CN109722457B - 一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素k2的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明中公开了一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法，属于微生物发酵技术领域。所述方法步骤如下：（1）将活化后的黄杆菌种接种于种子培养基中，经种子培养，制得种子液；（2）将步骤（1）制得的种子液转接于发酵培养基中，在其生长周期中加入磁场辅助处理促进发酵，得到磁场处理后的发酵产物；（3）对磁场辅助处理条件下的发酵培养基进行优化，可使黄杆菌的发酵产物维生素K2的产量提高了30‑60%，该方法步骤简单，易于操作。
Description
技术领域
本发明涉及一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法，属于微生物发酵技术领域。
背景技术
维生素K2（menaquinone，简写为MK，甲萘醌类），是一种具有叶绿醌生物活性的萘醌基团的衍生物，脂溶性维生素。依据C-3上异戊二烯侧链长度的不同，MK共有14种，通常以MK-n表示，其中n指的是侧链上异戊二烯单元的个数。目前研究结果表明，能够合成MK的生物都是原核生物。一般地，革兰氏阳性菌能够合成MK；革兰氏阴性菌中，专性厌氧菌能够合成MK，兼性厌氧菌不但能够合成MK而且能合成辅酶Q(CoQ)，而需氧菌不能合成MK，只能产生CoQ。然而，能够合成较高产量MK的菌种为数不多。考查已有的相关研究文献不难发现，能够进行发酵生产MK的菌种主要是属于革兰氏阴性菌的黄杆菌(Flavobacterium sp.)，该菌种目前主要合成MK-4和MK-6；属于革兰氏阳性菌的枯草杆菌(Bacillus subtilis natto，日本文献称之为纳豆菌)，主要合成MK-7。
维生素K2具有良好的促进凝血、预防和治疗骨质疏松的功效，同时还能改善动脉硬化，对肝癌和白血病也有预防和治疗作用，早在1995 年日本已经将维生素K2作为骨质疏松治疗药物。目前，维生素K2主要用化学手段合成，利用微生物法生产维生素K2还处于起步阶段。由于化学法存在环境污染和产物生物活性低等问题，而生物法生产的维生素K2可使血清维生素K2保持较高水平，因此近年来众多的研究者开始进行微生物法生产维生素K2。
磁场具有生物效应，受磁场作用的生物的形态、行为、生理功能等方面会发生不同程度的变化。随着外加磁场的强度增加，磁场所能影响的物质由磁性粒子，带金属离子的生物分子，逐步发展到抗磁性的生物分子，并导致生命体的不同定向状态。王蓓等研究发现，静磁场可显著促进樟芝菌丝体液态发酵，同时显著提高发酵产物中三萜的产量（王蓓，王薇薇，马海乐，等。静磁场辅助液态发酵对樟芝菌丝体及三萜产量的影响[J]。中国农业科技导报，2015，17(5):99-105.）。Kazumasa O和Okuno K等用两株大肠杆菌(ZK126Na～r 和ZK126Sm～r)来研究不同强度磁场对其在固定相中生长的影响，发现其在5.2-6.1T高强度磁场下生长具有明显的优势（Okuno K, Fujinami R, Ano T, et al. Disappearance ofgrowth advantage in stationary phase (GASP) phenomenon under a high magneticfield[J]. Bioelectrochemistry, 2001, 53(2):165）。
发明内容
本发明的目的在于提供一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法，包括一发酵装置，该发酵装置包括发酵罐、蠕动泵和磁场；所述发酵罐的出料口通过第一管路与蠕动泵的进料口连通，所述蠕动泵的出料口通过第二管路与发酵罐的进料口连通，所述第一管路或/和第二管路穿过所述磁场设置；
将黄杆菌种子液接种至装有无菌发酵培养基的发酵罐中进行培养；在接种后的0-24小时内启动蠕动泵，以使发酵液循环流动。
优选的技术方案为：包括两间隔设置的钕铁硼磁铁，所述第一管路或/和第二管路从所述两间隔设置的钕铁硼磁铁之间穿过。
优选的技术方案为：在接种后的0-24小时内，向发酵罐中加入胆碱、蛋氨酸、叶酸、维生素B12、甜菜碱中的至少一种。
优选的技术方案为：所述胆碱、蛋氨酸、叶酸、维生素B12和甜菜碱在添加时，每升发酵培养基添加3-5g。
优选的技术方案为：所述磁场的磁感应强度为50-200mT，发酵液的流速为1-200mL/min，连续处理1-6天。
优选的技术方案为：在接种后2-12h内磁场处理强度50-150mT，接种后12-24h磁场处理强度150-200mT，连续处理2-5天。
优选的技术方案为：在接种后2-12h内发酵液流速10-100mL/min；在接种后12-24h，发酵液流速100-200 mL/min，连续处理2-5天。
由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有的优点是：
本发明利用磁场技术有效的促进了维生素K2在黄杆菌中的合成，与没有磁场作用相比，维生素K2产量有了显著的提高，且该方法简单、高效。
附图说明
图1为发酵装置示意图。
以上附图中，1、发酵罐；2、蠕动泵；3磁场。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本实施例所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
本文中使用的术语的目的仅在于说明特别实施例，并不意图对本发明做限制。除非上下文明确显示，否则本文中使用的单数形式“一”、“一个”亦包括复数形式。
在说明较佳实施例时，可能基于清楚的目的而使用特别的术语；然而，本说明书所揭露者并不意图被限制在所选择的该特别术语；并且应当理解，每一个特定元件包括具有相同功能、以相似方式操作并达成相似效果的所有等效技术。
对比例：用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25℃、300 r/min，共发酵6天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中维生素K2的含量为14mg/L。
实施例1：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
（1）黄杆菌菌种活化：从冻存甘油管中挑取一环菌液接种至含固体培养基的新鲜斜面上，35℃培养24h，所述固体培养基的成分包括10g/L甘油、33g/L蛋白胨、1.5g/L酵母粉、3g/L K2HPO4、4.5g/L NaCl、0.3g/L MgSO4·7H2O和15～20g/L琼脂粉。
（2）黄杆菌菌株种子培养：挑取步骤（1）中生长成熟的斜面用接种环刮取一环菌苔接种于盛有100ml种子培养基的500ml三角瓶中，在22℃，250rpm振荡培养24h制得种子液，所述种子培养基成分包括10g/L甘油、33g/L蛋白胨、1.5g/L酵母粉、3g/L K2HPO4、4.5g/LNaCl、0.3g/L MgSO4·7H2O，且在121℃灭菌20 min。
（3）黄杆菌菌株发酵培养：将步骤（2）中的种子液按10%（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25℃、300r/min，共发酵6天。在接种后5h进行磁场处理，磁场强度50 mT，发酵液流速10 mL/min，连续处理2天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了5%。发酵培养基的组分：10g/L甘油、33g/L蛋白胨、1.5g/L酵母粉、3g/L K2HPO4、4.5g/L NaCl、0.3g/L MgSO4·7H2O、10g/L玉米浆干粉。（胆碱、蛋氨酸、叶酸、维生素B12、甜菜碱中的至少一种，浓度3-5g/L。
实施例2：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后12 h进行磁场处理，磁场强度100 mT，发酵液流速50 mL/min，连续处理5天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了12%。培养基同实施例1。
实施例3：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后12 h进行磁场处理，磁场强度140 mT，发酵液流速50 mL/min，连续处理5天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了30%。培养基同实施例1。
实施例4：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后5 h进行磁场处理，磁场强度140 mT，发酵液流速100 mL/min，连续处理2天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了7%。培养基同实施例1。
实施例5：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后12 h进行磁场处理，磁场强度150 mT，发酵液流速100 mL/min，连续处理2天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了9%。培养基同实施例1。
实施例6：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后18 h进行磁场处理，磁场强度190 mT，发酵液流速150mL/min，连续处理5天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了13%。培养基同实施例1。
实施例7：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后24 h进行磁场处理，磁场强度190 mT，发酵液流速180mL/min，连续处理2天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了7%。培养基同实施例1。
实施例8：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后24 h进行磁场处理，磁场强度190 mT，发酵液流速100 mL/min，连续处理5天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了21%。培养基同实施例1。
实施例9：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后12 h向发酵液中加入3 g/L甜菜碱，并进行磁场处理，磁场强度140 mT，发酵液流速50 mL/min，连续处理5天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了45%。培养基同实施例1。
实施例10：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后12 h向发酵液中加入3 g/L胆碱，并进行磁场处理，磁场强度140mT，发酵液流速50 mL/min，连续处理5天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了30%。培养基同实施例1。
实施例11：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后12 h向发酵液中加入5 g/L蛋氨酸，并进行磁场处理，磁场强度140 mT，发酵液流速50 mL/min，连续处理5天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了29%。培养基同实施例1。
实施例12：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后12 h向发酵液中加入3 g/L叶酸，并进行磁场处理，磁场强度140mT，发酵液流速50 mL/min，连续处理5天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了30%。培养基同实施例1。
实施例13：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后12 h向发酵液中加入5 g/L维生素B12，并进行磁场处理，磁场强度140 mT，发酵液流速50 mL/min，连续处理5天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了40%。培养基同实施例1。
实施例14：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后12 h向发酵液中分别加入3 g/L叶酸、甜菜碱和胆碱，并进行磁场处理，磁场强度140 mT，发酵液流速50 mL/min，连续处理5天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了40%。培养基同实施例1。
实施例15：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后12 h分别向发酵液中加入3 g/L维生素B12和甜菜碱，并进行磁场处理，磁场强度140 mT，发酵液流速50 mL/min，连续处理5天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了60%。培养基同实施例1。
实施例16：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
用无菌接种环从斜面培养基中挑取一环活化的黄杆菌接入含有100 mL无菌种子培养基的500 mL挡板摇瓶中，22 ℃、250 r/min培养24 h，获得种子液；将种子液按10 %（v/v）接种量接种至装有无菌发酵培养基的5L全自动发酵罐中，发酵条件控制在25 ℃、300 r/min，共发酵6天。在接种后12 h分别向发酵液中加入5 g/L蛋氨酸和维生素B12，并进行磁场处理，磁场强度140 mT，发酵液流速50 mL/min，连续处理5天。发酵培养结束后取一定体积发酵液，离心得到菌体，冷冻干燥，以0.2～0.5倍于原发酵液体积的甲醇浸泡菌体抽提过，再高速离心收集抽提液。利用高效液相色谱分析得到抽提液中维生素K2浓度，进而计算出发酵液中的维生素K2含量较对照组提高了41%。培养基同实施例1。
实施例17：一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法
一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法，包括一发酵装置，参见图1。该发酵装置包括发酵罐1、蠕动泵2和磁场3；所述发酵罐的出料口通过第一管路与蠕动泵的进料口连通，所述蠕动泵的出料口通过第二管路与发酵罐的进料口连通，所述第一管路和第二管路穿过所述磁场设置；
将黄杆菌种子液接种至装有无菌发酵培养基的发酵罐中进行培养；在接种后的12小时内启动蠕动泵，以使发酵液循环流动。
优选的实施方式为：包括两间隔设置的钕铁硼磁铁，所述第一管路从所述两间隔设置的钕铁硼磁铁之间穿过。
优选的实施方式为：在接种后的12小时内，向发酵罐中加入胆碱。
优选的实施方式为：所述胆碱在添加时，每升发酵培养基添加4g。
优选的实施方式为：所述磁场的磁感应强度为100mT，发酵液的流速为100 mL/min，连续处理5天。
优选的实施方式为：在接种后10h内磁场处理强度100mT，接种后20h磁场处理强度1580mT，连续处理4天。
优选的实施方式为：在接种后10h内发酵液流速60mL/min；在接种后20h，发酵液流速150 mL/min，连续处理4天。
培养基同实施例1。
以上所述者仅为用以解释本发明之较佳实施例，并非企图具以对本发明做任何形式上之限制，是以，凡有在相同之发明精神下所作有关本发明之任何修饰或变更，皆仍应包括在本发明意图保护之范畴。
Claims (5)
1.一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法，其特征在于：包括一发酵装置，该发酵装置包括发酵罐、蠕动泵和磁场；所述发酵罐的出料口通过第一管路与蠕动泵的进料口连通，所述蠕动泵的出料口通过第二管路与发酵罐的进料口连通，所述第一管路或/和第二管路穿过所述磁场设置；
将黄杆菌种子液接种至装有无菌发酵培养基的发酵罐中进行培养；在接种后的0-24小时内启动蠕动泵，以使发酵液循环流动；
包括两间隔设置的钕铁硼磁铁，所述第一管路或/和第二管路从所述两间隔设置的钕铁硼磁铁之间穿过；
所述磁场的磁感应强度为50-200mT，发酵液的流速为1-200 mL/min，连续处理1-6天。
2.根据权利要求1所述的磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法，其特征在于：在接种后的0-24小时内，向发酵罐中加入胆碱、蛋氨酸、叶酸、维生素B12、甜菜碱中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法，其特征在于：所述胆碱、蛋氨酸、叶酸、维生素B12和甜菜碱在添加时，每升发酵培养基添加3-5g。
4.根据权利要求1所述的磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法，其特征在于：在接种后2-12h内磁场处理强度50-150mT，或接种后12-24h磁场处理强度150-200mT，连续处理2-5天。
5.根据权利要求1所述的磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法，其特征在于：在接种后2-12h内发酵液流速10-100mL/min；或在接种后12-24h，发酵液流速100-200 mL/min，连续处理2-5天。
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