CN109730188A - 源于牦牛皮的降压肽及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种源于牦牛皮的降压肽的制备方法，包括以下步骤：将脱毛后洁净的牦牛皮切割成块状或条状，然后在100～150℃下煮浆处理0.5～3h；按每10～25g组织加入1～2g酶的量，向得到的处理液中加入酶，在20～50℃下酶解1～5h，离心后取上清液，得到胶原蛋白肽浆，其中，所述酶中至少包括菠萝蛋白酶；使用孔径为1kDa～5kDa的过滤膜对所述胶原蛋白肽浆进行超滤分离，向得到的滤出液中接种植物乳杆菌进行发酵，接种量为1％～5％，发酵结束后灭菌，得到所述降压肽。本发明通过联合应用酶解与发酵法制备牦牛皮来源的降压肽，所制备的降压肽能够辅助降低血压。

Description

源于牦牛皮的降压肽及其制备方法

技术领域

本发明涉及食品保健和医药领域，尤其涉及一种源于牦牛皮的降压肽及其制备方法。

背景技术

近年来，随着环境污染的加剧和生活水平的提高，高血压已成为一种常见的代谢疾病，患病率日益增高，是世界公认的健康问题之一。目前服用哌唑嗪、特拉唑嗪等抗血压药物是控制这类疾病的主要手段，但是这些药物均有不同程度的副作用，因此，寻求一种有效且安全的方法来预防和治疗高血压具有极其重要的意义。

牦牛是青藏高原的特有牛种，是典型的高寒动物，具有耐寒、耐高海拔、抗缺氧、抗紫外线等优点。研究表明，牦牛皮胶原具有含量多，生物活性强等诸多优点。近年来，随着西部开发和一代一路的战略实施，藏区牦牛养殖和加工产业发展较快。利用牦牛皮生产胶原或活性胶原肽可实现牦牛皮高值化利用。

目前的胶原肽下游产品大部分是围绕美容的食品、日化产品进行开发，典型的，如一种鱼皮胶原肽面膜液的生产方法(申请号CN201310445990.5)，通过酶解鱼皮制备了一种无臭、安全性高、无刺激的胶原肽面膜液。又如一种含鳕鱼皮胶原肽的皮肤修复肥皂的制备方法(申请号CN201710568451.9)，采用动物油脂、植物油脂、NaOH、水、鳕鱼皮胶原肽和精油制备了一种对皮肤具有多重保护作用的肥皂，可以修复皮肤损伤，补充皮肤中的胶原蛋白。而以胶原蛋白肽为主成分开发保健功能产品的报道较少，现有的公开资料中有保护骨关节(申请号CN201710359491.2)、辅助组织再生(申请号CN201710976345.4)、抗氧化(申请号CN201511014857.X)、降血糖(申请号CN200710157641.8)等功能，而具有降血压保健功能的胶原肽则未见到报道。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种源于牦牛皮的降压肽及其制备方法，本发明通过联合应用酶解与发酵法制备牦牛皮来源的降压肽，所制备的降压肽能够辅助降低血压。

本发明的第一个目的是提供一种源于牦牛皮的降压肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)将脱毛后洁净的牦牛皮切割成块状或条状，然后在100～150℃下煮浆处理0.5～3h；

(2)按每10～25g组织加入1～2g酶的量，向步骤(1)得到的处理液中加入酶，在20～50℃(优选为30～40℃)下酶解1～5h，离心后取上清液，得到胶原蛋白肽浆，其中，所述酶中至少包括菠萝蛋白酶；

(3)使用孔径为1kDa～5kDa(优选为1kDa)的过滤膜对所述胶原蛋白肽浆进行超滤分离，向得到的滤出液中接种植物乳杆菌，接种量为1％～5％(w/v)(优选地，接种量为5％(w/v))，在25～45℃，pH值为5.0～7.0条件下发酵2～5h，发酵结束后灭菌，得到所述降压肽。

进一步地，在步骤(1)之前，还包括将牦牛皮洗净，去除皮下脂肪和皮毛的步骤。

进一步地，在步骤(1)中，所述牦牛皮为新鲜牦牛皮或干牦牛皮。

进一步地，在步骤(1)中，采用机械切割或人工切割方法将牦牛皮切割成块状或条状。

在步骤(1)中，牦牛皮来源于西藏特有牛种牦牛wild yak，为藏族地区的特色牦牛资源。

进一步地，在步骤(2)中，酶解在pH值为6～8条件下进行。

进一步地，在步骤(2)中，所述酶为菠萝蛋白酶或含菠萝蛋白酶的复合蛋白酶。酶优选为商品化的菠萝蛋白酶制品，包括含有菠萝蛋白酶的复合蛋白酶。

在步骤(2)中，组织指的是经步骤(1)煮浆后获得的牦牛皮胶。

进一步地，在步骤(3)中，在pH值为6.0～7.0条件下进行发酵。

进一步地，在步骤(3)中，灭菌温度为90～95℃。

进一步地，在步骤(3)中，灭菌后还包括浓缩和干燥的步骤。

进一步地，浓缩方法为离心浓缩、超滤浓缩或旋蒸浓缩，所述超滤浓缩所使用的超滤膜孔径为40kDa～100kDa。

进一步地，干燥方法为冷冻干燥法或喷雾干燥法。

本发明的第二个目的是要求保护一种采用上述制备方法所制备的降压肽。

本发明的降压肽对血管紧张素转化酶的抑制率最高为85％～90％。

借由上述方案，本发明至少具有以下优点：

本发明通过联合应用酶解与发酵法制备牦牛皮来源的降压肽，工艺简单，适合工业化大规模生产。本发明所制备的降压肽能够辅助降低血压，对血管紧张素转化酶的抑制率较高。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。

附图说明

图1是本发明实施例1所制备的牦牛降压肽分子量分布的GPC测试结果。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1牦牛来源降压胶原蛋白肽的制备

一种源于牦牛皮的降压肽的制备方法，处理步骤为：脱毛、煮浆、酶解、分离、发酵、精制，其具体步骤如下：

(1)脱毛：将牦牛皮去污并反复清洗干净，用刀剃去皮下脂肪，褪毛器退去长毛，或用喷火枪将毛烧尽，脱毛后反复清洗。

(2)煮浆：将洗净的牦牛皮机械切割或人工切割成块状，150℃下高温煮浆，冷却。

(3)酶解：按每25g组织加入2g菠萝蛋白酶的量，向步骤(2)得到的浆液中加入菠萝蛋白酶，在50℃下酶解2h，离心分离上清与皮质残渣，得到胶原蛋白肽浆。

(4)分离：将步骤(3)获得的胶原蛋白肽浆通过1kDa孔径的过滤膜进行超滤分离，收集滤出液。

(5)乳酸菌发酵：向步骤(4)得到的滤出液中接种5％(w/v)的植物乳杆菌进行发酵，发酵5h，发酵温度为35℃，发酵pH值为6.5，发酵结束后95℃灭菌。

(6)降压肽精制：将灭菌后的溶液进一步浓缩和喷雾干燥，得到无臭的白色粉末，即为牦牛降压肽。浓缩方法为离心浓缩、超滤浓缩或旋蒸浓缩，优选为超滤浓缩，超滤浓缩所使用的超滤膜孔径为40kDa～100kDa。对上述制得的牦牛降压肽分子量进行检测，结果见图1和表1。表1中，Mn表示数均分子量，Mw表示重均分子量，MP表示峰位分子量。

表1牦牛降压肽的分子量分布

	保留时间	Mn	Mw	MP	面积	％面积
							1	10.961	14020	14195	14660	445628	0.43
2	13.068	5541	5576	4998	232278	0.22
							3	14.068	3593	3658	2999	2244313	2.17
4	14.862	2375	2407	2000	4500133	4.34
							5	16.175	1321	1373	1023	16488484	15.91
6	17.335	663	689	566	30484926	29.41
							7	18.832	291	314	263	40744395	39.31
8	19.582	89	109	180	8518897	8.22

实施例2不同工艺产物降压效果的比较

采用不同工艺制备牦牛胶原肽，并采用体外血管紧张素转化酶抑制活性进行降压效果的评价，方法分别如下：

方法一：按照实施例1的方法制备牦牛胶原肽。

方法二：按照实施例1的方法制备牦牛胶原肽，不同之处在于：步骤(4)中的分离步骤所采用的过滤膜的孔径为3kDa。

方法三：按照实施例1的方法制备牦牛胶原肽，不同之处在于：在步骤(4)收集滤出液后，直接进行浓缩和喷雾干燥。

方法四：按照实施例1的方法制备牦牛胶原肽，不同之处在于：在步骤(3)中，按每25g组织加入2g中性蛋白酶的量，向步骤(2)得到的浆液中加入中性蛋白酶进行酶解。

方法五：按照实施例1的方法制备牦牛胶原肽，不同之处在于：在步骤(5)中，接种5％的动物乳杆菌进行发酵。

对以上五种方法所制备的牦牛胶原肽进行体外血管紧张素转化酶抑制活性测试，结果如表2所示。血管紧张素转化酶(ACE)是一种与血压上升有着密切关系的转化酶。在ACE作用下，血管紧张素I生成具有升高血压作用的血管紧张素II。从表2可见，通过本发明的方法(方法一)，所制备的活性肽对血管紧张素转化酶的抑制率高于其他工艺，具有良好的降压效果。

表2不同方法制备的牦牛胶原肽的降压效果

实施例3不同原料制备的胶原肽降压效果的比较

采用不同工艺制备胶原肽，并采用体外血管紧张素转化酶抑制活性进行评价，工艺如下：

方法一：按照实施例1的方法制备牦牛胶原肽。

方法二：按照实施例1的方法制备胶原肽，不同之处在于：步骤(1)中的原料牦牛皮替换为普通牛皮。

方法三：按照实施例1的方法制备胶原肽，不同之处在于：步骤(1)-(2)替换为如下步骤：

将鱼皮去污并反复清洗干净后脱脂，然后将洗净的鱼皮机械切割或人工切割成块状，150℃下高温煮浆，冷却。

对以上三种方法所制备的胶原肽进行体外血管紧张素转化酶抑制活性测试，结果如表3所示。从表3可见，通过本发明的方法(方法一)，选择牦牛皮所制备的胶原肽对血管紧张素转化酶的抑制率高于其他原料所制备的胶原肽，具有良好的降压效果。

表3不同原料制备的胶原肽降压效果

实施例4不同降压活性肽比较

采用不同工艺制备降压活性肽，并采用体外血管紧张素转化酶抑制活性进行评价，工艺如下：

方法一：按照实施例1的方法制备牦牛降压肽。

方法二：参照专利CN201010556397.4方法制备以大豆为原料生产的降压肽，具体步骤如下：将蒸煮好的大豆与水以料液比1∶4混合,温度40℃，超声处理20分钟，再在微波下处理1分钟，冷却到40℃，料液中加入0.7％(w/w)的脂肪酶和蛋白酶的混合酶制剂，pH4.0条件下酶解20分钟。酶解后的料液过滤后，向滤液中加入蛋白酶，50℃及pH5.0条件下酶解20分钟，料液用8kDa的超滤膜于40℃，0.1MPa条件下超滤30min。然后将超滤透过液通过H⁺阳离子交换树脂和OH^-阴离子交换树脂进行纯化，收集的流出液即为以大豆为原料生产的降压肽。

对以上三种方法所制备的胶原肽进行体外血管紧张素转化酶抑制活性测试，结果如表4所示。从表4可看出，本发明的方法制备降压肽，其产率高于现有技术，所得的降压肽活性与现有技术接近。

表4不同降压活性肽比较

实施例5牦牛来源降压胶原蛋白肽的制备

按照实施例1的方法制备牦牛降压肽，不同之处在于：在步骤(2)中，煮浆温度为100℃。比较发现，煮浆温度为100℃时，所得胶原肽得率为30％，低于实施例1的方法得率(70％)。

实施例6牦牛来源降压胶原蛋白肽的制备

按照实施例1的方法制备牦牛降压肽，不同之处在于：在步骤(2)中，煮浆温度为120℃。比较发现，煮浆温度为120℃时，所得胶原肽得率为50％，低于实施例1的方法得率(70％)。

实施例7牦牛来源降压胶原蛋白肽的制备

按照实施例1的方法制备牦牛降压肽，不同之处在于：在步骤(3)中，酶解时，按每10g组织加入2g菠萝蛋白酶，在30℃下酶解3h，比较发现本例方法所得胶原肽的血管紧张素转化酶抑制率为85％。

实施例8牦牛来源降压胶原蛋白肽的制备

按照实施例1的方法制备牦牛降压肽，不同之处在于：在步骤(3)中，酶解时，按每18g组织加入2g菠萝蛋白酶，在20℃下酶解5h。比较发现本例方法所得胶原肽的血管紧张素转化酶抑制率为86％。

实施例9牦牛来源降压胶原蛋白肽的制备

按照实施例1的方法制备牦牛降压肽，不同之处在于：在步骤(5)中，植物乳杆菌的接种量为1％。比较发现本例方法所得胶原肽的血管紧张素转化酶抑制率为20％，低于实施例1的方法(86％)。

实施例10牦牛来源降压胶原蛋白肽的制备

按照实施例1的方法制备牦牛降压肽，不同之处在于：在步骤(5)中，植物乳杆菌的接种量为3％。比较发现本例方法所得胶原肽的血管紧张素转化酶抑制率为35％，低于实施例1的方法(86％)。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种源于牦牛皮的降压肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将脱毛后洁净的牦牛皮切割成块状或条状，然后在100～150℃下煮浆处理0.5～3h；

(2)按每10～25g组织加入1～2g酶的量，向步骤(1)得到的处理液中加入酶，在20～50℃下酶解1～5h，离心后取上清液，得到胶原蛋白肽浆，其中，所述酶中至少包括菠萝蛋白酶；

(3)使用孔径为1kDa～5kDa的过滤膜对所述胶原蛋白肽浆进行超滤分离，向得到的滤出液中接种植物乳杆菌，接种量为1％～5％(w/v)，在25～45℃下发酵2～5h，发酵结束后灭菌，得到所述降压肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(1)之前，还包括将牦牛皮洗净，去除皮下脂肪和皮毛的步骤。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述牦牛皮为新鲜牦牛皮或干牦牛皮。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，酶解在pH值为6～8条件下进行。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述酶为菠萝蛋白酶或含菠萝蛋白酶的复合蛋白酶。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(3)中，在pH值为5.0～7.0条件下进行发酵。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(3)中，灭菌温度为90～95℃。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤(3)中，灭菌后还包括浓缩和干燥的步骤。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：浓缩方法为离心浓缩、超滤浓缩或旋蒸浓缩，所述超滤浓缩所使用的超滤膜孔径为40kDa～100kDa。

10.一种权利要求1-9中任一项所述的制备方法所制备的降压肽。