用于治疗肿瘤的两亲性碱基缀合物纳米颗粒及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域,特别涉及一种用于治疗肿瘤的两亲性碱基缀合物纳米颗粒及其制备方法、应用。
背景技术
恶性肿瘤(癌症)一直是导致世界各国人民死亡率上升的主要疾病。因此,如何有效治疗恶性肿瘤已成为全世界亟待解决的难题之一。目前,恶性肿瘤的治疗方法主要有以下几种:手术切除法、化学疗法、放射治疗法、免疫及生物治疗法。其中,化学疗法是最有效的治疗手段之一。然而,大多数抗肿瘤药物都存在如下缺点,例如溶解性差、稳定性差、对正常组织毒副作用大、血液停留时间短等。为解决上述问题,大量文献报道了采用纳米尺寸的物质作为抗肿瘤药物的输送载体,将抗肿瘤药物输送到癌细胞内,以达到杀死癌细胞的目的,具体包括水溶性聚合物(Prog.Polym.Sci.2008,33,1-39;J.ControlledRelease2006,114,175-183)、超支化聚合物(Adv.Mater.2010,22,4567-4590;Chem.Soc.Rev.,2015,DOI:10.1039/C4CS00229F)、树枝状聚合物(J.Am.Chem.Soc.,2004,126,11936-11943.)、脂质体(Angew.Chem.Int.Ed.,2009,48,1807-1809.)、囊泡(Angew.Chem.Int.Ed.,2009,48,1807-1809)、聚合物纳米粒子(Adv.Funct.Mater.,2007,17,355-362.)和无机材料(J.Am.Chem.Soc.,2009,131,4783-4787.)等。然而,这些纳米尺寸的物质将药物送到癌细胞内后,其自身需要通过肾脏等器官排出体外,有可能引起肾脏等器官发生炎症或引起一些其它病症。此外,目前众多药物输送体系中都会涉及到药物的化学修饰,这既增加了生产药物的成本,又容易导致药物自身的性质发生改变,从而影响药效的发挥。
发明内容
本发明目的在于提供一种用于治疗肿瘤的两亲性碱基缀合物纳米颗粒,以解决现有技术中的抗肿瘤药物采用纳米尺寸的物质作为载体,这些纳米尺寸的载体将抗肿瘤药物输送到癌细胞内后,其自身需要通过肾脏等器官排出体外,有可能引起肾脏等器官发生炎症或引起一些其它病症的技术性问题。
本发明的另一目的在于提供上述的用于治疗肿瘤的两亲性碱基缀合物纳米颗粒的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述的用于治疗肿瘤的两亲性碱基缀合物纳米颗粒的用途。
本发明目的通过以下的技术方案实现:
一种用于治疗肿瘤的两亲性碱基缀合物纳米颗粒,包括由疏水性抗肿瘤碱基类似药物与亲水性抗肿瘤碱基类似药物通过非共价键连接形成的两亲性碱基缀合物。
优选地,所述疏水性抗肿瘤碱基类似药物与所述亲水性抗肿瘤碱基类似药物通过碱基之间的分子识别形成所述两亲性碱基缀合物。
优选地,所述纳米颗粒的粒径小于300nm。
上述的用于治疗肿瘤的两亲性碱基缀合物纳米颗粒的制备方法,包括以下步骤:
步骤a:将疏水性抗肿瘤碱基类似药物与亲水性抗肿瘤碱基类似药物溶解在有机溶剂中,搅拌进行反应,得到两亲性碱基缀合物;
步骤b:在室温下将步骤a中的含有两亲性碱基缀合物的有机溶剂滴入水中,之后除去有机溶剂,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。
优选地,在所述步骤a中,搅拌进行反应的温度是25-60℃,搅拌的时间为12-24h。
优选地,所述疏水性抗肿瘤碱基类似药物选自8-氮鸟嘌呤(8-Azaguanine)、去氧氟尿苷(Doxifluridine)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)、替加氟(Tegafur)、卡莫氟(Carmofur)、双呋氟尿嘧啶(Ftorafur)、依达曲沙(Edatrexate)、氨蝶呤(Aminopterin)、甲氨蝶呤(Methotrexate)、硫鸟嘌呤(Thioguanine)、巯嘌呤(Mercaptopurine)、硫唑嘌呤(Azathioprine)、卡培他滨(Capecitabine)、盐酸诺拉曲塞(Nolatrexeddihydrochloride)、雷替曲塞(Raltitrexed)、恩尿嘧啶(Eniluracil)、六甲密胺(Altretamine)、替尼泊苷(Teniposide)、TS-1的其中一种。
优选地,所述亲水性抗肿瘤碱基类似药物选自氟尿苷(Floxuridine)、阿糖胞苷(Cytarabine)、亚叶酸钙(Leucovorinecalcium)、左亚叶酸钙(Levoleucovorincalcium)、吉西他滨(Gemcitabine)、氮杂胞苷(5-azacytidine)、扎西他滨(Zalcitabine)、安西他滨(Ancitabine)、氯法拉滨(Clofarabine)、2'-氟脱氧鸟苷(2'-Deoxy-2'-fluoroguanosine)、磷酸氟达拉滨(Fludarabinephosphate)、氟达拉滨(Fludarabine)、克拉屈滨(Cladribine)、培美曲塞二钠(Pemetrexeddisodium)、曲沙他滨(Troxacitabine)、羟基脲(Hydroxycarbamide)、磷酸依托泊苷(Etoposidephosphate)、依托泊苷(Etoposide)的其中一种。
优选地,所述步骤a中的有机溶剂选自N,N′-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃、乙腈的其中一种。
上述的用于治疗肿瘤的两亲性碱基缀合物纳米颗粒在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
与现有技术相比,本发明有以下有益效果:
1、本发明的两亲性碱基缀合物纳米颗粒自身即可完成抗肿瘤药物的输送,不需采用纳米尺寸的物质作为载体,避免了引入载体带来的毒副作用。
2、本发明的两亲性碱基缀合物由亲水性抗肿瘤碱基类似药物和疏水性抗肿瘤碱基类似药物简单混合而形成,亲水性抗肿瘤碱基类似药物和疏水性抗肿瘤碱基类似药物之间是通过碱基之间的分子识别连接在一起,能有效避免化学合成对药物化学结构的改变,在水中可进一步组装形成纳米粒子,这种制备方法不仅避免了化学合成对药物性质产生的影响,而且大大简化了纳米药物的制备流程,降低了成本。
3、本发明的两亲性碱基缀合物纳米颗粒,无需任何药物输送载体,该纳米颗粒自身就能实现药物输送,通过肿瘤组织的通透性增强与滞留效应,该纳米颗粒可以更有效地进入肿瘤细胞,减少对正常细胞的毒副作用;在纳米颗粒进入肿瘤细胞后,由于氢键对微酸性环境的敏感性,使得纳米药物在酸性条件下能快速解离,释放两种抗肿瘤药物以达到协同治疗癌症的目的。
4、本发明的两亲性碱基缀合物纳米颗粒还是一种被动靶向纳米载体,能够进一步负载和输送其它高效抗癌药物对肿瘤进行多种药物的联合治疗。
附图说明
图1为实施例1合成的两亲性碱基缀合物的化学结构式;
图2为实施例1合成的两亲性碱基缀合物的1HNMR谱图;
图3为实施例1制备的两亲性碱基缀合物纳米颗粒的透射电镜照片;
图4为实施例2合成的两亲性碱基缀合物的化学结构式;
图5为实施例2制备的两亲性碱基缀合物纳米颗粒的透射电镜照片;
图6为实施例3合成的两亲性碱基缀合物的化学结构式;
图7为实施例4合成的两亲性碱基缀合物的化学结构式;
图8为实施例5合成的两亲性碱基缀合物的化学结构式;
图9为实施例6合成的两亲性碱基缀合物的化学结构式;
图10为实施例1中制备的两亲性碱基缀合物纳米颗粒对肿瘤细胞生长抑制作用的示意图。
具体实施方式
以下结合实施例及附图对本发明作详细说明。具体实施例均以本发明的技术方案为前提进行实施,包括详细的实施方式和具体的操作过程,但本发明的保护范围不限于下述实施例。
实施例1
将雷替曲塞(15毫克)和氯法拉滨(10毫克)加入样品瓶中,再加入5毫升二甲基亚砜,室温搅拌12小时,即得到两亲性碱基缀合物。图1为该两亲性碱基缀合物(雷替曲塞/氯法拉滨)的化学结构式,雷替曲塞与氯法拉滨通过碱基之间的分子识别形成该两亲性碱基缀合物。图2为该两亲性碱基缀合物(雷替曲塞/氯法拉滨)的一维核磁1HNMR谱图,测试溶剂为d6-DMSO。图2中各质子峰的归属如下:δ(ppmfromTMS),8.14(1H,NCHCC),7.84(1H,CONHCH),7.59-7.61(2H,CCONHCNC,CCHCHCCCH),7.36-7.40(3H,CCHCHCCCH,SCCHCHC),6.23(2H,NH2),5.91(1H,SCCHCHC),5.20(1H,OCHCHCHCH),5.11(1H,OCHCHCHCH),4.51(2H,CCH2N),4.33-4.36(2H,OCHCHCHCH),4.12,(1H,COHNCH),4.0(1H,CHCHOHCH),3.74-3.81(3H,CHCH2OH),2.98(3H,NCH3),2.13(3H,CCH3),1.84-1.98(4H,CHCH2CH2COOH)。
将该两亲性碱基缀合物溶解在二甲基亚砜中,在室温下将其滴入水中,之后除去二甲基亚砜,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于雷替曲塞与氯法拉滨的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的透射电镜照片如图3所示,纳米颗粒粒径的平均尺寸在30纳米左右。
实施例2
将去氧氟尿苷(10毫克)和氯法拉滨(12毫克)加入样品瓶中,再加入5毫升二甲基亚砜,在40℃下搅拌24小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。
本实施例合成的两亲性碱基缀合物的化学结构式如图4所示。去氧氟尿苷与氯法拉滨通过碱基之间的分子识别形成该两亲性碱基缀合物。
将上述的两亲性碱基缀合物(去氧氟尿苷/氯法拉滨)溶解在二甲基亚砜中,在室温下将其滴入水中,之后除去二甲基亚砜,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于去氧氟尿苷与氯法拉滨的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的透射电镜照片如图5所示,纳米颗粒粒径的平均尺寸在70纳米左右。
实施例3
将双呋氟尿嘧啶(8毫克)和氯法拉滨(12毫克)加入样品瓶中,再加入4毫升二甲基亚砜,在60℃下搅拌18小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。
本实施例合成的两亲性碱基缀合物的化学结构式如图6所示。双呋氟尿嘧啶与氯法拉滨通过碱基之间的分子识别形成该两亲性碱基缀合物。
将制得的两亲性碱基缀合物(双呋氟尿嘧啶/氯法拉滨)溶解在二甲基亚砜中,在室温下将其滴入水中,之后除去二甲基亚砜,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于双呋氟尿嘧啶/氯法拉滨的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的粒径的平均尺寸在110纳米左右。
实施例4
将阿糖胞苷(12毫克)和8-氮鸟嘌呤(8毫克)加入样品瓶中,再加入4毫升N,N′-二甲基甲酰胺,在45℃下搅拌18小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。
本实施例合成的两亲性碱基缀合物的化学结构式如图7所示。阿糖胞苷与8-氮鸟嘌呤通过碱基之间的分子识别形成该两亲性碱基缀合物。
将制得的两亲性碱基缀合物(阿糖胞苷/8-氮鸟嘌呤)溶解在N,N′-二甲基甲酰胺中,在室温下将其滴入水中,之后除去N,N′-二甲基甲酰胺,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于阿糖胞苷/8-氮鸟嘌呤的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的粒径的平均尺寸在60纳米左右。
实施例5
将吉西他滨(13毫克)和8-氮鸟嘌呤(8毫克)加入样品瓶中,再加入4毫升二甲基亚砜,在50℃下搅拌12小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。
本实施例合成的两亲性碱基缀合物的化学结构式如图8所示。吉西他滨与8-氮鸟嘌呤通过碱基之间的分子识别形成两亲性碱基缀合物。
将制得的(吉西他滨/8-氮鸟嘌呤)溶解在二甲基亚砜中,在室温下将其滴入水中,之后除去二甲基亚砜,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于吉西他滨/8-氮鸟嘌呤的两亲性碱基缀合物的抗肿瘤纳米颗粒的粒径的平均尺寸在40纳米左右。
实施例6
将阿糖胞苷(12.2毫克)和硫鸟嘌呤(8.4毫克)加入样品瓶中,再加入5毫升N,N′-二甲基甲酰胺,在35℃下搅拌24小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。
本实施例合成的两亲性碱基缀合物的化学结构式如图9所示。阿糖胞苷与硫鸟嘌呤通过碱基之间的分子识别形成该两亲性碱基缀合物。
将制得的两亲性碱基缀合物(阿糖胞苷/硫鸟嘌呤)溶解在N,N′-二甲基甲酰胺中,在室温下将其滴入水中,之后除去N,N′-二甲基甲酰胺,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于阿糖胞苷/硫鸟嘌呤的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的粒径的平均尺寸在200纳米左右。
实施例7
将依达曲沙(14.0毫克)和氟尿苷(7.4毫克)加入样品瓶中,再加入5毫升二甲基亚砜,在35℃下搅拌20小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。依达曲沙与氟尿苷通过碱基之间的分子识别形成两亲性碱基缀合物。
将制得的两亲性碱基缀合物(依达曲沙/氟尿苷)溶解在二甲基亚砜中,在室温下滴入水中,之后除去二甲基亚砜,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于依达曲沙/氟尿苷的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的粒径的平均尺寸在250纳米左右。
实施例8
将恩尿嘧啶(5.4毫克)和磷酸氟达拉滨(14.6毫克)加入样品瓶中,再加入4毫升二甲基亚砜,在35℃下搅拌24小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。恩尿嘧啶与磷酸氟达拉滨通过碱基之间的分子识别形成该两亲性碱基缀合物。
将制得的两亲性碱基缀合物(恩尿嘧啶/磷酸氟达拉滨)溶解在二甲基亚砜中,在室温下滴入水中,除去二甲基亚砜,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于恩尿嘧啶/磷酸氟达拉滨的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的粒径的平均尺寸在200纳米左右。
实施例9
将氟尿嘧啶(6.5毫克)和克拉屈滨(14.3毫克)加入样品瓶中,再加入3毫升二甲基亚砜,在35℃下搅拌18小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。氟尿嘧啶与克拉屈滨通过碱基之间的分子识别形成两亲性碱基缀合物。
将制得的两亲性碱基缀合物(氟尿嘧啶/克拉屈滨)溶解在二甲基亚砜中,在室温下滴入水中,之后除去二甲基亚砜,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于氟尿嘧啶/克拉屈滨的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的粒径的平均尺寸在100纳米左右。
实施例10
将卡莫氟(7.7毫克)和培美曲塞二钠(14.1毫克)加入样品瓶中,再加入4毫升二甲基亚砜,在35℃下搅拌20小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。卡莫氟与培美曲塞二钠通过碱基之间的分子识别形成该两亲性碱基缀合物。
将制得的两亲性碱基缀合物(卡莫氟/培美曲塞二钠)溶解在二甲基亚砜中,在室温下滴入水中,之后除去二甲基亚砜,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于卡莫氟/培美曲塞二钠的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的粒径的平均尺寸在100纳米左右。
实施例11
将卡培他滨(14.4毫克)和2'-氟脱氧鸟苷(11.4毫克)加入样品瓶中,再加入5毫升二甲基亚砜,在35℃下搅拌24小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。卡培他滨与2'-氟脱氧鸟苷通过碱基之间的分子识别形成该两亲性碱基缀合物。
将制得的两亲性碱基缀合物(卡培他滨/2'-氟脱氧鸟苷)溶解在二甲基亚砜中,在室温下滴入水中,之后除去二甲基亚砜,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于卡培他滨/2'-氟脱氧鸟苷的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的粒径的平均尺寸在100纳米左右。
实施例12
将替加氟(8.0毫克)和氟达拉滨(11.4毫克)加入样品瓶中,再加入3毫升二甲基亚砜,在35℃下搅拌20小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。替加氟与氟达拉滨通过碱基之间的分子识别形成该两亲性碱基缀合物。
将制得的两亲性碱基缀合物(替加氟/氟达拉滨)溶解在二甲基亚砜中,在室温下滴入水中,之后除去二甲基亚砜,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于替加氟/氟达拉滨的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的粒径的平均尺寸在200纳米左右。
实施例13
将曲沙他滨(8.5毫克)和硫鸟嘌呤(11.7毫克)加入样品瓶中,再加入4毫升乙腈,在35℃下搅拌24小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。曲沙他滨与硫鸟嘌呤通过碱基之间的分子识别形成该两亲性碱基缀合物。
将制得的两亲性碱基缀合物(曲沙他滨/硫鸟嘌呤)溶解在乙腈中,在室温下滴入水中,之后除去乙腈,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于曲沙他滨/硫鸟嘌呤的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的粒径的平均尺寸在100纳米左右。
实施例14
将扎西他滨(8.4毫克)和硫鸟嘌呤(11.7毫克)加入样品瓶中,再加入4毫升N,N′-二甲基甲酰胺,在35℃下搅拌24小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。扎西他滨与硫鸟嘌呤通过碱基之间的分子识别形成该两亲性碱基缀合物。
将制得的两亲性碱基缀合物(扎西他滨/硫鸟嘌呤)溶解在N,N′-二甲基甲酰胺中,在室温下滴入水中,之后除去N,N′-二甲基甲酰胺,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于扎西他滨/硫鸟嘌呤的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的粒径的平均尺寸在100纳米左右。
实施例15
将亚叶酸钙(10.2毫克)和去氧氟尿苷(4.9毫克)加入样品瓶中,再加入4毫升四氢呋喃,在35℃下搅拌24小时,冷却至室温即得到两亲性碱基缀合物。亚叶酸钙与去氧氟尿苷通过碱基之间的分子识别形成该两亲性碱基缀合物。
将制得的两亲性碱基缀合物(亚叶酸钙/去氧氟尿苷)溶解在四氢呋喃中,在室温下滴入水中,之后除去四氢呋喃,得到两亲性碱基缀合物的纳米颗粒水溶液。本实施例制备的基于亚叶酸钙/去氧氟尿苷的两亲性碱基缀合物的纳米颗粒的粒径的平均尺寸在100纳米左右。
本发明的用于治疗肿瘤的两亲性碱基缀合物纳米颗粒对癌细胞的影响实验
将实施例1中制备得到的两亲性碱基缀合物纳米颗粒分别用细胞培养液配制成浓度为0.1、0.5、1、2.5、5、10、25、50、100微摩尔/升的溶液,然后分别跟HeLa细胞(宫颈癌细胞)培养72小时后,采用MTT方法进行细胞活性测试,用同浓度的小分子药物雷替曲塞和氯法拉滨作为对照,结果如图10所示。当两亲性碱基缀合物纳米颗粒的浓度到达10微摩尔/升后,两亲性碱基缀合物纳米颗粒显示了很好的杀死癌细胞的能力,并且纳米颗粒对肿瘤细胞的抑制效果明显优于小分子抗癌药物,说明该两亲性碱基缀合物纳米颗粒在治疗恶性肿瘤中具有潜在的应用价值。
以上公开的仅为本申请的几个具体实施例,但本申请并非局限于此,任何本领域的技术人员能思之的变化,都应落在本申请的保护范围内。