CN112042472A - 一种减缓真姬菇平板培养老化的培养基 - Google Patents

一种减缓真姬菇平板培养老化的培养基 Download PDF

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万佳宁
鲍大鹏
李燕
杨瑞恒
杜莎莎
马丽娟
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Abstract

本发明涉及一种减缓真姬菇平板培养老化的培养基。该培养基的组成及含量为：PDA粉末3.9g，木质素磺酸钠0.08‑0.15g，加水至100ml。该培养基可减缓平板培养时真姬菇菌丝老化，降低节孢子的产生，具有较好的科研应用前景。

Description

一种减缓真姬菇平板培养老化的培养基
技术领域
本发明属于真姬菇培养基领域，特别涉及一种减缓真姬菇平板培养老化的培养基。
背景技术
真姬菇(Hypsizigusmarmorens)又名玉蕈、斑玉蕈等，是一种珍稀食用菌，质地脆嫩，味道鲜美，其子实体提取物具有清除体内自由基、降血压、提高免疫力和延缓衰老等功效。2017年全国真姬菇(包含海鲜菇、蟹味菇和白玉菇)生产总量超过390，000吨，在工厂化栽培品类中仅次于金针菇和杏鲍菇，是我国工厂化栽培食用菌中的重要品类。但是在其平板培养的过程中随着时间推移，菌丝的老化，产孢菌丝产生隔膜，断裂，产生大量的节孢子，会对其显微观察或原生质体制备产生干扰。对于工厂化生产而言保持母种的菌丝活力和菌种稳定性非常重要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种减缓真姬菇平板培养老化的培养基，以克服现有技术中真姬菇平板培过程中菌丝老化的缺陷。
本发明提供一种减缓真姬菇平板培养老化的培养基，所述培养基的组成及含量为：PDA粉末3.9g，木质素磺酸钠0.08-0.15g，加水至100mL。
本发明还提供一种减缓真姬菇平板培养老化的方法，包括：
(1)将PDA粉末3.9g、木质素磺酸钠0.08-0.15g加水至100mL，灭菌，得到平板培养基；
(2)接种真姬菇菌块于步骤(1)中平板培养基上，黑暗培养。
所述步骤(1)中灭菌温度为121℃，灭菌时间为15-20分钟。
所述步骤(2)中平板培养基的接种为用6mm打孔器取菌丝块接种于平板培养基上。
所述步骤(2)中黑暗培养的温度为20-25℃。
有益效果
本发明可操作性强、可重复性高、稳定可靠，可减缓平板培养时真姬菇菌丝老化，降低节孢子的产生，具有较好的科研应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例1中PDAL培养基培养14d的真姬菇菌丝在不同视野下的镜检照片；
图2为对比例1中PDA培养基培养14d的真姬菇菌丝在不同视野下的镜检照片；
图3为对比例2中PDA培养基培养14d的真姬菇菌丝在不同视野下的镜检照片。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
PDA粉末(Patato Dextrose Agar马铃薯葡萄糖琼脂培养基)来源于美国BD公司(213400，500g)，木质素磺酸钠来源于源叶生物(S30635-500g)，Calcoflour White(4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐)来源于Fluka公司(Fluka 18909-100ML-F)。
实施例1
本实施例提供一种减缓真姬菇平板培养老化的培养基，该培养基的组成及含量为：PDA粉末3.9g，木质素磺酸钠0.1g，加水至100mL。
本实施例还提供一种减缓真姬菇平板培养老化的方法，具体为：
(1)制备平板培养基(PDAL培养基)：PDA粉末3.9g，木质素磺酸钠0.1g，加水至100mL，121℃灭菌15分钟备用；
(2)用6mm打孔器取真姬菇菌块于PDLA平板上，22℃，黑暗培养。
将盖玻片插入上述培养有真姬菇菌落的培养基中进行爬片培养，得到附着有真姬菇菌丝的盖玻片。
14d后Calcoflour White(4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐)染色细胞壁，置于荧光显微镜下观察。
图1表明：采用本发明提供的真姬菇菌丝平板培养菌丝的方法能很好的减少节孢子的产生。
对比例1
采用现有常规PDA培养基对真姬菇菌丝进行平板培养，14d后进行显微观察的结果具体如下：
本对比例提供一种真姬菇平板培养的培养基，该培养基的组成及含量为：PDA粉末3.9g，加水至100mL。
本对比例还提供一种真姬菇平板培养的方法为：
(1)制备PDA平板培养基(PDA培养基)：PDA粉末3.9g，加水至100mL，121℃灭菌15分钟备用；
(2)用6mm打孔器取真姬菇菌块于PDA平板上，22℃，黑暗培养。
将盖玻片插入培养有真姬菇菌落的培养基中进行爬片培养，得到附着有真姬菇菌丝的盖玻片。
14d后Calcoflour White(4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐)染色细胞壁，置于荧光显微镜下观察。
图2表明：采用PDA平板培养的真姬菇菌丝中含有大量长粒状的节孢子。
对比例2
采用文献报道对真姬菇母种培养效果最好的玉米粉PDA培养基(郝涤非.不同培养基配方对真姬菇母种培养效果的影响[J].北方园艺,2011,000(011):168-170.)对真姬菇菌丝进行平板培养，14d后进行显微观察的结果具体如下：
本对比例提供一种真姬菇平板培养的培养基，该培养基的组成及含量为：土豆10g、葡萄糖2g、磷酸二氢钾0.06g、磷酸氢二钾0.01g、硫酸镁0.06g、蛋白胨0.2g、玉米粉3g、琼脂粉1g，加水至100mL。
本对比例还提供一种真姬菇平板培养的方法为：
(1)制备PDA平板培养基(PDA培养基)：土豆10g、葡萄糖2g、磷酸二氢钾0.06g、磷酸氢二钾0.01g、硫酸镁0.06g、蛋白胨0.2g、玉米粉3g、琼脂粉1g，加水至100mL，121℃灭菌15分钟备用；
(2)用6mm打孔器取真姬菇菌块于PDA平板上，22℃，黑暗培养。
将盖玻片插入培养有真姬菇菌落的培养基中进行爬片培养，得到附着有真姬菇菌丝的盖玻片。
14d后Calcoflour White(4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐)染色细胞壁，置于荧光显微镜下观察。
图3表明：采用玉米粉PDA平板培养的真姬菇菌丝中含有大量长粒状的节孢子。
综上，通过上述实施例和对比例，可以看出，本发明提供的减缓真姬菇平板培养老化的方法，可操作性强、可重复性高、稳定可靠，采用该方法可减缓平板培养时真姬菇菌丝老化，降低节孢子的产生，具有较好的科研应用前景。
以上所述仅为本发明的优选实施方式而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种减缓真姬菇平板培养老化的培养基，其特征在于，所述培养基的组成及含量为：PDA粉末3.9g，木质素磺酸钠0.08-0.15g，加水至100mL。
2.一种减缓真姬菇平板培养老化的方法，包括：
(1)将PDA粉末3.9g、木质素磺酸钠0.08-0.15g加水至100mL，灭菌，得到平板培养基；
(2)接种真姬菇菌块于步骤(1)中平板培养基上，黑暗培养。
3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中灭菌温度为121℃，灭菌时间为15-20分钟。
4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述步骤(2)中黑暗培养的温度为20-25℃。
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