CN109735454A - 一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基及其保藏方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基及其保藏方法，属于菌种保藏领域。所述木屑保藏培养基包括上下两层培养基，所述上层培养基由木屑、麸皮、石膏按照质量比10‑12：2‑3：0.2‑0.3组成，所述下层培养基由木屑组成，所述上层培养基与下层培养基质量比为12‑15：40‑45，所述木屑为浸泡于水或盐溶液至含水量达到最大值或自身含水量达最大值的木屑。本发明的保藏培养基可以使菌种在中期以及长期的保存中依然保持活力高、不退化的特性，且培养基制备以及保藏操作方法简便、培养基价格低廉、获得的菌种纯度高，可在工业生产中得到广泛应用，具有显著的市场前景。

Description

一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基及其保藏方法

技术领域

本发明属于菌种保藏领域，具体涉及一种真姬菇菌种的木屑保藏培养基及其保藏方法。

背景技术

真姬菇(Hypslzygus marmoreus)是目前进入工厂化生产的重要食用菌之一，是一种营养丰富的食用兼药用的珍稀食用菌，含有人体所需的八种必须氨基酸，具有提高人体免疫力、预防衰老、延长寿命等多种功效，享有“闻则松茸，食则玉蕈”的美誉。

对于食用菌工厂化周期生产来说,菌种工作必然是重中之重,菌种的纯度和质量决定着后期出菇的产量和质量,而一株优良的菌种如何保藏下来延长使用周期则是菌种工作中必不可缺的一项工作。

目前真姬菇的菌种保藏方法有斜面保藏法,麦粒保藏法,生理盐水保藏法等,斜面保藏法的保藏周期不长,一般半年左右,时间长,培养基干涸,菌丝变黄老化变异；麦粒保藏法制作工艺复杂,麦粒浸泡时间不好掌握,易产生粉孢子；生理盐水保藏操作简单,但存放时间长了,培养基易漂浮出水面,造成露出部分干涸,菌种老化,容易变异,活化时易产生粉孢子，影响出菇产量和质量。

发明内容

本发明所解决的技术问题是克服现有菌种保藏方法中存在的缺陷，提供一种保持真姬菇菌种活力高、不退化、操作简便、价格低廉、菌种纯度高、菌种活力高，且均无气生菌丝生成，易于推广的真姬菇菌种的木屑保藏方法，以拓宽真姬菇菌种保藏方法的范围。

为了实现上述目的，本发明首先提供一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，所述木屑保藏培养基包括上下两层培养基，所述上层培养基由木屑、麸皮、石膏按照质量比10-12：2-3：0.2-0.3组成，所述下层培养基由木屑组成，所述上层培养基与下层培养基质量比为12-15：40-45，所述木屑为自身含水量达最大值的木屑，或将干木屑通过用水或盐溶液充分浸泡至木屑含水量达最大值的木屑。

所述将干木屑通过浸泡得到的含水量达最大值的木屑中，所述含水量达最大值指的是将干木屑持续浸泡在水或盐溶液中，通过过滤定时测定木屑含水量，通过持续浸泡，不断测量木屑含水量，一直浸泡至木屑的含水量不再增加为止，即得到木屑含水量达最大值的木屑。

所述木屑为自身含水量达最大值的木屑是指木屑自身含有水，经过滤，测量木屑的含水量后，即使经过持续浸泡后，木屑含水量也不再增加，则该木屑为自身含水量达最大值的木屑。

所述过滤为常规用滤布进行的过滤操作。

优选地，所述木屑的含水量最大值为30％-80％。

优选地，所述木屑为栎木、杨木或腐木木屑中的一种。

更优选地，所述木屑为栎木木屑，所述栎木木屑中，干栎木木屑与水或盐溶液浸泡比例为100g：400-450ml，浸泡时间为24-28h。经测定所述浸泡后栎木木屑的含水量最大值为40％-45％。

更优选地，所述木屑为杨木木屑，所述杨木木屑中，干杨木木屑与水或盐溶液浸泡比例为100g：800-900ml，浸泡时间为5-7h。经测定所述杨木木屑的含水量最大值为55％-65％。

更优选地，所述木屑为腐木木屑，所述腐木木屑无需浸泡水或盐溶液，自身含水量已达到最大值。所述腐木木屑的含水量最大值为65％-70％。

优选地，所述盐溶液组成为：磷酸二氢钾0.05％，硫酸镁0.05％，余量为水，pH 7.0的溶液。

本发明的另一目的是提供利用上述木屑保藏培养基保藏真姬菇菌种的方法，具体步骤如下：

(1)将干木屑过筛，选取粒径2-3目的木屑，浸泡于水或盐溶液中，直至过滤后木屑含水量达最大值，过滤，备用；或将自身含水量已达最大值的木屑经同样方法过筛后，选取粒径2-3目的木屑，过滤，备用；

(2)将所述木屑保藏培养基的各成分按比例装入培养瓶中，将培养瓶包上透气膜，121℃，灭菌2.5h；

(3)向所述培养瓶中接入真姬菇菌块，25℃恒温培养箱培养20天。

(4)待所述培养瓶内的木屑保藏培养基表面长满菌丝后，将所述培养瓶置于4-10℃条件保藏。

优选地，所述步骤(1)中，利用筛子进行过筛，所述筛子的孔径为2目和3目。

优选地，所述步骤(2)中，所述培养瓶在装入木屑保藏培养基之前经121℃，灭菌1h。

优选地，所述步骤(2)中，所述木屑保藏培养基在装入培养瓶时，需先装下层，边装边摇，后装上层，轻轻摇动，减少空隙，使装好的培养基分为上下两层，并保证培养瓶外表面及瓶口无培养基残留。

优选地，所述步骤(3)中，所述真姬菇菌块为从供试菌种平板中筛选的生长健壮、长势良好的菌种。

优选地，所述步骤(3)中，所述真姬菇菌块直径为6-12mm，接入菌块数目为2-3块。

与现有技术相比，本发明的有益效果为:

本发明的木屑保藏培养基中具有的大量的有益真姬菇生长的木质素、微量元素等能满足真姬菇菌种的基本生长需要，又保持了菌种原有的活性，菌种纯度高，培养基内菌丝生长速度快，生长代谢活跃。

本发明提供的真姬菇菌种的木屑保藏培养基及应用方法，保藏效果优于现有的斜面保藏法，保藏后菌丝活力与一代母种相同，为真姬菇菌种的简便保藏和规模化栽培提供了有力保障，具有较高的应用价值、经济意义及社会意义。

1、本发明中采取双层培养基的结构，上层为木屑、麸皮、石膏混合物，下层为木屑，培养基的这种结构可有效保证菌块在接种后在25℃下继续生长20天，以保证保藏过程的菌丝需求量，而在此期间菌丝主要在上层培养基中生长，本发明的上层培养基可有效提供菌丝正常生长的需要的营养元素。另一方面，本发明双层培养基同时可有效满足此后培养瓶在进入低温条件下菌种保藏阶段的要求，有效保证菌丝处于新陈代谢最低水平，保持菌丝生长繁殖处于不活跃状态，符合菌体对于营养的较少的需求，本发明特将培养基下层设置为纯木屑。而经过对比实验发现，在使用双侧培养基时，对于保存的菌种的生长活性以及酶活性方面相较于单层的混合培养基均具有显著的提高，而仅适用单层的混合培养基则无法达到本发明的技术效果。

2、充分浸泡木屑：本发明中先将木屑单独浸泡于水或盐溶液中，通过调整浸泡时间，实现木屑完全泡透，获得过滤后含水量达到最大值的浸泡后木屑，这样做不仅有效防止木屑出现夹心现象，避免在后续的灭菌过程中出现灭菌不彻底的情况，进而可避免染菌问题。

3、单独浸泡木屑：区别于现有技术中培养基各成分混合浸泡水或盐溶液中，本发明仅将木屑单独浸泡于水或盐溶液中，一方面为培养基的后续分层装瓶提供方便。此外用盐溶液单独浸泡木屑，除了达到前面提到的目的外，还可以使木屑在浸泡过程中充分吸收和吸附一定浓度的营养成分，给保藏过程中的真姬菇菌丝提供营养补助，有效保存菌种的生长活性。此外仅浸泡木屑还可降低成本。

本发明通过选择木屑粒径为2-3目，该粒径范围的木屑更能有效地促进菌丝体的生长。

4、本发明采用石膏作为钙元素的主要来源，供给菌种的生长和保藏，而针对于真姬菇菌种的保藏，相比较于石灰粉等其他含钙成分，本发明对于菌种保藏后期的生长活性以及酶活性均有协同的促进作用。

具体实施方式：

下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。

实施例1：纯水浸泡的栎木木屑保藏培养基在真姬菇菌种保藏中的应用

(1)使用2目和3目的筛子对所用栎木木屑进行过筛处理，去掉颗粒较小的木屑和碎皮，获得粒径为2-3目的干栎木木屑。

(2)为保证灭菌彻底，不造成杂菌污染，所用木屑内部需完全湿润。经实验条件优化发现，实验中每100g干栎木木屑浸泡于400ml纯水中，室温下浸泡24h，可实现充分浸泡。经测定含水量最大值为42％，得到栎木木屑。

(3)将锥形瓶洗净、烘干后，121℃下灭菌1h。在灭菌的锥形瓶中装入木屑培养基，木屑培养基分为上下两层，上层为11.7g栎木木屑+3g麸皮+0.3g石膏，下层为45g栎木木屑。将木屑培养基装瓶时需边装边摇，尽量减少空隙，并保证培养瓶外表面及瓶口无培养基残留。将培养瓶包好透气膜，121℃高压蒸汽灭菌2.5h。灭菌完成后，放入接种工作台进行接种。

(4)待保藏培养基温度降至30℃以下时，从供试菌种平板中取生长健壮、长势良好的直径为9mm的2块菌块接种于培养基表面，25℃恒温培养箱培养20天。

(5)待培养瓶内培养料长满菌丝后，将其放在4℃冰箱中保藏，平行实验5瓶。保藏一定时间后进行指标检测。

实施例2：盐水浸泡的栎木木屑保藏培养基在真姬菇菌种保藏中的应用

(1)使用2目和3目的筛子对所用栎木木屑进行过筛处理，去掉颗粒较小的木屑和碎皮，获得粒径为2-3目的干栎木木屑。

(2)配制栎木木屑浸泡盐溶液，浸泡液组成为：磷酸二氢钾0.05％，硫酸镁0.05％，pH7.0。

(3)为保证灭菌彻底，不造成杂菌污染，所用木屑内部需完全湿润。经实验条件优化发现，实验中每100g干栎木木屑浸泡于400ml浸泡盐溶液中，室温下浸泡24h，可实现充分浸泡。经测定含水量最大值为42％，得到栎木木屑。

(4)将锥形瓶洗净、烘干后，121℃下灭菌1h。在灭菌的锥形瓶中装入木屑培养基，木屑培养基分为上下两层，上层为11.7g栎木木屑+3g麸皮+0.3g石膏，下层为45g栎木木屑。将木屑培养基装瓶时需边装边摇，尽量减少空隙，并保证培养瓶外表面及瓶口无培养基残留。将培养瓶包好透气膜，121℃高压蒸汽灭菌2.5h。灭菌完成后，放入接种工作台进行接种。

(5)待保藏培养基温度降至30℃以下时，从供试菌种平板中取生长健壮、长势良好的直径为9mm的2块菌块接种于培养基表面，25℃恒温培养箱培养20天。

(6)待培养瓶内培养料长满菌丝后，将其放在4℃冰箱中保藏，平行实验5瓶。保藏一定时间后进行指标检测。

实施例3:纯水浸泡的杨木木屑保藏培养基在真姬菇菌种保藏中的应用

(1)使用2目和3目的筛子对所用杨木木屑进行过筛处理，去掉颗粒较小的木屑和碎皮，获得粒径为2-3目的干杨木木屑。

(2)为保证灭菌彻底，不造成杂菌污染，所用木屑内部需完全湿润。经实验条件优化发现，实验中每100g干杨木木屑浸泡于800ml纯水中，室温下浸泡5h，可实现充分浸泡。经测定含水量最大值为60％，得到杨木木屑。

(3)将锥形瓶洗净、烘干后，121℃下灭菌1h。在灭菌的锥形瓶中装入木屑培养基，木屑培养基分为上下两层，上层为10.41g杨木木屑+2.66g麸皮+0.266g石膏，下层为40g杨木木屑。将木屑培养基装瓶时需边装边摇，尽量减少空隙，并保证培养瓶外表面及瓶口无培养基残留。将培养瓶包好透气膜，121℃高压蒸汽灭菌2.5h。灭菌完成后，放入接种工作台进行接种。

(4)待保藏培养基温度降至30℃以下时，从供试菌种平板中取生长健壮、长势良好的直径为9mm的2块菌块接种于培养基表面，25℃恒温培养箱培养20天。

(5)待培养瓶内培养料长满菌丝后，将其放在4℃冰箱中保藏，平行实验5瓶。保藏一定时间后进行指标检测。

实施例4：盐水浸泡的杨木木屑保藏培养基在真姬菇菌种保藏中的应用

(1)使用2目和3目的筛子对所用杨木木屑进行过筛处理，去掉颗粒较小的木屑和碎皮，获得粒径为2-3目的干杨木木屑。

(2)配制杨木木屑浸泡盐溶液，浸泡液组成为：磷酸二氢钾0.05％，硫酸镁0.05％，pH7.0。

(3)为保证灭菌彻底，不造成杂菌污染，所用木屑内部需完全湿润。经实验条件优化发现，实验中每100g干杨木木屑浸泡于800ml浸泡盐溶液中，室温下浸泡5h，可实现充分浸泡。经测定含水量最大值为60％，得到杨木木屑。

(4)将锥形瓶洗净、烘干后，121℃下灭菌1h。在灭菌的锥形瓶中装入木屑培养基，木屑培养基分为上下两层，上层为10.41g杨木木屑+2.66g麸皮+0.266g石膏，下层为40g杨木木屑。将木屑培养基装瓶时需边装边摇，尽量减少空隙，并保证培养瓶外表面及瓶口无培养基残留。将培养瓶包好透气膜，121℃高压蒸汽灭菌2.5h。灭菌完成后，放入接种工作台进行接种。

(5)待保藏培养基温度降至30℃以下时，从供试菌种平板中取生长健壮、长势良好的直径为9mm的2块菌块接种于培养基表面，25℃恒温培养箱培养20天。

(6)待培养瓶内培养料长满菌丝后，将其放在4℃冰箱中保藏，平行实验5瓶。保藏一定时间后进行指标检测。

实施例5：腐木木屑保藏培养基在真姬菇菌种保藏中的应用

(1)使用2目和3目的筛子对所用腐木木屑进行过筛处理，去掉颗粒较小的木屑和碎皮，获得粒径为2-3目的腐木木屑。

(2)为保证灭菌彻底，不造成杂菌污染，所用木屑内部需完全湿润。经实验测定发现，腐木木屑本身足够湿润，无需浸泡，腐木木屑自身含水量已达到最大值，经测定含水量最大值为67％。

(3)将锥形瓶洗净、烘干后，121℃下灭菌1h。在灭菌的锥形瓶中装入木屑培养基，木屑培养基分为上下两层，上层为11.7g腐木木屑+3g麸皮+0.3g石膏，下层为45g腐木木屑。将木屑培养基装瓶时需边装边摇，尽量减少空隙，并保证培养瓶外表面及瓶口无培养基残留。将培养瓶包好透气膜，121℃高压蒸汽灭菌2.5h。灭菌完成后，放入接种工作台进行接种。

(4)待保藏培养基温度降至30℃以下时，从供试菌种平板中取生长健壮、长势良好的直径为9mm的2块菌块接种于培养基表面，25℃恒温培养箱培养20天。

(5)待培养瓶内培养料长满菌丝后，将其放在4℃冰箱中保藏，平行实验5瓶。保藏一定时间后进行指标检测。

对比例1斜面保藏法

称取25g马铃薯淀粉与葡萄糖混合物(PD粉)和20g琼脂置于烧杯中，加适量水，加热溶解后，加水定容至1L。分装，121℃灭菌20min。灭菌后摆斜面。

将真姬菇斜面母种转接至PDA平板中，置于培养箱中25℃培养，待菌丝长满平板。

用直径9mm打孔器在长有菌丝的平板上打孔，得到9mm菌块，挑取一块菌块接种于试管斜面上，于25℃的培养箱中培养。培养15天后，观察菌落的生长形态以及其它的特征，判断该培养物是否与原菌种一致，并检查是否染杂菌。检查确认无误后，将长好的斜面试管置于4℃冰箱内进行保藏，平行保藏5支试管斜面。保藏一定时间后进行指标检测。

实施例6菌种保藏性能的测定

对于不同实施例制备获得的真姬菇菌种保藏样品，分别测定其经3、6、9个月保存后的菌种保藏性能测试，即菌丝生长速率、菌丝脱氢酶活力、LBL培养基脱色率测试。

其中：

对照组：斜面保藏法，其保藏过程见对比例1；

实验组1、2、3、4、5分别对应本发明实施例1、2、3、4、5；

测定方法如下：

菌种保藏效果检测1：菌丝生长速率V

取一支经过3个月，6个月及9个月保藏的有菌种的冻存管在25℃下复苏培养3天，然后取一块的菌种块接种到PDA平皿上，菌丝萌发后48h测量菌落直径，通过以下公式计算：

菌丝生长速率V(cm/d)＝(菌落直径2-菌落直径1)/时间(d)

菌种保藏效果检测2：菌丝脱氢酶活力

从平皿中取菌丝体0.1g装入15mL离心管中，加入2mL蒸馏水，再加入0.2mL，5mg/mL的MTT溶液，避光35℃水浴，静置3小时。去上清，加入2mL DMSO，避光35℃水浴，静置4小时。取上层液体100μl在490nm波长处测量吸光值OD，DMSO作空白。

菌种保藏效果检测3：LBL培养基脱色率

按照表1的配比制作LBL培养基。配体方法与PDA培养基相同。

表1 LBL培养基配方

从平皿中接取2个直径9mm的菌丝块转入一个5ml冻存管中，匀浆30s后接入含35mlLBL培养基的50ml离心管中，于25℃条件下进行静置培养。液体培养16d后取培养液500μl，5000r/min，4℃下离心15min，移取100μl上清液加入酶标板，使用酶标仪测定615nm处吸光度值，导入脱色率公式计算脱色率：

DR＝[1-(A_{615nm of strain}/A_{615nm of blank})]×100％

(DR以百分数表示，A_{615nm of strain}为接种菌株培养后的吸光值，A_{615nm of blank}为空白培养液的吸光值)。

保藏效果如表2所示，本发明的木屑作为菌种保藏培养基时，其菌丝生长速率V、脱氢酶活性以及脱色率DR上均高于对照组。

此外，对照组中真姬菇经过第9个月的保存后，其在测定生长速率时发现该菌种有大量气生菌丝的生长，有公知技术可知，气生菌丝的生长性能、酶活性以及营养物质均有所降低，且气生菌丝不容易再生，是较易退化的菌。因此可以看到表2中，对照组在保藏9个月后，菌丝的生长速率虽然为0.35cm/d，因无法分别测量为正常生长菌丝与气生菌丝的生长速率，因此该数值实际为正常生长菌丝与气生菌丝的混合菌丝的生长速率总计，其中气生菌丝约占总体菌丝的30％，因此对照组中正常菌丝的生长速率。

而实验组利用本发明培养基进行保藏的真姬菇，在经过第3、6、9个月的保存后其在测定生长速率时，不仅菌丝生长健壮、长势良好，且均未发现有气生菌丝的生长。

在保藏时间为9个月时，通过对比对照组与实验组的脱氢酶活性以及脱色率DR的数值也再次验证了实验组的菌丝生长活性显著高于对照组，对照组的脱氢酶活性以及脱色率DR分别为0.2780，20.8％，而本发明实验组较其显著提高0.038-0.3203以及3.6％-6.8％。

需要说明的是气生菌丝长在正常菌丝上方，并不像正常菌丝一样沿着培养基生长，且气生菌丝与正常原菌丝在颜色形态上均有不同。

本发明实施例中，保藏初期杨木木屑保藏培养基表现出较高的脱氢酶活性，随着保藏时间的增长，栎木木屑保藏培养基的保藏效果呈现出逐渐优于杨木木屑保藏培养基的趋势。由此说明杨木木屑保藏培养基更适于菌种的中期保藏，其在保藏3月、6月的脱氢酶活性最高分别高达1.2008、0.7031，较对照组分别高出0.3517、0.0208；其脱色率在保藏3月、6月时最高达34.1％、34.3％，均显著高出对照组。

此外，栎木木屑保藏培养基适于中长期保藏。栎木木屑保藏培养基的硬度条件在对于菌丝的活性保存更具延长性，对于菌丝后期保存过程具有更好的生长活性，如保存9个月时，其脱氢酶活性最高达0.5983，较对照组显著高出0.3203，其脱色率高达27.6％，较对照组显著高出6.8％。

表2木屑保藏培养基对真姬菇菌种的保藏效果

从表2中可以看出，本发明在经过浸泡盐水的木屑作为菌种保藏培养基时，其菌丝生长速率V、脱氢酶活性以及脱色率DR上均显著高于对照组，特别是在保藏至6个月时，这一特征尤为突出，这表明盐水浸泡的木屑保藏培养基更适于6个月左右的中短期保藏，同样适于9月长期保藏。同样经过普通水浸泡的木屑以及未经浸泡的腐木作为菌种保藏培养基时，其菌丝生长速率V、脱氢酶活性以及脱色率DR上也显著高于对照组，在保藏至9月时，菌种依然具有显著的生长活性，适于菌种中短期保存，且更适于菌种的长期的保存。

Claims (9)

1.一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，其特征在于：所述木屑保藏培养基包括上下两层，所述上层培养基由木屑、麸皮、石膏按照质量比10-12：2-3：0.2-0.3组成，所述下层培养基由木屑组成，所述上层培养基与下层培养基质量比为12-15：40-45，所述木屑为自身含水量达最大值的木屑，或将干木屑通过用水或盐溶液充分浸泡至木屑含水量达最大值的木屑。

2.如权利要求1所述一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，其特征在于：所述木屑为栎木、杨木或者腐木木屑中的一种。

3.如权利要求2所述一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，其特征在于：所述木屑为栎木木屑，所述栎木木屑中，干栎木木屑与水或盐溶液浸泡比例为100g：400-450ml，浸泡时间为24-28h。

4.如权利要求2所述一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，其特征在于：所述木屑为杨木木屑，所述杨木木屑中，干杨木木屑与水或盐溶液浸泡比例为100g：800-900ml，浸泡时间为5-7h。

5.如权利要求2所述一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，其特征在于：所述木屑为腐木木屑，所述腐木木屑含水量最大值为65％-70％。

6.如权利要求1所述一种用于真姬菇菌种的木屑保藏培养基，其特征在于：所述盐溶液组成为：磷酸二氢钾0.05％，硫酸镁0.05％，余量为水，pH 7.0。

7.如权利要求1-6任一所述木屑保藏培养基保藏真姬菇菌种的方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)将干木屑过筛，选取粒径2-3目的木屑，浸泡于水或盐溶液中，直至过滤后木屑含水量达最大值，过滤，备用；或将自身含水量已达最大值的木屑经同样方法过筛后，选取粒径2-3目的木屑，过滤，备用；

(2)将所述木屑保藏培养基的各成分按比例装入培养瓶中，将培养瓶包上透气膜，121℃，灭菌2.5h；

(3)向所述培养瓶中接入真姬菇菌块，25℃恒温培养箱培养20天；

(4)待所述培养瓶内的木屑保藏培养基表面长满菌丝后，将所述培养瓶置于4-10℃条件保藏。

8.如权利要求7所述木屑保藏培养基保藏真姬菇菌种的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述培养瓶在装入木屑保藏培养基之前经121℃，灭菌1h。

9.如权利要求7所述木屑保藏培养基保藏真姬菇菌种的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述真姬菇菌块直径为6-12mm，接入菌块数目为2-3块。