料制成，而橡胶塞43由医用橡胶制成。
图3例示了根据本发明的一个实施方案的采集和保存尿液的方法的流程图。如图3所示，其中的A为尿液采集容器1的初始状态，瓶盖3封闭瓶身2的上端开口，橡胶塞43与中间隔板贴合，并且保存液仓22中预充了300ml的尿液保存液。首先，如B所示，使尿液采集容器1处于直立状态，打开尿液采集容器1的顶部的瓶盖3，参照样本仓21的外表面的刻度指示收集100-300ml的中段尿，然后再将瓶盖3封闭瓶身2的上端开口。其次，如C所示，倒置尿液采集容器1，随后旋松旋动装置4的旋动手柄41，传动旋杆42带动橡胶塞43与中部隔板分离，使得样本仓21与保存液仓22连通，保存液仓22中的尿液保存液流入样本仓21与尿液混合。参照样本仓21的外表面的刻度指示，当样本仓21中的混合液的体积达到尿液的体积的一倍时(尿液与尿液保存液的比例为1:1)，旋紧旋动手柄41，使得橡胶塞43与中部隔板紧密贴合，随后上下颠倒尿液采集容器1数次，以使尿液与尿液保存液充分混合。最后，D为采集尿液并混入尿液保存液后的状态，样本仓21与保存液仓22隔离，尿液和尿液保存液的混合液保存在样本仓21中，保存液仓22中含有剩余的尿液保存液。
实施例及对比例
为了验证尿液保存液的效果，对尿液中的上皮细胞的保存时间进行了实验研究。取受试者尿液，分为两等份，每份200ml，采用两种保存方法进行保存，一份按照体积1:1的比例加入尿液保存液，一份不做其他操作。随后，将采用不同保存方法保存的两份尿液都分为5等份，放入4℃冰箱保存。在从保存开始的5个时间点，0小时、4小时、8小时、12小时和20小时，将两种保存方法保存的尿液分别取出一份进行上皮细胞分离操作。
尿液中上皮细胞的分离过程如下(所有尿液分离操作均按照本方式进行，参考文献：Zhou T.Generation of human induced pluripotent stem cells from urinesamples.[J].Nature Protocols,2012,7(12):2080-2089.)：
1)将尿液分装至50ml离心管，室温400g，离心10分钟；
2)自上而下小心吸取离心管液体，在管底保留1ml液体；
3)将各离心管中液体吹吸混匀，合并到50ml离心管中，使用尿液洗涤培养基定容到30ml，室温200g，离心10分钟；
4)自上而下小心吸取离心管液体，在管底保留0.2ml液体；
5)使用尿液分离培养基吹吸混匀管底液体，接种在预先包被有基质胶的12孔板中，放入细胞培养箱中，37℃，5％CO2培养，避免震动；
6)每天用显微镜拍照，补充尿液分离培养基，在培养第7天更换为肾细胞上皮扩增培养基。
每天用显微镜拍照观察尿液中的上皮细胞的克隆生长情况，并观察培养基是否发生微生物污染。对于每个时间点分离出的上皮细胞均做5次重复拍照观察。
图4示出了在尿液采集0小时后分离的细胞的生长示意图，刻度尺：500μm。如图4所示，
A：上皮细胞培养第3天，培养皿底部有散在尿液沉渣和细胞碎片；
B：上皮细胞培养第7天，可观察到小片细胞克隆；
C：上皮细胞培养第9天，细胞克隆轮廓扩大，细胞数量增多；
D：上皮细胞培养第12天，细胞克隆轮廓进一步扩大，细胞数量明显增多充满整个视野。
图5示出了原始尿液与加入根据本发明的一个实施例的尿液保存液后尿液中的上皮细胞的克隆数量随分离时间变化的柱状图。尿液保存液无动物源性物质，组成如下：
2438.0mg/L的碳酸氢钠(NaHCO3)、106.51mg/L的磷酸氢二钠(Na2HPO4)、62.5mg/L的磷酸二氢钠(NaH2PO4-H2O)和95.2mg/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)，pH在7.35-7.45范围内；
7000mg/L的氯化钠(NaCl)、155.9mg/L的氯化钾(KCl)、24.42mg/L的硫酸镁(MgSO4)、0.216mg/L的硫酸锌(ZnSO4-7H2O)和0.208mg/L的硫酸亚铁(FeSO4-7H2O)；
18.75mg/L的甘氨酸、147.5mg/L的L-精氨酸和45.63mg/L的L-赖氨酸；
10nM的人甲状腺素、20ng/ml的人重组内皮细胞生长因子、5μg/mL的胰岛素以及10μg/mL的人转铁蛋白；
500U/L的青霉素、500μg/L的链霉素、5mg/L的左氧氟沙星和250μg/L的两性霉素B。
对于分离的上皮细胞的所有培养样本，均在培养第12天时计数培养皿中全部上皮细胞的克隆数量。如图5所示，0小时组的原始尿液平均形成3.4个上皮细胞克隆，而加入尿液保存液的培养样本平均形成3.6个上皮细胞克隆；4小时组的原始尿液平均形成0.4个上皮细胞克隆，较0小时组明显减少，加入尿液保存液的培养样本平均形成4.0个上皮细胞克隆；8小时、12小时、20小时组的原始尿液均未能形成上皮细胞克隆，加入尿液保存液的培养样本形成上皮细胞克隆的平均数量分别为3.2个、3.0个、2.8个。因此，尿液保存液为尿液中的上皮细胞提供了适宜的保持环境。
图6示出了原始尿液与加入根据本发明的一个实施例的尿液保存液(组成如图5说明中所示)后尿液培养基中污染数量随分离时间变化的柱状图。在将尿液离心底部液体接种至12孔板后，每天观察细胞培养基的微生物污染情况，结果如图6所示，原始尿液在0小时、4小时、8小时、20小时分离的培养样本均出现1例污染情况，12小时分离的培养样本出现2例污染情况。经观察0小时、4小时、12小时、20小时分离的培养样本出现的是细菌污染，8小时分离的培养样本出现的是真菌污染。加入尿液保存液的培养样本均未出现污染情况。因此，尿液保存液可以保证尿液保存的无菌环境，防止了尿液中的上皮细胞被细菌和真菌污染，以便上皮细胞用于后续的处理和应用。
本发明的尿液保存液由于包含了特定的组份，在与尿液混合后可以为尿液中的上皮细胞提供了适宜的保存环境，防止了尿液被细菌和真菌污染，有效延长了上皮细胞的保存时间，为可操作地获得上皮细胞提供足够的作业时间。本发明的尿液采集容器便于采集尿液及使尿液与尿液保存液混合，有效地简化了操作，避免了样本受到从采集到细胞分离之间的操作(诸如，采集、分装、添加尿液保存液和保存等操作)带来的潜在污染，方便从尿液中获取上皮细胞。本发明的采集和保存尿液以用于培养上皮细胞的方法可以简便地采集尿液样本，并且延长了尿液中的上皮细胞的保存时间，可以确保从尿液中获得可以使用的上皮细胞。本发明的从尿液中获取上皮细胞的试剂盒可以方便地从尿液中获得可以使用的上皮细胞，为操作提供足够的作业时间。
虽然在上文展示和描述了多种优选实施方案，但对本领域技术人员显而易见的是，可以在不背离所附权利要求书所定义的本发明范围的前提下做出修改和变化。
Claims (10)
1.一种尿液保存液，其特征在于，所述尿液保存液包含酸碱平衡缓冲体系、离子成分、氨基酸成分以及细菌或真菌的抑制剂，并且不包含动物源性成分。
2.根据权利要求1所述的尿液保存液，其特征在于，所述酸碱平衡缓冲体系的pH值在7.35至7.45之间；优选选自碳酸盐缓冲系统、磷酸盐缓冲系统和4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲系统之一或者它们的混合体系。
3.根据权利要求2所述的尿液保存液，其特征在于，所述尿液保存液的pH值是通过预充二氧化碳来调节的。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的尿液保存液，其特征在于，所述离子成分包含氯的碱金属盐，例如氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)，硫酸的二价金属的盐，例如硫酸镁(MgSO4)、硫酸锌(ZnSO4-7H2O)和硫酸亚铁(FeSO4-7H2O)，优选地，所述尿液保存液中包含7000mg/L的氯化钠(NaCl)、155.9mg/L的氯化钾(KCl)、24.42mg/L的硫酸镁(MgSO4)、0.216mg/L的硫酸锌(ZnSO4-7H2O)和0.208mg/L的硫酸亚铁(FeSO4-7H2O)。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的尿液保存液，其特征在于，所述氨基酸成分包括甘氨酸、L-精氨酸和L-赖氨酸，优选地所述氨基酸成分包括18.75mg/L的甘氨酸、147.5mg/L的L-精氨酸和45.63mg/L的L-赖氨酸。
6.根据权利要求1至3中任一项所述的尿液保存液，其特征在于，所述氨基酸成分还包括人甲状腺素、人重组内皮细胞生长因子、胰岛素以及人转铁蛋白，优选地所述氨基酸成分还包括10nM的人甲状腺素、20ng/ml的人重组内皮细胞生长因子、5μg/mL的胰岛素以及10μg/mL的人转铁蛋白。
7.一种尿液采集容器，其特征在于，所述尿液采集容器包括：
瓶身，其包含中间隔板以将所述瓶身分为上部的样本仓和下部的保存液仓，所述中间隔板设置有孔来连通所述样本仓与所述保存液仓，所述保存液仓被配置用于预充尿液保存液，所述样本仓被配置用于采集尿液以及混合尿液和尿液保存液；
瓶盖，被设置在所述尿液采集容器的顶部以用于封闭所述瓶身的上端开口；以及
旋动装置，被配置成封闭或打开所述中间隔板的孔来关断或打开所述样本仓与所述保存液仓的连通。
8.根据权利要求7所述的尿液采集容器，其特征在于，所述旋动装置包括：
旋动手柄，被设置在所述尿液采集容器的底部；
传动旋杆，其与所述旋动手柄一起由塑料一体成型，并且在与所述旋动手柄连接的一端设置有密封螺纹；以及
橡胶塞，其具有圆形片状结构并且被设置在所述传动旋杆的与所述旋动手柄相对的一端；
其中所述瓶身在底面设置有一个圆孔，所述密封螺纹与所述底面的圆孔通过螺纹接合来密封所述底面，并且所述中间隔板的孔的直径大于所述传动旋杆的直径并且小于所述橡胶塞的直径，所述传动旋杆穿过所述保存液仓使得所述橡胶塞恰在所述中间隔板的孔上方，所述旋动手柄的旋转通过所述传动旋杆转换为所述橡胶塞与所述中间隔板的贴合或分离，从而封闭或打开所述中间隔板的孔。
9.一种采集和保存尿液以用于培养上皮细胞的方法，其特征在于，采用上述权利要求7-8中任一项所述的尿液采集容器来采集尿液，在初始状态下，所述尿液采集容器在所述保存液仓中预充有权利要求1-6之一所述的尿液保存液，所述样本仓与所述保存液仓的连通被关断，所述方法包括以下步骤：
a.使所述尿液采集容器处于直立状态，打开所述尿液采集容器的顶部的瓶盖，参照所述样本仓的外表面的刻度指示收集中段尿，然后再将所述瓶盖封闭所述瓶身的上端开口；
b.倒置所述尿液采集容器，随后旋松所述旋动装置的旋动手柄，通过所述旋动装置的传动旋杆带动所述旋动装置的橡胶塞与所述中部隔板分离，使得所述样本仓与所述保存液仓连通，以便所述保存液仓中的尿液保存液流入所述样本仓与尿液混合；以及
c.参照所述样本仓的外表面的刻度指示，当所述样本仓中的混合液的体积达到尿液的体积的一倍时，旋紧所述旋动手柄，使得所述橡胶塞与所述中部隔板紧密贴合，随后上下颠倒所述尿液采集容器数次，以使尿液与尿液保存液充分混合后保存在所述样本仓中。
10.一种用于从尿液中获取上皮细胞的试剂盒，包括：
尿液采集容器，其包括：
瓶身，其包含中间隔板以将所述瓶身分为上部的样本仓和下部的保存液仓，所述中间隔板设置有孔来连通所述样本仓与所述保存液仓，所述保存液仓被配置用于预充尿液保存液，所述样本仓被配置用于采集尿液以及混合尿液和尿液保存液；
旋动装置，被配置成封闭或打开所述中间隔板的孔来关断或打开所述样本仓与所述保存液仓的连通；以及
瓶盖，被设置在所述尿液采集容器的顶部以用于封闭所述瓶身的上端开口；
其中在瓶身的下部的保存液仓中，充有一种权利要求1-6之一所述的尿液保存液。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111266300.0A CN114342914A (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 尿液采集容器、采集和保存尿液的方法及试剂盒 |
| CN201811268170.2A CN109757466B (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 一种尿液保存液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811268170.2A CN109757466B (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 一种尿液保存液 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111266300.0A Division CN114342914A (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 尿液采集容器、采集和保存尿液的方法及试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109757466A true CN109757466A (zh) | 2019-05-17 |
| CN109757466B CN109757466B (zh) | 2022-05-24 |
Family
ID=66450096
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811268170.2A Active CN109757466B (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 一种尿液保存液 |
| CN202111266300.0A Pending CN114342914A (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 尿液采集容器、采集和保存尿液的方法及试剂盒 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111266300.0A Pending CN114342914A (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 尿液采集容器、采集和保存尿液的方法及试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (2) | CN109757466B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111964976A (zh) * | 2020-08-06 | 2020-11-20 | 沈阳农业大学 | 一种雄性动物采尿装置的制备方法 |
| CN115530154A (zh) * | 2021-06-29 | 2022-12-30 | 成都理想之光科技有限公司 | 一种异噻唑啉酮的新用途 |
| CN115530155A (zh) * | 2021-06-29 | 2022-12-30 | 成都理想之光科技有限公司 | 一种24小时尿液样本保存剂、制备方法及应用 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115590016B (zh) * | 2022-10-26 | 2024-03-08 | 中南大学湘雅三医院 | 一种肿瘤样本保存装置 |
Citations (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1273775A (zh) * | 1999-05-13 | 2000-11-22 | 徐永安 | 一种动、植物体贮藏除臭保鲜剂 |
| US20080064108A1 (en) * | 1997-12-10 | 2008-03-13 | Tony Baker | Urine Preservation System |
| CN101601378A (zh) * | 2009-07-20 | 2009-12-16 | 同昕生物技术（北京）有限公司 | 高效快速的膀胱癌尿检试剂盒及尿液细胞活性保存液 |
| CN102258003A (zh) * | 2010-05-28 | 2011-11-30 | 孝感市中心医院 | 一种液基细胞保存液 |
| CN103966166A (zh) * | 2014-05-26 | 2014-08-06 | 北京赛贝生物技术有限公司 | 尿液细胞培养基及尿液细胞的培养方法 |
| CN104195101A (zh) * | 2014-09-09 | 2014-12-10 | 武斌 | 一种毛囊单位保存培养液 |
| CN105392363A (zh) * | 2013-03-01 | 2016-03-09 | A·S·戈尔兹伯勒 | 样品的固定和稳定化 |
| CN105409925A (zh) * | 2014-09-19 | 2016-03-23 | 孝感宏翔生物医械技术有限公司 | 一种液基细胞保存液 |
| CN107267500A (zh) * | 2017-07-17 | 2017-10-20 | 北京安必奇生物科技有限公司 | 一种游离dna保存液及其制备方法和应用 |
| CN107603970A (zh) * | 2017-09-25 | 2018-01-19 | 湖南优品司生物科技有限公司 | 一种防止尿液中游离dna降解的尿液保存剂及尿液保存管 |
| CN107881213A (zh) * | 2017-11-10 | 2018-04-06 | 人和未来生物科技（长沙）有限公司 | 一种尿液保存试剂及其应用 |
| CN108552162A (zh) * | 2018-06-15 | 2018-09-21 | 北京迈迪金生物科技股份有限公司 | 一种尿液保存液、制备方法及其制片装置 |
| CN108642042A (zh) * | 2018-04-13 | 2018-10-12 | 江苏康为世纪生物科技有限公司 | 一种尿液核酸的保存剂及装置 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07223644A (ja) * | 1994-02-10 | 1995-08-22 | Kanebo Ltd | 二成分混合容器 |
| CN202670427U (zh) * | 2012-06-27 | 2013-01-16 | 江苏龙灯博士摩包装材料有限公司 | 一种液体混合瓶 |
| CN205525861U (zh) * | 2016-03-12 | 2016-08-31 | 宁波大学 | 一种医药生物用药瓶 |
| CN205981773U (zh) * | 2016-08-09 | 2017-02-22 | 浙江家大夫健康产业股份有限公司 | 一种采集管自带保存液的唾液采集器 |
| CN206297914U (zh) * | 2016-12-22 | 2017-07-04 | 解码（上海）生物医药科技有限公司 | 一种体液收集保存器 |
| CN207263494U (zh) * | 2017-09-30 | 2018-04-20 | 黄海妮 | 一种用于基因检测的唾液采集装置 |
| CN107826431B (zh) * | 2017-12-07 | 2019-08-27 | 台州市佰亿特塑业有限公司 | 一种带定量倒茶叶功能的茶叶盒 |
| CN207712496U (zh) * | 2018-01-10 | 2018-08-10 | 黑河市圣源科技有限责任公司 | 球形阀隔离液体连通瓶 |
-
2018
- 2018-10-29 CN CN201811268170.2A patent/CN109757466B/zh active Active
- 2018-10-29 CN CN202111266300.0A patent/CN114342914A/zh active Pending
Patent Citations (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080064108A1 (en) * | 1997-12-10 | 2008-03-13 | Tony Baker | Urine Preservation System |
| CN1273775A (zh) * | 1999-05-13 | 2000-11-22 | 徐永安 | 一种动、植物体贮藏除臭保鲜剂 |
| CN101601378A (zh) * | 2009-07-20 | 2009-12-16 | 同昕生物技术（北京）有限公司 | 高效快速的膀胱癌尿检试剂盒及尿液细胞活性保存液 |
| CN102258003A (zh) * | 2010-05-28 | 2011-11-30 | 孝感市中心医院 | 一种液基细胞保存液 |
| CN105392363A (zh) * | 2013-03-01 | 2016-03-09 | A·S·戈尔兹伯勒 | 样品的固定和稳定化 |
| CN103966166A (zh) * | 2014-05-26 | 2014-08-06 | 北京赛贝生物技术有限公司 | 尿液细胞培养基及尿液细胞的培养方法 |
| CN104195101A (zh) * | 2014-09-09 | 2014-12-10 | 武斌 | 一种毛囊单位保存培养液 |
| CN105409925A (zh) * | 2014-09-19 | 2016-03-23 | 孝感宏翔生物医械技术有限公司 | 一种液基细胞保存液 |
| CN107267500A (zh) * | 2017-07-17 | 2017-10-20 | 北京安必奇生物科技有限公司 | 一种游离dna保存液及其制备方法和应用 |
| CN107603970A (zh) * | 2017-09-25 | 2018-01-19 | 湖南优品司生物科技有限公司 | 一种防止尿液中游离dna降解的尿液保存剂及尿液保存管 |
| CN107881213A (zh) * | 2017-11-10 | 2018-04-06 | 人和未来生物科技（长沙）有限公司 | 一种尿液保存试剂及其应用 |
| CN108642042A (zh) * | 2018-04-13 | 2018-10-12 | 江苏康为世纪生物科技有限公司 | 一种尿液核酸的保存剂及装置 |
| CN108552162A (zh) * | 2018-06-15 | 2018-09-21 | 北京迈迪金生物科技股份有限公司 | 一种尿液保存液、制备方法及其制片装置 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111964976A (zh) * | 2020-08-06 | 2020-11-20 | 沈阳农业大学 | 一种雄性动物采尿装置的制备方法 |
| CN115530154A (zh) * | 2021-06-29 | 2022-12-30 | 成都理想之光科技有限公司 | 一种异噻唑啉酮的新用途 |
| CN115530155A (zh) * | 2021-06-29 | 2022-12-30 | 成都理想之光科技有限公司 | 一种24小时尿液样本保存剂、制备方法及应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109757466B (zh) | 2022-05-24 |
| CN114342914A (zh) | 2022-04-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109757466A (zh) | 尿液保存液、尿液采集容器、方法及试剂盒 | |
| AU2006293780B8 (en) | Kit for preparing a composition comprising fat cells | |
| AU2023200521A1 (en) | Products and methods to isolate mitochondria | |
| US6841170B2 (en) | Process for preparing an autologous platelet gel and membrane thereof | |
| US20050106753A1 (en) | Sanitary fluid collection, application and storage device and methods of use of same | |
| JP2008220319A (ja) | 遠心分離用容器および支持器 | |
| CN105454220B (zh) | 一种胎盘保存方法、胎盘保存液及其制备方法 | |
| JPH08292189A (ja) | 採便容器 | |
| CN108552162A (zh) | 一种尿液保存液、制备方法及其制片装置 | |
| CN201859075U (zh) | 新型一次性大便采样器 | |
| US20220008475A1 (en) | Methods for preparing platelet releasate | |
| CN103764028A (zh) | 凝固控制剂和包含凝固控制剂的装置 | |
| CN110115600A (zh) | 一种护理用尿液分段采集装置 | |
| CN102429665B (zh) | 一种可直接分离血浆的血液采集组件 | |
| CN109082378A (zh) | 骨软骨微流控芯片培养设备、包含其的骨软骨微流控芯片分析设备 | |
| CN109893884A (zh) | 一种prp分离采集器及其使用方法 | |
| CN208171632U (zh) | 样品采样装置及其包装体 | |
| CN108823150A (zh) | 一种输卵管缓冲培养液及其制备方法 | |
| CN114657117A (zh) | 一种基于中空纤维生物反应器的外泌体制备方法 | |
| CN207330932U (zh) | 便携式户外孢子分离器 | |
| CN208367009U (zh) | 一种非定值质控品 | |
| KR20220100579A (ko) | 선택적 개방가능 다이어프램 밸브를 갖는 캡을 포함하는 샘플 수집 키트 | |
| CN220618938U (zh) | 微生物标本采样接种一体化容器 | |
| CN209400275U (zh) | 一种尿液检验标本存取容器 | |
| CN203754727U (zh) | 一种用于毛囊培养的装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |