CN109730976B - 一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法 - Google Patents

一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109730976B
CN109730976B CN201811581767.2A CN201811581767A CN109730976B CN 109730976 B CN109730976 B CN 109730976B CN 201811581767 A CN201811581767 A CN 201811581767A CN 109730976 B CN109730976 B CN 109730976B
Authority
CN
China
Prior art keywords
albumin
free radical
preparing
nanoparticles
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811581767.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109730976A (zh
Inventor
万江陵
罗寒
盛剑勇
杨祥良
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Huazhong University of Science and Technology
Original Assignee
Huazhong University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Huazhong University of Science and Technology filed Critical Huazhong University of Science and Technology
Priority to CN201811581767.2A priority Critical patent/CN109730976B/zh
Publication of CN109730976A publication Critical patent/CN109730976A/zh
Priority to US17/292,455 priority patent/US11318105B2/en
Priority to PCT/CN2019/125591 priority patent/WO2020135123A1/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109730976B publication Critical patent/CN109730976B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5192Processes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5169Proteins, e.g. albumin, gelatin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/335Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明属于药物制剂领域,具体公开了一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法,包括以下步骤:(1)制备白蛋白浓度为1~20mg/mL的白蛋白水溶液;(2)在搅拌条件下向白蛋白水溶液中加入自由基产生剂,15~50℃下继续搅拌反应1~60min,利用自由基产生剂产生的自由基氧化白蛋白,氧化后的白蛋白分子发生组装,形成主要通过疏水作用而结合的白蛋白纳米粒,从而得到白蛋白纳米粒溶液。本发明通过对纳米粒制备方法关键的反应机理,相应整理工艺流程设计等进行改进,与现有技术相比能够有效解决纳米粒制备复杂、成本高、毒性大等问题,本发明工艺简单、生产成本低廉,适合工业化大规模生产。

Description

一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法
技术领域
本发明属于药物制剂领域,更具体地,涉及一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法,利用该自由基氧化法可制备得到可溶性注射蛋白纳米粒。本发明尤其可以以羟基自由基和硫酸根自由基为引发剂,使白蛋白分子表面亲疏水性发生变化,蛋白分子间主要通过疏水作用组装形成纳米粒,这种纳米粒可以包载难溶性小分子药物。
背景技术
白蛋白是血浆中含量最多的蛋白质,是多种营养物质的输送载体,如亚铁离子、激素、脂肪酸和甾体类等。白蛋白来源丰富,生物相容性好,生物可降解,免疫原性低;溶解性好,易于包载疏水性药物;功能基团多,容易修饰。以上这些优点使得白蛋白成为制药领域中的理想载体。而且在2005年,美国生命科学(American Bioscience)公司开发的结合型紫杉醇白蛋白注射液
Figure BDA0001918065480000011
年由美国FDA批准上市,用于转移性乳腺癌的治疗。这种白蛋白注射液粒径130nm左右,不仅可以通过EPR效应在肿瘤组织蓄积,还能通过受体介导的内吞作用特定靶向到高表达SPARC的肿瘤部位。临床研究显示,该紫杉醇蛋白纳米粒比其聚氧乙烯蓖麻油制剂
Figure BDA0001918065480000012
有更高的治疗指数和安全性,并且避免了使用皮质类固醇的术前给药,显示了血清白蛋白作为静脉应用载体的广阔前景。
白蛋白纳米颗粒的传统制备方法,主要涉及到化学交联和热变性。比如2015年,李芳等(CN104490847A)通过加入香草醛类似物在加热条件将白蛋白分子内游离巯基形成分子内二硫键,蛋白上的氨基和香草醛的醛基形成席夫碱等化学键,得到水溶液中稳定的纳米颗粒;2013年,陈道桢等(CN103768024B)采用反溶剂和戊二醛交联方法制备了人参皂苷Rh2的白蛋白复合纳米粒。热变性方法不适用于对热不稳定的药物,且在制备过程中或多或少的添加了有机溶剂,如氯仿,二氯甲烷等,上述有机溶剂的添加使药物毒性大大增加;化学交联为非特异性,存在于蛋白质结构内的任何亲核基团(如胺和羟基)都有反应活性,且使用的交联剂戊二醛等有毒。American Bioscience公司开发了nab技术(Nanoparticlealbumin-bound technology),以白蛋白为基质和稳定剂,在不加入任何乳化剂和交联剂的情况下得到白蛋白纳米粒(US6753006B1)。但nabTM技术存在制备方法周期长及工艺繁琐等缺点,生产成本高昂,且引入有机溶剂氯仿,不易除尽。CN102048695A报道了一种白蛋白自组装的方式,利用巯基乙醇作为还原剂打开白蛋白分子的二硫键,使其利用疏水作用相互结合形成纳米颗粒,但该方法需要采用透析除去多余的还原剂,不仅耗时长,而且无法实现工业化生产。目前,亟需需求一种工艺简单的载药白蛋白纳米粒,同时药物活性以及毒性能在人体的需求上达到平衡。
发明内容
针对现有技术的以上缺陷或改进需求,本发明的目的在于提供一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法,其中通过对纳米粒制备方法关键的反应机理,相应整理工艺流程设计等进行改进,与现有技术相比能够有效解决纳米粒制备复杂、成本高、毒性大等问题,本发明工艺简单、生产成本低廉,适合工业化大规模生产,可得到可注射用的白蛋白纳米粒制剂,尤其是载药白蛋白纳米粒制剂。
为实现上述目的,按照本发明的一个方面,提供了一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制备白蛋白浓度为1~20mg/mL的白蛋白水溶液;
(2)在搅拌条件下向所述步骤(1)得到的所述白蛋白水溶液中加入自由基产生剂,15~50℃下反应1~60min,利用所述自由基产生剂产生的自由基氧化白蛋白,氧化后的白蛋白分子发生组装,形成主要通过疏水作用而结合的白蛋白纳米粒,这些反应过程均在搅拌下进行。
作为本发明的进一步优选,所述步骤(2)中,所述自由基为羟基自由基或硫酸根自由基;其中,所述羟基自由基是芬顿试剂或类芬顿试剂基于芬顿反应或类芬顿反应产生的,所述硫酸根自由基是过硫酸盐活化催化分解产生的;优选的,所述羟基自由基是由亚铁离子催化过氧化氢产生,所述硫酸根自由基是由亚铁离子活化催化过硫酸盐分解产生。
作为本发明的进一步优选,所述步骤(2)中,所述芬顿试剂为8.8mM硫酸亚铁(FeSO4)溶液、88mM过氧化氢溶液以及0.1M pH=4的柠檬酸钠缓冲液,这三种溶液的体积比满足10:1:1,并且所述过氧化氢溶液中的过氧化氢与所述白蛋白水溶液中的白蛋白两者之间的摩尔比为2~5。
作为本发明的进一步优选,所述步骤(2)中,所述过硫酸盐为过硫酸钠,所述硫酸根自由基是利用亚铁离子催化过硫酸钠分解产生的;其中,所述亚铁离子与所述过硫酸钠两者的摩尔比为1:1,并且所述过硫酸钠与所述白蛋白水溶液中的白蛋白两者之间的摩尔比为33~66。
作为本发明的进一步优选,所述步骤(1)中,制备所述白蛋白水溶液所采用的溶质白蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、重组人血清白蛋白、卵白蛋白、羊血清白蛋白、鼠血清白蛋白、驴血清白蛋白、马血清白蛋白、兔血清白蛋白以及猪血清白蛋白中的至少一种,优选为人血清白蛋白、牛血清白蛋白以及重组人血清白蛋白中的至少一种。
按照本发明的又一方面,本发明提供了一种用于递送疏水性抗肿瘤药物的白蛋白纳米颗粒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制备白蛋白浓度为1-20mg/mL的白蛋白水溶液;
(2)在搅拌条件下向所述步骤(1)得到的所述白蛋白水溶液中加入自由基产生剂,15~50℃下反应1~10min后加入疏水性抗肿瘤药物的乙醇溶液,继续反应1~10min,利用所述自由基产生剂产生的自由基氧化白蛋白,氧化后的白蛋白分子发生组装,形成主要通过疏水作用而结合的白蛋白纳米粒并在这些白蛋白纳米粒中包载疏水性抗肿瘤药物,从而得到包载疏水性抗肿瘤药物的白蛋白纳米粒溶液,这些反应过程均在搅拌下进行;其中,所述疏水性抗肿瘤药物因其疏水性促进了白蛋白纳米粒的形成,增强了生成的白蛋白纳米粒的均一性和稳定性。
作为本发明的进一步优选,所述步骤(2)中,所述疏水性抗肿瘤药物为紫杉醇、多西紫杉醇、卡巴他赛、10-羟基喜树碱中的一种或者两种以上的混合物;优选药物为紫杉醇。
通过本发明所构思的以上技术方案,与现有技术相比,由于以自由基为引发剂,使蛋白分子亲疏水性发生变化,蛋白分子间通过疏水作用组装形成纳米粒,这种纳米粒可以包载难溶性小分子药物。本发明的白蛋白纳米粒的制备方法尤其可应用于制备抗肿瘤药物的载体。具体说来,本发明具有以下技术效果:
1.与传统白蛋白纳米粒的制备方法相比,不引入任何有毒试剂,具有更高的生物安全性;
2.与nabTM技术相比,工艺流程简单,包封率高,制备中损耗少,易于工业化,成分单一,不引入有毒试剂。
3.本发明可以利用纳米粒子对肿瘤的高通透性与滞留效应以及白蛋白分子本身的靶向作用,能使更多药物富集在肿瘤组织,提高抗肿瘤效果,减少毒副作用。本发明保留了白蛋白作为载体的优势,利用白蛋白载体的EPR效应以及主动靶向肿瘤的能力,提高了药物在肿瘤部位的蓄积,与传统泰素制剂相比,具有更高的治疗指数和安全性。
现有技术中,
Figure BDA0001918065480000041
采用结合型白蛋白纳米技术(nabTM)制备,高剪切制备初乳,高压均质后得到精乳,然后旋转蒸发除去有机溶剂氯仿。整个制备过程繁琐,而且需要使用有毒溶剂氯仿。这里,我们报道了一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法。白蛋白中对自由基氧化敏感的氨基酸残基多数位于白蛋白疏水口袋中,这些氨基酸残基被氧化后,极性增加,导致疏水域外露,蛋白构象发生变化。自由基氧化导致白蛋白的疏水口袋外露,蛋白表面疏水性增加,当蛋白表面疏水性增加到一定程度时蛋白分子之间通过疏水作用和静电作用聚集在一起,形成均一的纳米粒。由于自由基反应快速剧烈且方式多样,我们在自由基引发剂的产生方式和剂量做了优选,优选出了简便易控制,绿色环保,成本低廉的反应条件。芬顿反应是羟基自由基产生的经典方式之一,具体是过氧化氢在亚铁离子的催化作用下产生高反应活性的羟基自由基·OH,·OH与大多数有机污染物都可以发生快速的链式反应,无选择性地把有害物质氧化成CO2、H2O或矿物盐,无二次污染,现主要用于有机废水的处理。本发明利用由芬顿试剂产生的羟基自由基引发白蛋白自组装,即自由基氧化的白蛋白分子通过疏水作用聚集形成纳米粒,得到了空白及载药白蛋白纳米粒。硫酸根自由基与OH·的氧化还原电位相近,在常温下即可由过渡金属催化活化过硫酸盐产生,且高效无毒、价格较低廉;而本发明也利用过硫酸盐活化产生的硫酸根自由基引发白蛋白自组装,得到了均一的白蛋白纳米粒。
附图说明
图1为空白白蛋白纳米粒与载药白蛋白纳米粒的粒径分布图,图中a)为实施例1中空白白蛋白纳米粒DLS粒径分布,b)为实施例7中载紫杉醇白蛋白纳米粒的DLS粒径分布,可以看出载药白蛋白纳米粒较空白白蛋白纳米粒分布更窄,原因可能是疏水性的紫杉醇为白蛋白的组装提供了一个疏水核,为载紫杉醇白蛋白纳米粒的形成提供助力。
图2为空白白蛋白纳米粒与载药白蛋白纳米粒的电镜图,图中a)为实施例1中空白白蛋白纳米粒的TEM电镜图,b)为实施例7中载紫杉醇白蛋白纳米粒的TEM电镜图,与图1的DLS图对应,载药白蛋白纳米粒形状更加圆整,分布更加均一。
图3为白蛋白包载的DiR纳米粒以及DiR溶液(溶剂为聚氧乙烯蓖麻油和无水乙醇,体积比1:1),静脉注射后,Dir在荷瘤小鼠肿瘤部位的蓄积量随时间的变化,结果表明白蛋白组DiR在肿瘤部位的蓄积量明显高于DiR溶液,说明白蛋白包载有利于提高药物在肿瘤组织的靶向性,从而提高抗肿瘤效果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。此外,下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1
以芬顿反应产生的羟基自由基为引发剂制备牛血清白蛋白纳米粒:
将牛血清白蛋白(98%,68KD,Roche)200mg,溶于10mL去离子水中,37℃水浴下,加入1000μL的芬顿试剂(8.8mM硫酸亚铁(FeSO4)溶液、88mM过氧化氢溶液以及0.1M pH=4的柠檬酸钠缓冲液,三种溶液的体积比为10:1:1),反应2~10min后,即得到白蛋白纳米粒溶液,上述反应过程均在搅拌下进行。白蛋白纳米粒的平均粒径为130~180nm,Zeta电位-15mV左右(Malvern,Zetasizer Nano ZSP)。
实施例2
以芬顿反应产生的羟基自由基为引发剂制备牛血清白蛋白纳米粒:
将牛血清白蛋白(98%,68KD,Roche)100mg,溶于10mL去离子水中,15℃水浴下,加入500μL的芬顿试剂(8.8mM硫酸亚铁(FeSO4)溶液、88mM过氧化氢溶液以及0.1M pH=4的柠檬酸钠缓冲液,三种溶液的体积比为10:1:1),反应10~60min后,即得到白蛋白纳米粒溶液,上述反应过程均在搅拌下进行。白蛋白纳米粒的平均粒径为180~275nm,Zeta电位-15mV左右(Malvern,Zetasizer Nano ZSP)。
实施例3
以芬顿反应产生的羟基自由基为引发剂制备牛血清白蛋白纳米粒:
将牛血清白蛋白(98%,68KD,Roche)10mg,溶于10mL去离子水中,50℃水浴下,加入50μL的芬顿试剂(8.8mM硫酸亚铁(FeSO4)溶液、88mM过氧化氢溶液以及0.1M pH=4的柠檬酸钠缓冲液,三种溶液的体积比为10:1:1),反应1~10min后,即得到白蛋白纳米粒溶液,上述反应过程均在搅拌下进行。白蛋白纳米粒的平均粒径为130~200nm,Zeta电位-15mV左右(Malvern,Zetasizer Nano ZSP)。
实施例4
以亚铁离子催化过硫酸钠分解产生的硫酸根自由基为引发剂制备牛血清白蛋白纳米粒:
将牛血清白蛋白(98%,68KD,Roche)10mg,溶于10mL去离子水中,25℃水浴下,加入10μL的硫酸根自由基为引发剂(1M FeSO4,1M过硫酸铵PS,这两种溶液体积比为1:1),反应约10min后,即得到白蛋白纳米粒溶液,上述反应过程均在搅拌下进行。白蛋白纳米粒的平均粒径为80~95nm(Malvern,Zetasizer Nano ZSP)。
实施例5
以亚铁离子催化过硫酸钠分解产生的硫酸根自由基为引发剂制备牛血清白蛋白纳米粒:
将牛血清白蛋白(98%,68KD,Roche)10mg,溶于10mL去离子水中,25℃水浴下,加入20μL的硫酸根自由基为引发剂(1M FeSO4,1M过硫酸铵PS,这两种溶液体积比为1:1),反应约10min后,即得到白蛋白纳米粒溶液,上述反应过程均在搅拌下进行。白蛋白纳米粒的平均粒径约为160nm(Malvern,Zetasizer Nano ZSP)。
实施例6
以芬顿反应产生的羟基自由基为引发剂制备载紫杉醇牛血清白蛋白纳米粒:
将牛血清白蛋白(98%,68KD,Roche)10mg,溶于10mL去离子水中,25℃水浴下,加入50μL的芬顿试剂(8.8mM硫酸亚铁(FeSO4)溶液、88mM过氧化氢溶液以及0.1M pH=4的柠檬酸钠缓冲液,三种溶液的体积比为10:1:1),反应2min后,加入40mg/mL的紫杉醇乙醇溶液75μL,继续反应10min,即得到载紫杉醇白蛋白纳米粒溶液,上述反应过程均在搅拌下进行。白蛋白纳米粒的平均粒径为150nm(Malvern,Zetasizer Nano ZSP),HPLC分析表明本实验的紫杉醇载药量达到18.8%。
实施例7
以芬顿反应产生的羟基自由基为引发剂制备载多西紫杉醇牛血清白蛋白纳米粒:
将牛血清白蛋白(98%,68KD,Roche)100mg,溶于10mL去离子水中,25℃水浴下,加入500μL的芬顿试剂(8.8mM硫酸亚铁(FeSO4)溶液、88mM过氧化氢溶液以及0.1M pH=4的柠檬酸钠缓冲液,三种溶液的体积比为10:1:1),反应2min后,加入40mg/mL的紫杉醇乙醇溶液250μL,继续反应10min,即得到载紫杉醇白蛋白纳米粒溶液,上述反应过程均在搅拌下进行。白蛋白纳米粒的平均粒径为160nm(Malvern,Zetasizer Nano ZSP),HPLC分析表明本实验的多西紫杉醇包封率达到97%。
实施例8
以芬顿反应产生的羟基自由基为引发剂制备载荧光染料DiR的牛血清白蛋白纳米粒
将牛血清白蛋白(98%,68KD,Roche)100mg,溶于10mL去离子水中,25℃水浴下,加入500μL的芬顿试剂(8.8mM硫酸亚铁(FeSO4)溶液、88mM过氧化氢溶液以及0.1M pH=4的柠檬酸钠缓冲液,三种溶液的体积比为10:1:1),反应2min后,加入DiR母液(5mg/mL,DMSO和无水乙醇为溶剂,体积比1:4)25μL,继续反应10min,即得到载DiR的白蛋白纳米粒,上述反应过程均在搅拌下进行。载DiR白蛋白纳米粒的平均粒径为140nm(Malvern,Zetasizer NanoZSP)。
实施例9
载荧光染料DiR的白蛋白纳米粒静脉注射到4T1荷瘤小鼠后对肿瘤的靶向性评价
按实施例8制备载DiR的白蛋白纳米粒,同时用泰素溶剂(聚氧乙烯蓖麻油和无水乙醇,体积比1:1)稀释DiR母液至相同浓度,将两种DiR制剂静脉注射到接种4T1荷瘤Balb/c小鼠后,评价对肿瘤的靶向作用。
取生长良好,对数生长期的4T1小鼠乳腺癌细胞,用0.25%胰蛋白酶消化细胞使其成为单细胞,经PBS洗涤两次后,通过细胞记数法,用生理盐水调整细胞浓度为1×107cell/ml,每只健康Balb/c雌性小鼠右侧腰背处皮下接种0.1ml(含1×106个活细胞),在饲养过程中,各组小鼠均同等自由饮食,动物房内保持对湿度20~30%。当皮下瘤体积至时200mm3时(约2周左右),将荷瘤小鼠随机分成2组,分别尾静脉注射2种DiR制剂100μL。分别在给药后0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12小时对小鼠进行活体成像(IVIS Lumina XR,Caliper,U.S.),可以看到白蛋白组在肿瘤部位的蓄积量明显更多。
除了上述实施例中所采用的具体种类的白蛋白外,本发明还可以根据需求采用其他种类的白蛋白,如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、重组人血清白蛋白、卵白蛋白、羊血清白蛋白、鼠血清白蛋白、驴血清白蛋白、马血清白蛋白、兔血清白蛋白以及猪血清白蛋白等均适用,尤其可以采用人血清白蛋白、牛血清白蛋白、重组人血清白蛋白或它们的组合。
本领域的技术人员容易理解,以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制备白蛋白浓度为1~20mg/mL的白蛋白水溶液;
(2)在搅拌条件下向所述步骤(1)得到的所述白蛋白水溶液中加入自由基产生剂,15~50℃下反应1~60min,利用所述自由基产生剂产生的自由基氧化白蛋白,氧化后的白蛋白分子发生组装,形成主要通过疏水作用而结合的白蛋白纳米粒,这些反应过程均在搅拌下进行。
2.如权利要求1所述基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述自由基为羟基自由基或硫酸根自由基;其中,所述羟基自由基是芬顿试剂或类芬顿试剂基于芬顿反应或类芬顿反应产生的,所述硫酸根自由基是过硫酸盐活化催化分解产生的。
3.如权利要求1所述基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述自由基为羟基自由基或硫酸根自由基;其中,所述羟基自由基是由亚铁离子催化过氧化氢产生,所述硫酸根自由基是由亚铁离子活化催化过硫酸盐分解产生。
4.如权利要求2所述基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述芬顿试剂为8.8mM硫酸亚铁(FeSO4)溶液、88mM过氧化氢溶液以及0.1M pH=4的柠檬酸钠缓冲液,这三种溶液的体积比满足10:1:1,并且所述过氧化氢溶液中的过氧化氢与所述白蛋白水溶液中的白蛋白两者之间的摩尔比为2~5。
5.如权利要求2所述基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述过硫酸盐为过硫酸钠,所述硫酸根自由基是利用亚铁离子催化过硫酸钠分解产生的;其中,所述亚铁离子与所述过硫酸钠两者的摩尔比为1:1,并且所述过硫酸钠与所述白蛋白水溶液中的白蛋白两者之间的摩尔比为33~66。
6.如权利要求1所述基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,制备所述白蛋白水溶液所采用的溶质白蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、重组人血清白蛋白、卵白蛋白、羊血清白蛋白、鼠血清白蛋白、驴血清白蛋白、马血清白蛋白、兔血清白蛋白以及猪血清白蛋白中的至少一种。
7.如权利要求1所述基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,制备所述白蛋白水溶液所采用的溶质白蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白以及重组人血清白蛋白中的至少一种。
8.一种用于递送疏水性抗肿瘤药物的白蛋白纳米颗粒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制备白蛋白浓度为1-20mg/mL的白蛋白水溶液;
(2)在搅拌条件下向所述步骤(1)得到的所述白蛋白水溶液中加入自由基产生剂,15~50℃下反应1~10min后加入疏水性抗肿瘤药物的乙醇溶液,继续反应1~10min,利用所述自由基产生剂产生的自由基氧化白蛋白,氧化后的白蛋白分子发生组装,形成主要通过疏水作用而结合的白蛋白纳米粒并在这些白蛋白纳米粒中包载疏水性抗肿瘤药物,从而得到包载疏水性抗肿瘤药物的白蛋白纳米粒溶液,这些反应过程均在搅拌下进行;其中,所述疏水性抗肿瘤药物因其疏水性促进了白蛋白纳米粒的形成,增强了生成的白蛋白纳米粒的均一性和稳定性。
9.如权利要求8所述用于递送疏水性抗肿瘤药物的白蛋白纳米颗粒的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述疏水性抗肿瘤药物为紫杉醇、多西紫杉醇、卡巴他赛、10-羟基喜树碱中的一种或者两种以上的混合物。
10.如权利要求8所述用于递送疏水性抗肿瘤药物的白蛋白纳米颗粒的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述疏水性抗肿瘤药物为紫杉醇。
CN201811581767.2A 2018-12-24 2018-12-24 一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法 Active CN109730976B (zh)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811581767.2A CN109730976B (zh) 2018-12-24 2018-12-24 一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法
US17/292,455 US11318105B2 (en) 2018-12-24 2019-12-16 Method for preparing albumin nanoparticles based on free radical oxidation
PCT/CN2019/125591 WO2020135123A1 (zh) 2018-12-24 2019-12-16 一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811581767.2A CN109730976B (zh) 2018-12-24 2018-12-24 一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109730976A CN109730976A (zh) 2019-05-10
CN109730976B true CN109730976B (zh) 2020-06-09

Family

ID=66359654

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811581767.2A Active CN109730976B (zh) 2018-12-24 2018-12-24 一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法

Country Status (3)

Country Link
US (1) US11318105B2 (zh)
CN (1) CN109730976B (zh)
WO (1) WO2020135123A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109730976B (zh) * 2018-12-24 2020-06-09 华中科技大学 一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法
WO2024139226A1 (zh) * 2022-12-27 2024-07-04 北京华昊中天生物医药股份有限公司 含白蛋白结合型优替德隆纳米粒的药物组合物及其制备方法

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6753006B1 (en) * 1993-02-22 2004-06-22 American Bioscience, Inc. Paclitaxel-containing formulations
WO2007011406A2 (en) * 2004-10-29 2007-01-25 The University Of Akron Radical polymerization method and products prepared thereby
CN101864178A (zh) * 2010-06-17 2010-10-20 复旦大学 一种可注射的化学交联蛋白质/多肽水凝胶及其制备方法
CN102048695A (zh) * 2009-08-11 2011-05-11 南京大学 一种制备用于体内递送药理活性物质的蛋白纳米粒的方法
CN102688525A (zh) * 2012-05-07 2012-09-26 东南大学 一种生物大分子水凝胶及其制备方法
CN103768024A (zh) * 2013-11-18 2014-05-07 无锡市妇幼保健院 人参皂苷Rh2白蛋白复合纳米粒及其制备方法
CN104004231A (zh) * 2014-06-12 2014-08-27 东南大学 一种生物大分子互穿网络水凝胶及其制备方法
CN104490847A (zh) * 2015-01-07 2015-04-08 中国药科大学 一种热变性制备稳定白蛋白纳米颗粒的方法
CN105120909A (zh) * 2013-02-13 2015-12-02 新加坡科技研究局 用于释放活性剂的聚合系统
CN105960411A (zh) * 2013-11-30 2016-09-21 新加坡科技研究局 自组装肽、肽模拟物和肽缀合物作为构件用于生物制造和打印
CN106659230A (zh) * 2014-08-05 2017-05-10 高级生物营养公司 疏水性生物活性化合物的包封
CN106990250A (zh) * 2017-05-23 2017-07-28 华中科技大学 一种还原自组装蛋白质包裹磁性微球的制备方法及应用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1736489A (zh) 2004-08-19 2006-02-22 张阳德 白蛋白纳米粒的制备方法
US8420605B2 (en) * 2005-09-07 2013-04-16 The University Of Strathclyde Hydrogel compositions
CA2723563C (en) * 2008-05-09 2017-12-12 South Dakota State University Method of forming non-immunogenic hydrophobic protein nanoparticles, and uses therefor
CN102030898B (zh) 2009-09-25 2012-05-02 天津大学 Abc型两亲性生物降解聚酯三嵌段共聚物及制备方法和应用
US10420830B2 (en) 2015-01-29 2019-09-24 Agency For Science, Technology And Research Nanocapsules carrying chikungunya-associated peptides
CN104906589A (zh) 2015-06-05 2015-09-16 天津大学 一种pH响应性蛋白质-高分子结合体及其制备和组装方法
CN108524452A (zh) 2018-05-08 2018-09-14 辽宁大学 一种紫杉醇白蛋白纳米粒的制备方法和应用
CN109730976B (zh) * 2018-12-24 2020-06-09 华中科技大学 一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6753006B1 (en) * 1993-02-22 2004-06-22 American Bioscience, Inc. Paclitaxel-containing formulations
WO2007011406A2 (en) * 2004-10-29 2007-01-25 The University Of Akron Radical polymerization method and products prepared thereby
CN102048695A (zh) * 2009-08-11 2011-05-11 南京大学 一种制备用于体内递送药理活性物质的蛋白纳米粒的方法
CN101864178A (zh) * 2010-06-17 2010-10-20 复旦大学 一种可注射的化学交联蛋白质/多肽水凝胶及其制备方法
CN102688525A (zh) * 2012-05-07 2012-09-26 东南大学 一种生物大分子水凝胶及其制备方法
CN105120909A (zh) * 2013-02-13 2015-12-02 新加坡科技研究局 用于释放活性剂的聚合系统
CN103768024A (zh) * 2013-11-18 2014-05-07 无锡市妇幼保健院 人参皂苷Rh2白蛋白复合纳米粒及其制备方法
CN105960411A (zh) * 2013-11-30 2016-09-21 新加坡科技研究局 自组装肽、肽模拟物和肽缀合物作为构件用于生物制造和打印
CN104004231A (zh) * 2014-06-12 2014-08-27 东南大学 一种生物大分子互穿网络水凝胶及其制备方法
CN106659230A (zh) * 2014-08-05 2017-05-10 高级生物营养公司 疏水性生物活性化合物的包封
CN104490847A (zh) * 2015-01-07 2015-04-08 中国药科大学 一种热变性制备稳定白蛋白纳米颗粒的方法
CN106990250A (zh) * 2017-05-23 2017-07-28 华中科技大学 一种还原自组装蛋白质包裹磁性微球的制备方法及应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Layer-by-layer assembly of hierarchical nanoarchitectures to enhance;Hima Bindu Ruttala等;《International Journal of Pharmaceutics》;20170106;第519卷(第1-2期);11-21 *
Novel Self-assembly Endows Human Serum Albumin Nanoparticles;Dawei Ding等;《AAPS PharmSciTech》;20121128;第15卷(第1期);213-222 *
Self-assembly of plasma protein through disulfide;Shudong Wang等;《Polymer Chemistry》;20140516;第5卷(第17期);4871-4874 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020135123A1 (zh) 2020-07-02
CN109730976A (zh) 2019-05-10
US20210322336A1 (en) 2021-10-21
US11318105B2 (en) 2022-05-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Mintz et al. The use of nanotechnology to combat liver cancer: Progress and perspectives
CN110403916B (zh) 一种纳米治疗剂及其制备方法与应用
CN102451160A (zh) 一种长循环纳米粒的制备方法
CN108096583B (zh) 共载有乳腺癌化疗药物MTDH siRNA的肿瘤靶向纳米粒子载体的制备方法
Tian et al. Multi-functional chitosan-based nanoparticles for drug delivery: Recent advanced insight into cancer therapy
CN109730976B (zh) 一种基于自由基氧化制备白蛋白纳米粒的方法
CN109395087A (zh) 一种共递送no供体和纳米药物的纳米共递送系统
CN108295046A (zh) 一种白蛋白纳米颗粒的制备方法及制得的白蛋白纳米颗粒与应用
CN107308457A (zh) 一种具有肿瘤微环境响应性降解的深层穿透纳米递药系统
Chen et al. Toxicity, pharmacokinetics, and in vivo efficacy of biotinylated chitosan surface-modified PLGA nanoparticles for tumor therapy
Kuang et al. Disulfide bond based cascade reduction-responsive Pt (IV) nanoassemblies for improved anti-tumor efficiency and biosafety
JP2003501379A (ja) ガン治療のための薬剤を充填したナノパーティクルの使用
CN114588271A (zh) 一种金属-药物全活性纳米药物及其制备方法与用途
CN114177305A (zh) 一种诱导肿瘤细胞多机制死亡的前药纳米粒及其制备方法、应用
Tahir et al. Lipid polymer hybrid nanoparticles: a novel approach for drug delivery
Raut et al. Sorafenib tosylate novel drug delivery systems: Implications of nanotechnology in both approved and unapproved indications
CN109846857B (zh) 一种活性天然超分子光敏剂的制备方法及其应用
CN105535991A (zh) 用于治疗肿瘤的两亲性碱基缀合物纳米颗粒及其制备方法
CN106606778A (zh) 含磷酸胆碱聚合物包覆的核壳式磁性复合粒子及其制备方法
CN111166728B (zh) 一种肿瘤靶向的复合纳米药物载体、药物及制备方法和应用
CN116473940B (zh) 一种caf靶向的载药脂质纳米粒及其制备方法
CN105832676B (zh) 一种三氧化二砷白蛋白纳米药物的制备方法
CN110664784A (zh) 一种复合纳米给药系统及其在妇科肿瘤治疗中的应用
WO2020053445A1 (en) Drug delivery sytem for platinum-based drugs
CN107261155B (zh) 靶向循环肿瘤细胞的长循环纳米粒及其制备和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant