CN109715666A - 癌症治疗方法和使用结合糖基化pd-l1的抗体的组合的疗法 - Google Patents

癌症治疗方法和使用结合糖基化pd-l1的抗体的组合的疗法 Download PDF

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Abstract

提供了抗癌治疗和治疗方法，其中将相对于未糖基化PD‑L1特异性结合糖基化PD‑L1并阻断PD‑L1与PD‑1的结合的抗体与相对于非糖基化PD‑L1特异性结合糖基化PD‑L1的抗体组合施用于有需要的个体，阻断PD‑L1与PD‑1的结合，并促进PD‑L1的内化和降解。所述抗癌方法利用识别糖基化PD‑L1蛋白质上特定表位的抗体，以及表现出阻断PD‑L1与PD‑1结合且还促进表达PD‑L1的细胞上的PD‑L1的内化的IPD功能的抗体。其中此类抗体组合特别有用的方法包括癌症或肿瘤治疗和疗法，其中所述癌症或肿瘤是PD‑L1阳性癌症或肿瘤。

Description

癌症治疗方法和使用结合糖基化PD-L1的抗体的组合的疗法
相关领域
本文呈现的方法和治疗通常涉及分子生物学、医学和肿瘤学的领域。更具体地，提供了使用特异性结合糖基化免疫检查点蛋白质PD-L1的抗体、尤其是不同抗体的组合的癌症的疗法和治疗的方法。
背景
T-细胞活化的永久化已彻底改变广谱恶性癌症的治疗。例如，伊匹单抗(ipilimumab)(FDA首次批准的靶向T-细胞反应的检查点阻断)的发展使得转移性黑色素瘤的治疗是可能的(Hodi,F.S.等人,2010,NEJM,363:711-723；Robert,C.等人,2013,Clin.Cancer Res.,19:2232-2239；和Robert,C.等人,2011,NEJM,364:2517-2526)。尽管抗细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)单克隆抗体显示在治疗黑色素瘤患者中有前景的结果，但靶向PD-1和PD-L1两者的第二代检查点抑制剂已证实在III期临床试验中更好的临床活性和安全性(Topalian,S.L.等人,2012,NEJM,366:2443-54；和Brahmer,J.R.等人,2012,NEJM,366:2455-2465)。因为PD-L1还具有诱发癌细胞进展的致癌潜力(Topalian,S.L.等人,同上；Page,D.B.等人,2014,Ann.Rev.Med.,65:185-202)。除了其免疫抑制活性外，靶向PD-1/PD-L1相互作用提供经由PD-1阻断免疫抑制作用同时经由PD-L1减慢细胞进展的双重疗效，且预期具有更敏感的结果(Topalian,S.L.等人，同上；Brahmer,J.R.等人，同上；和Hamid,O.,2013,NEJM,369:134-144)。在2014年，在美国仍有超过10项临床试验测试抗PD-L1和/或抗PD-1抗体的疗效(作为单一药剂或呈组合)(Page,D.B.等人，同上)。美国FDA已批准两种抗PD-1治疗性抗体用于治疗特定癌症，(派姆单抗(pembrolizumab))和(纳武单抗(nivolumab))。然而，PD-L1的病理生理功能和调节机制仍未被完整定义。
最近，已将再觉醒沉默的免疫反应(具体而言效应子T-细胞)添加至治疗选项列表(包括外科手术移除、化学疗法、放射疗法和靶向疗法)。尽管最初证实使用抗CTLA-4单克隆抗体(Dunn,G.P.,等人,2002,Nat.Immunol.,3:991-998；和Leach,D.R.,等人,1996,Science,271:1734-1736)在治疗转移性黑色素瘤中取得成功，但其已显示还诱发自体免疫反应。不同于抗CTLA-4抗体(其仅影响免疫细胞)，抗PD-L1抗体和抗PD-1抗体在细胞水平和在肿瘤位点用于阻断表达PD-1的效应子T细胞与表达PD-L1的肿瘤细胞之间的相互作用。此产生来自肿瘤细胞和T-细胞两者的双重影响，由此限制不良效应且提供更好的治疗疗效(Okazaki,T.,等人,2013,Nature immunology,14:1212-1218)。需要更好地理解PD-L1介导的免疫抑制和对肿瘤细胞的促致癌效应潜在的病理生理机制以开发靶向此途径的更稳健的治疗。仍需要成功地靶向PD-1/PD-L1途径并活化免疫系统的效应子细胞以攻击肿瘤细胞并治疗癌症的新颖且更有效的治疗和方法，特别是涉及抗体的那些。
概述
本发明人已发现表达于肿瘤细胞上的PD-L1(也称为CD274、PDCD1L1或B7-H1)的糖基化促进或增强结合表达于免疫效应子细胞(诸如T细胞)上的PD-1，由此增加T细胞活性抗肿瘤细胞的抑制作用。本发明人进一步发现PD-L1的糖基化可稳定细胞表面上的PD-L1表达，由此减小PD-L1的内化和胞内降解的速率。本发明人已鉴定了相对于未糖基化人PD-L1多肽优先结合糖基化人PD-L1多肽的抗体。如本文所用，优先结合糖基化人PD-L1的此类抗体被称为“抗糖基化PD-L1抗体”。
如本文所述的某些抗糖基化PD-L1抗体也阻断PD-L1/PD-1相互作用并且还促进PD-L1在PD-L1表达细胞上的内化和细胞内降解；因此，这些抗体被称为“内化和促进降解”抗体或“IPD”抗糖基化PD-L1抗体。因此，提供了抑制PD-1/PD-L1结合并且促进PD-L1内化和降解的此类抗糖基化PD-L1抗体，并将其包括在所述的组合疗法中。
本文提供了使用两种或更多种本文所述的抗糖基化PD-L1抗体的组合来治疗其细胞表达或过表达PD-L1的癌症、肿瘤和赘生物的方法。组合癌症治疗和治疗方法涉及将两种或更多种不同的如本文所述的抗糖基化PD-L1抗体(即，具有不同的结合特异性和/或与不同的表位结合)施用于具有或被鉴定为患有癌症、肿瘤或赘生物(优选地，其中所述细胞表达或过表达PD-L1，且更具体地，糖基化PD-L1)的个体。在某些实施方案中，2、3、4或5种不同的抗糖基化PD-L1抗体组合施用(或组合存在于药物组合物中)。在一个实施方案中，抗癌治疗涉及向有需要的个体施用两种抗糖基化PD-L1抗体的组合，其中两种抗体结合癌症、肿瘤或赘生物细胞的表面上的糖基化PD-L1并且相对于未糖基化PD-L1优先结合糖基化PD-L1，并且其中至少一种抗体也是如本文所述或根据本文所述的方法(例如，实施例1)产生的IPD抗糖基化PD-L1抗体。在某些实施方案中，两种抗糖基化PD-L1抗体均为IPD抗糖基化PD-L1抗体。
如本文所述的抗糖基化PD-L1抗体抑制或阻断PD-1与PD-L1间的相互作用。因此，这些抗糖基化PD-L1抗体抑制源自于PD-1/PD-L1相互作用的免疫抑制并促进表达PD-1的效应子T-细胞针对表达PD-L1的肿瘤细胞的细胞毒性活性的永久化。通过抑制PD-1/PD-L1相互作用和减低肿瘤细胞表面上糖基化PD-L1的浓度，所述的抗糖基化PD-L1抗体可增强效应子T-细胞反应并介导抗肿瘤活性。IPD抗糖基化PD-L1抗体还通过促进细胞表面表达的PD-L1的内化和降解来降低肿瘤细胞上PD-L1的水平。在某些实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体结合为非线性、构象表位的PD-L1表位。另外，并在不受理论约束下，抗糖基化PD-L1抗体结合含有PD-L1的三维结构或在PD-L1的三维结构中接近糖基化氨基酸的PD-L1表位；PD-L1的此类糖基化区被认为尤其参与PD-L1/PD-1相互作用。通过结合PD-L1的糖基化区中的表位氨基酸，所述的抗糖基化PD-L1抗体可有效地用于掩蔽或中和糖基化PD-L1蛋白质的参与PD-L1/PD-1相互作用和/或参与肿瘤细胞表面上PD-L1表达的稳定化的结合位点或区。与单独的抗糖基化PD-L1抗体相比，两种或更多种抗糖基化PD-L1抗体(包括一种或多种IPD抗糖基化PD-L1抗体)的组合可以表现出累加或协同活性。如本文所用，术语肿瘤、癌症和赘生物可互换使用。除非另作指明，否则如本文所用的“PD-L1”是指PD-L1蛋白质、多肽或肽，具体而言人PD-L1(其氨基酸序列为SEQ ID NO:1)；且“PD-1”是指PD-1蛋白质、多肽或肽，具体而言人PD-1。
本发明人发现人PD-L1在胞外结构域中的四个位点，于人PD-L1蛋白质(例如，如SEQ ID NO:1中所示)的氨基酸位置N35、N192、N200和/或N219处糖基化。所述的抗糖基化PD-L1抗体可结合这些位点中的一个或多个，且例如，可不结合在这些糖基化位点中的一个或多个具有突变(例如，糖基化共有序列中的谷氨酰胺取代为天冬酰氨酸)且因此不在那些一个或多个位点被糖基化。因此，在一些实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体特异性结合PD-L1糖多肽或其肽中的一个或多个糖基化基序。在一些实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体结合包含糖基化基序和邻接肽的PD-L1糖肽。在一些实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体结合位于糖基化基序中的一个或多个附近的呈三维的肽序列。尽管不受理论约束，但是据信ECD的N-端糖基化位点(N35)主要涉及PD-L1/PD-1结合，而ECD的更多C-端糖基化位点(N192、N200和N219)主要涉及细胞膜上PD-L1的稳定化，然而，这些区域内的各个可造成PD-L1/PD-1结合和膜上PD-L1的稳定化。因此，结合、阻断和/或掩蔽在N35糖基化的抗糖基化PD-L1抗体可抑制PD-L1/PD-1结合，而结合、阻断和/或掩蔽在N192、N200和/或N219处糖基化的抗体促进PD-L1内化和降解。因此，提供了至少两种不同抗糖基化PD-L1抗体的组合，其中一种抗体是结合、阻断和/或掩蔽N192、N200和/或N219处的糖基化的IPD抗糖基化PD-L1抗体，且另一抗体是结合、阻断和/或掩蔽N35处的糖基化的抗糖基化PD-L1抗体。
因此，在实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体识别并选择性结合糖基化PD-L1的构象表位。通过实例的方式，在某些实施方案中，至少一种抗糖基化PD-L1抗体结合糖基化PD-L1，其Kd为相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd的小于85％、小于80％、小于75％、小于70％、小于65％、小于60％、小于55％、小于50％、小于45％，但在实施方案中，相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd的不超过5％、10％、15％、20％或25％，并且在IPD的情况下，抗糖基化PD-L1抗体仍表现出双重抗糖基化PD-L1功能。应当理解，涵盖在其之间以及等于前述Kd值的值。在一个实施方案中，组合中的至少一种抗糖基化PD-L1抗体结合糖基化PD-L1，其Kd为相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd的小于一半，并且在IPD抗糖基化PD-L1抗体的情况下，仍表现出PD-L1内化和降解促进抗糖基化PD-L1功能。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体结合糖基化PD-L1蛋白质，其Kd比相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd小至少5倍。在一个实施方案中，至少一种抗糖基化PD-L1抗体结合糖基化PD-L1蛋白质，其Kd比相对于未糖基化PD-L1蛋白质表现出的Kd小至少10倍。在某些实施方案中，组合中的一种或多种抗糖基化PD-L1抗体优先结合表达WT糖基化PD-L1的细胞，其频率比表达未糖基化PD-L1的细胞大至少1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍，如例如细胞流式细胞术测定法中所测定，在所述细胞流式细胞术测定法中，将表达WT PD-L1和未糖基化PD-L1的细胞混合并差异标记，然后与用可检测标记物标记的待测定的抗体接触，例如，如实施例1中所述，并且如例如通过当用荧光标记物标记抗体时测量的两个细胞群体的荧光强度(MFI)所测量。在一个实施方案中，在细胞流式细胞术测定法中，当通过荧光标记物直接或间接可检测时，一种或多种抗糖基化PD-L1抗体优先结合表达糖基化PD-L1的细胞，其MFI比结合表达未糖基化PD-L1的细胞的抗体表现出的MFI高2倍至10倍。在一个实施方案中，一种或多种抗糖基化PD-L1抗体优先结合表达糖基化PD-L1的细胞，其MFI比结合表达未糖基化PD-L1的细胞的抗体表现出的MFI高3倍至5倍。在一个实施方案中，一种或多种抗糖基化PD-L1抗体选择性结合糖基化PD-L1蛋白质，其亲和力为5-20nM、5-10nM或10-20nM。在一个实施方案中，组合中的抗体是单克隆抗体，且更优选嵌合或人源化或人抗体。在一个实施方案中，组合中的抗体是重组产生的抗体。术语“特异性结合”和“选择性结合”在本文中可互换使用。
在具体实施方案中，提供了抗糖基化PD-L1抗体的组合，其中组合中的一种抗体是作为MAb STM073或MAb STM108的人源化或嵌合形式的IPD抗糖基化PD-L1抗体，或与如本文所述的MAb STM073或MAb STM108竞争结合人PD-L1的抗体，或者是不是作为MAb STM004或MAb STM115的人源化或嵌合形式的IPD抗糖基化PD-L1抗体的抗糖基化PD-L1抗体，或与如本文所述的MAb STM004或MAb STM115竞争结合人PD-L1的抗体。在优选实施方案中，提供了以下两者的组合：MAb STM073或MAb STM108的人源化或嵌合形式，或与MAb STM073或MAbSTM108竞争结合人PD-L1的抗体，和MAb STM004或MAb STM115的人源化或嵌合形式，或与MAb STM004或MAb STM115竞争结合人PD-L1的抗体。提供的具体组合是：(1)MAb STM073的人源化或嵌合形式，或与MAb STM073竞争结合的抗体，和MAb STM004的人源化或嵌合形式，或与MAb STM004竞争结合人PD-L1的抗体；(2)MAb STM073的人源化或嵌合形式，或与MAbSTM073竞争结合的抗体，和MAb STM115的人源化或嵌合形式，或与MAb STM115竞争结合人PD-L1的抗体；(3)MAb STM108的人源化或嵌合形式，或与MAb STM108竞争结合的抗体，和MAb STM004的人源化或嵌合形式，或与MAb STM004竞争结合人PD-L1的抗体；(4)MAbSTM108的人源化或嵌合形式，或与MAb STM108竞争结合的抗体，和MAb STM115的人源化或嵌合形式，或与MAb STM115竞争结合人PD-L1的抗体；或(5)MAb STM073的人源化或嵌合形式，或与MAb STM073竞争结合的抗体，和MAb STM108的人源化或嵌合形式，或与MAb STM108竞争结合人PD-L1的抗体。应当理解，本文所述的抗癌抗体组合方法中使用的抗糖基化PD-L1抗体的形式是在向其施用抗体的人类个体(诸如癌症患者)中有效且具有最小免疫原性的形式。因此，此类抗体将优选为本文所述的抗糖基化PD-L1抗体的人源化或嵌合形式，或与本文所述的抗体竞争结合人PD-L1和/或与本文所述的单克隆抗体结合相同表位的人源化、人或嵌合抗体。
如本领域技术人员还将理解，对于涉及具有不同结合特异性的至少两种不同抗体的抗癌治疗，所述抗体可以在同时或在不同时施用于个体，第一抗体的施用和第二抗体的施用之间的时间段不同，例如，数小时、数天或数周以及其间隔。另外，对于其中将IPD抗糖基化PD-L1抗体和不是IPD抗糖基化PD-L1抗体的抗糖基化PD-L1抗体施用于有需要的个体的组合治疗，所述抗体可以同时共同施用，或所述抗体可以以任何顺序在不同预定时间施用。还提供了包含至少两种不同抗糖基化PD-L1抗体的药物组合物，优选地其中一种抗体是IPD抗糖基化PD-L1抗体，并且在某些实施方案中，另一种抗体是不是IPD抗体的抗糖基化PD-L1抗体。
提供的治疗组合物和方法的组合包括MAb STM004的人源化或嵌合形式，其结合糖基化PD-L1并且具有分别具有SEQ ID NO:3和11(成熟的VH和VL区氨基酸序列)或分别具有SEQ ID NO:86和88(其含有信号肽序列)的氨基酸序列的重链和轻链可变结构域及其抗原结合部分，及其人源化和嵌合形式。已经确定STM004结合PD-L1上的表位，所述表位对应于如本文SEQ ID NO:1所示的人PD-L1氨基酸序列的位置Y56、K62和K75的氨基酸残基，并且是构象表位。涵盖STM004 MAb表位的人PD-L1多肽的部分具有序列LDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQH(SEQ ID NO:42)。如本文所示，构成由MAb STM004识别的表位(即，由与PD-L1结合的mAb接触)的氨基酸残基Y56、K62和K75标下划线。
STM004 MAb的重链和轻链可变(V)结构域的核酸(DNA)和相应氨基酸序列显示于下表3中。SEQ ID NO 2、3、10和11是重链和轻链可变结构域的成熟形式(即，不具有信号肽)的核苷酸和氨基酸序列。表3还提供了作为SEQ ID NO:34-37的重链和轻链可变结构域的核苷酸和氨基酸序列，其中信号序列以斜体字体表示。表3中还显示了STM004的Kabat和Chothia重链和轻链V结构域CDR。
组合物的和如本文方法中使用的抗糖基化PD-L1抗体组合还可以包括MAb STM004的人源化或嵌合形式(其具有SEQ ID NO:3的VH结构域氨基酸序列和SEQ ID NO:11的VL结构域氨基酸序列，也如下表3中所提供)或MAb STM115的人源化或嵌合形式(其具有SEQ IDNO:19的VH结构域氨基酸序列和SEQ ID NO:27的VL结构域氨基酸序列，也如下表3中所提供)和其对糖基化PD-L1特异性的结合片段。抗体组合可以包括抗糖基化PD-L1抗体STM004或STM115的人源化或嵌合形式，其具有如下表3中所示的Chothia或Kabat VH CDR 1-3或其组合，和Chothia或Kabat VL CDR 1-3(对于MAb STM004或MAb STM115)，和优选地，人框架区，或者可以包括与如本文所述的此类抗体竞争结合人PD-L1的抗体。
当经由常规竞争方法测定时，抗PD-L1抗体可以包括结合糖基化PD-L1和与如本文所述的MAb STM004或MAb STM115竞争或交叉竞争与糖基化PD-L1的特异性结合的抗糖基化PD-L1抗体。在一个方面，至少一种抗糖基化PD-L1抗体与MAb STM004或MAb STM115结合相同的表位。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体特异性结合PD-L1序列LDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQH(SEQ ID NO:42)内的表位。在一个方面，抗糖基化PD-L1抗体可以特异性结合糖基化人PD-L1，使得当与人PD-L1结合时，所述抗体结合以下氨基酸残基中的至少一个：SEQ ID NO:1的Y56、K62或K75，其中所述抗体抑制结合人糖基化PD-L1的人PD-1的结合。另外，抗糖基化PD-L1抗体可以是分离的抗糖基化PD-L1抗体，其特异性结合糖基化人PD-L1，使得当与人PD-L1结合时，所述抗体结合以下氨基酸残基中的至少一个：SEQ ID NO:1的K62、H69或K75，其中所述抗体抑制结合人糖基化PD-L1的人PD-1的结合。在实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体接触构成PD-L1的表位区的氨基酸残基中的至少两个、至少三个或四个。
在另一个方面，至少一种抗糖基化PD-L1抗体特异性结合糖基化人PD-L1，使得当与人PD-L1结合时，所述抗体结合SEQ ID NO:1的L48至H78的氨基酸区域内的至少一个氨基酸。在一个方面，抗糖基化PD-L1抗体特异性结合糖基化人PD-L1，使得当与人PD-L1结合时，所述单克隆抗体结合以下氨基酸残基组：SEQ ID NO:1的L48至H78的氨基酸区域内的Y56、K62、K75；其中所述单克隆抗体抑制PD-1与PD-L1、特别是人PD-1与人糖基化PD-L1的结合。在另一个方面，抗糖基化PD-L1抗体特异性结合糖基化人PD-L1，使得当与人PD-L1结合时，所述抗体结合SEQ ID NO:1的D61至H78的氨基酸区域内的至少一个氨基酸。在一个方面，抗糖基化PD-L1抗体特异性结合糖基化人PD-L1，使得当与人PD-L1结合时，所述单克隆抗体结合以下氨基酸残基组：SEQ ID NO:1的D61至H78的氨基酸区域内的K62、H69和K75；其中所述单克隆抗体抑制PD-1与PD-L1、特别是人PD-1与人糖基化PD-L1的结合。在另一个方面提供了抗糖基化PD-L1抗体特异性结合糖基化人PD-L1蛋白质，使得当与人PD-L1结合时，所述抗体在人PD-L1蛋白质(SEQ ID NO:1)的氨基酸区域L48-H78内或氨基酸区域D61-H78内结合。
组合物的和如本文方法中使用的抗糖基化PD-L1抗体组合还可以包括IPD抗糖基化PD-L1抗体MAb STM073(其具有SEQ ID NO:44的VH结构域氨基酸序列和SEQ ID NO:52的VL结构域氨基酸序列，也如下表4中所提供)或IPD抗糖基化PD-L1抗体STM108(其具有SEQ IDNO:60的VH结构域氨基酸序列和SEQ ID NO:68的VL结构域氨基酸序列，也如下表4中所提供)的人源化或嵌合形式，及其对糖基化PD-L1特异性的结合片段。MAb STM073特异性结合PD-L1上的表位，其对应于涵盖本文SEQ ID NO:1的人PD-L1氨基酸序列的位置H69、Y112、R113和K124的氨基酸残基。该STM073表位在氨基酸序列内是非连续的并且是构象表位。人PD-L1多肽的涵盖STM073 MAb表位的部分具有序列VHGEEDLKVQH------DAGVYRCMISYGGADYKRITV(SEQ ID NO:75)，其中构成MAb STM073识别的表位的氨基酸残基H69、Y112、R113和K124标下划线，并且位置78的氨基酸残基组氨酸(H)和位置108的氨基酸残基天冬氨酸(D)之间的短划线代表SEQ ID NO:1的人PD-L1氨基酸序列的位置79-107的氨基酸。提供了包含IPD抗糖基化PD-L1抗体的抗糖基化PD-L1抗体的组合，所述IPD抗糖基化PD-L1抗体结合STM073表位和/或与STM073竞争结合PD-L1。
MAb STM108结合PD-L1上的表位，其对应于涵盖本文SEQ ID NO:1的人PD-L1氨基酸序列的位置S80、Y81、K162和S169的氨基酸残基。该STM108表位在氨基酸序列内是非连续的并且是构象表位。人PD-L1多肽的涵盖MAb STM108表位的部分具有序列SEQ ID NO:1的LKVQHSSYRQR------EGYPKAEVIWTSSDHQ，其中构成MAb STM108识别的表位的氨基酸残基S80、Y81、K162和S169标下划线，并且位置84的氨基酸残基精氨酸(R)和位置158的氨基酸残基谷氨酸(E)之间的短划线代表SEQ ID NO:1的人PD-L1氨基酸序列的位置85-157的氨基酸，即来自SEQ ID NO:1的氨基酸19-290的成熟PD-L1蛋白质。提供了方法和组合物，其包含结合STM108表位的IPD抗糖基化PD-L1抗体和与STM108竞争结合PD-L1的抗体。
STM073 MAb的重链和轻链可变(V)结构域的核酸(DNA)和相应氨基酸序列显示于下表4中。表4提供了STM073的成熟(即，不含信号肽)VH和VL结构域(分别为SEQ ID NO:43、51、44和52)和含有信号肽的VH和VL结构域序列(分别为SEQ ID NO:76、78、77和79)的核苷酸和氨基酸序列两者。在表4中显示的含有信号序列的重链和轻链结构域的重链DNA和蛋白质V结构域序列中，氨基端信号序列(分别为VH结构域的核苷酸1-58和氨基酸1-19以及VL结构域的核苷酸1-66和氨基酸1-22)以斜体字体表示。表4中还显示使用Kabat和Chothia编号定义的STM073 MAb重链和轻链V结构域CDR。
在一个实施方案中，所述方法和组合物包含IPD抗糖基化PD-L1抗体，其特异性结合糖基化PD-L1并且包含SEQ ID NO:44的VH结构域和SEQ ID NO:52的VL结构域。在一个实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体与包含SEQ ID NO:44的VH结构域和SEQ ID NO:52的VL结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。在一个实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体是人源化或嵌合抗体，其特异性结合糖基化PD-L1，并且包含VH结构域和/或VL结构域，其包含具有如下表4中所示的氨基酸序列或其组合的MAb STM073的Chothia或Kabat CDR 1-3，优选在人框架区的背景下。在一个实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体是人源化或嵌合抗体，其与包含VH结构域和/或VL结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合，所述VH结构域和/或VL结构域包含具有如下表4中所示的氨基酸序列或其组合的MAb STM073的Chothia或Kabat CDR 1-3。
在一个实施方案中，特异性结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含与SEQID NO:44的氨基酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的VH结构域和/或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的VL结构域，并且其抑制或阻断糖基化PD-L1与PD-1的结合。在一个实施方案中，特异性结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含VH和/或VL结构域，其包含STM073的Chothia或Kabat CDR 1-3，其中至少1、2或所有3个CDR就表4中所示的氨基酸序列而言具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代。
提供的方法和组合物的组合可以包括IPD抗糖基化PD-L1，其为MAb STM108的嵌合或人源化形式。STM108 MAb的成熟重链和轻链可变(V)结构域的核酸(DNA)和相应的氨基酸序列(分别为SEQ ID NO:59、67、60和68)显示于下表4中。未加工的重链V结构域序列(即，在N-端含有信号序列的那些)的DNA和氨基酸序列也显示于表4中(SEQ ID NO:81和82)，并且氨基端信号序列以斜体字体表示(VH结构域的核苷酸1-57和氨基酸1-19)。根据Kabat和Chothia定义两者，表4中还显示STM108MAb重链和轻链V结构域CDR。
在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的VH结构域和SEQ ID NO:68的氨基酸序列的VL结构域。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体与包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的VH结构域和SEQID NO:68的氨基酸序列的VL结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。在一个实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体是人源化或嵌合抗体，其特异性结合糖基化PD-L1，并且包含VH结构域和/或VL结构域，其包含具有如下表4中所示的氨基酸序列或其组合的MAbSTM073的Chothia或Kabat CDR 1-3，优选在人框架区的背景下。在一个实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体是人源化或嵌合抗体，其与包含VH结构域和/或VL结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合，所述VH结构域和/或VL结构域包含具有如下表4中所示的氨基酸序列或其组合的MAb STM073的Chothia或Kabat CDR 1-3。
在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1抗体包含与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的VH结构域和与SEQ ID NO:68的氨基酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的VL结构域。在一个实施方案中，特异性结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含VH和/或VL结构域，其包含STM073的Chothia或Kabat CDR 1-3，其中至少1、2或所有3个CDR就表4中所示的氨基酸序列而言具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代。
提供了使用AbM、Contact或IMGT定义的CDR的STM108的人源化形式，其具有人框架区和任选地人恒定区。优选地，这些抗体具有人框架区，即为STM108的人源化形式，并且任选地具有人恒定结构域。还提供了使用AbM、Contact或IMGT定义的CDR的STM073的人源化形式，其具有人框架区和任选地人恒定区。优选地，这些抗体具有人框架区，即为STM073的人源化形式，并且任选地具有人恒定结构域。
在实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体与包含上述VH和VL结构域及其中的CDR的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。STM108的人源化形式可以在CDR和/或框架区中具有一个或多个氨基酸取代、缺失或插入，其改善抗体的一种或多种性质，诸如抗原亲和力。
在某些方面，一种或多种抗糖基化PD-L1抗体是IgG、IgM、IgA，其同种型，诸如IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG4，或其抗原结合片段。在其他方面，一种或多种抗糖基化PD-L1抗体是Fab'、F(ab')2、F(ab')3、单价scFv、二价scFv、双特异性抗体、双特异性scFv或单一结构域抗体。在一些方面，组合中的一种或多种、优选每种抗糖基化PD-L1抗体是嵌合抗体、人抗体或人源化抗体，并且优选地，是重组产生的。在进一步方面，IPD抗糖基化PD-L1抗体与化学治疗剂、毒素或放射性核素缀合。
在具体实施方案中，所述方法和组合物包含双互补位抗体，其具有两个不同抗原结合结构域，所述抗原结合结构域各自结合不与糖基化PD-L1的另一抗原结合结构域的表位重叠的表位；和至少一个结合结构域(并且在某些实施方案中，两个结合结构域)优先结合PD-L1的糖基化形式，例如通过结合含有一个或多个本文所列的糖基化位点的表位。这些抗体可以交联细胞表面蛋白质，促进内化、溶酶体运输和降解。所述表位优选是IPD抗糖基化PD-L1抗体的表位和不是IPD抗糖基化PD-L1抗体的抗糖基化PD-L1抗体的表位。可以使用针对含有糖基化的表位或本文所述的抗体优先结合糖基化PD-L1的表位中任一种的抗体。Mab STM073或MAb STM108的抗原结合结构域(包括人框架区中的CDR或其VH和VL结构域)和MAb STM004或MAb STM115的抗原结合结构域(包括人框架区中的CDR或其VH和VL结构域)的组合可以形成用于本文所述的方法中的双互补位抗体。两个抗原结合结构域可以排列在抗体分子中，例如，如Dimasi等人,J.Mol.Biol.,393:672-692(2009)中所述。在具体实施方案中，抗原结合结构域之一被工程改造为单链Fv的形式，然后将其连接至具有另一个抗原结合结构域的抗体的重链和/或轻链的N端或CH3结构域的C-端，例如，经由肽接头。
在另一个方面，本文所述的组合中的一种或多种抗糖基化PD-L1抗体是抗体-药物缀合物(ADC)，其中抗糖基化PD-L1抗体与抗肿瘤药物化学连接。在实施方案中，抗糖基化PD-L1 MAb ADC在杀死肿瘤或癌细胞中高度有效，并且在用于治疗患有癌症的个体的抗肿瘤疗法中高度有效。在实施方案中，ADC的抗糖基化PD-L1抗体组分是双特异性、多特异性、双互补位或多互补位抗体或其抗原结合部分。在其他实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体化学连接至抗有丝分裂剂，诸如美登素衍生物，例如，类美登素诸如DM1或DM4，或与微管蛋白聚合奥瑞他汀，例如单甲基奥瑞他汀E(MMAE)或单甲基奥瑞他汀F(MMAF)，如本文进一步描述。在一个实施方案中，至抗糖基化PD-L1抗体的接头在细胞外液中是稳定的，但一旦ADC进入肿瘤或癌细胞其就被组织蛋白酶切割，因此活化MMAE或其他毒素药物的抗有丝分裂机制。在一个实施方案中，ADC的抗体组分是MAb STM073Mab或MAb STM108的嵌合或人源化形式或MAb STM004或MAb STM115的嵌合或人源化形式。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体经由可切割接头化学连接至MMAE。在一个具体实施方案中，ADC包含这样的结构，其中抗糖基化PD-L1抗体经由其C-区域中的半胱氨酸残基化学连接至马来酰亚胺和己酸(MC)连接基团，其化学连接至组织蛋白酶可切割接头，诸如由缬氨酸(Val)和瓜氨酸(Cit)组成的“vc”，其化学连接至间隔区“PAB”，即对氨基苯甲酸，其化学连接至MMAE细胞毒素，因此产生ADC，其通过其组分结构指定为抗糖基化PD-L1抗体-MC-vc-PAB-MMAE。
在施用提供的抗糖基化PD-L1抗体的组合的方法中，在某些优选实施方案中，所述癌细胞对于PD-L1、特别是糖基化PD-L1呈阳性。所述癌细胞还可以对于一种或多种其他癌细胞标志物(诸如但不限于EGFR)呈阳性。在非限制性实施方案中，在个体中待治疗的癌症、疾病或病理是乳腺癌、肺癌、头颈癌、前列腺癌、食道癌、气管癌、皮肤癌、脑癌、肝癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、睾丸癌、结肠癌、直肠癌或皮肤癌。在某些实施方案中，待治疗的癌症为肾上腺癌、肛门癌、胆管癌、骨癌、成人中的脑/CNS肿瘤、儿童中的脑/CNS肿瘤、人中的乳腺癌、青少年中的癌症、儿童中的癌症、年轻成人中的癌症、原发灶未知的癌症、Castleman病、子宫颈癌、子宫内膜癌、尤因氏家族肿瘤、眼癌、胆囊癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、妊娠滋养层细胞疾病、霍奇金氏病、卡波西肉瘤、肾癌、喉癌或下咽癌、白血病(例如，成年型急性淋巴细胞性(ALL)、急性骨髓性(AML)、慢性淋巴细胞性(CLL)、慢性骨髓性(CML)、慢性骨髓性单核细胞性(CMML)、儿童型白血病)、肺癌(例如，非小细胞、小细胞)、肺类癌肿瘤、淋巴瘤、皮肤淋巴瘤、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、脊髓发育不良综合征、鼻腔癌、副鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、儿童中的非霍奇金氏淋巴瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、阴茎癌、垂体肿瘤、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤(例如，成年型软组织癌)、皮肤癌(例如，基底鳞状细胞、黑色素瘤、默克尔细胞)、小肠癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌、华氏巨球蛋白血症或威尔姆氏肿瘤(Wilms tumor)。
在某些方面，两种或更多种抗糖基化PD-L1抗体的组合被配制于药学上可接受的组合物中。在进一步方面，所述抗体全身性或肠胃外施用。在具体方面，所述抗体静脉内、皮内、肿瘤内、肌肉内、腹膜内、皮下、鞘内或局部施用。
在一个方面，提供了治疗患有癌症或肿瘤、特别是在癌症或肿瘤细胞表面上表达PD-L1的癌症或肿瘤的个体的方法。这种方法包括向有需要的个体施用有效量的两种或更多种不同的抗糖基化PD-L1抗体的组合，以抑制或阻断PD-L1与PD-1的相互作用，防止免疫抑制并促进个体的效应子T淋巴细胞杀死癌症或肿瘤细胞。在一个实施方案中，至少一种抗PD-L1抗体是如本文所述的IPD抗体。
在一些方面，所述方法包括向接受用两种或更多种抗糖基化PD-L1抗体的组合治疗的个体施用至少一种额外的不是抗糖基化PD-L1抗体的抗癌疗法或药物。额外的抗癌疗法可以包括、不限于手术疗法、化学疗法、放射疗法、冷冻疗法、激素疗法、免疫疗法或细胞因子疗法。额外的抗癌药物也不旨在受限，并且能够由临床医生、本领域的医学专业人员(例如，肿瘤学家)实际或经验地确定。如本领域技术人员所理解，至少一种额外的抗癌疗法或药物的施用可以在施用抗糖基化PD-L1抗体的组合之前、之后或同时发生。
附图简述
下列图形成本说明书的一部分且被包括以进一步证实本文所述的实施方案的某些方面而非限制性。该专利或申请文件含有至少一个彩图。在请求并支付必需费用后，专利局将提供具有彩图的本专利或专利申请公开的拷贝。
图1A-1D.结合测定。图1A-1D显示如实施例2中所述的结合测定的结果，其中看到STM073 Mab(A)、STM108 Mab(B)和STM004 MAb(C)相对测定对照(即，无PD-1/Fc；无Ab；mIgGAb对照(D))以剂量依赖方式阻断PD-1与表达WT PD-L1的BT549靶细胞的结合。
图2.通过抗糖基化PD-L1抗体的PD-L1的内化。图2显示来自在无血清培养基中培养过夜且经如本文所述的抗糖基化PD-L1抗体(10μg)处理2天的A431细胞的PD-L1蛋白质的Western印迹的结果。呈现印迹的较短时间和较长时间暴露。微管蛋白作为对照呈现。标示为“73”的泳道表示经STM073 MAb处理的A431细胞且显示相对用对照处理(IgG泳道)，STM073处理的细胞中PD-L1的浓度减小。所述结果支持通过如本文所述的抗糖基化PD-L1抗体(诸如STM073)促进或增强PD-L1的内化和降解。
图3A-3E.抗糖基化PD-L1抗体的细胞内化的显现。标记STM073和STM108 MAb且与不同癌细胞类型孵育且使用如实施例3中所述的IncuCyte仪器显现内化。图3A：与STM073孵育的野生型BT549细胞(人类乳腺管癌，乳腺癌细胞系)；图3B：与STM073孵育的分子工程改造以表达PD-L1WT(糖基化)的BT 549细胞；图3C：与STM073孵育的NCI-H226细胞(人类肺癌细胞系，鳞状细胞间皮瘤)；图3D：与STM073孵育的MCF-7细胞(人类乳腺癌细胞系，腺癌)；和图3E：与STM108孵育的表达PD-L1WT(糖基化)的BT 549细胞。
图4A-4C.在由抗糖基化PD-L1抗体结合之后PD-L1的内化和降解。图4A-4C显示与IPD抗糖基化PD-L1抗体孵育的表达PD-L1的细胞的活细胞成像的结果。图4A-4C中，抗PD-L1抗体为缀合至红色荧光染料(pHrodoTM Red(琥珀酰亚胺酯(pHrodoTM Red，SE)，(ThermoFisher Scientific，Waltham，MA))的STM108 MAb。pHrodoTM Red染料缀合物在细胞外无荧光，但在吞噬体中发鲜红色荧光，此使得其为用于从生物粒子吞噬作用至受体内化范围的研究的有用试剂。绿色染色反映用Green DND-26(其为染色经由活细胞成像而成像的活细胞中酸性区室(溶酶体)的细胞渗透性绿色染料)染色的细胞。图4A显示在第一时间点(时间0)，STM108被内化至细胞中，如通过以箭头指示的细胞的深红色细胞内染色所描绘。图4B显示图4A中的时间点后2分钟的时间时描绘于图4A的相同细胞中的减弱的细胞内红色染色。图4C显示在图4A中的时间点后4分钟时缺乏红色细胞内染色，此反映细胞内部STM108抗体和/或抗体-抗原复合物的降解。
图5A-5L.相对于总T细胞的肿瘤细胞中通过抗PD-L1抗体结合的PD-L1的内化。图5A-5L呈现显示IPD抗糖基化PD-L1抗体内化进入至PD-L1阳性肿瘤细胞中，但不会进入至活化或非活化T细胞中的能力的细胞的图像。图5A-5D显示在与以下抗体孵育之后来自周边血液的非活化总T细胞的图像：小鼠IgG抗体对照(图5A)；非内化抗糖基化PD-L1 MAb STM004(图5B)；IPD抗糖基化PD-L1 MAb STM073(图5C)；和IPD抗糖基化PD-L1抗体STM108(图5D)。图5A-5D显示所测试的抗体中无一被内化至非活化总T细胞中。图5E-5H显示在与以下抗体孵育之后从周边血液的活化总T细胞的图像：小鼠IgG抗体对照(图5E)；非内化STM004(图5F)；IPD STM073(图5G)；和IPD STM108(图5H)。对于T细胞活化，将总T细胞与珠粒(例如，惰性、超顺磁性珠粒)混合，与抗CD3和抗CD28抗体(例如，ThermoFisher Scientific，Rochester，NY)以1:1比率共价偶联。图5E-5H显示事实上针对任何所测试抗体未观察到活化总T细胞中的内化。图5I-5L显示在与以下抗体孵育之后NCI-H226细胞(人类肺癌细胞系，鳞状细胞间皮瘤)的图像：小鼠IgG抗体对照(图5I)；非内化抗糖基化PD-L1抗体STM004(图5J)；IPD抗糖基化PD-L1 MAb STM073(图5K)；和IPD抗糖基化PD-L1 MAb STM108(图5L)。图5I-5L显示相比于对照抗体mIgG(图5I)和非内化STM004 MAb，IPD内化STM073和STM108 MAb在与这些细胞孵育之后被内化进入至NCI-H226细胞中，如通过红色细胞内染色所证实。
图6.使用抗糖基化PD-L1抗体的组合减少肿瘤体积。图6显示与对照相比用抗糖基化PD-L1抗体STM004、STM073或STM108或用抗糖基化PD-L1抗体和IPD抗糖基化PD-L1抗体的组合(STM004+STM073或STM004+STM108)治疗癌症的Balb/c小鼠模型中的荷瘤动物的结果，如本文所述。该图呈现用抗人糖基化PD-L1抗体治疗的Balb/c小鼠中源自用人PD-L1转染且在其表面上表达PD-L1的4T1乳腺癌细胞的肿瘤的生长。用小鼠IgG2a抗体对照(100μg)；或用STM004 MAb(100μg)；或用STM073 MAb(100μg)；或用STM108 MAb(100μg)；或用STM004MAb(50μg)和STM073 MAb(50μg)的组合，即，(STM004+STM073)；或用STM004 MAb(50μg)和STM108 MAb(50μg)的组合，即，(STM004+STM108)治疗荷瘤小鼠(每组n＝7只小鼠)。在指定的时间点测量肿瘤并在终点解剖。参见，实施例6。
描述的实施方案的其他方面、特征和优点从以下详述和说明性实例将变得显而易见。
实施方案的详述
表达于肿瘤细胞上的程序性死亡配体-1蛋白质(PD-L1)和表达于免疫效应子细胞(例如T-细胞)上的程序性死亡-1蛋白质(PD-1)之间的胞外相互作用对与肿瘤相关联的免疫逃逸具有显著影响。尽管使用抗PD-1或抗PD-L1抗体取得免疫检查点阻断的临床成功，但PD-L1和PD-1相互作用潜在的调节机制和结构特征在很大水平上仍未知。根据本文所述的发现，已证实PD-L1的N-连接的糖基化将PD-L1蛋白质配体以存在于肿瘤细胞上的方式稳定且还促进且增强其与PD-1的结合，此促进T细胞介导的免疫反应的抑制。相反地，已发现N-连接的糖基化的异常或损失(诸如来自表达于肿瘤细胞上的PD-L1多肽的部分或完全去糖基化)不利地影响(例如减弱或破坏)PD-L1/PD-1相互作用和促进肿瘤细胞上PD-L1的内化和降解，此进而抑制免疫抑制和促进效应子T-细胞的细胞毒性活性和肿瘤细胞的杀死。另外，因为其肿瘤高度表达糖基化PD-L1的患者的存活期较差，所以糖基化PD-L1基于本文中的发现结果被识别为癌症治疗的有效治疗性目标。
本文中提供并描述癌症治疗剂和治疗方法，其涉及使用两种或更多种特异性结合人糖基化-PD-L1的抗体的组合，所述抗体包括IPD抗糖基化PD-L1抗体，其特异性且优先结合糖基化PD-L1且与其相互作用以破坏糖基化PD-L1/PD-1相互作用和使得表达于肿瘤细胞表面上的PD-L1去稳定化，由此抑制免疫抑制和促进针对肿瘤细胞的T-细胞效应子功能以治疗癌症。如本文所述的肿瘤治疗，特别是用抗糖基化PD-L1抗体的组合的肿瘤治疗，更特别是用抗糖基化PD-L1 MAb和IPD抗糖基化PD-L1 Mab的组合的肿瘤治疗，提供相对于对PD-L1的糖基化形式无特异性的抗PD-L1抗体且相对于单独施用的抗糖基化PD-L1抗体增强的免疫抑制作用的抑制效应。在实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体为单克隆抗体，本文中命名为“MAb”。在实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体是人源化的、双特异性的、嵌合的、双互补位的或其组合。
所述方法和组合物包括抗糖基化PD-L1抗体的组合，所述抗糖基化PD-L1抗体结合PD-L1的胞外结构域(ECD)中对应于糖基化位点的表位，尤其PD-L1ECD的N-端和C-端部分中或可替代地结合以阻断或掩蔽那些糖基化位点。在PD-L1蛋白质中糖基化的氨基酸在其胞外结构域中，在PD-L1的位置35、192、200和219处，如本文SEQ ID NO:1中所编号。本文所述的抗糖基化PD-L1抗体中的某些为IPD抗糖基化PD-L1抗体，因为其减少、阻断或抑制PD-L1与PD-1的结合且还促进PD-L1内化和降解以减小表达于肿瘤细胞上的PD-L1的浓度。在实施方案中，所述IPD抗糖基化PD-L1抗体结合非线性、构象表位。另外但不希望受理论约束，抗糖基化PD-L1抗体结合含有糖基化氨基酸的表位或在三维空间中接近糖基化氨基酸；此类糖基化氨基酸据信尤其参与PD-L1/PD-1相互作用且还参与维持肿瘤细胞表面上的PD-L1。不受理论约束，糖基化PD-L1的ECD N-端内与N35相关联的聚糖结构可包含或贡献于由PD-1蛋白质识别并结合并在PD-1/PD-L1相互作用中具有重要作用的糖基化PD-L1蛋白质的功能性结构或构象。通过结合在PD-L1ECD的N-端区域中包含位置35的氨基酸的表位或接近位置35的表位，所述IPD抗糖基化PD-L1抗体掩蔽糖基化PD-L1蛋白质的可尤其参与PD-L1/PD-1相互作用的结合位点或区域。通过结合，或通过结合、掩蔽PD-L1ECD的C-端区域中的包含糖基化氨基酸残基(N192、N200和N219)的氨基酸，所述的IPD抗糖基化PD-L1抗体有效掩蔽糖基化PD-L1蛋白质的可尤其参与肿瘤细胞表面上PD-L1的稳定化的结合位点或区域，由此促进PD-L1内化和降解且减小肿瘤细胞上PD-L1的水平。
本文所述的IPD抗糖基化PD-L1抗体可结合包含或掩蔽PD-L1 ECD的N-端和C-端区域两者中的氨基酸，具体而言非线性、构象表位内的氨基酸的表位，导致抗糖基化PD-L1抗体掩蔽或隐藏PD-L1蛋白质的参与PD-L1/PD-1相互作用和肿瘤细胞表面上PD-L1的稳定化的那些含聚糖残基或区域。此类抗糖基化PD-L1抗体抑制或阻断PD-L1与PD-1结合且还降低减小肿瘤细胞表面上PD-L1的水平，使得较少的PD-L1分子可用于结合PD-1。抗糖基化PD-L1抗体当在与效应子T-细胞和携带PD-1的肿瘤或癌细胞的混合物中提供时促进T-细胞杀死此类肿瘤或癌细胞，并不受PD-1/PD-L1相互作用的免疫抑制。因此，提供了包含两种或更多种抗糖基化PD-L1抗体的组合的组合物和方法，其中一种抗糖基化PD-L1抗体结合包含N35的表位，或其中结合阻断或掩蔽PD-L1的糖基化N35，且另一种抗糖基化PD-L1抗体结合包含PD-L1(SEQ ID NO:1)的糖基化N192、N200和/或N219的表位或阻断或掩蔽PD-L1(SEQ IDNO:1)的糖基化N192、N200和/或N219。
本文所述的实施例提供显示如本文所述的抗糖基化PD-L1抗体在结合糖基化PD-L1相对于未糖基化PD-L1方面显著差异(例如，2至3倍)的实验结果。在实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体表现出相对于未糖基化PD-L1而言在纳摩尔范围(例如，约5-20nM或约10-20nM)内的对糖基化PD-L1的结合亲和力。实施例进一步显示抗糖基化PD-L1抗体阻断PD-1/PD-L1结合(实施例2，图1A-1D)；内化抗糖基化PD-L1抗体促进PD-L1的内化和降解，并且内化抗糖基化PD-L1抗体自身内化(实施例3和4；图2，图3A-3E和图4A-4C)；抗糖基化PD-L1抗体被表达PD-L1的肿瘤细胞内化，但不被T细胞(活化的或未活化的)内化(实施例5，图5A-5L)；并且，相对于非特异性对照抗体，在4T1小鼠肿瘤模型中施用于荷瘤小鼠的抗糖基化PD-L1抗体的组合比单独施用的抗糖基化PD-L1抗体在更大程度上减小肿瘤体积(实施例6，图6)。
定义
如本文所用，术语“一”或“一个”可意指一个或多个。
如本文所用，除非特别指出仅指替代物或替代物互相排斥，否则术语“或”意指“和/或”，尽管本公开支持仅指替代物和“和/或”的定义。
如本文所用，术语“另一”意指至少第二或更多。
如本文所用，术语“约”用于指示数值包括用于测定该数值的装置、方法中的固有误差、或研究个体之间的误差。
如本文所用，除非另作指明，否则术语“程序性死亡配体-1”或“PD-L1”是指多肽(本文中，术语“多肽”和“肽”可互换使用)或来自任何脊椎动物来源，包括哺乳动物，诸如灵长类(例如，人类、食蟹猴(cyno))、狗和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)的任何天然PD-L1，且在某些实施方案中，包括各种PD-L1同种型、相关的PD-L1多肽(包括其SNP变体)。
下文提供人PD-L1的示例性氨基酸序列PD-L1(UniProtKB/Swiss-Prot:Q9NZQ7.1；GI:83287884)：
在SEQ ID NO:1中，氨基端氨基酸1-18构成人PD-L1蛋白质的信号序列。相应地，成熟人PD-L1蛋白质由SEQ ID NO:1的氨基酸19-290组成。
针对包含本文所述的多肽和肽的氨基酸残基和这些氨基酸残基的保守性取代的缩写显示于下表1中。含有一个或多个保守性氨基酸取代的多肽或本文所述多肽的保守修饰变体是指其中初始或天然存在的氨基酸被具有类似特征(例如，类似电荷、疏水性/亲水性、侧链尺寸、主链构象、结构和刚性等)的其他氨基酸取代的多肽。因此，可通常在不改变多肽的生物活性、功能或其他所需性质(诸如其对抗原的亲和力或其特异性)下进行这些氨基酸改变。一般而言，多肽的非必需区中的单个氨基酸取代基本上不改变生物活性。此外，结构或功能相似的氨基酸取代不太可能会破坏多肽的生物活性。
表1.氨基酸残基和保守性氨基酸取代的实例
本文中，术语“抗体”、“免疫球蛋白”和“Ig”在广义上可互换使用，且具体而言涵盖例如个别抗PD-L1抗体，诸如本文所述的单克隆抗体，(包括激动剂、拮抗剂、中和抗体、全长或完整单克隆抗体、抗体的维持抗原结合活性的肽片段)、抗未糖基化PD-L1抗体和抗糖基化PD-L1抗体；具有多表位或单表位特异性的抗PD-L1抗体组合物、多克隆或或单价抗体、多价抗体、由至少两个完整抗体形成的多特异性抗体(例如，双特异性抗体或双互补位抗体，只要它们表现出所需生物活性即可)、单链抗PD-L1抗体和抗PD-L1抗体的片段，如下文所述。抗体可以是人类、人源化、嵌合和/或亲和力成熟抗体。抗体可来自其他物种，例如，小鼠、大鼠、兔等。术语“抗体”意欲包括能够结合特异性分子抗原的多肽的免疫球蛋白类别中的B细胞的多肽产物。抗体通常由两对相同的多肽链组成，其中每对具有一条重链(约50-70kDa)和一条轻链(约25kDa)；且其中所述重链和轻链的氨基端部分包括约100个至约130个或更多个氨基酸的可变区且每一链的羧基端部分包括恒定区(参见，AntibodyEngineering,Borrebaeck(编)，1995，第二版，Oxford University Press.；Kuby,1997,Immunology，第三版，W.H.Freeman and Company,New York)。在具体实施方案中，由本文提供的抗体所结合的特异性分子抗原包括PD-L1多肽、PD-L1肽片段或PD-L1表位。PD-L1多肽、PD-L1肽片段或PD-L1表位可未糖基化或被糖基化。在一个具体实施方案中，PD-L1多肽、PD-L1肽片段或PD-L1表位被糖基化。可例如通过免疫测定法、Biacore或本领域技术人员已知的其他技术鉴定结合PD-L1抗原的抗体或其肽片段。当抗体或其片段特异性结合PD-L1抗原时，其以比结合任何交叉反应性抗原更高的亲和力(如利用实验技术，诸如放射免疫测定(RIA)和酶联免疫吸附测定(ELISA)所测定)特异性结合PD-L1抗原。通常，特异性或选择性结合反应将为背景信号或噪声的至少两倍，和更通常为背景信号或噪声的超过5-10倍。关于抗体特异性的讨论，参见，例如，Fundamental Immunology第二版，Paul编，1989，RavenPress，New York，第332-336页。
本文提供的抗体包括但不限于合成抗体、单克隆抗体、重组产生的抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人类抗体、人源化抗体、骆驼抗体(camelized antibodies)、嵌合抗体、胞内抗体(intrabodies)、抗独特性(抗-Id)抗体和任何上述的功能性片段(例如，抗原结合片段，诸如PD-L1结合片段)。结合片段是指抗体重链或轻链多肽的一部分，诸如肽部分，其保留衍生出该片段的抗体的部分或全部结合活性。功能性片段(例如，抗原结合片段，诸如PD-L1结合片段)的非限制性实例包括单链Fv(scFv)(例如，包括单特异性、双特异性、双互补位、单价(例如，具有单一VH或VL结构域)或二价等)、Fab片段、F(ab’)片段、F(ab)2片段、F(ab’)2片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、Fd片段、Fv片段、双功能抗体、三功能抗体、四功能抗体和微型抗体(minibody)。具体而言，本文提供的抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，例如，含有结合PD-L1抗原(具体而言，糖基化PD-L1抗原)的抗原结合位点的抗原结合结构域或分子(例如，抗PD-L1抗体的一个或多个互补决定区(CDR))。此类抗体片段的描述可见于例如Harlow和Lane,1989,Antibodies:A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York；Molec.Biology andBiotechnology:A Comprehensive Desk Reference,Myers(编),New York:VCHPublisher,Inc.；Huston等人,1993,Cell Biophysics,22:189-224；Plückthun和Skerra,1989,Meth.Enzymol.,178:497-515以及Day,E.D.,1990,Advanced Immunochemistry，第二版，Wiley-Liss,Inc.,New York,NY。本文提供的抗体可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)、或任何亚类别(例如，IgG2a和IgG2b)。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体为完全人类抗体，诸如完全人类单克隆抗PD-L1抗体。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体为人源化抗体，诸如人源化单克隆抗PD-L1抗体。在某些实施方案中，本文提供的抗体为IgG抗体、或其类别(例如，人类IgG1或IgG4)或亚类别，具体而言，IgG1亚类别抗体。
四链抗体单元为由两条相同轻(L)链和两条相同重(H)链组成的异种四聚糖蛋白。在IgG的情况下，四链(未还原)抗体单元的分子量通常为约150,000道尔顿。各L链通过一个共价二硫键与H链连接，而两条H链通过一个或多个二硫键彼此连接，这取决于H链同种型。各H和L链还具有有规律间隔的链内双硫桥。在N-端，各H链具有可变结构域(VH)，随后就α和γ链各链而言接着三个恒定结构域(CH)和就μ和ε同种型而言接着四个CH结构域。各L链在N-端具有可变结构域(VL)，并在其羧基端接着一个恒定结构域(CL)。VL结构域与VH结构域对齐，且CL结构域与重链的第一恒定结构域(CH1)对齐。据信，特定氨基酸残基在轻链和重链可变结构域之间形成接口。VH和VL的配对可一起形成单一抗原结合位点(尽管某些VH和VL结构域可结合与各自对应物VH或VL无关的抗原)。本领域技术人员理解免疫球蛋白分子的基本结构。例如，不同类别抗体的结构和性质可见于Stites，Daniel P.等人，1994，Basic andClinical Immunology，第8版，Appleton&Lange，Norwalk，CT，第71页，第6章。
如本文所用，术语“抗原”或“靶抗原”为抗体可选择性结合的预定分子。靶抗原可以是多肽、肽、碳水化合物、核酸、脂质、半抗原或其他天然存在的化合物或合成化合物。在实施方案中，靶抗原为小分子。在某些实施方案中，靶抗原为多肽或肽，优选糖基化PD-L1多肽。
如本文所用，术语“抗原结合片段”、“抗原结合结构域”、“抗原结合区”和类似术语是指抗体的包括与抗原相互作用且为作为结合剂的抗体赋予其针对抗原的特异性和亲和力的氨基酸残基的部分(例如，抗体的CDR为抗原结合区)。抗原结合区可衍生自任何动物物种，诸如啮齿动物(例如，兔、大鼠或仓鼠)和人类。在具体实施方案中，抗原结合区可源自人类。
“分离的”抗体基本上不含来自细胞或组织来源的细胞物质或其他污染性蛋白质和/或衍生出抗体的其他污染组分，或当化学合成时基本上不含化学前体或其他化学品。语句“基本上不含细胞物质”包括抗体从其所分离或重组产生的细胞的细胞组分分离的抗体制剂。因此，基本上不含细胞物质的抗体包括具有小于约30％、25％、20％、15％、10％、5％或1％(以干重计)的异种蛋白质(本文中也称为“污染性蛋白质”)的抗体制剂。在某些实施方案中，当重组产生抗体时，其基本上不含培养基，例如，培养基表示小于约20％、15％、10％、5％或1％的蛋白质制剂的体积。在某些实施方案中，当抗体通过化学合成产生时，其基本上不含化学前体或其他化学品，例如，其从参与蛋白质合成的化学前体或其他化学品分离。相应地，除了目标抗体之外，此类抗体制剂具有小于约30％、25％、20％、15％、10％、5％或1％(以干重计)的化学前体或化合物。污染组分也可包括但不限于将干扰抗体的治疗用途的物质，且可包括酶、激素和其他蛋白性或非蛋白性溶质。在某些实施方案中，抗体被纯化，(1)至大于或等于95重量％的抗体，如通过Lowry方法(Lowry等人,1951,J.Bio.Chem.,193:265-275)所测定，诸如95重量％、96重量％、97重量％、98重量％或99重量％，(2)至足以通过使用旋杯式测序仪得到N-端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或(3)至在还原或非还原条件下通过SDS-PAGE利用考马斯蓝或银染色的均质性。分离的抗体还包括重组细胞内的原位抗体，因为该抗体的天然环境的至少一种组分将不存在。分离的抗体通常通过至少一个纯化步骤制备。在一些实施方案中，分离本文提供的抗体。
如本文所用，术语“结合(binds)”或“结合(binding)”是指分子之间的相互作用，包括，例如，形成复合物。说明性地，此类相互作用包括非共价相互作用，包括氢键、离子键、疏水相互作用和/或范德华相互作用。复合物也可包括两个或更多个分子通过共价或非共价键、相互作用或力保持在一起的结合。抗体的单一抗原结合位点和其靶(抗原)分子(诸如PD-L1)上的表位之间的总非共价相互作用的强度为抗体或功能性片段对该表位的亲和力。抗体对单价抗原的缔合(kon)与解离(koff)的比(kon/koff)为缔合常数Ka，其为亲和力的量度。抗体和抗原的不同复合物的Ka值不同且取决于kon和koff两者。可利用本文提供的任何方法或本领域技术人员已知的任何其他方法测定本文提供的抗体的缔合常数Ka。在一个结合位点的亲和力并非总是反映抗体和抗原之间的相互作用的真实强度。当含有多个抗原决定簇的复合抗原(诸如糖基化PD-L1)与含有多个结合位点的抗体接触时，抗体与抗原在一个位点处的相互作用将增加在第二结合位点处相互作用的概率。多价抗体和抗原之间的此类多重相互作用的强度被称为亲合力(avidity)。抗体的亲合力可以是比其个别结合位点的亲和力更好的其结合能力的量度。例如，高亲合力可补偿如有时针对五聚IgM抗体所发现的低亲和力，所述五聚IgM抗体可具有低于IgG的亲和力，但IgM的由于其多价性所致的高亲合力使其可有效地结合抗原。
“结合亲和力”通常是指分子(例如，结合蛋白质，诸如抗体)的单一结合位点和其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总计强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗体和抗原或受体和配体)之间的1:1相互作用的固有结合亲和力。结合分子X对其结合配偶体Y的亲和力可通常由解离常数(Kd)表示。可通过本领域中已知的常见方法测量亲和力，包括本文描述的那些。低亲和力抗体通常缓慢地结合抗原，且倾向于容易解离，而高亲和力抗体通常更快速结合抗体，且倾向于较长久保持与抗原结合。本领域中已知多种测量结合亲和力的方法，出于本公开的目的可使用其中任一种。特定说明性实施方案包括下列：在一个实施方案中，“Kd”或“Kd值”通过本领域中已知的测定法，例如，通过结合测定法来测定。可在放射性标记的抗原结合测定(RIA)，例如，利用目标抗体的Fab部分和其抗原进行(Chen等人,1999,J.Mol.Biol.,293:865-881)，来测量Kd。也可通过利用表面等离振子共振(SPR)测定(Biacore)，使用例如BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore,Inc.，Piscataway，NJ)，或通过生物层干涉仪测定(BLI)，使用例如OctetQK384系统(ForteBio，Menlo Park,CA)，或通过石英晶体微量天平(QCM)技术，来测量Kd或Kd值。也可用上文所述的相同表面等离振子共振或生物层干涉仪测定技术，使用例如BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore,Inc.，Piscataway，NJ)或OctetQK384系统(ForteBio，Menlo Park,CA)测定“缔合速率”或“结缔的速率”或“缔合速率”或“kon”。
术语“抗PD-L1抗体”、“特异性结合PD-L1的抗体”、或“对PD-L1特异性的抗体”、“特异性结合PD-L1表位的抗体”、“选择性结合PD-L1的抗体”、“选择性结合PD-L1表位的抗体”、“优先结合PD-L1的抗体”和类似术语在本文中可互换使用，且是指能够尤其相比未糖基化PD-L1或PD-L1的糖基化突变体以足够的亲和力和特异性结合PD-L1(即，糖基化或WT PD-L1)的抗体。如本文所提供的抗糖基化PD-L1抗体的“优先结合”可基于定量抗体与表达于细胞上的PD-L1(即，糖基化PD-L1多肽、或PD-L1WT、或糖基化PD-L1)的结合相对于适当对照(诸如与未糖基化或变体PD-L1(例如，4NQ PD-L1)结合)，或与诸如本文中例如实施例1所述的表达PD-L1的未糖基化或变体形式(例如，4NQ PD-L1)的细胞，例如，分子工程改造细胞、细胞系或肿瘤细胞分离物结合的荧光强度来确定或定义。所述的抗糖基化PD-L1抗体优先与糖基化PD-L1多肽或与表达糖基化PD-L1(PD-L1WT)的细胞的结合由通过细胞流式细胞术评估的测量的荧光结合强度(MFI)值表示，其相比于抗体与未糖基化或突变体糖基化PD-L1多肽或未糖基化或突变体表达糖基化PD-L1的细胞的结合相比为至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍或更大倍，且其中待测定的抗体可直接或间接通过荧光标记或标记物检测。在一个实施方案中，该抗体直接用荧光标记物(诸如FITC)标记。在实施方案中，优先或选择性结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1抗体显示比相同抗体针对结合本文所述的未糖基化PD-L1或PD-L1糖基化变体(例如4NQ PD-L1，其为未糖基化)的MFI值大1.5倍至25倍、或2倍至20倍、或3倍至15倍、或4倍至8倍、或2倍至10倍、或2倍至5倍或更多倍的MFI值。意欲包括所有前述之间和等于其的倍数-荧光强度值。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体特异性且优先结合糖基化PD-L1多肽，诸如糖基化PD-L1抗原、肽片段、或表位(例如，人类糖基化PD-L1，诸如人类糖基化PD-L1多肽、抗原或表位)。特异性结合PD-L1(例如，糖基化或野生型人PD-L1)的抗体可结合PD-L1的胞外结构域(ECD)或衍生自ECD的肽。特异性结合PD-L1抗原(例如，人PD-L1)的抗体可与相关抗原(例如，食蟹猴(cyno)PD-L1)交叉反应。在一个优选实施方案中，特异性结合PD-L1抗原的抗体不与其他抗原交叉反应。可例如通过免疫荧光结合测定、免疫测定方法、免疫组织化学测定方法、Biacore或本领域技术人员已知的其他技术鉴定特异性结合PD-L1抗原的抗体。
在某些其他实施方案中，如本文所述的结合PD-L1的抗体具有小于或等于20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM，和/或大于或等于0.1nM的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体结合PD-L1的表位，其在来自不同物种的PD-L1蛋白质中(例如，在人类和食蟹猴PD-L1之间)是保守的。当抗体结合PD-L1抗原时，抗体以高于任何与交叉反应性抗原的亲和力特异性结合PD-L1抗原，如使用实验技术，诸如放射免疫测定(RIA)和酶联免疫吸收测定(ELISA)所测定。通常，特异性或选择性反应是背景信号或噪声的至少两倍，且可以是背景的超过10倍。关于抗体特异性的讨论，参见，例如，Fundamental Immunology(第二版)，Paul编，1989，Raven Press，New York，第332-336页。在此类实施方案中，抗体与“非靶”蛋白质结合的程度小于抗体与其特定靶蛋白质的结合的约10％，例如，如通过荧光活化的细胞分选(FACS)分析或放射免疫沉淀(RIA)所测定。
如本文所述的抗PD-L1抗体包括抗糖基化PD-L1抗体或抗野生型PD-L1抗体，其中野生型PD-L1蛋白质被糖基化，其对糖基化PD-L1有特异性。在一些实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体结合PD-L1的线性糖基化基序。在一些实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体结合呈三维的糖基化基序中的一个或多个附近的肽序列。在一些实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体相对于未糖基化PD-L1选择性地结合PD-L1的一个或多个糖基化基序或具有PD-L1的糖基化基序的PD-L1肽。在其他实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体结合包含PD-L1蛋白质的氨基酸的线性表位。在一些实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体选择性地结合PD-L1的一个或多个糖基化基序，其中所述糖基化基序包含SEQ ID NO:1的PD-L1多肽的N35、N192、N200和/或N219。在其他实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体结合包含PD-L1蛋白质的氨基酸的构象(非线性)表位。在一些实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体或其结合部分以这样的Kd结合糖基化PD-L1，所述Kd低于相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd的至少30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％。在某些实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体或其结合部分以相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd的小于50％的Kd结合糖基化PD-L1。在一些实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体或其结合部分以相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd的小于1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％的Kd结合糖基化PD-L1。在其他方面，抗糖基化PD-L1抗体或其结合部分以比相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd小至少5-10倍的Kd结合糖基化PD-L1。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体或其结合部分以比相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd小至少10倍的Kd结合糖基化PD-L1。在某些实施方案中，抗体以比通过结合未糖基化PD-L1表现出的Kd大不超过1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的Kd结合糖基化PD-L1。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体或其结合部分以纳摩尔亲和力，诸如5-20nM或10-20nM(包括下限和上限值)的亲和力结合糖基化PD-L1。
在一个实施方案中，在如实施例1中所述的细胞流式细胞术结合测定中，该抗体表现出表示为与针对结合表达未糖基化PD-L1的细胞的MFI相比大1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或至少1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍，且在某些实施方案中，比与表达未糖基化PD-L1的细胞的结合的MFI大不超过10倍、20倍、50倍或100倍的针对表达WT PD-L1的细胞的MFI的结合。
如本文中提及抗体时所用，术语“重(H)链”是指约50-70kDa的多肽链，其中氨基端部分包括约115至130个或更多个氨基酸的可变(V)区(也称为V结构域)和包括恒定(C)区的羧基端部分。恒定区(或恒定结构域)可以是五种不同类型(例如，同种型)之一，基于重链恒定区的氨基酸序列，这五种类型被称为alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)和mu(μ)。不同重链的大小不同：α、δ和γ含有约450个氨基酸，而μ和ε含有约550个氨基酸。当与轻链组合时，重链的这些不同类型产生抗体的五种众所周知的类别(例如，同种型)，即，分别IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，包括IgG的四种亚类别，即，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。抗体重链可以是人类抗体重链。
如本文中提及抗体时所用，术语“轻(L)链”是指约25kDa的多肽链，其中该氨基端部分包括约100至约110个或更多个氨基酸的可变结构域和包括恒定区的羧基端部分。轻链(V和C结构域两者)的近似长度为211至217个氨基酸。轻链有两种不同类型，基于恒定结构域的氨基酸序列，称为kappa(κ)和lambda(λ)。轻链氨基酸序列是本领域中众所周知的。抗体轻链可以是人类抗体轻链。
如本文所用，术语“可变(V)区”或“可变(V)结构域”是指抗体多肽的轻(L)链或重(H)链的通常位于L或H链的氨基端的部分。H链V结构域具有约115至130个氨基酸的长度，而L链V结构域为约100至110个氨基酸长。所述H和L链V结构域用于各特定抗体针对其特定抗原的结合和特异性。H链的V结构域可称为“VH”。L链的V区可称为“VL”。术语“可变”是指不同抗体中V结构域的某些片段的序列广泛不同的事实。尽管V结构域介导抗原结合且定义特定抗体对其特定抗原的特异性，但可变性并非均匀地分布在抗体V结构域的110个氨基酸范围。反而，V结构域由通过各约9-12个氨基酸长的更可变(例如，极端可变性)的更短区(称为“超变区”或“互补决定区”(CDR))间隔的约15-30个氨基酸的不太变化(例如，相对恒定)的延伸(称为框架区(FR))组成。抗体H链和L链的V结构域各包含由被称为三个超变区(其形成环连接，和在一些情况下形成β片状结构的一部分)连接的四个FR(其主要采用β片状构型)。各链中的超变区通过FR紧密相邻地保持在一起，且与来自其他链的超变区有助于形成抗体的抗原结合位点(参见，例如，Kabat等人，1991，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service，NationalInstitutes ofHealth，Bethesda，MD))。所述C结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但表现出各种效应子功能，诸如抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。不同抗体类别或类型中所述V结构域的序列广泛不同。序列的可变性集中在CDR中，所述CDR主要负责抗体与抗原的相互作用。在具体实施方案中，抗体的可变结构域为人类或人源化可变结构域。
如本文所用，术语“互补决定区”、“CDR”、“超变区”、“HVR”和“HV”可互换使用。“CDR”是指抗体VHβ-片状框架的非框架区域内三个超变区(H1、H2或H3)之一，或指抗体VLβ-片状框架的非框架区域内三个超变区(L1、L2或L3)之一。当用于本文中时，该术语是指在序列上超变和/或形成结构限定环的抗体V结构域的区域。一般而言，抗体包含六个超变区：VH结构域中三个(H1、H2、H3)和VL结构域中三个(L1、L2、L3)。因此，CDR通常为穿插于V结构域的框架区序列中的高度可变序列。“框架”或“FR”残基为侧接CDR的那些可变区残基。FR残基存在于例如嵌合抗体、人源化抗体、人类抗体、结构域抗体、双抗体、线性抗体、双特异性抗体或双互补位抗体中。
许多超变区划定在使用中，并涵盖于本文中。CDR区是本领域技术人员众所周知和已由例如Kabat定义为抗体V结构域中最超变性的区域(Kabat等人，1977,J.Biol.Chem.,252:6609-6616；Kabat,1978,Adv.Prot.Chem.,32:1-75)。Kabat CDR基于序列可变性并且是最常用的(参见，例如，Kabat等人,1991,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD)。CDR区序列也已结构上由Chothia定义为并非保守β-片状框架的部分且因此能够采用不同构象的那些残基(Chothia等人，1987,J.Mol.Biol.,196:901-917)。相反，Chothia是指结构环的位置。Chothia CDR-H1环的末端当使用Kabat CDR编号惯例编号时根据环长度在H32和H34之间变化(这是因为Kabat编号方案在H35A和H35B处放入插入；如果既不存在35A也不存在35B，则环末端在32；如果仅存在35A，则环末端在33；如果35A和35B两者均存在，则环末端在34)。本领域中众所周知两种编号系统和术语。
最近，已开发通用编号系统且被广泛采用，ImMunoGeneTics(IMGT)Information(Lefranc等人,2003,Dev.Comp.Immunol.,27(1):55-77)。IMGT为特定于人类和其他脊椎动物的免疫球蛋白(Ig)、T细胞受体(TR)和主要组织相容性复合体(MHC)的整合性信息系统。本文中，CDR在就氨基酸序列和在轻链或重链内的位置方面提及。通过使用根据结构特征、CDR和框架残基将可变结构域序列对齐并容易被鉴定的编号系统，免疫球蛋白V结构域的结构中CDR的“位置”在物种间是保守的且存在于称为环的结构中。该信息可用于移植和替换来自一个物种的免疫球蛋白的CDR残基进入来自通常人类抗体的受体框架。Honegger等人,2001,J.Mol.Biol.309:657-670已开发额外编号系统(AHon)。本领域技术人员众所周知编号系统(包括例如Kabat编号和IMGT独特编号系统)之间的一致性(参见，例如，Kabat,同上；Chothia等人,1987,J.Mol.Biol.,196:901-917,同前述；Martin,2010,Antibody Engineering,第2卷，第3章，Springer Verlag；和Lefranc等人,1999,Nuc.AcidsRes.,27:209-212)。
也已通过AbM、Contact和IMGT定义CDR区序列。AbM超变区代表Kabat CDR和Chothia结构环之间的折衷方案，并且由Oxford Molecular的AbM抗体模型软件(参见，例如，Martin,同上)所采用。“contact”超变区基于可用的复杂晶体结构的分析。来自这些超变区或CDR中每一者的残基如下所示。
CDR区序列的示例性划定说明于下表2中。已通过对许多结构的比较来确定典型抗体可变区内CDR的位置(Al-Lazikani等人,1997,J.Mol.Biol.,273:927-948；Morea等人,2000,Methods,20:267-279)。因为不同抗体中超变区中残基的数量不同，所以相对于典型位置的额外残基常规上以靠近典型可变区编号方案(Al-Lazikani等人，同上)中的残基编号的a、b、c等编号。本领域技术人员类似地众所周知此类命名法。
表2.CDR区序列的示例性划定
“亲和力成熟”抗体是在其一个或多个HVR中具有一个或多个改变(例如，氨基酸序列改变，包括变化、添加和/或缺失)的抗体，相比于不具有那些改变的亲本抗体，所述改变导致抗体对抗原的亲和力改善。在某些实施方案中，亲和力成熟抗体将对靶抗原(诸如糖基化PD-L1)具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。亲和力成熟抗体可由本领域中已知的程序制备。对于综述，参见Hudson和Souriau,2003,Nature Medicine 9:129-134；Hoogenboom,2005,Nature Biotechnol.,23:1105-1116；Quiroz和Sinclair,2010,Revista IngeneriaBiomedia 4:39-51。
“嵌合”抗体是其中H链和/或L链的一部分(例如V结构域)与源自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的对应氨基酸序列相同或同源，而所述链的其余部分(例如C结构域)与源自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的对应序列相同或同源的抗体和此抗体的片段，只要其表现出所需生物活性(参见，例如，美国专利号4,816,567；和Morrison等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855)。
“人源化”非人类(例如鼠)抗体是指人类免疫球蛋白序列的抗体(例如受体抗体)的嵌合形式，其中天然CDR残基被来自非人类物种(例如供体抗体)(诸如具有针对抗原结合和相互作用的所需特异性、亲和力和能力的小鼠、大鼠、兔或非人类灵长类)的对应CDR的残基替换。在一些情况下，人类免疫球蛋白的一个或多个FR区残基也可被对应非人类残基替换。另外，人源化抗体可包含未见于受体抗体或供体抗体中的残基。为了进一步优化人源化抗体的性能，可以进行这些修饰。也可在CDR区中进行一种或多种修饰以改善和优化例如亲和力成熟抗体的人源化抗体的性能。人源化抗体H链或L链可包含实质上所有至少一个或多个可变区，其中所有或实质上所有CDR对应于非人类免疫球蛋白的那些CDR且所有或实质上所有FR为人类免疫球蛋白序列的那些FR。在某些实施方案中，人源化抗体将包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人类免疫球蛋白的Fc。尽管为本领域技术人员已知，但如果需要，则更多细节可见于例如Jones等人,1986,Nature,321:522-525；Riechmann等人,1988,Nature,332:323-329；和Presta,1992,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-596；Carter等人,1992,Proc.Natl.Acd.Sci.USA,89:4285-4289；和美国专利号：6,800,738(在2004年10月5日颁予)、6,719,971(在2005年9月27日颁予)、6,639,055(在2003年10月28日颁予)、6,407,213(在2002年6月18日颁予)和6,054,297(在2000年4月25日颁予)。
术语“人类抗体”和“完全人类抗体”在本文中可互换使用，且是指具有氨基酸序列的抗体，所述氨基酸序列对应于人所产生和/或已利用由本领域技术人员实践的制备人类抗体的任何技术制造的抗体的氨基酸序列。具体地，人类抗体的该定义排除包含非人类抗原结合残基的人源化抗体。可利用本领域中已知的各种技术，包括噬菌体展示文库(Hoogenboom和Winter,1991,J.Mol.Biol.,227:381；Marks等人,1991,J.Mol.Biol.,222:581)和酵母展示文库(Chao等人,2006,Nature Protocols,1:755-768)，产生人类抗体。同样可用于制备人类单克隆抗体的是Cole等人,1985,Monoclonal Antibodies and CancerTherapy,Alan R.Liss,p.77；Boerner等人,1991,J.Immunol.,147(1):86-95中描述的方法。也可参见van Dijk和van de Winkel,2001,Curr.Opin.Pharmacol.,5:368-74。可通过将抗原施用于内源Ig基因座已失效且已经基因修饰成具有编码人类抗体的人类免疫球蛋白基因的转基因动物(例如小鼠)来制备人类抗体，使得响应于抗原攻击而产生人类抗体(关于XENOMOUSETM技术，参见，例如，Jakobovits,A.,1995,Curr.Opin.Biotechnol.,6(5):561-6；Brüggemann和Tauss ing,1997,Curr.Opin.Biotechnol.,8(4):455-8；和美国专利号6,075,181和6,150,584)。关于经由人类B-细胞杂交瘤技术产生的人类抗体，也可参见，例如，Li等人,2006,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562。在具体实施方案中，人类抗体包含源自人类的可变区和恒定区。在某些实施方案中，“完全人类”抗PD-L1抗体也可涵盖结合PD-L1多肽且由为人类种系免疫球蛋白核酸序列的天然存在的体细胞变体的核苷酸序列编码的抗体。在一个具体实施方案中，本文所提供的抗PD-L1抗体为完全人类抗体。术语“完全人类抗体”包括具有对应于人类种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区的抗体，如Kabat等人所述(参见Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services，NIH出版号91-3242)。短语“重组人类抗体”包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的人类抗体，诸如使用转染至宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体；从重组组合的人类抗体库分离的抗体；从针对人类免疫球蛋白基因转基因和/或转染色体的动物(例如，小鼠或牛)分离的抗体(参见，例如，Taylor,L.D.等人,1992,Nucl.Acids Res.20:6287-6295)；或通过任何其他涉及将人类免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的方法制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人类抗体可具有源自人类种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区(参见Kabat,E.A.等人，同上)。然而，在某些实施方案中，此类重组人类抗体经受体外诱变(或当使用针对人类Ig序列转基因的动物时，体内体细胞诱变)且因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列为以下序列：尽管衍生自人类种系VH和VL序列且与其相关，但可非天然存在于体内人类抗体种系库中。
如本文所用，术语“表位”为单一抗体分子所结合的抗原分子的表面上的位点或区域，诸如抗原(例如，能够被抗PD-L1或抗糖基化PD-L1抗体的一个或多个抗原结合区结合的PD-L1多肽或糖基化PD-L1多肽)的表面上的局部区域。表位可以是免疫原性的且能够引发动物免疫反应。表位不一定需要是免疫原性的。表位通常由分子(诸如氨基酸或糖侧链)的化学活性表面分组组成且具有特异性三维结构特征和特异性电荷特征。表位可以是线性表位或构象表位。多肽的有助于表位的区域可以是多肽的连续氨基酸，其形成线性表位，或表位可由多肽的两个或更多个非连续氨基酸或区域形成，通常称为构象表位。表位可以是或可以不是抗原的三维表面特征。在某些实施方案中，PD-L1表位是PD-L1多肽的三维表面特征。在其他实施方案中，PD-L1表位是PD-L1多肽的线性特征。在一些实施方案中，PD-L1表位在一个或多个位点处糖基化。一般而言，抗原具有几个或许多不同表位并且可以与许多不同抗体反应。在一个具体实施方案中，如本文所述的抗糖基化PD-L1抗体结合PD-L1(尤其是糖基化PD-L1)的表位，其为构象表位。
当两种抗体在三维空间中识别相同、重叠或相邻表位时，抗体结合“表位”或与参考抗体“基本上相同的表位”或“相同的表位”。用于确定两种抗体在三维空间中是否结合相同、重叠或相邻表位的最广泛使用且快速的方法是竞争测定，其可例如使用标记抗原或标记抗体以多种不同形式配置。在一些测定中，将抗原固定于96-孔板上，或在细胞表面上表达，且未标记抗体阻断标记抗体与抗原结合的能力使用可检测信号(例如，放射性、荧光或酶标记物)测量。另外，可确定抗体的表位然后使用本领域中已知并例如于本文实施例8中描述的方法进行比较。
术语“竞争”在用于竞争PD-L1靶蛋白质或其肽上的相同表位或结合位点的抗PD-L1抗体情况下时意指如通过测定法确定的竞争，在所述测定法中，所研究的抗体防止、阻断或抑制参考分子(例如，参考配体或参考抗原结合蛋白质，诸如参考抗体)与共同抗原(例如，PD-L1或其片段)特异性结合。多种类型的竞争结合测定可用于确定测试抗体是否与参考抗体竞争结合PD-L1(例如，人PD-L1或人类糖基化PD-L1)。可采用的测定的实例包括固相直接或间接放射免疫测定(RIA)；固相直接或间接酶免疫测定(EIA)；夹心竞争测定(参见，例如，Stahli等人,1983,Methods in Enzymology 9:242-253)；固相直接生物素-抗生物素蛋白(Avidin)EIA(参见，例如，Kirkland等人,1986,J.Immunol.137:3614-3619)；固相直接标记测定；固相直接标记夹心测定(参见，例如，Harlow和Lane,1988,Antibodies,ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Press)；固相直接标记RIA，其使用标记的碘(1125标记)(参见，例如，Morel等人,1988,Molec.Immunol.25:7-15)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(参见，例如，Cheung等人,1990,Virology 176:546-552)；和直接标记RIA(Moldenhauer等人,1990,Scand.J.Immunol.32:77-82)。通常，此测定涉及使用结合至固体表面的纯化抗原(例如，PD-L1，诸如人PD-L1或糖基化PD-L1)、或携带未标记测试抗原结合蛋白质(例如，测试抗PD-L1抗体)或标记的参考抗原结合蛋白质(例如，参考抗PD-L1抗体)中任一种的细胞。竞争性抑制可通过测定在已知量的测试抗原结合蛋白质存在的情况下结合至固体表面或细胞的标记物的量来测定。通常，测试抗原结合蛋白质以过量存在。通过竞争测定鉴定的抗体(竞争抗体)包括与参考抗体结合相同的表位的抗体和/或结合与由参考抗体所结合的表位足够接近的相邻表位(从而发生空间位阻)的抗体。本文中描述关于用于确定竞争结合的方法的其他细节。通常，当竞争抗体蛋白质以过量存在时，其将参考抗体与共同抗原的特异性结合抑制至少15％、或至少23％，例如，非限制性地，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％或更大以及所述量之间的百分比量。在一些情况下，将结合抑制至少80％、85％、90％、95％、96％或97％、98％、99％或更大。
如本文所用，术语“阻断性”抗体或“拮抗剂”抗体是指防止、抑制、阻断或减小其所结合抗原的生物或功能性活性的抗体。阻断性抗体或拮抗剂抗体可实质上或完全防止、抑制、阻断或减小抗原的生物活性或功能。例如，阻断性抗PD-L1抗体可防止、抑制、阻断或减小PD-L1和PD-1之间的结合相互作用，由此防止、阻断、抑制或减小与PD-1/PD-L1相互作用相关的免疫抑制功能。术语阻断、抑制和中和在本文中可互换使用，且是指如本文所述的抗PD-L1抗体防止或以其他方式破坏或减小PD-L1/PD-1相互作用的能力。
如本文所用，术语“多肽”或“肽”是指连续阵列中通过肽键连接的三个或更多个氨基酸的氨基酸的聚合物。“多肽”可以是蛋白质、蛋白质片段、蛋白质类似物、寡肽等。包含多肽的氨基酸可以是天然衍生的或合成的。多肽可从生物样品纯化。例如，PD-L1多肽或肽可由人PD-L1或糖基化PD-L1的至少3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个或25个连续氨基酸组成。在一些实施方案中，多肽具有人PD-L1或糖基化PD-L1的至少25个、30个、35个、40个、45个、50个、55个、60个、65个、70个、75个、80个、85个、90个、95个、100个、105个、110个、115个、120个、125个、130个、135个、140个、145个、150个、160个、170个、180个、190个、200个、210个、220个、230个、240个、250个、260个、270个、280个或285个连续氨基酸。在某些实施方案中，PD-L1多肽包含PD-L1多肽或糖基化PD-L1多肽的氨基酸序列的至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、至少200个连续氨基酸残基、至少250个连续氨基酸残基。
如本文所用，术语“类似物”是指具有与参考多肽相似或相同的功能、但不一定包含参考多肽的相似或相同氨基酸序列的多肽、或具有参考多肽的相似或相同结构的多肽。参考多肽可以是PD-L1多肽、PD-L1多肽的片段、抗PD-L1抗体或抗糖基化PD-L1抗体。具有与参考多肽相似的氨基酸序列的多肽是指具有与参考多肽的氨基酸序列具有至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性的氨基酸序列的多肽，所述参考多肽可以是如本文所述的PD-L1多肽或抗PD-L1抗体。具有与参考多肽相似的结构的多肽是指具有与参考多肽的结构相似的二级、三级或四级结构的多肽，所述参考多肽可以是本文所述的PD-L1多肽或PD-L1抗体。可通过本领域技术人员已知的方法，包括但不限于X-射线结晶学、核磁共振和结晶学电子显微镜，来确定多肽的结构。优选地，该类似物作为IPD抗糖基化PD-L1抗体发挥功能。
如本文所用，术语“变体”当关于PD-L1多肽或抗PD-L1抗体使用时是指相比天然或未修饰PD-L1序列或抗PD-L1抗体序列具有一个或多个(诸如，例如，约1个至约25个、约1个至约20个、约1个至约15个、约1个至约10个或约1个至约5个)氨基酸序列取代、缺失和/或添加的多肽或抗PD-L1抗体。例如，PD-L1变体可由天然PD-L1的氨基酸序列的一个或多个(诸如，例如，约1个至约25个、约1个至约20个、约1个至约15个、约1个至约10个或约1个至约5个)变化所致。此外，通过实例的方式，抗PD-L1抗体的变体可由天然或先前未修饰抗PD-L1抗体的氨基酸序列的一个或多个(诸如，例如，约1个至约25个、约1个至约20个、约1个至约15个、约1个至约10个或约1个至约5个)变化所致。多肽变体可从编码该变体的对应的核酸分子制备。在某些实施方案中，该变体为在一个或多个CDR或框架区中具有一个或多个氨基酸取代、缺失或插入的抗糖基化PD-L1抗体，且优选地，该类似物作为IPD抗糖基化PD-L1抗体发挥功能。
术语“同一性”是指两个或更多个多肽分子或两个或更多个核酸分子的序列之间的关系，如通过比对并比较所述序列来确定。“同一性百分比”意指所比较的分子中的氨基酸或核苷酸之间相同残基的百分比且基于所比较分子中最小分子的尺寸计算。对于这些计算，比对中的空位(如果存在)必须通过特定数学模型或计算机程序(例如“算法”)解决。可用于计算所比对核酸或多肽的同一性的方法包括以下中描述的那些：ComputationalMolecular Biology,Lesk,A.M.,编,1988,New York:Oxford University Press；Biocomputing Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.,编,1993,New York:Academic Press；Computer Analysis of Sequence Data,Part I,Griffin,A.M.,和Griffin,H.G.,编,1994,New Jersey:Humana Press；Sequence Analysis in MolecularBiology,von Heinje,G.,1987,New York:Academic Press；Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.和Devereux,J.,编,1991,New York:M.Stockton Press；和Carillo等人,1988,SIAM J.Applied Math.,48:1073。
在计算同一性百分比中，所比较的序列可以使得所述序列之间最大匹配的方式进行比对。可用于确定同一性百分比的计算机程序的一个实例是GCG程序包，其包括GAP(Devereux等人,1984,Nucl.Acid Res.,12:387；Genetics Computer Group,Universityof Wisconsin,Madison,WI)，其为用于比对两种多肽或多核苷酸以确定其序列同一性百分比的计算机算法。所述序列可经比对以最佳匹配其各自的氨基酸或核苷酸序列(“匹配跨度”，如通过该算法来确定)。空位开放罚分(其被计算为平均对角线的3倍，其中“平均对角线”为所使用比较矩阵的对角线的平均值，且“对角线”为通过特定比较矩阵指定给每对完美氨基酸匹配的评分或数值)；且空位延伸罚分(其通常为空位开放罚分的1/10)、以及比较矩阵(诸如PAM 250或BLOSUM 62)结合该算法使用。在某些实施方案中，算法还使用标准比较矩阵(关于PAM 250比较矩阵，参见Dayhoff等人,1978,Atlas of Protein Sequence andStructure,5:345-352；关于BLOSUM 62比较矩阵，参见Henikoff等人,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:10915-10919)。使用GAP程序以确定多肽或核苷酸序列的同一性百分比的示例性参数包括下列：(i)算法：Needleman等人,1970,J.Mol.Biol.,48:443-453；(ii)比较矩阵：来自Henikoff等人，同上的BLOSUM 62；(iii)空位罚分：12(但不含末端空位罚分)；(iv)空位长度罚分：4；和(v)相似性阈值：0。
用于比对两种氨基酸序列的某些比对方案可导致仅匹配两个序列的短区域，且该所比对的小的区域可具有非常高的序列同一性，即使两个全长序列之间无明显关系。因此，如果需要如此，可调整所选比对方法(例如，GAP程序)以产生在靶多肽的跨代表性数量的氨基酸(例如，至少50个连续氨基酸)范围的比对。
将关于参考多肽序列的氨基酸序列同一性百分比(％)定义为在比对序列并引入空位后(如果有必要)实现最大序列同一性百分比，且未考虑任何保守取代为序列同一性的一部分，候选序列中氨基酸残基与参考多肽序列中氨基酸残基相同的百分比。为了确定百分比氨基酸序列一致性的目的，可以本领域技术人员技术范围内的方法实现比对，例如，利用公开可用的计算软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可决定用于比对序列的适当参数，包括为实现最大对齐对所比较序列的全部长度所需的任何算法。
如本文所用，术语“衍生物”是指包含参考多肽的已通过引入氨基酸残基取代、缺失或添加改变的氨基酸序列的多肽。该参考多肽可以是抗PD-L1抗体。如本文所用，术语“衍生物”也是指已例如通过将任何类型的分子共价连接至多肽而化学修饰的抗PD-L1抗体。例如，抗PD-L1抗体可例如通过糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知保护基/阻断基团衍生化、蛋白酶裂解、与细胞配体连接、与肽或蛋白质标签分子或其他蛋白质连接等进行化学修饰。所述衍生物以不同于天然存在或起始肽或多肽的方式在所连接分子的类型或位置方面进行修饰。衍生物可进一步包括缺失天然存在于肽或多肽上的一个或多个化学基团。通过化学修饰，使用本领域技术人员已知的技术，包括但不限于特异性化学裂解、乙酰化、配制、通过衣霉素(tunicamycin)的代谢合成等，可化学修饰抗PD-L1抗体的衍生物。此外，抗PD-L1抗体的衍生物可含有一个或多个非经典氨基酸。多肽衍生物具有与参考多肽相似或相同的功能，所述参考多肽可以是本文所述的抗PD-L1抗体，尤其是IPD抗糖基化PD-L1单克隆抗体。
如本文所用，术语“融合蛋白质”是指包含至少两个异源多肽的氨基酸序列的多肽。术语“融合”当关于抗PD-L1抗体使用时是指将抗PD-L1抗体、其变体和/或衍生物与异源肽或多肽接合、融合或偶联。在某些实施方案中，融合蛋白质保留抗PD-L1抗体的生物活性。在某些实施方案中，融合蛋白质包括偶联、融合或接合至异源肽或多肽的PD-L1抗体VH区、VL区、VH CDR(一个、两个或三个VH CDR)和/或VL CDR(一个、两个或三个VL CDR)，其中该融合蛋白质结合PD-L1蛋白质或肽上的表位。融合蛋白质可通过如本领域中所实施的化学偶联反应或通过分子重组技术制备。
如本文所用，术语“组合物”是指以任选地指定或有效量含有指定组成成分(例如，本文所提供的多肽或抗体)的产品、以及直接或间接通过特定组成成分以任选地指定或有效量组合或相互作用产生的任何所需产品。
如本文所用，术语“载体”包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、媒介物或稳定剂，其在所采用的剂量和浓度下对暴露于所述载体的细胞或哺乳动物无毒。通常，生理上可接受的载体为pH缓冲水溶液。生理上可接受的载体的实例包括缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(例如，小于约10个氨基酸残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、蔗糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖醇，诸如甘露糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，诸如钠；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。术语“载体”也可指与治疗剂一起施用的稀释剂、佐剂(例如，弗氏(Freund's)完全或不完全佐剂)、赋形剂或媒介物。此类载体(包括药物载体)可以是无菌液体，诸如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，诸如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当组合物(例如药物组合物)静脉内施用时，水是示例性载体。也可采用盐水溶液和葡萄糖和甘油水溶液作为液体载体(尤其对于可注射溶液)。合适的赋形剂(例如药物赋形剂)包括但不限于淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。如果需要，该组合物也可含有少量润湿剂或乳化剂或pH缓冲剂。组合物可采用溶液、悬浮液、乳剂、锭剂、丸剂、胶囊、粉剂、持续释放制剂等的形式。口服组合物(包括制剂)可包括标准载体，诸如药物级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。合适的药物载体的实例描述于Remington’sPharmaceutical Sciences,1990,Mack Publishing Co.,Easton,PA中。组合物(包括药物化合物)可含有例如呈分离或纯化形式的治疗有效量的抗PD-L1抗体(诸如抗糖基化PD-L1抗体)，连同适当量的载体一起，以便提供适合恰当施用于个体(例如患者)的形式。该组合物或制剂应适于施用模式。
如本文所用，术语“赋形剂”是指惰性物质，其通常用作稀释剂、媒介物、防腐剂、粘合剂或稳定剂，且包括但不限于蛋白质(例如血清白蛋白等)、氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、甘氨酸、组氨酸等)、脂肪酸和磷脂(例如，磺酸烷基酯、辛酸酯等)、表面活性剂(例如，SDS、聚山梨醇酯、非离子表面活性剂等)、糖类(例如，蔗糖、麦芽糖、海藻糖等)和多元醇(例如，甘露醇、山梨糖醇等)。对于参考，还可参见Remington’sPharmaceutical Sciences,同上，其在此以其整体通过引用并入。
如本文所用，术语“药学上可接受”或“药理上可接受”是指当适当地施用于动物(诸如人类)时不会产生不良、过敏性或其他不希望出现或不必要的反应的分子实体、制剂和组合物。本领域技术人员根据本发明，如Remington's Pharmaceutical Sciences,同上所例举，知道包含抗体或其他活性成分的药物组合物的制备。此外，对于动物(例如人类)施用，应理解制剂应当符合如联邦或州政府的管理机构(诸如FDA生物标准办公室)所要求或如美国药典、欧洲药典或用于动物(和更具体而言人类中)的其他大体上认可的药典中所列的无菌性、无热原性、一般安全性和纯度标准。
术语“药物制剂”是指这样的制剂，其呈可允许活性成分(例如抗PD-L1抗体和抗糖基化PD-L1抗体)的生物活性有效的形式且不含对将施用制剂的个体而言不可接受的毒性的额外组分。该制剂可以是无菌的，即，无菌的或不含所有活的微生物和其孢子等。
术语“包装插页”用于指通常包括在治疗性产品的商业包装中的指示说明，其含有关于与此类治疗性产品的使用有关的适应症、用法、剂量、施用、禁忌症和/或警示的信息。
如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是指施用或应用治疗剂至有需要的个体，或为实现至少一种阳性治疗效应或益处，诸如治疗疾病或健康相关病况的目的而对个体进行程序或方法。例如，治疗可包括施用药物有效量的各特异性结合糖基化PD-L1的不同抗体的组合、或其组合物或制剂以实现治疗各种类型癌症的目的。术语“治疗疗程”、“给药疗程”或“给药方案”可互换使用且是指治疗剂(诸如所述的抗糖基化PD-L1抗体的组合)的时机和剂量。如本文所用，术语“个体”是指患有癌症或诊断患有癌症的人类或非人类动物(诸如灵长类、哺乳动物和脊椎动物)。在优选实施方案中，该个体为人类。在一些实施方案中，该个体为癌症患者。在一个实施方案中，有需要的个体将或预期从用两种或更多种不同抗糖基化PD-L1抗体的组合治疗获益。
如本文所用，术语“治疗益处”或“治疗有效”是指在病况的医学治疗、疗法、剂量施用方面，尤其作为使用所提供的抗体组合和进行所述方法的结果，促进或增强有需要的个体(例如，患有癌症或诊断患有癌症的个体)的健康。这包括但不限于减小疾病的体征或症状的频率或严重程度。例如，癌症的治疗可涉及例如减小肿瘤尺寸，减少肿瘤的侵袭或严重程度，减少癌细胞侵润进入周边组织或器官中；减小肿瘤或癌症的生长速率，或预防或减少转移。癌症的治疗也可指在个体中实现持续反应或延长患有癌症的个体的存活期。
如本文所用，术语“施用(administer)”或“施用(administration)”是指物理上递送(例如，经由注射或经口途径)存在于体外的物质至患者中的动作，诸如通过口服、皮下、粘膜、皮内、静脉内、肌肉内递送和/或本文所述或本领域中已知的任何其他物理递送方法。当疾病、病症或病况或其症状进行治疗性治疗时，物质的施用通常在疾病、病症或病况或其症状的发作之后进行。预防性治疗涉及在疾病、病症或病况或其症状的发作之前的某一时间施用物质。
如本文所用，术语“有效量”是指足以减轻、消除、缓解和/或改善癌症或与其有关的症状的严重程度和/或持续时间的治疗剂(例如，本文提供的抗体或药物组合物)的量。该术语还涵盖减慢或改善癌症前进或进展所需的量；减慢或改善癌症的复发、发展或发作；和/或改善或增强另一癌症疗法(例如，除了施用抗PD-L1抗体的组合之外的疗法)的预防性或治疗性效应。在一些实施方案中，本文提供的抗体的有效量为约或等于0.1mg/kg(每kg个体体重的mg抗体)至约或等于100mg/kg。在某些实施方案中，本文提供的抗体的有效量为约或等于0.1mg/kg、约或等于0.5mg/kg、约或等于1mg/kg、约或等于3mg/kg、约或等于5mg/kg、约或等于10mg/kg、约或等于15mg/kg、约或等于20mg/kg、约或等于25mg/kg、约或等于30mg/kg、约或等于35mg/kg、约或等于40mg/kg、约或等于45mg/kg、约或等于50mg/kg、约或等于60mg/kg、约或等于70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg或100mg/kg。这些量意欲包括其中的量和范围。在一些实施方案中，“有效量”也指本文提供的抗体单独或组合实现指定结果(例如，防止、阻断或抑制细胞表面PD-1与细胞表面PD-L1结合；或防止、阻断或抑制由PD-1/PD-L1介导的免疫抑制)的量。
术语“组合”在施用其他疗法(例如，其他药剂、癌症药物、癌症疗法)情形中包括使用多于一种疗法(例如，药物疗法和/或癌症疗法)。与一种或多种其他治疗剂“组合”的施用包括同时(例如合并)和以任何顺序连续施用。使用术语“组合”并不限制疗法施用于个体的顺序。通过非限制性实例的方式，第一疗法(例如，药剂，诸如抗糖基化PD-L1抗体)可在施用第二疗法(例如药剂)至具有或诊断患有癌症的个体之前(例如，1分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周、8周、9周、10周、11周或12周)、与其同时、或之后(例如，1分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周或更长时间)施用。
疗法的组合(例如，使用药剂，包括治疗剂)可比任何两种或更多种单一疗法的累加效应更有效(例如，具有协同效应)或可具有未先验预测到的其他益处，诸如副作用概况改善、治疗效应的功效增加或持续时间延长、该组合有效的患者群体增大等。该效应通常是出人意料的且无法预测。例如，治疗剂的组合的协同效应通常允许使用减小剂量的一种或多种所述药剂和/或对癌症患者较不频繁地施用该等药剂。利用减小剂量的治疗剂和癌症疗法和/或较不频繁地施用治疗剂的能力降低发生与对个体施用疗法相关的毒性的可能性而不降低疗法的有效性。另外，协同效应可导致疗法在治疗或改善癌症中的功效改善。此外，通过疗法(例如治疗剂)的组合证实的协同效应可避免或减小与任何单一疗法的使用相关的不良或不想要的副作用。
组合疗法
提供了通过施用至少两种不同的抗糖基化PD-L1抗体(即，其具有不同的结合特异性且结合糖基化PD-L1的不同表位)的组合来治疗、预防、减少和减缓患有其的个体中的癌症扩散或癌症或肿瘤的生长的方法。在某些方面，可施用抗糖基化PD-L1抗体的组合以治疗患有癌症的个体的癌症或预防具有发展癌症的倾向性(诸如遗传倾向性、先前环境暴露于致癌物、先前癌症发病率等)的个体的癌症。因此，本文提供了通过向有需要的个体施用治疗有效量的至少两种不同的抗糖基化PD-L1抗体(优选地其中抗糖基化PD-L1抗体之一是IPD抗糖基化PD-L1抗体)以治疗癌症来治疗癌症的方法。在具体实施方案中，组合施用两种、三种、四种或五种不同的抗糖基化PD-L1抗体以治疗或预防癌症，优选PD-L1阳性的癌症。在一个优选实施方案中，组合施用两种不同的抗糖基化PD-L1抗体(优选地其中至少一种抗体是IPD抗糖基化PD-L1抗体)，以治疗或预防癌症，优选PD-L1阳性的癌症。如本文所示，治疗涉及减慢、防止、抑制或阻断癌细胞的生长、增殖、迁移等且包括引起癌细胞的细胞杀死或细胞凋亡。治疗也可防止或引起肿瘤细胞转移的退化。本文所述的方法为经历治疗的个体(例如人类患者)提供了益处，尤其对于表达可结合表达于免疫效应子细胞(诸如T-细胞，具体而言杀伤或细胞毒性T-细胞)的细胞表面上的PD-1/与其相互作用的糖基化PD-L1细胞表面蛋白质的肿瘤细胞而言。
预期用有效量的至少两种不同抗糖基化PD-L1抗体(优选地，其中至少一种是IPD抗糖基化PD-L1抗体)的组合治疗这些个体导致所述抗体结合肿瘤细胞上的糖基化PD-L1且防止、阻断或抑制PD-L1与PD-1的相互作用并促进PD-L1的内化和降解以防止、阻断或抑制表达PD-L1的肿瘤细胞与表达PD-1的T细胞的相互作用，由此防止或避免T-细胞活性的免疫抑制且允许T细胞被活化以杀死具有PD-L1的肿瘤细胞。在一个优选实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体结合人PD-L1且该个体为人类患者。因此，本文所提供的方法对于需要通过实施本发明方法实现的抗癌结果的个体、能够从该结果获益的个体或想要接受该结果的益处的个体有利。个体寻求涉及施用治疗有效量的两种不同抗糖基化PD-L1抗体的组合的方法的治疗益处或接受所述治疗益处通常有利于本领域。此外，本发明方法提供了消除或避免副作用、不良结果、禁忌症等或相比其他治疗和治疗方法降低此类问题发生的风险或可能性的其他优点。
在具体实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用作为IPD抗糖基化PD-L1抗体的STM073或STM108的人源化或嵌合形式和可以是或可以不是IPD抗糖基化PD-L1抗体的第二抗糖基化PD-L1抗体。当单独和/或作为组合的一部分施用时，抗糖基化PD-L1抗体以治疗有效的量施用。不同的抗糖基化PD-L1抗体可以同时(包括作为相同药物组合物的一部分)施用，或分开(包括在不同时间依次)施用。在其他具体实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用STM073或STM108的人源化或嵌合形式和STM004或STM115的人源化或嵌合形式。在其他具体实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用STM073的人源化或嵌合形式和STM108的人源化或嵌合形式。提供了通过组合施用STM073的人源化或嵌合形式和STM004的人源化或嵌合形式；或STM073的人源化或嵌合形式和STM115的人源化或嵌合形式；或STM108的人源化或嵌合形式和STM004的人源化或嵌合形式；或STM108的人源化或嵌合形式和STM115的人源化或嵌合形式来治疗癌症的方法。在实施方案中，提供了通过组合施用STM073的人源化或嵌合形式和STM108的人源化或嵌合形式来治疗癌症的方法。
本发明治疗方法可用的癌症包括任何恶性细胞类型，诸如在实体肿瘤或血液性肿瘤，具体而言其表面上表达糖基化PD-L1的细胞的肿瘤中发现的那些。一般而言，肿瘤是指任何尺寸的恶性或潜在恶性赘生物或组织块，且包括原发性肿瘤和继发性肿瘤。实体肿瘤为通常不含囊肿或液体的异常组织块或生长。示例性实体肿瘤可包括但不限于选自胰脏、胆囊、结肠、盲肠、胃、脑、头、颈、卵巢、睾丸、肾脏、喉、肉瘤、肺、膀胱、黑色素瘤、前列腺和乳房的器官的肿瘤。示例性血液性肿瘤包括骨髓的肿瘤、T或B细胞恶性病、白血病、淋巴瘤、胚细胞瘤、骨髓瘤等。可使用本文提供的方法治疗的癌症的其他实例包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤、白血病、鳞状细胞癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(包括胃肠道癌和胃肠道间质癌)、胰腺癌、神经胶质母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌或肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、各种类型的头颈癌、黑色素瘤、浅表散播型黑色素瘤、痣样恶性黑色素瘤、肢端痣样黑色素瘤、结节型黑色素瘤以及B-细胞淋巴瘤(包括低度/滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)(NHL)；小淋巴细胞性(SL)NHL；中度/滤泡性NHL；中度扩散型NHL；高度免疫母细胞性NHL；高度淋巴母细胞性NHL；高度小非裂解型细胞NHL；巨块病变NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关的淋巴瘤；和华氏巨球蛋白血症)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性骨髓性白血病(AML)和慢性成骨髓球性白血病。
具体地，该癌症可以是以下组织类型，尽管其无需受限于这些：恶性赘生物；癌；未分化癌；梭形巨细胞癌；小细胞癌；乳头状癌；鳞状细胞癌；淋巴上皮癌；基底细胞癌；毛母质癌；移行细胞癌；乳头状移行细胞癌；腺癌；恶性胃泌素瘤；胆管癌；肝细胞癌；组合型肝细胞癌和胆管癌；小梁状腺癌；腺样囊状癌；在腺瘤性息肉中的腺癌；家族性结肠息肉腺癌；实体癌；恶性类癌肿瘤；小支气管-肺泡腺癌；乳头状腺癌；嫌色细胞癌；嗜酸性癌；亲氧性腺癌；嗜碱性癌；透明细胞腺癌；粒状细胞癌；滤泡性腺癌；乳头状和滤泡性腺癌；非包膜性硬化癌；肾上腺皮质癌；内膜性癌；皮肤附属器癌；大汗腺腺癌；皮脂腺癌；耵聍腺腺癌；粘液表皮癌；囊腺癌；乳头状囊腺癌；乳头状浆液性囊腺癌；粘液性囊腺癌；粘液性腺癌；印戒细胞癌；浸润性腺管癌；髓状癌；小叶癌；炎性癌；乳腺佩吉特氏病；腺泡细胞癌；腺鳞状癌；腺癌w/鳞状上皮化生；恶性胸腺瘤；恶性卵巢间质肿瘤；恶性卵泡膜细胞瘤；恶性颗粒细胞瘤；恶性睾丸母细胞瘤；塞尔托利氏细胞瘤(sertoli cell carcinoma)；恶性莱迪希氏细胞瘤(leydigcell tumor)；恶性脂质细胞瘤；恶性副神经节瘤；恶性乳房外副神经节瘤；嗜铬细胞瘤；血管球状肉瘤；恶性黑色素瘤；无黑色素黑色素瘤；浅表散播型黑色素瘤；恶性巨大色素痣黑色素瘤；上皮样细胞黑色素瘤；恶性蓝痣；肉瘤；纤维肉瘤；恶性纤维组织细胞瘤；粘液肉瘤；脂肪肉瘤；平滑肌肉瘤；横纹肌肉瘤；胚胎性横纹肌肉瘤；腺泡型横纹肌肉瘤；间质肉瘤；恶性混合瘤；米勒氏混合瘤(mullerian mixed tumor)；肾母细胞瘤；肝母细胞瘤；癌肉瘤；恶性间叶瘤；恶性布氏瘤(brenner tumor)；恶性乳房叶状瘤；滑液肉瘤；恶性间皮瘤；无性细胞瘤；胚胎癌；恶性畸胎瘤；恶性卵巢甲状腺癌(struma ovarii)；绒毛膜癌；恶性中肾瘤；血管肉瘤；恶性血管内皮瘤；卡波西氏肉瘤(kaposi's sarcoma)；恶性血管外皮细胞瘤；淋巴管肉瘤；骨肉瘤；皮质旁成骨肉瘤；软骨肉瘤；恶性软骨母细胞瘤；间叶性软骨肉瘤；骨巨大细胞瘤；尤因氏肉瘤(Ewing'ssarcoma)；恶性牙源性肿瘤；成釉细胞牙肉瘤；恶性成釉细胞瘤；成釉细胞纤维肉瘤；恶性松果腺瘤；脊索瘤；恶性胶质瘤；室管膜瘤；星形细胞瘤；原浆性星形细胞瘤；原纤维性星形细胞瘤；星形母细胞瘤；神经胶质母细胞瘤；寡树突神经胶质瘤；成少突神经胶质细胞瘤；原始神经外胚层瘤；小脑肉瘤；节细胞性神经母细胞瘤；神经母细胞瘤；视网膜母细胞瘤；嗅神经源性肿瘤；恶性脑膜瘤；神经纤维肉瘤；恶性神经鞘瘤；恶性颗粒细胞瘤；恶性淋巴瘤；霍奇金氏症(Hodgkin's disease)；副肉芽肿；恶性小淋巴细胞性淋巴瘤；恶性大细胞淋巴瘤；恶性扩散性淋巴瘤；恶性滤泡性淋巴瘤；蕈状肉芽肿；其他指定非霍奇金氏淋巴瘤；恶性组织细胞增生；多发性骨髓瘤；肥大细胞瘤；免疫增生性小肠病；白血病；淋巴样白血病；浆细胞白血病；红细胞性白血病；淋巴肉瘤细胞性白血病；骨髓性白血病；嗜碱粒细胞性白血病；嗜酸粒细胞性白血病；单核细胞白血病；肥大细胞白血病；巨核细胞白血病；髓样肉瘤；和毛细胞白血病。
待治疗的癌症优选对PD-L1(具体而言糖基化PD-L1)为阳性。在某些实施方案中，肿瘤细胞也对肿瘤细胞标志物(诸如EGFR或HER2/neu表达，例如，在乳腺癌细胞上的表达)为阳性。这些标志物的存在或不存在可指示与靶向治疗剂，诸如酪氨酸激酶抑制剂(例如，针对EGFR-阳性癌症的吉非替尼(gefitinib)，或针对HER2/neu-阳性癌症的赫赛汀(Herceptin))组合如本文所述的IPD抗糖基化PD-L1抗体的组合疗法将为有需要的个体提供治疗益处。在某些实施方案中，该癌症为BLBC。
可用于表征癌症以引导疗法的选择或监测疗法的其他标志物包括在非小细胞肺癌和间变性大细胞淋巴瘤中的ALK基因重排和过表达；针对肝癌和生殖细胞瘤的α-胎蛋白(AFP)；针对多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病和部分淋巴瘤的α-2-微球蛋白(B2M)；针对绒毛膜癌和生殖细胞瘤的β-人类绒毛膜促性腺激素(β-hCG)；针对卵巢癌和乳腺癌的BRCA1和BRCA2基因突变；针对慢性骨髓性白血病、急性淋巴母细胞性白血病和急性骨髓性白血病的BCR-ABL融合基因(费城染色体(Philadelphia chromosome))；针对皮肤黑色素瘤和结肠直肠癌的BRAF V600突变；针对胃肠道间质肿瘤和粘膜型黑色素瘤的C-kit/CD117；针对乳腺癌的CA15-3/CA27.29；针对胰腺癌、胆囊癌、胆管癌和胃癌的CA19-9；针对卵巢癌的CA-125；针对髓质甲状腺癌的抑钙素；针对结肠直肠癌和一些其他癌症的癌胚抗原(CEA)；针对非霍奇金氏淋巴瘤的CD20；针对神经内分泌肿瘤的染色颗粒素A(ChromograninA)(CgA)；针对膀胱癌的染色体3、7、17和9p21；针对肺癌的细胞角质蛋白片段21-1；针对非小细胞肺癌的EGFR基因突变分析；针对乳腺癌的雌激素受体(ER)/孕酮受体(PR)；针对膀胱癌的纤维蛋白/纤维蛋白原；针对卵巢癌的HE4；针对乳腺癌、胃癌和胃肠道胃食道结点腺癌的HER2/neu基因扩增或蛋白质过表达；针对多发性骨髓瘤和华氏巨球蛋白血症的免疫球蛋白；针对结肠直肠癌和非小细胞肺癌的KRAS基因突变分析；针对生殖细胞瘤、淋巴瘤、白血病、黑色素瘤和神经母细胞瘤的乳酸脱氢酶；针对小细胞肺癌和神经母细胞瘤的神经元特异性烯醇酶(NSE)；针对膀胱癌的核基质蛋白22；针对前列腺癌的前列腺-特异性抗原(PSA)；针对甲状腺癌的甲状腺球蛋白；和针对乳腺癌的尿激酶纤维蛋白溶酶原活化剂(uPA)和纤维蛋白溶酶原活化抑制剂(PAI-1)。
不同抗糖基化PD-L1抗体的组合可用作用于多种方法中的抗肿瘤药剂。一个具体实施方案涉及使用抗体的组合作为抗肿瘤剂的方法，且因此包括使肿瘤细胞的群体与治疗有效量的抗体或含有抗体的一种或多种组合物接触一段足以阻断或抑制肿瘤细胞生长或实现肿瘤细胞凋亡的时间。在一个实施方案中，体内肿瘤细胞的接触通过对有需要的患者施用(例如，通过静脉内、皮下、腹膜内或肿瘤内注射)治疗组合的不同抗糖基化PD-L1抗体来实现。该抗体可随时间通过注射或通过逐渐输注肠胃外施用。有用的施用和递送疗程包括静脉内、腹膜内、口腔、肌肉内、皮下、腔内、鞘内、经皮、真皮、蠕动泵方法、或直接注射至含肿瘤细胞的组织中。
包含抗体的治疗性组合物常规地静脉内，诸如通过注射(例如)单位剂量施用。术语“单位剂量”在提及治疗性组合物使用时是指适用作针对个体的单元剂量的物理上离散单位；各单位含有经计算以产生所需治疗效应的预定量的活性物质以及所需稀释剂(即载体或媒介物)。含抗糖基化PD-L1抗体的组合物以与剂量制剂相容的方式和以治疗有效量施用。待施用的量取决于待治疗的个体、个体系统利用活性成分的能力和所需治疗效应的程度。待施用的活性成分的精确量取决于医师判断和对于各个体不同。然而，用于全身施用的合适的剂量范围公开于本文中且取决于施用途径。还设想用于初始和加强施用的合适的疗程且可通常涉及初始施用，随后，在一个或多个时间间隔(小时)下通过随后的注射或其他施用进行重复施用。示例性多次施用适用于维持持续高的血清和组织抗体水平。或者，设想足以维持血液中的浓度在针对体内疗法所指定的范围内的连续静脉内输注。
预期抗糖基化PD-L1抗体的组合可全身性或局部施用以治疗疾病，诸如以抑制肿瘤细胞生长或杀死具有局部晚期或转移性癌症的癌症患者的癌细胞。所述抗体可单独地或与不是抗糖基化PD-L1抗体的其他抗增殖药物或抗癌药物组合施用。在一个实施方案中，施用抗糖基化PD-L1抗体以减小手术或其他程序前患者中的癌症负荷。或者，它们可在周期性时间间隔下在手术之后施用以确保任何残留癌症(例如，手术未消除的癌症)在尺寸或生长能力上减小和/或不存活。如上文所述，抗体的治疗有效量为经计算以实现所需效应的预定量。因此，用于施用抗糖基化PD-L1抗体的组合的剂量范围是大到足以产生所需效应(其中肿瘤细胞分化和细胞循环的症状减少)的其范围。最佳地，剂量不应大到引起不良副作用，诸如高粘度综合征、肺水肿、充血性心脏衰竭、神经学效应等。一般而言，剂量将随患者的年龄、状况、体型和性别、和疾病的程度改变且可由本领域技术人员(诸如医疗专业人员或临床医师)确定。当然，剂量可在任何并发症的情况下由个别医师调整。
抗糖基化PD-L1抗体(抗glycPD-L1抗体)
在实施方案中提供了结合糖基化PD-L1蛋白质(例如，具有特定N-聚糖结构的PD-L1蛋白质；PD-L1的特定糖肽)或糖基化PD-L1肽(优选地，以比未糖基化PD-L1更高的亲和力(即，优先结合))且抑制糖基化PD-L1/PD-1相互作用的免疫抑制功能的抗体或其结合片段，以及此类抗体在治疗疾病、特别是癌症中的用途。抗糖基化PD-L1抗体可以是，并且优选组合中的至少一种是，相对于非糖基化PD-L1蛋白特异性且优先结合糖基化PD-L1蛋白质的IPD抗糖基化PD-L1抗体，并且在阻断PD-L1/PD-1结合并促进PD-L1内化和降解中具有双重活性。
糖基化PD-L1抗体可以是IgG、IgM、IgA、IgD和IgE Ig类别的抗体，以及包含一个或多个保留抗原结合活性的抗体CDR结构域的多肽。说明性地，抗糖基化PD-L1抗体可以是嵌合、亲和力成熟、人源化或人类抗体。在某些实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体是STM073、STM108、STM004或STM115的人源化或嵌合形式(或任何其他治疗上有用的形式)。通过已知方法且如本文所述，可产生对糖基化PD-L1抗原、其各自表位中的一个或多个或前述任一种的缀合物特异性的多克隆或单克隆抗体、抗体片段、结合结构域和CDR(包括前述任何者的工程改造形式)，不论此类抗原或表位是分离自天然来源还是是天然化合物的合成衍生物或变体。所述抗体可以是双特异性或双互补位的。
在一个具体实施方案中提供了抗体，诸如单克隆抗体，其相对于非糖基化PD-L1蛋白质特异性且优先结合糖基化PD-L1蛋白质。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体特异性或优先结合PD-L1蛋白质，所述PD-L1蛋白质在PD-L1蛋白质的氨基酸序列(例如，如SEQID NO:1中所示)的位置N35、N192、N200和/或N219处被糖基化。或者，抗糖基化PD-L1抗体在三维空间中与N35、N192、N200或N219中的一个或多个邻近结合，并且例如可以掩蔽或阻断一个或多个糖基化的残基。例如，抗糖基化PD-L1抗体的特异性或选择性结合涉及所述抗体与PD-L1抗原的结合，其Kd小于相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd的一半。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体结合糖基化PD-L1蛋白质，其Kd比相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd小至少5倍。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体结合糖基化PD-L1蛋白质，其Kd比相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd小至少10倍。在一个实施方案中，在如实施例1中所述的细胞流式细胞术结合测定法中，所述抗体表现出这样的表示为MFI的与表达WT PD-L1的细胞的结合，所述MFI为结合表达未糖基化PD-L1的细胞的MFI的1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
提供了抗糖基化PD-L1抗体的组合，其中抗糖基化PD-L1抗体之一具有单克隆抗体STM004的抗原结合位点或与STM004竞争结合糖基化PD-L1或与STM004结合PD-L1的相同表位。在其他实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体特异性结合PD-L1上的表位，所述表位对应于如本文SEQ ID NO:1所示的人PD-L1氨基酸序列的位置Y56、K62和K75的氨基酸残基。STM004结合PD-L1内的非连续氨基酸，并且所述表位是构象表位。涵盖STM004 MAb表位的人PD-L1多肽的部分具有序列LDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQH(SEQ ID NO:42)。如本文所示，构成由MAb STM004识别的表位的氨基酸残基Y56、K62和K75标下划线。
提供了抗糖基化PD-L1抗体的组合，其中抗糖基化PD-L1抗体之一具有单克隆抗体STM115的抗原结合位点或与STM115竞争结合糖基化PD-L1或与STM115结合PD-L1的相同表位。在其他实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体特异性结合PD-L1上的表位，所述表位对应于如本文SEQ ID NO:1所示的人PD-L1氨基酸序列的位置K62、H69和K75的氨基酸残基。涵盖STM115 MAb表位的人PD-L1多肽的部分具有SEQ ID NO:1内的序列DKNIIQFVHGEEDLKVQH。如本文所示，构成由MAb STM115识别的表位的氨基酸残基K62、H69和K75标下划线。
提供了抗糖基化PD-L1抗体的组合，其中抗糖基化PD-L1抗体之一具有单克隆抗体STM073的抗原结合位点或与STM073竞争结合糖基化PD-L1或与STM073结合PD-L1的相同表位。在其他实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体特异性结合PD-L1上的表位，所述表位涵盖SEQID NO:1的人PD-L1氨基酸序列的位置H69、Y112、R113和K124。STM073结合PD-L1内的非连续氨基酸，并且所述表位是构象表位。涵盖STM073 MAb表位的人PD-L1多肽的部分具有序列VHGEEDLKVQH------DAGVYRCMISYGGADYKRITV(即，SEQ ID NO:75或SEQ ID NO:1的V68-V128)，其中构成由MAb STM073识别的表位的氨基酸残基H69、Y112、R113和K124标下划线。在STM073表位序列中，位置78的氨基酸残基组氨酸(H)和位置108的氨基酸残基天冬氨酸(D)之间的短划线代表SEQ ID NO:1的人PD-L1氨基酸序列的位置79-107的氨基酸。还提供了抗糖基化PD-L1抗体的组合，其中抗糖基化PD-L1抗体之一具有单克隆抗体STM108的抗原结合位点或与STM108竞争结合糖基化PD-L1或与STM108结合PD-L1的相同表位。在其他实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体特异性结合PD-L1上的表位，所述表位涵盖本文SEQ ID NO:1的人PD-L1氨基酸序列的位置S80、Y81、K162和S169。STM108结合PD-L1内的非连续氨基酸，并且所述表位是构象表位。涵盖STM108 MAb表位的人PD-L1多肽的区域具有氨基酸序列LKVQHSSYRQR------EGYPKAEVIWTSSDHQ(即SEQ ID NO:1的L74-Q173)，其中构成由MAbSTM108识别的表位的氨基酸残基S80、Y81、K162和S169标下划线。在STM108表位区域中，位置84的氨基酸残基精氨酸(R)和位置158的氨基酸残基谷氨酸(E)之间的短划线代表SEQ IDNO:1的人PD-L1氨基酸序列的位置85-157的氨基酸。
提供了不是IPD抗糖基化PD-L1抗体的抗糖基化PD-L1抗体(诸如STM004和STM115)的人源化和嵌合以及重组产生的形式作为治疗组合的一部分。
STM004 MAb的重链和轻链可变(V)结构域的核酸(DNA)和相应氨基酸序列显示于下表3中。表3提供了STM004的成熟(即，不含信号肽)VH和VL结构域(分别为SEQ ID NO:2、3、10和11)和含有信号肽的VH和VL结构域序列(分别为SEQ ID NO:34、35、36和37)的核苷酸和氨基酸序列两者。在表3中显示的含有重链和轻链结构域的信号序列的重链DNA和蛋白质V结构域序列中，氨基端信号序列(分别为VH结构域的核苷酸1-57和氨基酸1-19以及VL结构域的核苷酸1-60和氨基酸1-20)以斜体字体表示。表3中还显示使用Kabat和Chothia编号定义的STM004 MAb重链和轻链V结构域CDR。
在提供的抗糖基化PD-L1抗体的组合中，抗糖基化PD-L1抗体之一特异性且优先结合糖基化PD-L1，并且包含SEQ ID NO:3的VH结构域和SEQ ID NO:11的VL结构域。抗糖基化PD-L1抗体可以与包含SEQ ID NO:3的VH结构域和SEQ ID NO:11的VL结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体特异性且优先结合糖基化PD-L1并且包含VH结构域，所述VH结构域包含分别具有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQID NO:8的氨基酸序列的Chothia CDR 1-3或分别具有SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7和SEQ IDNO:9的氨基酸序列的Kabat CDR 1-3或其组合。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体与包含VH结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合，所述VH结构域包含分别具有SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8的氨基酸序列的Chothia CDR 1-3或分别具有SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:9的氨基酸序列的Kabat CDR 1-3或其组合。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体特异性且优先结合糖基化PD-L1并且包含VL结构域，所述VL结构域包含分别具有SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR 1-3。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体与包含VL结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合，所述VL结构域包含分别具有SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR 1-3。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体特异性且优先结合糖基化PD-L1且包含(a)包含分别具有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8的氨基酸序列的ChothiaCDR 1-3或分别具有SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:9的氨基酸序列的Kabat CDR1-3或其组合的VH结构域；和(b)包含分别具有SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR 1-3的VL结构域。在实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体与包含上述VH和VL结构域及其中的CDR的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。
在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体的组合包含特异性结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1抗体，其包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的VH结构域和/或与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的VL结构域，并且其抑制或阻断糖基化PD-L1与PD-1的结合。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体之一特异性且优先结合糖基化PD-L1，其包含VH结构域，所述VH结构域包含CDR 1-3，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8的氨基酸序列或者分别SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代，所述抗糖基化PD-L1抗体阻断糖基化PD-L1与PD-1的结合。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含CDR 1-3，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1抗体包含(a)包含CDR1-3的VH结构域，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8的氨基酸序列或者分别SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代；和(b)包含CDR 1-3的VL结构域，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代，所述抗体阻断糖基化PD-L1与PD-1的结合。还提供了使用AbM、Contact或IMGT定义的CDR的STM004的人源化形式，其具有人框架区和任选地人恒定区。
在另一个具体实施方案中，提供的组合包含抗体或其结合片段，其特异性且优先结合糖基化PD-L1，并且是MAb STM115的嵌合或人源化形式。STM115 MAb的成熟重链和轻链可变(V)结构域的核酸(DNA)和相应的氨基酸序列(SEQ ID NO:18、19、26和27)显示于下表3中。未加工的重链和轻链V结构域序列(即，在N-端含有信号序列的那些)的DNA和氨基酸序列也显示于表3中(SEQ ID NO:38、39、40和41)，并且氨基端信号序列以斜体字体表示(VH结构域的核苷酸1-57和氨基酸1-19以及VL结构域的核苷酸1-66和氨基酸1-22)。根据Kabat和Chothia定义两者，表3中还显示STM115 MAb重链和轻链V结构域CDR。
在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1抗体包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH结构域和SEQ ID NO:27的氨基酸序列的VL结构域。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体与包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH结构域和SEQ IDNO:27的氨基酸序列的VL结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含分别具有SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:24的氨基酸序列的Chothia CDR 1-3或分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:25的氨基酸序列的Kabat CDR 1-3或其组合。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体与包含VH结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合，所述VH结构域包含分别具有SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22和SEQ IDNO:24的氨基酸序列的Chothia CDR 1-3或分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23和SEQ IDNO:25的氨基酸序列的Kabat CDR 1-3或其组合。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含分别具有SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:32的氨基酸序列的CDR 1-3。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体与包含VL结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合，所述VL结构域包含分别具有SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:32的氨基酸序列的CDR 1-3。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1抗体包含(a)包含分别具有SEQ IDNO:20、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:24的氨基酸序列的Chothia CDR 1-3或分别具有SEQ IDNO:21、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:25的氨基酸序列的Kabat CDR 1-3或其组合的VH结构域；和(b)包含分别具有SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:32的氨基酸序列的CDR1-3的VL结构域。在实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体与包含上述VH和VL结构域及其中的CDR的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。
在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1抗体包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的VH结构域和与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的VL结构域。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代的CDR 1-3或分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:25的氨基酸序列的CDR 1-3或其组合。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含CDR 1-3，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1抗体包含(a)包含CDR 1-3的VH结构域，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:24的氨基酸序列或相对于分别SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:25的氨基酸序列或其组合具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代；和/或(b)包含CDR 1-3的VL结构域，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代。还提供了使用AbM、Contact或IMGT定义的CDR的STM115的人源化形式，其具有人框架区和任选地人恒定区。
另一个实施方案提供了分离的抗糖基化PD-L1抗体或其结合片段，当经由常规竞争方法测定时，其结合糖基化PD-L1且与如本文所述的MAb STM004或MAb STM115竞争或交叉竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。在一个方面，提供了与MAb STM004或MAb STM115结合相同表位的分离的抗体，例如单克隆抗体或其结合片段。
另一个实施方案提供了分离的抗糖基化PD-L1抗体，其特异性结合选自LDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQH(SEQ ID NO:42)的氨基酸序列内的表位，所述序列位于SEQ ID NO:1的成熟人PD-L1多肽序列内。
另一个实施方案提供了分离的抗糖基化PD-L1抗体，其结合包含SEQ ID NO:1的人PD-L1蛋白质的氨基酸残基Y56、K62和K75的表位。在一个方面，提供了分离的抗糖基化PD-L1抗体，其在包含以下氨基酸残基中的至少一个的表位处特异性结合糖基化人PD-L1：SEQID NO:1的Y56、K62或K75。另一个实施方案提供了分离的抗糖基化PD-L1抗体，其结合包含SEQ ID NO:1的人PD-L1蛋白质的氨基酸残基K62、H69和K75的表位。在一个方面，提供了分离的抗糖基化PD-L1抗体，其在包含以下氨基酸残基中的至少一个的表位处特异性结合糖基化人PD-L1：SEQ ID NO:1的K62、H69或K75。在实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体接触构成PD-L1(即糖基化人PD-L1)的表位区的氨基酸残基中的至少两个、至少三个或四个。
又另一个实施方案提供了分离的抗糖基化PD-L1抗体，其在包括SEQ ID NO:1的L48至H78的氨基酸区域内或D61至H78的氨基酸区域内的至少一个氨基酸的表位处特异性结合糖基化人PD-L1。在一个实施方案中，提供了分离的抗糖基化PD-L1抗体，其在包括以下氨基酸残基组的表位处特异性结合糖基化人PD-L1：SEQ ID NO:1的L48至H78的氨基酸区域内的Y56、K62、K75。在另一个实施方案中，提供了分离的抗糖基化PD-L1抗体，其在包括以下氨基酸残基组的表位处特异性结合糖基化人PD-L1：SEQ ID NO:1的L48至H78的氨基酸区域内或D61至H78的氨基酸区域内的K62、H69、K75。
又另一个实施方案提供了分别包含与SEQ ID NO:2或18具有至少90-98％同一性的核苷酸序列的编码抗糖基化PD-L1VH结构域的分离的核酸分子和/或包含与SEQ ID NO:10或26具有至少90-98％同一性的核苷酸序列的编码抗糖基化PD-L1抗体VL结构域的分离的核酸分子。在实施方案中，编码VH和/或VL结构域的核苷酸序列分别与SEQ ID NO:2或18或SEQ ID NO:10或26具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性。
表3.抗糖基化PD-L1 MAb的核苷酸和氨基酸序列
IPD抗糖基化PD-L1抗体
本文提供且用于所述的组合抗体方法和组合物中的是结合糖基化PD-L1蛋白质(例如，具有特定N-聚糖结构的PD-L1蛋白质；PD-L1的特定糖肽)或糖基化PD-L1肽；减少或阻断PD-L1/PD-1相互作用的结合；并且还促进PD-L1在肿瘤细胞上的内化和降解的抗体或其结合片段(是“IPD”抗糖基化PD-L1抗体)，以及此类抗体在治疗疾病、特别是癌症中的用途。与未糖基化PD-L1相比，所述抗体优先结合糖基化PD-L1。如本文所述的IPD抗糖基化PD-L1抗体可以是IgG、IgM、IgA、IgD和IgE Ig类型的抗体，以及包含保留抗原结合活性的抗体CDR结构域的多肽。说明性地，IPD抗糖基化PD-L1抗体可以是嵌合抗体、亲和力成熟抗体、人源化抗体或人抗体。在一个优选实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体是人源化抗体或嵌合抗体，特别是STM073或STM108的人源化或嵌合形式。通过已知的方法且如本文所述，可以产生多克隆或单克隆抗体、抗体片段、结合结构域和CDR(包括任何前述的工程改造形式)，其对糖基化PD-L1抗原、其各自表位中的一个或多个或上述任一种的缀合物是特异性的，无论此类抗原或表位是从天然来源分离还是天然化合物的合成衍生物或变体。所述抗体可以是双特异性的或双互补位的。
在用于所述抗体组合方法和抗体组合物的实施方案中提供了IPD抗体或其结合片段，其对糖基化PD-L1特异性且优先结合糖基化PD-L1，其特异性结合由STM073结合的PD-L1表位。在某些实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体结合PD-L1上的表位，所述表位涵盖SEQID NO:1的人PD-L1氨基酸序列的位置H69、Y112、R113和K124。在一个实施方案中，表位的氨基酸是不连续的且表位是构象表位。涵盖STM073MAb表位的人PD-L1多肽的区域具有序列VHGEEDLKVQH------DAGVYRCMISYGGADYKRITV(即，SEQ ID NO:75或SEQ ID NO:1的V68-V128)，其中包含由MAb STM073识别的表位的氨基酸残基H69、Y112、R113和K124标下划线。在STM073表位序列中，位置78的氨基酸残基组氨酸(H)和位置108的氨基酸残基天冬氨酸(D)之间的短划线代表SEQ ID NO:1的人PD-L1氨基酸序列的位置79-107的氨基酸。
在另一个实施方案中提供了对糖基化PD-L1特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗体或其结合片段，其为抗糖基化PD-L1单克隆抗体STM108的人源化或嵌合形式。在具体实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1特异性结合PD-L1上的表位，所述表位涵盖本文SEQ ID NO:1的人PD-L1氨基酸序列的位置S80、Y81、K162和S169。涵盖STM108 MAb表位的人PD-L1多肽的区域具有氨基酸序列LKVQHSSYRQR------EGYPKAEVIWTSSDHQ(即SEQ ID NO:1的L74-Q173)，其中包含由MAb STM108识别的表位的氨基酸残基S80、Y81、K162和S169标下划线。在STM108表位区域中，位置84的氨基酸残基精氨酸(R)和位置158的氨基酸残基谷氨酸(E)之间的短划线代表SEQ ID NO:1的人PD-L1氨基酸序列的位置85-157的氨基酸。因此，STM108 MAb表位的氨基酸是不连续的且表位是构象表位。
STM073 MAb的重链和轻链可变(V)结构域的核酸(DNA)和相应氨基酸序列显示于下表4中。表4提供了STM073的成熟(即，不含信号肽)VH和VL结构域(分别为SEQ ID NO:43、51、44和52)和含有信号肽的VH和VL结构域序列(分别为SEQ ID NO:77、78、79和80)的核苷酸和氨基酸序列两者。在表4中所示的重链DNA和蛋白质V结构域序列中，氨基端信号序列以斜体字体表示。如通过Kabat和Chothia定义两者所确定，表4中还显示STM073 MAb重链和轻链V结构域CDR。
在抗体组合方法和组合物的一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含SEQ ID NO:44的VH结构域和SEQ ID NO:52的VL结构域。在一个实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体与包含SEQ ID NO:44的VH结构域和SEQ ID NO:52的VL结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含分别具有SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:49的氨基酸序列的Chothia CDR 1-3或分别具有SEQ IDNO:46、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:50的氨基酸序列的Kabat CDR 1-3或其组合。在一个实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体与包含VH结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合，所述VH结构域包含分别具有SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:49的氨基酸序列的Chothia CDR 1-3或分别具有SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:50的氨基酸序列的Kabat CDR 1-3或其组合。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含分别具有SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR 1-3。在一个实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体与包含VL结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合，所述VL结构域包含分别具有SEQ IDNO:53、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR 1-3。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含(a)包含分别具有SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:49的氨基酸序列的Chothia CDR 1-3或分别具有SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:50的氨基酸序列的Kabat CDR 1-3或其组合的VH结构域；和(b)包含分别具有SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR 1-3的VL结构域。在实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体与包含上述VH和VL结构域及其中的CDR的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。
在一个实施方案中，特异性结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含与SEQID NO:44的氨基酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的VH结构域和/或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的VL结构域，并且其抑制或阻断糖基化PD-L1与PD-1的结合且促进PD-L1在细胞膜上的表达的去稳定化。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体含有包含CDR1-3的VH结构域，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:49的氨基酸序列或分别SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:50的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代，所述抗糖基化PD-L1抗体阻断糖基化PD-L1与PD-1的结合且促进PD-L1在细胞膜上的表达的去稳定化。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含CDR 1-3，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:57的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含(a)包含CDR 1-3的VH结构域，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:49的氨基酸序列或者分别SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:50的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代；和(b)包含CDR 1-3的VL结构域，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ IDNO:53、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:57的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代，所述抗体阻断糖基化PD-L1与PD-1的结合且促进PD-L1在细胞膜上的表达的去稳定化。还提供了使用AbM、Contact或IMGT定义的CDR的STM073的人源化形式，其具有人框架区和任选地人恒定区。
在另一个具体实施方案中，提供了抗体或其结合片段，其特异性且优先结合糖基化PD-L1，其为抗糖基化PD-L1单克隆抗体STM108的人源化或嵌合形式或其结合部分。STM108 MAb的成熟重链和轻链可变(V)结构域的核酸(DNA)和相应的氨基酸序列(SEQ IDNO:)59、60、67和68显示于下表4中。未加工的重链V结构域(即，在N-端含有信号序列)的DNA和氨基酸序列也显示于表4中(分别为SEQ ID NO:81和82)。根据Kabat和Chothia定义两者，表4中还显示STM108 MAb重链和轻链V结构域CDR。
在用于抗体组合方法和组合物中的实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的VH结构域和SEQ ID NO:68的氨基酸序列的VL结构域。在一个实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体与包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的VH结构域和SEQ ID NO:68的氨基酸序列的VL结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含分别具有SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63和SEQID NO:65的氨基酸序列的Chothia CDR 1-3或分别具有SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64和SEQID NO:66的氨基酸序列的Kabat CDR 1-3或其组合。在一个实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体与包含VH结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合，所述VH结构域包含分别具有SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:65的氨基酸序列的Chothia CDR 1-3或分别具有SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:66的氨基酸序列的Kabat CDR 1-3或其组合。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含分别具有SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73的氨基酸序列的CDR 1-3。在一个实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体与包含VL结构域的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合，所述VL结构域包含分别具有SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:71和SEQID NO:73的氨基酸序列的CDR 1-3。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含(a)包含分别具有SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:65的氨基酸序列的Chothia CDR 1-3或分别具有SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64和SEQ IDNO:66的氨基酸序列的Kabat CDR 1-3或其组合的VH结构域；和(b)包含分别具有SEQ IDNO:69、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73的氨基酸序列的CDR 1-3的VL结构域。在实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体与包含上述VH和VL结构域及其中的CDR的抗体竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。
在本文所述的抗体组合方法和组合物的一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的VH结构域和与SEQ ID NO:68的氨基酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的VL结构域。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含VH结构域，所述VH结构域包含其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代的CDR 1-3或分别具有SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64和SEQ IDNO:66的氨基酸序列的CDR 1-3或其组合。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含CDR 1-3，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代。在一个实施方案中，特异性且优先结合糖基化PD-L1的IPD抗糖基化PD-L1抗体包含(a)包含CDR 1-3的VH结构域，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:65的氨基酸序列或相对于分别SEQ IDNO:62、SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:66的氨基酸序列或其组合具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代；和/或(b)包含CDR 1-3的VL结构域，其中至少1个、2个或所有3个CDR相对于分别SEQID NO:69、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73的氨基酸序列具有至少1、2、3、4或5个氨基酸取代。还提供了使用AbM、Contact或IMGT定义的CDR的STM108的人源化形式，其具有人框架区和任选地人恒定区。
在实施方案中，前述抗糖基化PD-L1抗体结合糖基化PD-L1，其Kd小于相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd的一半。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体结合糖基化PD-L1蛋白质，其Kd比相对于未糖基化PD-L1表现出的Kd小至少5倍。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体结合糖基化PD-L1蛋白质，其Kd比相对于未糖基化PD-L1蛋白质表现出的Kd小至少10倍。在一个实施方案中，STM108 MAb对糖基化PD-L1的结合亲和力为5-20nM或5-10nM，包括下限和上限值。在一个实施方案中，在如实施例1中所述的细胞流式细胞术结合测定法中，所述抗体表现出这样的表示为MFI的与表达WT PD-L1的细胞的结合，所述MFI为结合表达未糖基化PD-L1的细胞的MFI的1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。这些抗糖基化PD-L1抗体抑制PD-1与PD-L1的相互作用，且特别是抑制效应子T细胞表达的PD-1与PD-L1、特别是由肿瘤细胞表达的糖基化PD-L1的相互作用。
在一个实施方案中还涵盖分离的IPD抗糖基化PD-L1抗体，其结合人PD-L1氨基酸序列DAGVYRCMISYGGADYKRITV(即，SEQ ID NO:1的D108-V128)内的表位。在一个实施方案中，分离的IPD抗糖基化PD-L1抗体特异性结合不连续的人PD-L1表位，并且涵盖人PD-L1氨基酸序列SEQ ID NO:1的位置Y112、R113和S117，其显示为以下序列中的标下划线的氨基酸残基：DAGVYRCMISYGGADYKRITV(SEQ ID NO:76)。
在用于所述抗体组合方法和组合物中的另一个实施方案中提供了分离的IPD抗糖基化PD-L1抗体，例如单克隆抗体、其嵌合或人源化形式或其结合片段，其特异性结合选自以下的氨基酸序列内的表位：VHGEEDLKVQH------DAGVYRCMISYGGADYKRITV(SEQ ID NO:75)、DAGVYRCMISYGGADYKRITV(SEQ ID NO:76)或LKVQHSSYRQR------EGYPKAEVIWTSSDHQ，所述序列位于SEQ ID NO:1的人PD-L1多肽序列(即，包含SEQ ID NO:1的氨基酸19-290的成熟PD-L1蛋白质)内。在一个实施方案中，所述抗体抑制PD-1与PD-L1的相互作用，并且特别是抑制效应子T细胞表达的PD-1与PD-L1、特别是由肿瘤细胞表达的糖基化PD-L1的相互作用，以及促进PD-L1从细胞膜内化至细胞内和PD-L1的细胞内降解。
在用于本文所述的抗体组合方法和组合物中的另一个实施方案中提供了分离的IPD抗糖基化PD-L1抗体，例如单克隆抗体、其嵌合或人源化形式或其结合片段，其与MAbSTM073或如本文所述的分离的抗糖基化PD-L1 MAb结合相同的表位，其中所述表位包含SEQID NO:1的氨基酸残基H69、Y112、R113和K124。在另一个实施方案中，提供了分离的IPD抗糖基化PD-L1抗体，例如单克隆抗体、其嵌合或人源化形式或其结合片段，当与糖基化PD-L1结合时，其接触以下氨基酸残基中的至少一个：SEQ ID NO:1的H69、Y112、R113和K124。在实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体接触构成PD-L1(即糖基化人PD-L1)的表位区的氨基酸残基中的至少两个、至少三个或四个。
在用于本文所述的抗体组合方法和组合物中的另一个实施方案中提供了分离的IPD抗糖基化PD-L1抗体，例如单克隆抗体、其嵌合或人源化形式或其结合片段，其与MAbSTM108或分离的抗糖基化PD-L1 MAb结合相同的表位，所述分离的抗糖基化PD-L1 MAb结合包含SEQ ID NO:1的氨基酸残基S80、Y81、K162和S169的表位。在另一个实施方案中，提供了分离的IPD抗糖基化PD-L1抗体，当与糖基化PD-L1结合时，其接触以下氨基酸残基中的至少一个：SEQ ID NO:1的S80、Y81、K162和S169。
在用于本文所述的抗体组合方法和组合物中的另一个实施方案中提供了分离的IPD抗糖基化PD-L1抗体，例如单克隆抗体、其嵌合或人源化形式或其结合片段，当与糖基化PD-L1结合时，其接触以下氨基酸残基中的至少一个：SEQ ID NO:1的Y112、R113和S117。
在用于本文所述的抗体组合方法和组合物中的另一个实施方案中提供了分离的IPD抗糖基化PD-L1抗体，例如单克隆抗体、其嵌合或人源化形式或其结合片段，当与糖基化PD-L1结合时，其接触SEQ ID NO:1的V68至V128的氨基酸区域内，或SEQ ID NO:1的D108至V128的氨基酸区域内，或SEQ ID NO:1的L74至Q173的氨基酸区域内，或SEQ ID NO:1的L74至R84以及E158至Q173的氨基酸区域内的至少一个氨基酸。在另一个实施方案中，提供了分离的IPD抗糖基化PD-L1抗体，例如单克隆抗体、其嵌合或人源化形式或其结合片段，当与糖基化PD-L1结合时，其接触以下氨基酸残基组中的至少一个：SEQ ID NO:1的V68至V128的氨基酸区域内的H69、Y112、R113和K124。在另一个实施方案中，提供了分离的IPD抗糖基化PD-L1抗体，例如单克隆抗体、其嵌合或人源化形式或其结合片段，当与糖基化PD-L1结合时，其接触以下氨基酸残基组中的至少一个、至少两个、至少三个或四个：SEQ ID NO:1的V68至V173的氨基酸区域内的H69、S80、Y81、Y112、R113、K124、K162、S169。在一个实施方案中，提供了分离的IPD抗糖基化PD-L1抗体，例如单克隆抗体、其嵌合或人源化形式或其结合片段，当与糖基化PD-L1结合时，其接触以下氨基酸残基组：SEQ ID NO:1的D108至V128的氨基酸区域内的Y112、R113、S117。
在用于本文所述的抗体组合方法和组合物中的另一个实施方案中提供了分离的IPD抗糖基化PD-L1抗体，例如单克隆抗体、其嵌合或人源化形式或其结合片段，当与糖基化PD-L1结合时，其结合PD-L1蛋白质(SEQ ID NO:1)的至少氨基酸区域V68-V128或至少氨基酸区域D108-V128或其组合。
表4.IPD抗糖基化PD-L1MAb的核苷酸和氨基酸序列
抗糖基化PD-L1抗体的性质和特征
在一个实施方案中，所述组合的抗体中的一种或多种为嵌合抗体，例如，包含接枝至异源非人类、人类或人源化序列(例如，框架和/或恒定结构域序列)的来自非人类供体的抗原结合序列(例如，V结构域和/或CDR)的抗体。在一个实施方案中，非人类供体序列源自小鼠或大鼠。在具体实施方案中，所述VH和VL结构域是非人类的，例如，鼠和恒定结构域是人类的。在一个实施方案中，抗原结合序列是合成的，例如，通过诱变(例如，人类噬菌体文库的噬菌体展示筛选等)获得。在一个实施方案中，嵌合抗体具有鼠V区和人类C区。在一个实施方案中，鼠轻链V区融合至人类κ轻链C区。在一个实施方案中，鼠重链V区融合至人类IgG1C区。
在一个实施方案中，所述组合的抗体中的一种或多种或全部为衍生自骆驼科(camelid)抗体(优选源自重链骆驼科抗体，不含轻链)的免疫球蛋白单可变结构域，其已知为VHH结构域序列或NanobodiesTM。NanobodyTM(Nb)为天然存在的单链抗体的最小功能性片段或单可变结构域(VHH)且为本领域技术人员已知。它们仅衍生自在骆驼科中看到的仅重链抗体(Hamers-Cas terman等人,1993,Nature,363:446-448；Desmyter等人,1996,Nat.Struct.Biol.,第803-811页)。在“骆驼科”的家族中，发现不含多肽轻链的免疫球蛋白。“骆驼科”包含旧世界骆驼(双峰骆驼(Camelus bactrianus)和单峰骆驼(Camelusdromedarius))和新世界骆驼(例如，羊驼(Lama paccos)、大羊驼(Lama glama)、原驼(Lamaguanicoe)和瘦驼(Lama vicugna))。该单可变结构域重链抗体在本文中被称为NanobodyTM或VHH抗体。Nb的小尺寸和独特生物物理性质优于用于识别非常见或隐藏表位和用于结合进入蛋白质目标的腔或活性位点中的常规抗体片段。此外，Nb可被设计为连接至报导子分子的多特异性和多价抗体、或人源化抗体。Nb是稳定的，在胃-肠系统中存活且可容易地制造。
在另一个实施方案中，所述组合中的抗体中的至少一种为双特异性抗体。使两个具有不同特异性的抗原结合位点统一至单一构建体中，双特异性抗体具有使得两个具有强特异性的离散抗原结合在一起的能力且因此具有作为治疗剂的大大潜能。双特异性抗体初始通过将两个杂交瘤(各自能够产生不同免疫球蛋白)融合来制备。双特异性抗体也可通过将两个scFv抗体片段接合、同时省略存在于全免疫球蛋白中的Fc部分来产生。此类构建体中的各scFv单元可含有一个来自抗体重链(VH)和轻链(VL)各自的可变结构域，其经由合成多肽接头彼此接合，所述合成多肽接头通常被基因改造为免疫原性最小、同时最大程度上保留对蛋白水解的抗性。各自的scFv单元可通过多种已知技术接合，所述技术包括并入桥接两个scFv单元的短(通常少于10个氨基酸)多肽间隔区，由此产生双特异性单链抗体。因此，所得双特异性单链抗体为单多肽链上含有两个具有不同特异性的VH/VL对的种类，其中各自scFv单元中的VH和VL结构域通过足够长以允许此两个结构域之间的分子间缔合的多肽接头来隔开，使得如此形成的scFv单元通过保持短到足以防止例如一个scFv单元的VH结构域和另一scFv单元的VL之间的不想要的缔合的多肽间隔区彼此连续栓系。
在另一个实施方案中，所述组合的抗体中的至少一种为双互补位抗体。或者，提供了通过施用对糖基化PD-L1表位具有两种不同结合特异性的双互补位抗体的治疗方法，特别地，其中结合特异性之一是如本文所述的IPD抗糖基化PD-L1抗体结合结构域。如本文所用，术语“双互补位抗体”是指包含识别并结合相同蛋白质目标(例如，如本文所述的肿瘤相关联的PD-L1靶抗原或糖基化PD-L1靶抗原)上两个不同非重叠表位、抗原决定簇或结构域的两个抗原结合结构域的双特异性结合分子。在一个实施方案中，针对如本文所述的糖基化PD-L1或其一个或多个肽部分的双互补位抗体包含第一免疫球蛋白可变结构域和第二免疫球蛋白可变结构域，其中所述两个结合结构域结合相同靶糖基化PD-L1蛋白质上的两个不同非重叠表位。通过所述第一和第二免疫球蛋白结合结构域识别的表位中的一者或两者可被糖基化或含有糖基化残基。优选地，所述免疫球蛋白中的至少一种相对于未糖基化形式优先结合糖基化PD-L1蛋白质的糖基化形式。
在另一个实施方案中，双互补位抗体包含结合糖基化PD-L1靶分子上表位的免疫球蛋白(优选四价IgG)和结合相同糖基化PD-L1靶分子上的不同且非重叠表位的scFv，其中所述免疫球蛋白和scFv通过接头连接以允许免疫球蛋白和scFv结合糖基化PD-L1靶分子上的不同且非重叠表位。因此，双互补位抗体从结合相同糖基化PD-L1目标上不同表位(或结构域)的两种抗糖基化PD-L1抗体(即双互补位结合)产生以增强结合亲和力/亲合力；以增加肿瘤细胞上的抗体负载以促进效应子功能，诸如抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)；和/或以改善或增加肿瘤保留时间。此外，靶向肿瘤相关的糖基化PD-L1抗原上的两个非重叠表位的二价双互补位抗体具有诱导细胞膜中糖基化PD-L1靶分子簇集的潜力，这进而可促进增加的内化、溶酶体迁移和降解。可使用本领域中已知的技术产生针对靶蛋白质/抗原上两个不同非重叠表位的双互补位抗体。参见，例如，B.Roberts等人,1999,Int.J.Cancer,Vol.81:285-291(癌胚抗原，CEA)；D.Lu等人,1999,J.Immunol.Methods,Vol.230:159–71(血管内皮生长因子受体2，VEGF2)；WO 2009/068627,Ablynx NV，在2009年6月4日公开；WO 2010/142534和Ablynx NV，在2010年12月16日公开。
在一个实施方案中，二价双互补位抗体可通过使用来自两种不同的识别并结合给定糖基化PD-L1靶蛋白质上不同非重叠表位的如本文所述鉴定的抗糖基化PD-L1抗体的可变结构域序列产生，其中所述抗体含有连接至H链和/或L链的N-端，或可替代地，识别糖基化PD-L1上的不同且非重叠表位的第二抗PD-L1抗体的CH3结构域的C-端的抗糖基化PD-L1抗体之一的单链可变片段(scFv)。scFv可经由肽接头，例如，诸如用于连接scFv中的结合结构域的那些，连接至第二抗PD-L1抗体。参见，例如，Dimasi等人,J.Mol.Biol.,393:672-692(2009)。所得结合分子产物或双互补位抗体含有四个抗糖基化PD-L1结合单元或分子的每个臂上的两个结合单元，所述结合单元能够与糖基化PD-L1上两种不同表位相互作用并与其结合。根据该实施方案，靶向表达于肿瘤细胞表面上的糖基化PD-L1上两种非重叠表位的二价双互补位抗体可通过表位结合有效地使糖基化PD-L1交联以诱导细胞表面上糖基化PD-L1簇集，从而导致形成引发并促进增强的内化和溶酶体降解的大复合物。在一个实施方案中，双互补位抗体连接至毒素或抗癌药物以产生如本文进一步描述的抗体-药物缀合物(ADC)。此类抗PD-L1双互补位抗体的增强的内化和胞吞作用和溶酶体迁移最终导致更大量的毒素递送至靶细胞中和更大的肿瘤细胞杀死或消退。如针对双互补位抗HER2 ADC所述在体外和体内均观察到此类效应(J.Y.Li等人,2016,Cancer Cell,Vol.29:117-129)。说明性地，可产生双互补位抗糖基化PD-L1抗体或抗糖基化PD-L1 ADC，其特异性结合糖基化膜结合的PD-L1的两个非重叠表位以防止或阻断其与其PD-1同源结合配偶体相互作用和促进其内化和降解以及肿瘤细胞的杀死(如果使用抗糖基化PD-L1ADC)。具体而言，双互补位抗体具有一个作为IPD抗糖基化PD-L1结合结构域的结合结构域，且另一个是不是IPD抗体的抗糖基化PD-L1结合结构域。
在其他实施方案中，本发明涵盖的抗糖基化PD-L1结合分子或抗体可以是多互补位的，即，含有识别并结合相同糖基化PD-L1靶分子上三个、四个或更多个不同(优选非重叠)表位或抗原决定簇的抗原结合结构域。在其他实施方案中，所述抗糖基化PD-L1抗体是双互补位或多互补位且多价的，即，还包含识别并结合不同靶糖基化PD-L1分子上的一个或多个不同表位或抗原决定簇的抗原结合位点或“互补位”。
适合于使用的抗体片段的实例包括但不限于：(i)Fab片段，其由VL、VH、CL和CH1结构域组成；(ii)“Fd”片段，其由VH和CH1结构域组成；(iii)“Fv”片段，其由单一抗体的VL和VH结构域组成；(iv)“dAb”片段，其由VH结构域组成；(v)分离的CDR区；(vi)F(ab')2片段，包含两个连接的Fab片段的二价片段；(vii)单链Fv分子(“scFv”)，其中VH结构域和VL结构域通过使两个结构域缔合以形成结合结构域的肽接头连接；(viii)双特异性单链Fv二聚物(参见美国专利号5,091,513)；和(ix)通过基因融合构建的双功能抗体、多价或多特异性片段(美国专利申请公开号20050214860)。Fv、scFv或双功能抗体分子可通过并入连接VH和VL结构域的双硫桥而稳定化。包含接合至CH3结构域的scFv的微型抗体(Hu等人,1996,Cancer Res.,56:3055-3061)也可以是有用的。此外，实施方案中还涵盖抗体样结合模拟肽。Liu等人,2003,Cell Mol.Biol.,49:209-216已报告“抗体样结合模拟肽”(ABiP)以及较简单合成方法，所述ABiP为充当简化抗体且具有更长的血清半衰期的某些优点的肽。
动物可用抗原(诸如糖基化PD-L1多肽或肽)接种以产生免疫反应并产生对糖基化PD-L1多肽特异性的抗体。经常地，抗原被结合或缀合至另一分子以增强免疫反应。如本文所用，缀合物为结合至用于引发动物中的免疫反应的抗原的任何肽、多肽、蛋白质或非蛋白性物质。动物中响应于抗原接种所产生的抗体包含从产生多种个别抗体的B淋巴细胞制备的多种非相同分子(多克隆抗体)。多克隆抗体为抗体种类的混合群体，其各自可识别相同抗原上的不同表位。考虑到动物中产生多克隆抗体的正确条件，动物血清中的大多数抗体将识别动物所免疫的抗原化合物上的集体表位。该特异性通过亲和力纯化进一步增强以仅选择识别目标抗原或表位的那些抗体。
单克隆抗体为抗体的单一克隆种类，其中每一抗体分子识别相同表位，因为所有产生抗体的细胞源自单一的产生抗体的B-淋巴细胞。用于产生单克隆抗体(MAb)的方法一般与用于制备多克隆抗体的那些沿着相同路线开始。在一些实施方案中，在产生单克隆抗体中使用啮齿动物(诸如小鼠和大鼠)。在一些实施方案中，在产生单克隆抗体中使用兔、绵羊或青蛙细胞。大鼠的使用是众所周知的且可提供某些优点。常规使用小鼠(例如BALB/c小鼠)且一般而言可得到高百分比的稳定融合。如用于单克隆抗体产生中的杂交瘤技术涉及从先前用糖基化PD-L1蛋白质或肽免疫的小鼠分离的单一产生抗体的B淋巴细胞与永生化骨髓瘤细胞(例如，小鼠骨髓瘤细胞系)的融合。该技术提供繁殖单一产生抗体的细胞以得到无限代的方法，使得可产生无限个具有相同抗原或表位特异性的结构相同的抗体(即单克隆抗体)。
工程改造的抗体可使用单克隆和其他抗体和重组DNA技术以产生保留初始抗体的抗原或表位结合特异性的其他抗体或嵌合分子(即，该分子具有特异性结合结构域)来产生。此类技术可涉及将编码抗体的免疫球蛋白可变区或CDR的DNA引入不同抗体的用于框架区、恒定区或恒定区加上框架区的遗传物质。参见，例如，美国专利号5,091,513和6,881,557，其通过引用并入本文。
通过如本文所述的已知方法，可产生多克隆或单克隆抗体、具有结合活性的抗体片段、结合结构域和CDR(包括任何前述的工程改造形式)，其特异性结合糖基化PD-L1蛋白质、其各自表位中的一个或多个，且在某些实施方案中，阻断PD-L1与PD-1结合并促进肿瘤细胞中PD-L1的内化和降解，或任何前述的缀合物，无论此类抗原或表位分离自天然来源还是天然化合物的合成衍生物或变体。
可从任何动物来源(包括鸟和哺乳动物)产生抗体。优选地，所述抗体为绵羊、鼠(例如，小鼠和大鼠)、兔、山羊、豚鼠、骆驼、马或鸡。此外，可通过筛选人类组合抗体文库来获得人类抗体。例如，噬菌体抗体表达技术允许在不存在动物免疫的情况下产生特异性抗体，如美国专利号6,946,546中所述，其通过引用并入本文。这些技术进一步描述于Marks,1992,Bio/Technol.,10:779-783；Stemmer,1994,Nature,370:389-391；Gram等人,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:3576-3580；Barbas等人,1994,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,91:3809-3813；和Schier等人,1996,Gene,169(2):147-155。
用于在各种动物物种中产生多克隆抗体以及用于产生各种类型的单克隆抗体(包括人源化抗体、嵌合抗体和完全人类抗体)的方法是本领域中众所周知的且高度可再现。例如，以下美国专利提供此类方法的描述且通过引用并入本文：美国专利号3,817,837；3,850,752；3,939,350；3,996,345；4,196,265；4,275,149；4,277,437；4,366,241；4,469,797；4,472,509；4,606,855；4,703,003；4,742,159；4,767,720；4,816,567；4,867,973；4,938,948；4,946,778；5,021,236；5,164,296；5,196,066；5,223,409；5,403,484；5,420,253；5,565,332；5,571,698；5,627,052；5,656,434；5,770,376；5,789,208；5,821,337；5,844,091；5,858,657；5,861,155；5,871,907；5,969,108；6,054,297；6,165,464；6,365,157；6,406,867；6,709,659；6,709,873；6,753,407；6,814,965；6,849,259；6,861,572；6,875,434；6,891,024；7,407,659；和8,178,098。
预期如本文所提供的针对糖基化PD-L1的抗体将具有中和、阻断、抑制或抵消糖基化PD-L1的效应(不论动物物种、单克隆细胞系或抗体的其他来源)的能力。某些动物物种可能因为其更可能由于通过抗体的“Fc”部分活化补体系统而引起免疫或过敏性反应而对于产生治疗性抗体而言不太优选。然而，整个抗体可酶促消化为“Fc”(补体结合)片段，且被消化为具有结合结构域或CDR的肽片段。Fc部分的移除降低该抗体片段将引发不期望的免疫反应的可能性，且因此没有Fc部分的抗体可优先用于预防性或治疗性治疗。如上文所述，抗体也可构建为嵌合抗体、人源化抗体或部分或完全人类抗体，以便减小或消除由对动物施用抗体所导致的可能的不良免疫效应，所述抗体已在另一物种中产生或具有来自另一物种的氨基酸序列。
抗体蛋白质可以是重组的，或在体外合成。预期在如本文所述的含抗糖基化PD-L1抗体的组合物中，每ml存在约0.001mg和约10mg之间的总抗体多肽。因此，组合物中抗体蛋白质的浓度可以是约、至少约或至多约或等于0.001、0.010、0.050、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0mg/ml或更大(或其中可衍生的任何范围)。其中，约、至少约、至多约或等于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％可以是结合糖基化PD-L1的抗体。
融合体和缀合物
抗体或抗体的保留结合活性的免疫部分可化学缀合至或重组表达为与其他蛋白质的融合蛋白质。为了本文所述的目的，所有此类融合蛋白质包括在抗体或抗体的免疫部分的定义中。在一些实施方案中，涵盖产生的针对糖基化PD-L1的IPD抗体和抗体样分子或连接至至少一种试剂以形成抗体缀合物或有效负载(payload)的多肽。为了增加抗体分子作为诊断剂或治疗剂的效力，抗体可连接或共价结合至抗体的至少一个所需分子或部分或与其形成复合物。此类连接的分子或部分可以是，但不限于，至少一个效应子或报导子分子。效应子分子包含具有所需活性(例如细胞毒性活性)的分子。可连接至抗体的效应子分子的非限制性实例包括毒素、治疗性酶、抗生素、放射标记的核苷酸等。相反，报导子分子被定义为可使用测定法检测到的任何部分。可缀合至抗体的报导子分子的非限制性实例包括酶、放射性标记物、半抗原、荧光标记物、磷光分子、化学发光分子、发色团、发光分子、光亲和分子、着色颗粒或配体(诸如生物素)等。本领域中已知几种方法用于将抗体连接或缀合至缀合分子或部分。一些连接方法涉及使用金属螯合物络合物，通过非限制性实例的方式，使用连接至抗体的有机螯合剂，诸如二乙三胺戊乙酸酐(DTPA)；乙三胺四乙酸；N-氯-对甲苯磺酰胺；和/或四氯-3-6α-二苯基乙炔脲-3。抗体(具体而言如本文所述的抗体)也可与酶在偶联剂(诸如戊二醛或过碘酸盐)存在的情况下反应。与荧光素标记物的缀合物常规上在这些偶联剂存在的情况下或通过与异硫氰酸盐反应进行制备。在另一个实施方案中，如本文所述的IPD抗糖基化PD-L1抗体可偶联或连接至化合物或物质，诸如聚乙二醇(PEG)，以增加施用后其在血浆、血清或血液中的体内半衰期。
在实施方案中，本文提供的抗糖基化PD-L1抗体也可表达为与其他蛋白质的融合蛋白质或化学缀合至另一部分。在一些实施方案中，所述抗体具有Fc部分，其可以通过同种型或亚类变化，可以是嵌合或杂合的，和/或可修饰，例如以改善效应子功能，控制半衰期或组织可接近性，增强生物物理特征，诸如稳定性，和改善生产效率，其可与成本减少相关。可用于构建融合蛋白质的许多修饰和其制造方法是本领域中已知的，例如，如Mueller,J.P.等人,1997,Mol.Immun.34(6):441-452；Swann,P.G.,2008,Curr.Opin.Immunol.,20:493-499；和Presta,L.G.,2008,Curr.Opin.Immunol.,20:460-470所报道。在一些实施方案中，Fc区是抗体的天然IgG1、IgG2或IgG4Fc区。在一些实施方案中，Fc区是杂合的，例如，含有IgG2/IgG4Fc恒定区的嵌合体。对Fc区的修饰包括但不限于经修饰以防止与Fcγ受体和补体结合的IgG4；经修饰以改善与一种或多种Fcγ受体结合的IgG1；经修饰以使效应子功能(氨基酸变化)最小化的IgG1；具有改变/不含聚糖(通常通过改变表达宿主)的IgG1；和与FcRn的pH-依赖性结合改变的IgG1。Fc区可包括抗体的完整铰链区或非完整铰链区。
另一个实施方案包括已减小与FcR结合且增加其半衰期的IgG2-4杂合体和IgG4突变体。代表性IG2-4杂合体和IgG4突变体描述于例如Angal等人,1993,Molec.Immunol.,30(1):105-108；Mueller等人,1997,Mol.Immun.,34(6):441-452；和美国专利号6,982,323；其全部在此通过引用并入。在一些实施方案中，缺失IgG1和/或IgG2结构域。例如，Angal等人(同上)描述其中IgG1和IgG2结构域的丝氨酸241被脯氨酸置换的蛋白质。在一些实施方案中，设想具有至少10个、至少20个、至少30个、至少40个、至少50个、至少60个、至少70个、至少80个、至少90个或至少100个氨基酸的融合蛋白质或多肽。
在一些实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体或糖基化PD-L1多肽连接至或共价结合至少一个部分或与至少一个部分形成复合物。此部分可以是，但不限于，增加抗体作为诊断剂或治疗剂的效力的部分。在一些实施方案中，该部分可以是成像剂、毒素、治疗性酶、抗生素、放射性标记的核苷酸、化疗剂等。
抗体-药物缀合物(ADC)
抗体药物缀合物(ADC)为生物治疗剂，其中强效细胞毒性药物经由化学接头或偶联剂共价连接至针对特异性靶抗原(具体而言，表达或过表达于肿瘤或癌细胞表面上的靶抗原)的抗体(通常为单克隆抗体)。此类“加载”抗体被设计成将致死性细胞毒性物质(cargoes)递送至肿瘤或癌细胞。ADC提供用于将加载药物靶向至肿瘤细胞、同时减小副作用和使全身性毒性最小化的方法。ADC凭借ADC的抗体组分与其靶抗原的特异性相互作用结合细胞表面表达的靶抗原。在结合靶抗原之后，ADC可被内化至细胞中，具体而言，如果抗体具有提高的内化活性，则本文所述的IPD抗糖基化PD-L1抗体(例如，STM108和STM073)也是如此。因此，当此类ADC被内化至细胞中时，它们直接用于杀死细胞或靶向细胞内部的分子，其导致细胞凋亡或细胞死亡。此类包含本文所述的抗糖基化PD-L1抗体(具体而言，单克隆、人源化、嵌合或人类抗体)的ADC将抗体特异性靶向至肿瘤和癌细胞上的糖基化PD-L1与细胞毒性药物或化合物的癌杀死能力组合，由此提供用抗糖基化PD-L1抗体治疗和疗法的进一步的优点。用于制备和使用ADC的技术是本领域中已知的而并非旨在限制本文所述的抗糖基化PD-L1抗体。(参见，例如，Valliere Douglass,J.F.,等人,2015,Mol.Pharm.,12(6):1774-1783；Leal,M.等人,2014,Ann.N.Y.Acad.Sci.,1321:41-54；Panowski,S.等人,2014,mAbs,6(1):34-45；Beck,A.2014,mAbs,6(1):30-33；Behrens,C.R.等人,2014,mAbs,6(1):46-53；和Flygare,J.A.等人,2013,Chem.Biol.Drug Des.,81(1):113-121)。在实施方案中，上述部分(特别是，毒素和细胞毒素)的一部分或全部可以缀合至抗糖基化PD-L1抗体以产生用于治疗癌症的有效ADC。在实施方案中，ADC的抗糖基化PD-L1抗体组分可以是双特异性、多特异性、双互补位或多互补位抗体。
用于将治疗性或细胞毒性部分缀合至抗体缀合的技术是众所周知的；参加，例如，Amon等人,“Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In CancerTherapy”,MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY,Reisfeld等人(编),1985,pp.243-56,Alan R.Liss,Inc.)；Hellstrom等人,“Antibodies For Drug Delivery”,CONTROLLED DRUG DELIVERY(第2版),Robinson等人(编),1987,pp.623-53,MarcelDekker,Inc.)；Thorpe,“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review”,MONOCLONAL ANTIBODIES'84:BIOLOGICAL AND CLINICAL APPLICATIONS,Pinchera等人(编),1985,pp.475-506)；“Analysis,Results,And Future Prospective OfThe Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”,MONOCLONALANTIBODIES FOR CANCER DETECTION AND THERAPY,Baldwin等人(编),1985,pp.303-16,Academic Press；Thorpe等人,Immunol.Rev.62:119-158(1982)；Carter等人,Cancer J.14(3):154-169(2008)；Alley等人,Curr.Opin.Chem.Biol.14(4):529-537(2010)；Carter等人,Amer.Assoc.Cancer Res.Educ.Book.2005(1):147-154(2005)；Carter等人,CancerJ.14(3):154-169(2008)；Chari,Acc.Chem Res.41(1):98-107(2008)；Doronina等人,Nat.Biotechnol.21(7):778-784(2003)；Ducry等人,Bioconjug Chem.21(1):5-13(2010)；Senter,Curr.Opin.Chem.Biol.13(3):235-244(2009)；和Teicher,Curr Cancer DrugTargets.9(8):982-1004(2009)。ADC和ADC肿瘤学产品的综述可见于Lambert,BritishJ.Clin.Pharmacol.,76(2):248-262(2013)和Bouchard等人,Bioorganic&MedicinalChemistry Letters,24:5357-5363(2014)。
在具体实施方案中，有利于PD-L1内化至肿瘤细胞中的IPD抗糖基化PD-L1抗体通常通过具有不稳定键的化学接头缀合至高度强效的如上所示的生物活性药物或药剂(诸如细胞毒性和/或化学治疗剂、毒素或细胞毒素)或放射性核素，以产生抗糖基化PD-L1抗体-药物缀合物(ADC)(本文中称为抗糖基化PD-L1抗体-ADC)。例如，生物活性药物或细胞毒性剂充当“细胞毒性有效负载”，其被递送至细胞(具体而言表达由抗糖基化PD-L1抗体-ADC所结合的细胞表面靶受体或分子的肿瘤或癌细胞)中。此结合至其靶分子的抗糖基化PD-L1抗体-ADC被内化至其中释放细胞毒性药物有效负载的细胞中。通过缀合至高度强效细胞毒性有效负载内化本文所述的抗糖基化PD-L1抗体的癌细胞杀死活性的增强可提供具有高抗肿瘤活性和一般而言良好耐受的轻度不利效应的抗癌ADC生物制剂。
所述组合的至少一种抗糖基化PD-L1抗体可以与本领域已知和使用或者尚未商业化的各种类型的细胞毒性或DNA作用有效负载连接。在一些实施方案中，缀合或融合至抗糖基化PD-L1抗体的部分可以是酶、激素、细胞表面受体、毒素，诸如(但不限于)相思豆毒素、蓖麻毒素A、假单胞菌外毒素(即PE-40)、白喉毒素、蓖麻毒素、白树毒素(gelonin)或美洲商陆(pokeweed)抗病毒蛋白质)、蛋白质(诸如肿瘤坏死因子、干扰素(例如，α-干扰素、β-干扰素)、神经生长因子(NGF)、血小板源性生长因子(PDGF)、组织纤维蛋白溶酶原活化剂(TPA)或细胞凋亡剂(例如，肿瘤坏死因子-α、肿瘤坏死因子-β))、生物反应改善剂(诸如，例如，淋巴因子(例如，白介素-1(“IL-1”)、白介素-2(“IL-2”)、白介素-6(“IL-6”))、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(“GM-CSF”)、粒细胞集落刺激因子(“G-CSF”)或巨噬细胞集落刺激因子(“M-CSF”)、或生长因子(例如，生长激素(“GH”))、细胞毒素(例如，细胞生长抑制剂或杀细胞剂，诸如紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、吐根碱、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙素、多柔比星、道诺霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔、基于妥布莱森(tubulysin)的微管抑制剂和嘌呤霉素和其类似物或同源物)、抗代谢物(例如，甲胺喋呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪)、烷基化剂(例如，氮芥、噻替哌苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、美法仑、(卡莫司汀；BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲霉素、丝裂霉素C和顺二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)、蒽环霉素(例如，道诺霉素(原名为正定霉素(daunomycin))和多柔比星)、抗生素(例如，放线菌素(dactinomycin)(原名为放线菌素(actinomycin))、博来霉素、光神霉素和安曲霉素(anthramycin)(AMC))、抗有丝分裂剂和/或微管蛋白抑制剂，例如，长春新碱和长春花碱、单甲基奥瑞他汀F(MMAF)、单甲基奥瑞他汀E(或去甲基-奥瑞他汀E)(MMAE)，例如，维多汀(vedotin)；或其组合。
在优选实施方案中，所述抗体缀合至美登素，美登素为最先分离自埃塞俄比亚灌木卵叶美登木(Maytenus ovatus)的树皮的苯并桥环大环内酯(benzoansamacrolide)。该细胞毒性剂和其衍生物(例如类美登素)结合长春花生物碱(Vinca alkaloid)结合位点附近的微管蛋白。它们被视为对位于微管末端的微管蛋白具有高亲和力而对分布贯穿微管中的位点的亲和力较低。微管动力学的抑制引起细胞停滞在细胞周期的G2/M期，最终导致通过细胞凋亡的细胞死亡。(Oroudjev等人,Mol.Cancer Ther.,10L2700-2713(2010))。两种美登素衍生物(含硫醇类美登素)包括DM1和DM4(ImmunoGen,Inc.，Waltham,MA)已广泛地与不可逆和可逆接头组合使用。具体而言，用硫醚接头连接至抗体的DM1称为“emtansine”；用SPP接头连接至抗体的DM1称为“mertansine”；用SPDB接头连接的DM4称为“ravtansine”；且用sSPDB接头连接的DM4称为“soravtansine”(ImmunoGen,Inc.，Waltham,MA)。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体-ADC包含微管蛋白作用的类美登素有效负载DM1。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体-ADC包含微管蛋白作用的类美登素有效负载DM4。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体-ADC包含DNA作用的有效负载，例如，DGN462(ImmunoGen,Inc.，Waltham,MA)。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体-ADC的抗糖基化PD-L1抗体组分为STM073的嵌合或人源化形式或其结合部分。在一个实施方案中，抗糖基化PD-L1抗体-ADC的抗糖基化PD-L1抗体组分为STM108的嵌合或人源化形式或其结合部分。
在一个具体实施方案中，缀合至抗糖基化PD-L1抗体的细胞毒性剂为MMAE(单甲基奥瑞他汀E(或去甲基-奥瑞他汀E))，一种高毒性抗肿瘤剂，其抗有丝分裂活性涉及通过阻断微管蛋白的聚合来抑制细胞分化。维多汀(国际非专属名称)是指MMAE加上其MMAE-抗体缀合物中连接至抗体的连接结构。在更具体实施方案中，ADC为STM073(嵌合或人源化形式)-MMAE或STM108(嵌合或人源化形式)-MMAE。
许多化学接头是已知的且用于将细胞毒性或DNA作用的药物有效负载缀合至抗体以产生ADC。单独或组合使用用于产生包含抗糖基化PD-L1抗体(具体而言，如本文所述的在结合其目标之后内化的那些)的ADC所涵盖的某些接头包括SMCC(4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷羧酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)；SPDB(3-(2-吡啶基二硫基)丁酸N-琥珀酰亚胺基酯)；SPP(4-(2-吡啶基二硫基)戊酸N-琥珀酰亚胺基酯)；磺基-SPDB或sSPDB(N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基二硫基)-2-磺丁酸酯)；硫醚接头琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯(MCC)；和vc(缬氨酸-瓜氨酸二肽接头)。通过实例的方式，工程改造的接头(例如，SMCC、SPDB、S-SPDB)(Immunogen,Inc.)已经被设计成在ADC结合肿瘤之前稳定然后在ADC在癌细胞内部内化后将有效负载效力优化。其他接头(诸如二肽vc接头，其为可组织蛋白酶裂解接头)可用于将抗体缀合至细胞毒性剂，诸如奥瑞他汀，其为衍生自多拉司他汀10的有丝分裂抑制剂，例如，单甲基奥瑞他汀E(MMAE)，例如，维多汀。细胞毒素可缀合至抗体，使得多于一个毒素分子连接至各抗体分子，例如，每个抗体可平均存在2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个毒素分子。
在一个具体实施方案中，MMAE通过马来酰亚胺基己酰基(MC)连接基间接连接至抗体半胱氨酸，所述连接基偶联至缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄氧羰基-MMAE(MC-vc-PAB-MMAE)。在“MC-vc-PAB-MMAE”线性结构中，“MC”由马来酰亚胺和己酸组成且为通常经由H链上的半胱氨酸基团连接至抗体的部分。进而，“MC”连接至由缬氨酸(Val)和瓜氨酸(Cit)组成的“vc”接头且其为通过肿瘤或癌细胞内部的组织蛋白酶裂解的组织蛋白酶可裂解接头。“vc”连接至MMAE细胞毒素所连接的间隔基“PAB”(即，对氨基苯甲酸)。MC-vc-PAB-MMAE ADC在通过蛋白酶诸如组织蛋白酶B裂解时释放出游离膜可渗透MMAE。在一个实施方案中，至抗体的接头在胞外液中是稳定的，但一旦ADC已进入肿瘤或癌细胞就被组织蛋白酶裂解，因此活化MMAE或其他毒素药物的抗有丝分裂机制。在另一个实施方案中，单甲基奥瑞斯汀F(MMAF)通过马来酰亚胺基己酰基连接至抗体半胱氨酸(MC-MMAF)。与MC-vc-PAB-MMAE ADC对比，MC-MMAF ADC是不可裂解的，例如MCC-DM1ADC，且必须在细胞内内化和降解，释放半胱氨酸-MC-MMAF作为细胞内部的活性药物。
在一个实施方案中，细胞毒性有效负载在ADC内化至细胞中之后释放于溶酶体中。在溶酶体中，溶酶体酶消化ADC的抗体组分。在溶酶体降解之后，药物(和药物-接头)有效负载释放于细胞质中，其中药物结合胞内目标，最终引起细胞死亡。最佳地，释放的有效负载是完全活性的，其中仍连接接头。在其中结合至ADC的目标导致不良转运至溶酶体的其他实施方案中，在靶细胞外部稳定、但其一旦在细胞内部就裂解抗体组分的有效负载的接头提供在细胞内、但在溶酶体外部有效负载释放的替代模式。在其他实施方案中，接头在胞外液中是稳定的，但一旦ADC已进入肿瘤或癌细胞就被组织蛋白酶裂解，因此活化毒素药物的抗有丝分裂或其他细胞毒性机制。在其他实施方案中，通过可裂解接头的作用释放的有效负载能够进入邻近癌细胞中且经由旁观者效应将其杀死，因此增强ADC的靶向和肿瘤杀死活性。
在一个实施方案中，如本文所述的IPD抗糖基化PD-L1抗体(诸如STM073或STM108Mab的人源化或嵌合形式)经由接头SMCC(4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺基酯)偶联至DM1。在另一个实施方案中，如本文所述的IPD抗糖基化PD-L1抗体(诸如STM073或STM108的人源化或嵌合形式)经由接头SPDB(3-(2-吡啶基二硫基)丁酸N-琥珀酰亚胺基酯)或sSPDB(N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基二硫基)-2-磺基丁酸酯)偶联至DM4。在另一个实施方案中，奥瑞他汀单甲基奥瑞他汀E通过马来酰亚胺基己酰基-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄氧基羰基(MC-vc-PAB-MMAE)连接至如本文所述的抗糖基化PD-L1抗体(诸如STM073或STM108的人源化或嵌合形式)的半胱氨酸残基。在一个具体实施方案中，ADC为STM108-MC-vc-PAB-MMAE。在另一个具体实施方案中，ADC为STM073-MC-vc-PAB-MMAE。在一个实施方案中，IPD抗糖基化PD-L1抗体-ADC每分子包含多个单位的药物(诸如MMAE)，诸如每分子包含1-10个、1-5个、2-5个、3-5个或2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个单位的药物(诸如MMAE)和其之间的值。在其他实施方案中，抗体药物比可以是2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大和2-10之间的范围和其之间的值。在实施方案中，STM108或STM073抗体的结合位点被并入双特异性、多特异性、双互补位或多互补位抗体或其抗原结合部分。此类包含如本文所述的IPD抗糖基化PD-L1抗体的ADC(例如上述STM108-MC-vc-PAB-MMAE)为癌症治疗提供了在杀死肿瘤和癌细胞上的强化且多层面的抗癌效应。但就几个说明性优点而言，抗人类糖基化PD-L1抗体(例如，MAb)-ADC(例如STM108-ADC)可阻断PD-1/PD-L1相互作用，由此增强T细胞免疫性和针对肿瘤细胞的效应子功能；其可选择性靶向表达于肿瘤和癌细胞上的糖基化PD-L1；其可在结合之后将肿瘤或癌细胞上的PD-L1内化，由此减少肿瘤或癌细胞上的表面表达的PD-L1且进一步减低PD-L1的致癌可能性；其可引起抗体内化所进入的肿瘤或癌细胞的细胞凋亡且释放毒性药物以损伤且最终杀死细胞；且其可通过经由从凋亡的肿瘤或细胞释放毒性药物杀死附近或邻近的肿瘤或癌细胞而促进旁观者效应。
在一些实施方案中，如本文所述的抗体可缀合至标记物，诸如肽，以利于纯化。在一些实施方案中，所述标记物为六-组氨酸肽，即，血细胞凝集素“HA”标签，其对应于衍生自流感血细胞凝集素蛋白质的表位(Wilson,I.A.等人,Cell,37:767-778(1984))或“flag”标签(Knappik,A.等人,Biotechniques 17(4):754-761(1994))。
在一些实施方案中，如本文所述的抗糖基化PD-L1抗体或糖基化PD-L1多肽可缀合至第二抗体以形成抗体异质缀合物，例如，如美国专利号4,676,980中所述。另外，此类异质缀合抗体可结合半抗原(例如荧光素)，或结合细胞标记物(例如，但非限制性地，4-1-BB、B7-H4、CD4、CD8、CD14、CD25、CD27、CD40、CD68、CD163、CTLA4、GITR、LAG-3、OX40、TIM3、TIM4、TLR2、LIGHT、ICOS、B7-H3、B7-H7、B7-H7CR、CD70、CD47)或结合细胞因子(例如，IL-7、IL-15、IL-12、IL-4TGF-β、IL-10、IL-17、IFNγ、Flt3、BLys)或趋化因子(例如，CCL21)。
抗糖基化PD-L1抗体与其他药剂的组合
在某些实施方案中，所述的组合物和方法涉及单独或与不是抗糖基化PD-L1抗体的第二或额外的药物或疗法组合施用两种或更多种抗糖基化PD-L1抗体的组合。此类药物或疗法可用于治疗任何疾病，所述疾病与PD-L1或糖基化PD-L1相关，优选与人PD-L1或糖基化人PD-L1与人PD-1的相互作用相关。例如，所述疾病可以是癌症。包含至少两种不同的抗PD-L1抗体(其优先结合糖基化PD-L1蛋白质，并且阻断或抑制PD-L1与PD-1结合，并且在IPD抗糖基化PD-L1抗体的情况下，促进PD-L1内化和降解)或其结合部分的组合物和方法在治疗癌症或其他疾病中具有治疗或保护作用，特别是通过预防、减少、阻断或抑制PD-1/PD-L1相互作用，由此提供治疗效果和治疗。
在所述方法中与抗糖基化PD-L1抗体组合组合使用的其他试剂可以改善治疗的疗效。这些额外药剂可以包括实现细胞表面受体和GAP接合的上调的药剂、化合物或药物、细胞生长抑制剂和分化剂、细胞粘着的抑制剂、增加过度增殖性细胞对细胞凋亡诱导剂的敏感性的药剂。通过升高GAP接合的数量的细胞间信号传导的增加可增强邻近过度增殖性细胞群体上的抗过度增殖效应。在其他实施方案中，细胞生长抑制剂或分化剂可与本发明实施方案的某些方面组合使用以改善治疗的抗过度增殖效力。预期细胞粘着的抑制剂改善本发明实施方案的效力。细胞粘着抑制剂的实例为粘着斑激酶(FAK)抑制剂和洛伐他汀(Lovastatin)。另外预期增加过度增殖性细胞对细胞凋亡的敏感性的其他药剂(诸如抗体c225)可用于本实施方案的抗体组合方法中以改善治疗效力。
组合疗法，包括不是抗糖基化PD-L1抗体的药剂与两种或更多种不同抗糖基化PD-L1抗体的那些，具有治疗性或保护效应且可增强治疗性或保护效应，和/或增加另一抗癌或抗过度增生疗法的治疗性效应。所述治疗性和预防性方法和组合物可以可有效实现所需效应，诸如杀死癌细胞和/或抑制细胞过度增殖的组合量提供。该方法可涉及施用两种或更多种不同抗糖基化PD-L1抗体或其结合片段和第二疗法的组合。第二疗法可或可不具有直接细胞毒性效应。例如，第二疗法可以是上调免疫系统而不具有直接细胞毒性效应的药剂。可将组织、肿瘤和/或细胞暴露于一种或多种包含一种或多种药剂(例如，抗体或抗癌药剂)的组合物或药物制剂，或将组织、肿瘤和/或细胞暴露于两种或更多种不同组合物或制剂，其中一种组合物提供例如1)抗体，2)抗癌药剂，3)抗体和抗癌药剂两者，或4)两种或更多种抗体。在一些实施方案中，第二疗法是抗PD-1抗体或不同的PD-L1抗体。非限制性地，示例性抗PD-1抗体包括派姆单抗和纳武单抗；示例性抗PD-L1抗体包括阿特朱单抗和度伐单抗。此外，预期此组合疗法可与化学疗法、放射疗法、手术疗法或免疫疗法组合使用。
通过实例的方式，当应用于细胞时，术语“接触”和“暴露”在本文用于描述其中将治疗性多肽(优选如本文所述的抗糖基化PD-L1抗体)递送至靶细胞或置为与靶细胞直接邻接，具体而言以特异性结合表达或高度表达于肿瘤或癌细胞表面上的靶抗原(例如PD-L1，具体而言，糖基化PD-L1)的方法。由治疗性抗糖基化PD-L1抗体或其结合片段的此类结合防止、阻断、抑制或减小效应子T-细胞上肿瘤或癌症细胞表达的PD-L1与PD-1的相互作用，由此防止与PD-L1/PD-1相互作用相关的免疫抑制。在实施方案中，还将化疗剂或放射治疗剂与抗糖基化PD-L1抗体或其结合片段的组合结合施用或递送至个体。为了实现细胞杀死，例如，将一种或多种药剂以可有效杀死细胞或防止其分化的组合量递送至细胞。
两种或更多种不同抗糖基化PD-L1抗体的组合可相对于彼此和另一抗癌治疗之前、期间、之后施用，以各种组合形式施用。施用可以在范围为彼此之前或之后连续至数分钟至数天至数周的间隔中。在其中抗体或抗体组合中的一种或多种与抗癌药剂分开提供给患者的实施方案中，通常确保一段显著时间段不会在每次递送时之间失效，使得施用的化合物仍能够针对患者发挥有利组合的效应。说明性地，在此类情况下，预期可在彼此的约12至24或72小时内和更具体而言在彼此的约6-12小时内对患者提供抗体组合和抗癌疗法。在一些情况下，希望显著延长治疗时间段，其中各次施用之间相隔数天(2天、3天、4天、5天、6天或7天)至数周(1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周)。
在某些实施方案中，治疗过程或治疗周期将持续1-90天或更长(该范围包括间隔天数和最后一天)。预期可在第1天至第90天中任何一天(该此范围包括间隔天数和最后一天)或其任何组合提供一种药剂，且在第1天至第90天中任何一天(该此范围包括间隔天数和最后一天)或其任何组合提供另一药剂。在单日(24小时期间)内，可对患者提供一次或多次施用。此外，在治疗过程之后，预期可能有一段不施用抗癌治疗的时间段。该时间段可持续例如1-7天、和/或1-5周、和/或1-12个月或更长(该此围包括间隔天数和上限时间点)，这取决于患者的状况，诸如预后、强度、健康等。将根据需要重复治疗周期。可采用治疗的各种组合。在下文显示的组合治疗方案的代表性实例中，抗糖基化PD-L1抗体或其结合片段的组合以“A”表示，而不是抗糖基化PD-L1抗体的抗癌疗法以“B”表示：
A/B/A B/A/B B/B/A A/A/B A/B/B B/A/A A/B/B/B B/A/B/B
B/B/B/A B/B/A/B A/A/B/B A/B/A/B A/B/B/A B/B/A/A
B/A/B/A B/A/A/B A/A/A/B B/A/A/A A/B/A/A A/A/B/A。
将本发明实施方案的任何抗体或疗法施用至患者将遵循施用此类化合物的一般方案，如果有毒性的话，考虑药剂的毒性。因此，在一些实施方案中，存在监测不良事件和毒性、特别是可归因于组合疗法的那些的步骤。
在一个实施方案中，提供了一种方法，其涉及单独地或与另一抗癌药剂组合施用两种或更多种抗糖基化PD-L1抗体的组合至有需要的患者(即，患有癌症或肿瘤的患者)。在施用治疗剂之前，评估患者的肿瘤或癌症样品中PD-L1的存在。如果此评估的结果揭示患者的肿瘤或癌症对于糖基化PD-L1为阳性，则将基于患者的糖基化PD-L1+肿瘤或癌症将更适合用两种或更多种抗糖基化PD-L1抗体的组合治疗且治疗可继续进行以实现更可能有益的结果的可能性来选择患者用于治疗。医疗专业人员或医师可建议患者继续抗糖基化PD-L1抗体的组合治疗方法，且该患者可基于医疗专业人员或医师的建议来决定继续治疗。此外，在治疗过程期间，可测定患者的肿瘤或癌细胞中糖基化PD-L1的存在作为监测治疗的进展或有效性的方法。如果测定显示例如患者的肿瘤或癌细胞上糖基化PD-L1的改变、损失或减小，则可由医疗专业人员结合患者决定治疗是否应继续或以某种方式改变(例如，更高的剂量、添加另一抗癌药剂或疗法等)来采取决策。
化学疗法
根据本发明实施方案的治疗或治疗性方法，可使用多种各样的化学治疗剂。术语“化学疗法”是指使用药物以治疗癌症。“化学治疗剂”意指在治疗癌症中施用的化合物或组合物。此类药剂或药物根据其在细胞中的活性模式(例如，其是否影响细胞周期和细胞生长和增殖和在什么阶段影响)来分类。或者，化学治疗剂可基于其直接交联DNA、插入DNA中、或通过影响细胞中核酸合成诱导染色体和有丝分裂异常的能力进行表征。
化学治疗剂的非限制性实例包括烷基化剂，诸如噻替哌和环磷酰胺；烷基磺酸酯，诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，诸如苯唑达帕(benzodopa)、卡波醌、美托达帕(meturedopa)和乌瑞替哌(uredopa)；乙烯亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫基磷酰胺和三羟甲蜜胺；乙酰素(尤其是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括合成类似拓扑替康)；苔藓抑素；卡里斯他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；念珠藻素(cryptophycin)(具体而言念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；多卡米星(duocarmycin)(包括合成类似物、KW-2189和CB1-TM1)；艾榴素(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；肉质网囊素(sarcodictyin)；海绵抑素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustards)，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、胆磷酰胺、雌氮芥、异环磷酰胺、氮芥(mechlorethamine)、氧化氮芥盐酸盐、美法仑(melphalan)、新氮芥、胆甾醇对苯乙酸氮芥(phenesterine)、泼尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)和乌拉莫司汀(uracil mustard)；亚硝基脲，诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素，诸如烯二炔类抗生素(例如，卡奇霉素，尤其是卡奇霉素γ1和卡奇霉素ω1)；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素A；双膦酸酯，诸如氯膦酸盐；埃斯培拉霉素(esperamicin)；和新抑癌素生色团和相关色蛋白烯双炔抗生素发色团、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素、奥沙尼菌素(authrarnycin)、氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C(cactinomycin)、卡拉比辛(carabicin)、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素、放线菌素、道诺霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(包括吗啉基-多柔比星、氰基吗啉基-多柔比星、2-吡咯啉并-多柔比星和脱氧阿霉素(deoxydoxorubicin))、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素(诸如丝裂霉素C)、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、波提洛霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁和佐柔比星；抗代谢物，诸如甲胺喋呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、蝶罗呤和曲美沙特；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤和硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿札胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、依诺他滨(enocitabine)和氟尿苷(floxuridine)；雄激素，诸如卡普睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)和睾内酯(testolactone)；抗肾上腺素，诸如米托坦和曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充液，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；贝斯他布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；迪佛法明(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鸟氨酸(elformithine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃坡霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸嫁；羟基脲；蘑菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；类美登素(maytansinoid)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫匹达漠(mopidanmol)；氮滨(nitraerine)；喷托他丁(pentostatin)；蛋胺氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；足叶草酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK多糖络合物；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；螺锗胺(spirogermanium)；细交键孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；新月毒素(trichothecenes)(特别是T-2毒素、韦拉卡瑞A(verracurin A)、杆孢菌素A(roridin A)和蛇形菌素(anguidine))；尿烷(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；呱泊溴烷(pipobroman)；加赛特辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；类紫杉醇，例如，紫杉醇(paclitaxel)和多西他赛吉西他滨(docetaxel gemcitabine)；6-硫基乌嘌呤；巯基嘌呤；铂配位络合物，诸如顺铂、奥沙利铂(oxaliplatin)和卡铂；长春花碱(vinblastine)；铂；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌；长春新碱(vincristine)；长春瑞滨(vinorelbine)；诺安托(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基喋呤(aminopterin)；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；伊立替康(irinotecan)(例如CPT-11)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视色素，诸如视黄酸；卡培他滨(capecitabine)；卡铂、丙卡巴肼(procarbazine)、普里克霉素(plicomycin)、吉西他滨(gemcitabine)、温诺平(navelbine)、法呢基(farnesyl)-蛋白转移酶抑制剂、反式铂(transplatinum)和任何上述的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
放射疗法
放射疗法包括用引起DNA损伤的药剂治疗。放射疗法已广泛地用于癌症和疾病治疗中且包括通常称为γ-射线、X-射线和/或将放射性同位素直接递送至肿瘤细胞的放射疗法。还预期DNA损伤因素的其他形式，诸如微波、质子束照射(美国专利号5,760,395和4,870,287)和UV-照射。最有可能的是，所有这些因素对DNA本身、DNA的前体、DNA的复制和修复和染色体的组装和维持均实现宽广范围的损伤。X-射线的示例性剂量范围为50至200伦琴的日剂量持续延长的时间段(3至4周)至2000至6000伦琴的单剂量范围内。放射性同位素的剂量范围广泛地变化且取决于同位素的半衰期、发射的辐射的强度和类型、肿瘤细胞的吸收和经历治疗的个体的耐受性。
免疫疗法
在所述方法的一些实施方案中，免疫疗法可与如本文所述的抗糖基化PD-L1抗体的组合的施用组合或结合使用。在癌症治疗的背景下，免疫疗法一般依赖于使用免疫效应子细胞和分子以靶向和破坏癌细胞。利妥昔单抗为此实例。其他检查点抑制剂也可组合施用，包括伊匹单抗。抗糖基化PD-L1抗体的组合也可与其他抗PD-1或抗PD-L1抑制剂(诸如针对PD-L1的其他抗体，其包括阿特朱单抗、度伐单抗或阿非鲁单抗(avelumab))或针对PD-1的抗体(包括纳武单抗、派姆单抗或pidilizumab)组合施用。免疫效应子可以是例如肿瘤细胞表面上对标记物(细胞表面蛋白质或受体)特异性的抗体。该抗体仅可充当疗法的效应子或其可募集其他细胞以实际上实现细胞杀死。该抗体也可缀合至药物或毒素(化学治疗剂、放射性核素、蓖麻毒素A链、霍乱毒素、百日咳毒素等)且仅充当靶向剂。或者，效应子可以是携带与肿瘤细胞目标直接或间接相互作用(例如，T-细胞上的PD-1/肿瘤细胞上的PD-L1相互作用)的表面分子的淋巴细胞。各种效应子细胞包括细胞毒性T细胞和自然杀伤(NK)细胞。
在免疫疗法的一个方面，肿瘤细胞必须携带适合于靶向的一些标记物(蛋白质/受体)。最佳地，肿瘤标记蛋白质/受体不存在于大多数其他细胞(诸如非癌细胞或正常细胞)上。存在许多肿瘤标记物且这些中的任一种在本发明实施方案的背景下可能适合通过与抗糖基化PD-L1抗体一起施用的另一药物或疗法的靶向。常见肿瘤标记物包括例如CD20、癌胚抗原(CEA)、酪氨酸酶(p97)、gp68、TAG-72、HMFG、唾液酸化的路易斯抗原(Sialyl LewisAntigen)、MucA、MucB、PLAP、层粘连蛋白受体、erbB和p155。免疫疗法的替代性方面是将抗癌效应与免疫刺激效应组合。还存在免疫刺激分子且包括细胞因子，诸如IL-2、IL-4、IL-12、GM-CSF、γ-IFN；趋化因子，诸如MIP-1、MCP-1、IL-8；和生长因子，诸如FLT3配体。
当前所研究或使用的免疫疗法的实例为免疫佐剂，例如，牛结核分枝杆菌、恶性疟原虫、二硝基氯苯和芳族化合物(美国专利号5,801,005和5,739,169；Hui和Hashimoto,1998,Infection Immun.,66(11):5329-5336；Chrisodoulides等人,1998,Microbiology,144(Pt 11):3027-3037)；细胞因子疗法，例如，α、β和γ干扰素；IL-1、GM-CSF和TNF(Bukowski等人,1998,Clinical Cancer Res.,4(10):2337-2347；Davidson等人,1998,J.Immunother.,21(5):389-398；Hellstrand等人,1998,Acta Oncologica,37(4):347-353)；基因疗法，例如，TNF、IL-1、IL-2和p53(Qin等人,1998,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95(24):14411-14416；Austin-Ward等人,1998,Revista Medica de Chile,126(7):838-845；美国专利号5,830,880和5,846,945)；和单克隆抗体，例如，抗CD20、抗神经节苷脂GM2和抗p185(Hollander,2012,Front.Immun.,3:3；Hanibuchi等人,1998,Int.J.Cancer,78(4):480-485；美国专利号5,824,311)。预期一种或多种抗癌疗法可与本文所述的抗体疗法一起使用。
外科手术
患有癌症的个体中约60％经历一些类型的外科手术，其包括预防性、诊断性或分级治愈性和缓解手术。治愈性手术包括物理上移除、切除和/或破坏所有或部分癌组织的切除术且可与其他疗法(诸如如本文所述的组合抗糖基化PD-L1抗体治疗、化学疗法、放射疗法、激素疗法、基因疗法、免疫疗法和/或替代疗法和其组合)结合使用。肿瘤切除术是指物理上移除肿瘤的至少一部分。除了肿瘤切除术外，通过外科手术的治疗包括激光手术、冷冻手术、电子手术和显微镜控制手术(莫氏手术(Mohs’surgery))。在切除癌细胞、组织或肿瘤的一部分或全部后，可在体内形成腔。治疗可通过该区域的灌注、直接注射或局部应用额外抗癌疗法来实现。可例如每1、2、3、4、5、6或7天或每1、2、3、4和5周或每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月重复此治疗。这些治疗同样可以是不同剂量的治疗。
蛋白质纯化
蛋白质(包括抗体和具体而言抗糖基化PD-L1抗体)纯化技术是本领域技术人员众所周知的。在一个水平上，这些技术涉及将细胞、组织或器官均质化和粗分级分离成多肽和非多肽部分。除非另外指明，否则目标蛋白质或多肽可进一步使用色谱和电泳技术纯化以实现部分或完全纯化(或纯化至同质性)。特别适合制备纯蛋白质或肽的分析方法为离子交换色谱、尺寸排除色谱、反相色谱、羟磷灰石色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳、亲和色谱、免疫亲和色谱和等电聚焦。一种特别有效的肽纯化方法为快效液相色谱(FPLC)或甚至高效液相色谱(HPLC)。如本领域中一般所知，可改变进行各个纯化步骤的顺序，和/或可省略某些步骤，且可仍然得到用于制备基本上纯化多肽的适合的方法。
纯化的多肽(诸如如本文所述的抗糖基化PD-L1抗体)是指可分离或分离自其他组分且相对于其可天然得到的状态而言纯化至任何程度的多肽。因此，分离或纯化的多肽也指非存在于其可天然存在，例如，细胞、组织、器官、生物样品等的环境中的多肽。一般而言，“纯化的”将是指已经历分级分离以移除各种其他组分的多肽组合物，且该组合物基本上保留其所表达生物活性。“基本上纯化”的组合物是指多肽形成组合物的主要组分，且因此，构成组合物的蛋白质组分的约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更多的组合物。
用于定量多肽(诸如抗体蛋白质)的纯化程度的各种方法是本领域技术人员根据本发明可知的。这些包括例如测定活性级分的比活性，或通过SDS/PAGE分析评估级分中多肽的量。用于评估级分的纯度的一种优选方法是计算该级分的比活性，将其与初始提取物的比活性进行比较，且因此计算其中的纯度，通过“纯化倍数”所评估。当然，用于表示活性量的实际单位将取决于经选择以跟随纯化的特定测定技术和表达的多肽是否表现出可检测活性。
一般不要求多肽将总是以其最纯状态提供。实际上，预期在某些实施方案中，较少的基本上纯化产物可具有效用。部分纯化可通过使用更少纯化步骤的组合，或通过使用相同一般纯化方案的不同形式来实现。例如，应理解，利用HPLC设备进行的阳离子交换柱色谱通常将导致比利用低压色谱系统的相同技术更大的纯化“倍数”。表现出较低相对纯化程度的方法可在蛋白质产物的总回收率和维持表达的蛋白质的活性方面具有优点。
亲和色谱是依赖于待分离的物质(蛋白质)和其可特异性结合的分子之间的特异性亲和力，例如，受体-配体类型的相互作用的色谱程序。柱材料(树脂)通过将结合配偶体之一共价偶联至不溶性基质来合成。然后，该柱材料能够从传送于柱树脂上的溶液特异性吸收物质。洗脱通过将条件改变为结合将被破坏/将不发生的条件(例如，变化的pH、离子强度、温度等)发生。基质应为不会将分子吸收至任何明显程度且具有宽广范围的化学、物理和热稳定性的物质。配体应以此种不影响其结合性质的方式偶联。该配体还应提供相对紧密的结合；然而，结合的物质的洗脱应在不破坏所需样品蛋白质或配体的情况下发生。
尺寸排除色谱(SEC)是其中溶液中的分子基于其尺寸或以更技术术语(其流体动力学体积)分离的色谱法。其通常应用于大分子或大分子复合物，诸如蛋白质和工业聚合物。通常，当使用水溶液以输送样品通过柱时，该技术被称为凝胶过滤色谱，相对于名称凝胶渗透色谱，其在将有机溶剂用作流动相时使用。SEC的基本原理是不同尺寸的颗粒将以不同速率洗脱(过滤)通过固定相，导致颗粒溶液基于尺寸而分离。如果所有所述颗粒同时或接近同时加载，则相同尺寸的颗粒应一起洗脱。
高效(又称为高压)液相色谱(HPLC)为通常用于生物化学和分析化学中以分离、鉴定和定量化合物的柱色谱的一种形式。HPLC利用保持色谱填充材料(固定相)的柱、将流动相移动通过柱的泵和显示分子的保留时间的检测器。保留时间根据固定相之间的相互作用、所分析的分子和所使用的溶剂而改变。
药物制剂
在进行包含两种或更多种不同抗糖基化PD-L1抗体的药物组合物的临床应用的情况下，制备适合预期应用的药物或治疗性组合物一般是有益的。一般而言，药物组合物可包含有效量的溶解或分散于药学上可接受的载体中的抗糖基化PD-L1抗体。在某些实施方案中，药物组合物可包含(例如)至少约0.1％抗体。在其他实施方案中，抗体可占该单位约2重量％至约75重量％，或例如约25重量％至约60重量％之间、和可从其间衍生的任何范围(包括上限和下限值)。每种治疗上有用的组合物中活性剂的量可以此种将以任何给定单位剂量获得合适剂量的方式来制备。制备此类药物制剂的领域的技术人员考虑因素(诸如溶解度、生物利用度、生物半衰期、施用途径、产品保存期以及其他药理学考量)，且因此，多种剂量和治疗方案可以是期望的。
另外根据某些方面，适合于施用的组合物可在有或没有惰性稀释剂的药学上可接受载体中提供。该载体应当是可同化的且包括液态、半固态(例如，凝胶或膏剂)或固态载体。载体或稀释剂的实例包括脂肪、油、水、盐水溶液、脂质、脂质体、树脂、粘合剂、填充剂等或其组合。如本文所用，“药学上可接受的载体”包括任何和所有水性溶剂(例如，水、醇/水溶液、乙醇、盐水溶液、肠胃外媒介物，诸如氯化钠、林格氏右旋糖等)、非水性溶剂(例如，丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射有机酯(诸如油酸乙酯))、分散介质、包衣剂(例如卵磷脂)、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗细菌剂或抗真菌剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体、对羟基苯甲酸酯(例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯)、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞)、等渗剂(例如，糖、氯化钠)、吸收延迟剂(例如，单硬脂酸铝、明胶)、盐、药物、药物稳定剂(例如，缓冲剂、氨基酸，诸如甘氨酸和赖氨酸、碳水化合物，诸如右旋糖、甘露糖、半乳糖、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、山梨糖醇、甘露醇等)、凝胶、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料、流体和营养补充剂，诸如类似材料和其组合，将由本领域普通技术人员所知。除了任何常规介质、试剂、稀释剂或载体对受体或对于其包含在内的组合物的治疗有效性有害的程度以外，其在实施所述方法的可施用组合物中的使用是适当的。根据众所周知的参数调整药物组合物中各种组分的pH和精确浓度。根据某些方面，将组合物与载体以任何方便和实用方式组合，即，通过溶液、悬浮液、乳化、混合物、包封、吸收、研磨等。此类程序对于本领域技术人员而言是常规的。
在某些实施方案中，所述组合物可包含不同类型的载体，这取决于其是否以固态、液态或气雾剂形式施用，和其是否需要针对施用途径(诸如注射)是无菌的。所述组合物可经配制以用于静脉内、皮内、经皮、鞘内、动脉内、腹膜内、鼻内、阴道内、直肠内、肌肉内、皮下、粘膜、经口、局部、通过吸入(例如，气雾剂吸入)、通过注射、通过输注、通过连续输注、直接、经由导管、经由灌洗术、在脂质组合物(例如脂质体)中局部灌注浴靶细胞、或通过其他方法或如本领域技术人员已知的前述的任何组合施用。参见，例如，Remington’sPharmaceutical Sciences，第18版，1990。通常，此类组合物可制备成液体溶液或悬浮液中任一种；也可制备适合在添加液体之后在注射之前用于制备溶液或悬浮液的固态或可重构形式；且也可乳化所述制剂。
所述抗体可配制成以游离碱、中性或盐形式的组合物。药学上可接受的盐包括酸加成盐，例如，与蛋白性组合物的游离氨基形成的那些，或其与无机酸(诸如例如盐酸或磷酸)或诸如乙酸、草酸、酒石酸或扁桃酸的有机酸形成。与游离羧基形成的盐也可衍生自无机碱，诸如例如钠、钾、铵、钙或铁氢氧化物；或有机碱诸如异丙胺、三甲胺、组氨酸或普鲁卡因。
在进一步实施方案中，可使用包括多肽、一种或多种脂质和水性溶剂的药物脂质媒介物组合物。如本文所用，术语“脂质”是指特征上不溶于水中且可用有机溶剂萃取的宽广范围物质中的任一种。该宽广类别的化合物是本领域技术人员众所周知的，且当本文中使用术语“脂质”时，其不受限于任何特定结构。实例包括含有长链脂族烃和其衍生物的化合物。脂质可以是天然存在或合成(即，由人设计并生产)。然而，脂质通常为生物物质。生物脂质是本领域众所周知的且包括例如中性脂肪、磷脂、磷酸甘油酯、类固醇、萜烯、溶血脂类(lysolipid)、鞘糖脂、糖脂质、硫脂、具有醚-和酯-连接的脂肪酸的脂质、可聚合脂质和其组合。当然，所述组合物和方法还涵盖除了本文具体描述的那些之外的本领域技术人员理解为脂质的化合物。本领域普通技术人员将熟悉可用于将组合物分散于脂质媒介物中的技术的范围。例如，可将抗体分散于含有脂质的溶液中，用脂质溶解，用脂质乳化，与脂质混合，与脂质组合，共价键合至脂质，在脂质中作为悬浮液包含，用胶束或脂质体包含或与其复合，或通过本领域普通技术人员已知的任何方式以其他方式与脂质或脂质结构结合。该分散液可或可不导致脂质体的形成。
术语“单位剂量”或“剂量”是指适合于个体中使用的物理上离散单位，各单位含有预定量的治疗性抗体或含有治疗性抗体的组合物，所述量经计算以产生上文结合其施用(即，适当途径和治疗方案)所讨论的所需反应。根据治疗次数和单位剂量两者的待施用的量取决于所需效应。施用于患者或个体的本发明实施方案的组合物的实际剂量可由身体和生理因素(诸如个体的体重、年龄、健康状况和性别、所治疗疾病的类型、疾病穿透的程度、先前或同时进行的治疗性干预、患者的自发病、施用途径和特定治疗性物质的效力、稳定性和毒性)来确定。在其他非限制性实例中，剂量也可包含每次施用约1微克/kg/体重、约5微克/kg/体重、约10微克/kg/体重、约50微克/kg/体重、约100微克/kg/体重、约200微克/kg/体重、约350微克/kg/体重、约500微克/kg/体重、约1毫克/kg/体重、约5毫克/kg/体重、约10毫克/kg/体重、约50毫克/kg/体重、约100毫克/kg/体重、约200毫克/kg/体重、约350毫克/kg/体重、约500毫克/kg/体重至约1000毫克/kg/体重或更大和从其中可衍生的任何范围。在从本文所列数值可衍生的范围的非限制性实例中，基于上文所述数值，可施用约5毫克/kg/体重至约100毫克/kg/体重、约5微克/kg/体重至约500毫克/kg/体重等的范围。前述剂量包括指定的那些之间的量且意欲还包括所述范围的下限和上限值。前述剂量可以是针对所提供的组合的每种抗糖基化PD-L1抗体，或针对总抗糖基化PD-L1抗体。在任何情况下，负责施用的专业者将决定组合物中活性成分的浓度和针对于个别个体的适当剂量。
治疗性组合物或制剂的特定性质并非意欲限制。例如，合适的组合物可以与生理上耐受的液体、凝胶、或固体载体、稀释剂和赋形剂一起在制剂中提供。在一些实施方案中，所述治疗性制剂可以类似于其他治疗剂的方式施用于哺乳动物用于兽用(诸如家畜)，和临床上在人类中使用。一般而言，如上所述，实现疗效所需要的剂量将根据使用的类型和施用模式、以及个别个体的特定要求而改变。
试剂盒和诊断剂
在另一个实施方案中，提供了含有治疗剂和/或其他治疗剂和递送试剂的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒用于制备和/或施用涉及两种或更多种不同的本文所述的抗糖基化PD-L1抗体的组合的疗法。所述试剂盒可包含一个或多个装纳如本文所述的药物组合物中任一种的密封小瓶。所述试剂盒可包括例如包含两种或更多种抗糖基化PD-L1抗体的组合的组合物或个别地用于组合施用的两种或更多种抗糖基化PD-L1抗体的组合物以及制备、配制和/或施用两种或更多种抗糖基化PD-L1抗体的组合或进行所述方法的一个或多个步骤的试剂。在一些实施方案中，所述试剂盒也可包含合适容器装置，其为将不会与试剂盒的组件(诸如Eppendorf管、测定板、针筒、瓶或管)反应的容器。所述容器可由可灭菌材料(诸如塑料或玻璃)制成。
所述试剂盒可进一步包括概述本文所述的方法的程序步骤的说明书页，并将遵循与本文所述实质上相同的程序或为本领域普通技术人员已知。说明书信息可在含有机器可读指令的计算机可读媒体中，当使用计算机执行时，其引起递送药物有效量的治疗剂的真实或虚拟程序的显示。
实施例
包括以下实施例以证实涉及组合施用的抗糖基化PD-L1抗体的抗肿瘤效用的实施方案。例举代表性抗糖基化PD-L1抗体的应用。本领域技术人员应理解，公开的抗糖基化PD-L1抗体是实例，而非旨在限制性的。
实施例1结合糖基化PD-L1的单克隆抗体的产生和抗糖基化PD-L1抗体与糖基化PD-L1的优先结合的测定
根据标准化方案，通过将SP2/0鼠骨髓瘤细胞与分离自人PD-L1-免疫的BALB/c小鼠(n＝6)的脾脏细胞(Antibody Solution,Inc.)融合来获得产生针对糖基化人PD-L1所产生的单克隆抗体的杂交瘤。在融合之前，使用FACS分析验证来自免疫小鼠的血清与PD-L1免疫原的结合。生成产生单克隆抗体(MAb)的杂交瘤。所有MAb的同种型为IgG1。再次测试产生抗体的杂交瘤的特异性。单克隆抗体的产生并不旨在限制性的，并且可以通过本领域常用且如上所述的方法和程序进行。
为了鉴定对糖基化PD-L1抗原特异性且相对于未糖基化PD-L1优先结合糖基化PD-L1的抗糖基化PD-L1 MAb(即糖基化PD-L1特异性MAb)，进行不同类型的测定。在检测MAb与糖基化PD-L1的优先结合的筛选测定中，基于通过FACS分析(使用细胞膜结合的蛋白质)的荧光强度测量值来确定抗体结合。通过实例的方式，使用BT549人类乳腺癌细胞系进行该测定。说明性地，根据常规程序用生物素标记过表达PD-L1WT(完全糖基化)的BT549细胞，然后与过表达PD-L1 4NQ(完全未糖基化PD-L1变体)的BT549细胞混合。将混合细胞与抗PD-L1抗体(例如，抗糖基化PD-L1抗体)孵育，且进一步与作为检测剂的与FITC缀合的二抗一起孵育。在洗涤之后，经由FACS/流式细胞术分析测量荧光强度(测量的荧光强度，MFI)以评价抗PD-L1抗体与膜结合的PD-L1WT(在细胞上)或与4NQ PD-L1(在细胞上)的相对结合。选择表现出对糖基化PD-L1(WT PD-L1)相对于未糖基化PD-L1(4NQ PD-L1)显著更高的MFI的抗体用于进一步评估。
通过实例的方式，使用BT549人乳腺癌细胞系进行用于评价抗体是否与未糖基化PD-L1相比优先结合糖基化PD-L1的测定。说明性地，将过表达PD-L1WT(完全糖基化)的BT549细胞根据常规程序用生物素标记，然后与过表达PD-L1 4NQ(完全未糖基化PD-L1变体)的BT549细胞混合。将混合细胞与抗PD-L1抗体(例如抗糖基化PD-L1抗体)一起孵育，并进一步与缀合有作为检测剂的FITC的二抗一起孵育。洗涤后，经由FACS/流式细胞术分析测量荧光强度(测量的荧光强度，MFI)以评价抗PD-L1抗体与膜结合的PD-L1WT(在细胞上)或4NQ PD-L1(在细胞上)的相对结合。STM004、STM073、STM108和STM115 MAb的荧光结合分析的结果显示于下表5中，其显示结合表达野生型(糖基化)PD-L1的BT549细胞(BT549PD-L1WT细胞)的抗体相对结合表达变体(未糖基化4NQ)PD-L1的BT549细胞(BT549PD-L1 4NQ细胞)的抗体的MFI值。表5中的实验结果显示STM073 MAb和STM004 MAb结合BT549PD-L1WT细胞(表达糖基化PD-L1的细胞)的MFI值相比结合BT549PD-L1 4NQ细胞(表达未糖基化PD-L1的细胞)的MFI值高约5倍。类似地，测定STM108 MAb结合BT549PD-L1WT细胞的MFI值相比结合BT549PD-L1 4NQ细胞的MFI值高约4倍。测定STM115 M Ab结合BT549PD-L1WT细胞的MFI值相比结合BT549PD-L1 4NQ细胞的MFI值高约2-3倍。
表5.测量的抗糖基化PD-L1 MAb的荧光强度值
基于结合分析，选择四十二个候选产生MAb的杂交瘤，在ADCF培养基中生长，浓缩含有单克隆抗体的上清液并纯化。在一些情况下，使用活细胞成像测定IncuCyteTM(EssenBioscience)，进一步测试纯化MAb的中和或抑制PD-L1和PD-1之间的相互作用(PD-L1/PD-1相互作用)的能力。对于该测定，将表达PD-L1的BT-549细胞与抗人PD-L1抗体孵育并与荧光标记的PD-1-Fc融合蛋白质一起孵育。根据制造商说明书，每小时通过IncuCyteTM Zoom定量配体和受体结合。基于该测定，发现所测试的42种MAb中有15种MAb完全阻断PD-L1与PD-1的结合。15种MAb中显示强阻断效力的一些Mab也在一定程度上结合未糖基化PD-L1。
在另一种测定中，将糖基化人PD-L1蛋白质和未糖基化PD-L1(即，用PNGase F处理的PD-L1蛋白质)包被于固相上并测试MAb与PD-L1抗原的结合亲和力。应理解“PD-L1抗原”与“PD-L1蛋白质”同义。所述MAb中有十二(12)种抗体显示相比未糖基化PD-L1蛋白质(用PNGase F处理的蛋白质)，与糖基化PD-L1蛋白质的更高亲和力的相互作用。对于进一步的特异性分析，通过Wes tern印迹和FACS流式细胞术分析法分析所选MAb。由各种分析法可知，发现MAb(诸如STM004、STM115、STM073和STM108)相比PD-L1的未糖基化形式特异性结合PD-L1的糖基化形式，这进一步验证这些MAb对糖基化PD-L1抗原的特异性。
实施例2结合测定
为了确定如本文所述的抗糖基化PD-L1单克隆抗体是否特异性抑制PD-1和PD-L1的相互作用，进行以下结合测定。在测定的第0天，从表达PD-L1的BT549靶细胞培养物除去含有血清的培养基，并用D-PBS轻轻冲洗两次。收获细胞并计数。将细胞悬浮液离心(1000RPM，5分钟)，并将细胞沉淀以50,000个细胞/mL重悬浮于培养基中。使用手动多通道移液管将细胞(100μL/孔，即5000个细胞/孔)接种至平底微孔板的每个孔中。将板在环境温度下静置30分钟。此后，将含有细胞的板在5％CO2培养箱中孵育过夜。
在测定的第1天(即，第二天早晨)，制备含有1μg/mL PD-1/Fc和Alex Fluor 488-山羊抗人IgG的1:400稀释液的培养基并在培养箱中加热至37℃。从培养箱中取出细胞板并吸出培养基，注意不要破坏细胞层。将50μL测试抗体以剂量依赖性方式添加至每个孔中。将50μL含有PD-1/Fc和Alex Fluor 488-山羊抗人IgG的培养基添加至每个孔中。将细胞板置于IncuCyte仪器中，并在第一次扫描前使其平衡20分钟。每1-2小时安排24小时自动重复扫描(10x)，持续最长达24小时。物镜：10x；容器类型：Corning 3596；扫描模式：标准；扫描模式：每孔4个图像；通道：相+“绿色”。图1A、1B和1C显示MAb STM073、STM108和STM004以剂量依赖性方式抑制PD-1/Fc与表达PD-L1的细胞的结合。对照测定结果显示于图1D中。
实施例3 PD-L1内化测定
为了确定抗糖基化PD-L1单克隆抗体是否促进PD-L1内化和降解，将A431细胞在无血清培养基中培养过夜，然后与10μg抗糖基化PD-L1抗体孵育两天。然后，收获所述细胞，并通过Western印迹评估细胞中的PD-L1。图2显示：与STM073的孵育显示相比对照(IgG)而言细胞中PD-L1的水平降低。
使用pHrodoTM Red Microscale标记试剂盒(ThermoFischer Scientific，Rochester,NY)，根据制造商说明书，通过用pHrodoTMRed染料标记抗体，显现STM073和STM108 MAb的细胞内化。简言之，对于分析，在时间0，接种细胞；在接种后24小时时，将细胞与标记的STM073或STM108 MAb(5μg/mL)一起孵育。在1小时后，使用IncuCyte仪器开始细胞的图像扫描，且每1小时安排24-小时重复扫描(10x)。物镜：10x；容器类型：Corning 356407；扫描模式：标准；扫描模式；每孔3个图像；通道：相+“红色”。图3A：野生型BT549细胞(人类腺管癌、乳腺癌细胞系)与STM073孵育；图3B：将过表达PD-L1WT(糖基化)的BT 549细胞与STM073孵育；图3C：将NCI-H226细胞(人类肺癌细胞系、鳞状细胞间皮瘤)与STM073孵育；图3D：将MCF-7细胞(人类乳腺癌细胞系、腺癌)与STM073孵育；和图3E：将表达PD-L1WT(糖基化)的BT 549细胞与STM108孵育。
实施例4由抗糖基化PD-L1抗体结合PD-L1促进PD-L1内化和降解
图4A-4C提供在抗糖基化PD-L1 MAb STM108与表达于BT549-PD-L1细胞上的PD-L1结合之后经由活细胞成像分析的PD-L1内化和降解的一个实例。在图4A-4C中，抗PD-L1抗体为STM108，其使用pHrodoTM Red Microscale标记试剂盒(ThermoFisher Scientific，Rochester,NY)，如上文在实施例3中所述，缀合至红色荧光染料(pHrodoTM Red(琥珀酰亚胺酯(pHrodoTM Red，SE))。绿色染色反映用Green DND-26染色的细胞，其为在经由活细胞成像所成像的活细胞中染色酸性区室(溶酶体)的细胞可渗透绿色染料。图4A显示在第一时间点(时间0)，STM108抗体被内化至细胞中，如通过由箭头指示的细胞的强红色胞内染色观察到。图4B显示图4A中的时间0之后的时间2分钟时描绘于图4A的相同细胞中弱化的胞内红色染色。图4C显示在图4A的时间0之后4分钟时缺少红色胞内染色，这反映细胞内部的STM108抗体和/或抗体-抗原复合物的降解。这些图像反映抗糖基化PD-L1抗体(诸如STM108 MAb)在结合表达于细胞表面上的PD-L1之后实现PD-L1的内化和降解。
实施例5由抗糖基化PD-L1抗体所结合的PD-L1在肿瘤细胞相对总T细胞中的内化
测试与活化或非活化T细胞相比，抗糖基化PD-L1抗体在结合细胞表面表达的PD-L1之后内化至PD-L1阳性肿瘤细胞中的能力。将抗糖基化PD-L1抗体STM004、STM073和STM108、和作为对照的小鼠IgG与来自周边血液的非活化总T细胞、来自周边血液的活化总T细胞和表达PD-L1的NCI-H226细胞一起孵育。为了T细胞活化，将总T细胞与珠粒(例如，惰性超顺磁性珠粒)混合(所述珠粒与抗CD3和抗CD28抗体(例如，ThermoFisher Scientific，Rochester,NY)以1:1比共价偶联)以模拟通过抗原呈递细胞的刺激的方式刺激T细胞(参见，例如,A.Trickett等人,2003,J.Immunol.Methods,275,Issues 1-2:251-255)。用pHrodoTM Red标记所有抗体且如实施例3中所述观察内化。图5A-5D和图5E-5H显示所测试抗体无一被内化至非活化总T细胞或活化总T细胞中。图5K和5L显示内化STM073和STM108 MAb在与这些细胞孵育之后被内化至NCI-H226细胞中，如通过红色胞内染色，相比标记的对照抗体mIgG(图5I)和相比标记的非内化STM004 MAb(图5J)所证实，其未显示红色胞内染色。本实施例证实IPD抗糖基化PD-L1抗体被选择性内化至表达PD-L1的肿瘤细胞中，但未内化至活化或非活化T细胞中。
实施例6抗糖基化PD-L1抗体的组合在减少荷瘤小鼠模型中的肿瘤体积方面的效力
为了生成小鼠肿瘤模型，将小鼠(6至8周龄的雌性；Jackson Laboratories,BarHarbor,ME,USA)根据每组中的平均肿瘤体积分组。将4T1细胞(与25μL MatrixgelBasement Membrane Matrix(BD Biosciences,San Jose,CA)混合的25μL培养基中的1×105个细胞)注射至乳腺脂肪垫中。用BALB/c小鼠的所有程序均在MD Anderson的机构动物护理和使用委员会(Institutional Animal Care and Use Committee)批准的指南下进行。对于用抗体的治疗，将100μg抗PD-L1抗体(STM004、STM073、STM108)或抗体组合(STM004+STM073或STM004+STM108)或对照小鼠IgG2a抗体(100μg)(Bio X Cell)在用肿瘤细胞接种动物后第3、5、7、9、11和13天腹膜内注射至动物中。用卡尺每3天测量肿瘤大小。使用下式计算肿瘤体积：π/6×长度×宽度2。对于用抗糖基化PD-L1抗体的组合治疗动物，将50μg每种抗体用于100μg的总剂量的组合抗体。实验的结果呈现于图6中。如在图6中可以观察到的那样，与IgG对照相比，在用STM004、STM073和STM108抗体治疗的动物中，肿瘤体积到约第9天降低；然而，在第15天至约第18天之后，与对照IgG抗体和单独使用的抗糖基化PD-L1抗体相比，用抗体组合疗法STM004+STM073和STM004+STM108治疗的动物中发现肿瘤体积甚至更大的降低。
鉴于本公开，本文中所公开和请求保护的所有方法可在无过度实验的情况下制得和实现。尽管已在实施方案和优选实施方案的方面描述所述组合物和方法，但对于本领域技术人员显而易见的是，可在不脱离所述的概念、精神和范围的情况下，对所述方法和在本文所述的方法的步骤或步骤的顺序中应用改变。更具体地，显而易见的是，化学上和生理上均相关的某些试剂可取代本文所述的试剂，同时将实现相同或相似结果。本领域技术人员显而易见的所有此类类似的替代和修改被视为在随附的权利要求所定义的所述实施方案的精神、范围和概念之内。
本文引用的所有专利、公开的专利申请和其他公开在此通过引用并入本申请中。

Claims (94)

1.治疗有需要的个体中的PD-L1-阳性癌症、肿瘤或赘生物的方法，其包括向具有PD-L1阳性癌症、肿瘤或赘生物的个体施用有效量的第一和第二分离的抗体的组合，其中所述第一抗体相对于未糖基化PD-L1选择性结合糖基化PD-L1，并且抑制糖基化PD-L1与PD-1的结合；并且其中所述第二抗体是这样的抗体，其相对于未糖基化PD-L1选择性结合糖基化PD-L1，抑制糖基化PD-L1与PD-1的结合，并促进PD-L1在肿瘤细胞上的内化和降解。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一分离的抗体在施用第二分离的抗体的同时、之前或之后施用于个体。
3.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述第一和第二分离的抗体是重组工程改造的、嵌合的或人源化的。
4.权利要求1至3中任一项的方法，其中所述第一和第二分离的抗体结合糖基化PD-L1，其Kd小于所述抗体结合未糖基化PD-L1表现出的Kd的一半。
5.权利要求4的方法，其中所述第一和第二分离的抗体结合糖基化PD-L1，其Kd比所述抗体结合未糖基化PD-L1表现出的Kd小至少10倍。
6.权利要求5的方法，其中所述第一和第二分离的抗体以5-20nM的亲和力结合糖基化PD-L1。
7.权利要求1至4中任一项的方法，其中在细胞流式细胞术测定法中，通过荧光标记物直接或间接可检测的第一和/或第二分离的抗体优先结合表达糖基化PD-L1的细胞，其测量的荧光强度(MFI)比所述抗体结合表达未糖基化PD-L1的细胞表现出的MFI高2倍至10倍。
8.权利要求7的方法，其中所述第一和/或第二分离的抗体优先结合表达糖基化PD-L1的细胞，其MFI比所述抗体结合表达未糖基化PD-L1的细胞表现出的MFI高3倍至5倍。
9.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述第一分离的抗体特异性结合糖基化PD-L1的表位，所述表位包含SEQ ID NO:1的氨基酸Y56、K62和K75中的至少一个。
10.权利要求1至9中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体特异性结合糖基化PD-L1的表位，所述表位包含SEQ ID NO:1的氨基酸H69、S80、Y81、Y112、R113、K162、K124和S169中的至少一个。
11.权利要求10的方法，其中所述表位包含SEQ ID NO:1的区域V68至V128内或区域L74至Q173内的氨基酸。
12.权利要求1至9中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体特异性结合糖基化PD-L1的表位，所述表位包含SEQ ID NO:1的氨基酸Y112、R113和S117中的至少一个。
13.权利要求12的方法，其中所述表位包含SEQ ID NO:1的区域D108至V128内的氨基酸。
14.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述第一分离的抗体特异性结合由单克隆抗体(MAb)STM004或MAb STM115识别的PD-L1的表位。
15.权利要求1至14中任一项的方法，其中所述第一分离的抗体与MAb STM004或MAbSTM115竞争或交叉竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。
16.权利要求1至15中任一项的方法，其中所述第一分离的抗体是MAb STM004或MAbSTM115的人源化或嵌合形式。
17.权利要求16的方法，其中所述第一分离的抗体是MAb STM004的人源化或嵌合形式。
18.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体特异性结合由MAbSTM073或MAb STM108识别的PD-L1的表位。
19.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体与MAb STM073或MAbSTM108竞争或交叉竞争与糖基化PD-L1的特异性结合。
20.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体是MAb STM073或MAbSTM108的人源化或嵌合形式。
21.权利要求20的方法，其中所述第二分离的抗体是MAb STM073的人源化或嵌合形式。
22.权利要求20的方法，其中所述第二分离的抗体是MAb STM108的人源化或嵌合形式。
23.权利要求1至8中任一项的方法，其中抗体组合包含作为MAb STM004的人源化或嵌合形式的第一分离的抗体，和作为MAb STM108的人源化或嵌合形式的第二分离的抗体。
24.权利要求1至8中任一项的方法，其中抗体组合包含作为MAb STM004的人源化或嵌合形式的第一分离的抗体，和作为MAb STM073的人源化或嵌合形式的第二分离的抗体。
25.权利要求1至8中任一项的方法，其中抗体组合包含作为MAb STM004的人源化或嵌合形式的第一分离的抗体，和作为MAb STM073的人源化或嵌合形式和MAb STM108的人源化或嵌合形式的第二分离的抗体。
26.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述第一分离的抗体包含MAb STM004或MAbSTM115的重链可变(VH)结构域或轻链可变(VL)结构域。
27.权利要求1至8或26中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体包含MAb STM073或MAb STM108的VH结构域或VL结构域。
28.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述第一分离的抗体包含来自MAb STM004或MAb STM115的重链CDR 1-3和/或轻链CDR 1-3。
29.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体包含来自MAb STM073或MAb STM108的重链CDR 1-3和/或轻链CDR 1-3。
30.权利要求1至29中任一项的方法，其中所述第一和第二分离的抗体具有人抗体框架区。
31.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述第一分离的抗体的VH结构域具有SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:19的氨基酸序列。
32.权利要求1至8或31中任一项的方法，其中所述第一分离的抗体的VL结构域具有SEQID NO:11或SEQ ID NO:27的氨基酸序列。
33.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体的VH结构域具有SEQ IDNO:44或SEQ ID NO:60的氨基酸序列。
34.权利要求1至8或33中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体的VL结构域具有SEQID NO:52或SEQ ID NO:68的氨基酸序列。
35.权利要求1至8或30至34中任一项的方法，其中所述第一分离的抗体的VH结构域具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列且所述VL具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列。
36.权利要求1至8或30至34中任一项的方法，其中所述第一分离的抗体的VH结构域具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列且所述VL具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列。
37.权利要求1至8或30至36中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体的VH结构域具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列且所述VL具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列。
38.权利要求1至8或30至36中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体的VH结构域具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列且所述VL结构域具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列。
39.权利要求16至38中任一项的方法，其中所述第一和第二分离的抗体包含人恒定结构域。
40.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述第一分离的抗体具有包含具有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的CDR H1、具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR H2和具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR H3的VH结构域，或包含具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR H1、具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR H2和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的CDR H3的VH结构域。
41.权利要求1至8或40中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体具有包含具有SEQID NO:45的氨基酸序列的CDR H1、具有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的CDR H2和具有SEQ IDNO:49的氨基酸序列的CDR H3的VH结构域，或包含具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR H2和具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR H3的VH结构域。
42.权利要求1至8或40中任一项的方法，其中所述第一分离的抗体具有包含具有SEQID NO:12的氨基酸序列的CDR L1、具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的CDR L2和具有SEQ IDNO:16的氨基酸序列的CDR L3的VL结构域。
43.权利要求1至8或41中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体具有包含具有SEQID NO:53的氨基酸序列的CDR L1、具有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR L2和具有SEQ IDNO:57的氨基酸序列的CDR L3的VL结构域。
44.权利要求1至8或40中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体具有包含具有SEQID NO:61的氨基酸序列的CDR H1、具有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的CDR H2和具有SEQ IDNO:65的氨基酸序列的CDR H3的VH结构域，或包含具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR H2和具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR H3的VH。
45.权利要求1至8或44中任一项的方法，其中所述第二分离的抗体具有包含具有SEQID NO:69的氨基酸序列的CDR L1、具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的CDR L2和具有SEQ IDNO:73的氨基酸序列的CDR L3的VL结构域。
46.权利要求1至8的方法，其中所述第一分离的抗体包含由与SEQ ID NO:2或18的核苷酸序列具有至少90％同一性的核苷酸序列编码的VH结构域，和/或由与SEQ ID NO:10或26的核苷酸序列具有至少90％同一性的核苷酸序列编码的VL结构域。
47.权利要求1至8的方法，其中所述第二分离的抗体包含由与SEQ ID NO:43或59的核苷酸序列具有至少90％同一性的核苷酸序列编码的VH结构域，和/或由与SEQ ID NO:51或67的核苷酸序列具有至少90％同一性的核苷酸序列编码的VL结构域。
48.权利要求46的方法，其中编码所述第一分离的抗体的VH和/或VL结构域的核苷酸序列与SEQ ID NO:2或18或SEQ ID NO:10或26的核苷酸序列分别具有至少95％同一性。
49.权利要求47的方法，其中编码所述第二分离的抗体的VH和/或VL结构域的核苷酸序列与SEQ ID NO:43或59或SEQ ID NO:51或67的核苷酸序列分别具有至少95％同一性。
50.权利要求46的方法，其中编码所述第一分离的抗体的VH和/或VL结构域的核苷酸序列与SEQ ID NO:2或18或SEQ ID NO:10或26的核苷酸序列分别具有至少98％同一性。
51.权利要求47的方法，其中编码所述第二分离的抗体的VH和/或VL结构域的核苷酸序列与SEQ ID NO:43或59或SEQ ID NO:51或67分别具有至少98％同一性。
52.权利要求40至51中任一项的方法，其中所述第一和第二分离的抗体具有人抗体框架区。
53.权利要求40至52中任一项的方法，其中所述第一和第二分离的抗体具有人抗体恒定结构域。
54.权利要求1至53中任一项的方法，其中所述第一或第二分离的抗体或两者是选自IgG、IgM、IgA的Ig类的抗体或其抗原结合片段。
55.权利要求1至54中任一项的方法，其中所述第一或第二分离的抗体或两者选自Fab'、F(ab')2、F(ab')3、单价scFv、二价scFv、双互补位、双特异性或单一结构域抗体。
56.权利要求55的方法，其中所述第一或第二分离的抗体或两者是双特异性或双互补位抗体。
57.权利要求56的方法，其中所述第一或第二分离的抗体或两者缀合至成像剂、化学治疗剂、细胞毒性剂、抗肿瘤剂或放射性核素。
58.权利要求1至56中任一项的方法，其中所述PD-L1阳性癌症是乳腺癌、肺癌、头颈癌、前列腺癌、食道癌、气管癌、皮肤癌、脑癌、肝癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、睾丸癌、结肠癌、直肠癌或皮肤癌。
59.权利要求1至56中任一项的方法，其中所述PD-L1阳性癌症是血液学癌症。
60.权利要求1至59中任一项的方法，其中所述第一和第二分离的抗体在药学上可接受的组合物中，所述药学上可接受的组合物包含药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或媒介物。
61.权利要求58或权利要求59的方法，其中所述抗体全身性、静脉内、皮内、肿瘤内、肌肉内、腹膜内、皮下或局部施用。
62.权利要求60的方法，其中所述组合物全身性、静脉内、皮内、肿瘤内、肌肉内、腹膜内、皮下或局部施用。
63.权利要求1至62中任一项的方法，其进一步包括向所述个体与所述第一分离的和所述第二分离的抗体组合施用至少第三抗癌药物或疗法。
64.权利要求63的方法，其中所述第三抗癌药物或疗法是化学治疗药物、细胞毒性药物、手术疗法、化学疗法、放射疗法、冷冻疗法、激素疗法、免疫疗法或细胞因子疗法。
65.权利要求1至56中任一项的方法，其中所述第一或第二分离的抗体或两者缀合至抗肿瘤剂以产生抗体-药物缀合物(ADC)。
66.权利要求65的方法，其中所述抗肿瘤剂是抑制微管蛋白聚合的药剂。
67.权利要求66的方法，其中所述药剂是类美登素或奥瑞他汀。
68.权利要求67的方法，其中所述类美登素是DM1或DM4。
69.权利要求67的方法，其中所述奥瑞他汀是MMAE或MMAF。
70.权利要求69的方法，其中所述奥瑞他汀是MMAE。
71.权利要求65的方法，其中所述第一分离的抗体化学缀合至MC连接基团，所述MC连接基团化学缀合至组织蛋白酶可切割接头，所述组织蛋白酶可切割接头化学缀合至PAB间隔区，所述PAB间隔区化学缀合至MMAE，由此形成ADC。
72.权利要求65或权利要求71的方法，其中所述第二分离的抗体化学缀合至MC连接基团，所述MC连接基团化学缀合至组织蛋白酶可切割接头，所述组织蛋白酶可切割接头化学缀合至PAB间隔区，所述PAB间隔区化学缀合至MMAE，由此形成ADC。
73.权利要求71或权利要求72的方法，其中所述组织蛋白酶可切割接头是缬氨酸-瓜氨酸(vc)。
74.权利要求65的方法，其中所述第一分离的抗体是STM004的人源化或嵌合形式或STM115的人源化或嵌合形式。
75.权利要求65的方法，其中所述第二分离的抗体是STM073的人源化或嵌合形式或STM108的人源化或嵌合形式。
76.权利要求65的方法，其中所述第一分离的抗体是STM004的人源化或嵌合形式且所述第二分离的抗体是STM108的人源化或嵌合形式。
77.权利要求65的方法，其中所述第一分离的抗体是STM004的人源化或嵌合形式且所述第二分离的抗体是STM073的人源化或嵌合形式。
78.权利要求65的方法，其中所述第二分离的抗体是STM108的人源化或嵌合形式。
79.权利要求65的方法，其中所述第二分离的抗体是STM073的人源化或嵌合形式。
80.减少或减缓有需要的个体中PD-L1阳性肿瘤的生长的方法，其包括向具有PD-L1阳性肿瘤的个体施用有效量的第一和第二分离的抗体的组合，其中所述第一抗体是相对于未糖基化PD-L1选择性结合糖基化PD-L1且抑制糖基化PD-L1与PD-1的结合的人源化、嵌合或重组产生的抗体；且其中所述第二抗体是相对于未糖基化PD-L1选择性结合糖基化PD-L1、抑制糖基化PD-L1与PD-1的结合并促进PD-L1在肿瘤细胞上的内化和降解的人源化、嵌合或重组产生的抗体。
81.药物组合物，其包含两种或更多种不同抗糖基化PD-L1抗体和药学上可接受的载体。
82.权利要求81的药物组合物，其中至少一种抗糖基化PD-L1抗体是IPD抗糖基化PD-L1抗体。
83.权利要求81或82的药物组合物，其包含MAb STM073的嵌合或人源化形式。
84.权利要求81至83中任一项的药物组合物，其包含MAb STM108的嵌合或人源化形式。
85.权利要求81至84中任一项的药物组合物，其包含MAb STM004的嵌合或人源化形式。
86.权利要求81至84中任一项的药物组合物，其包含MAb STM115的嵌合或人源化形式。
87.权利要求81至86中任一项的药物组合物，其中至少一种抗糖基化PD-L1抗体或两者缀合至抗肿瘤剂以产生抗体-药物缀合物(ADC)。
88.权利要求87的药物组合物，其中所述抗肿瘤剂是抑制微管蛋白聚合的药剂。
89.权利要求88的药物组合物，其中所述药剂是类美登素或奥瑞他汀。
90.权利要求89的药物组合物，其中所述类美登素是DM1或DM4。
91.权利要求89的药物组合物，其中所述奥瑞他汀是MMAE或MMAF。
92.权利要求91的药物组合物，其中所述奥瑞他汀是MMAE。
93.权利要求92的药物组合物，其中所述抗糖基化PD-L1抗体化学缀合至MC连接基团，所述MC连接基团化学缀合至组织蛋白酶可切割接头，所述组织蛋白酶可切割接头化学缀合至PAB间隔区，所述PAB间隔区化学缀合至MMAE，由此形成ADC。
94.权利要求93的药物组合物，其中所述组织蛋白酶可切割接头是缬氨酸-瓜氨酸(vc)。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110982824A (zh) * 2019-10-09 2020-04-10 天津大学 拮抗pd-1的抗体类似物bp基因及蛋白和应用

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11933786B2 (en) 2015-03-30 2024-03-19 Stcube, Inc. Antibodies specific to glycosylated PD-L1 and methods of use thereof
RU2018142573A (ru) 2016-06-20 2020-07-21 Ф-Стар Бета Лимитед Партнеры по связыванию lag-3
AU2017283181B2 (en) 2016-06-20 2024-08-15 F-Star Therapeutics Limited Binding molecules binding PD-L1 and LAG-3
GB201612520D0 (en) 2016-07-19 2016-08-31 F-Star Beta Ltd Binding molecules
CA3086098A1 (en) 2017-12-19 2019-06-27 F-Star Beta Limited Fc binding fragments comprising a pd-l1 antigen-binding site
WO2019227490A1 (en) * 2018-06-01 2019-12-05 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and methods for imaging
CN117442717A (zh) 2018-06-01 2024-01-26 大有华夏生物医药集团有限公司 治疗疾病或病况的组合物及其用途
GB201811403D0 (en) * 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Antibody molecules
GB201811408D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd CD137 Binding Molecules
TWI822815B (zh) * 2018-07-14 2023-11-21 財團法人生物技術開發中心 抗-人類ｐｄ-ｌ１之抗體及其用途
CA3165337A1 (en) * 2020-01-21 2021-07-29 Michael N. ALONSO Anti-pd-l1 antibodies
JP2023511363A (ja) * 2020-01-21 2023-03-17 ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド 坑ｐｄ－ｌ１抗体
CN114316022A (zh) * 2020-09-30 2022-04-12 正大天晴康方(上海)生物医药科技有限公司 结合pd-1抗体的肽及其应用
WO2024111633A1 (ja) * 2022-11-24 2024-05-30 国立大学法人徳島大学 タンパク質に対する抗体の作製
WO2024120084A1 (zh) * 2022-12-07 2024-06-13 宜明昂科生物医药技术（上海）股份有限公司 使用cd24抗体和pd-1-pd-l1通路阻断抗体的癌症联合疗法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015061668A1 (en) * 2013-10-25 2015-04-30 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Anti-pd-l1 monoclonal antibodies and fragments thereof
WO2016092419A1 (en) * 2014-12-09 2016-06-16 Rinat Neuroscience Corp. Anti-pd-1 antibodies and methods of use thereof

Family Cites Families (95)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
US3817837A (en) 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
US3939350A (en) 1974-04-29 1976-02-17 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4196265A (en) 1977-06-15 1980-04-01 The Wistar Institute Method of producing antibodies
US4277437A (en) 1978-04-05 1981-07-07 Syva Company Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4366241A (en) 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
US4957939A (en) 1981-07-24 1990-09-18 Schering Aktiengesellschaft Sterile pharmaceutical compositions of gadolinium chelates useful enhancing NMR imaging
US4867973A (en) 1984-08-31 1989-09-19 Cytogen Corporation Antibody-therapeutic agent conjugates
US4472509A (en) 1982-06-07 1984-09-18 Gansow Otto A Metal chelate conjugated monoclonal antibodies
US4606855A (en) 1982-07-26 1986-08-19 Mex Research Associates C/O Leon Reimer Monoclonal antibody to digoxin
US4469797A (en) 1982-09-23 1984-09-04 Miles Laboratories, Inc. Digoxigenin immunogens, antibodies, labeled conjugates, and related derivatives
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DE3330160A1 (de) 1983-08-20 1985-03-07 Boehringer Ingelheim KG, 6507 Ingelheim Monoklonaler antikoerper mit hoher affinitaet zum digoxin
DE3342870A1 (de) 1983-11-26 1985-06-05 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Digitalis-antikoerper, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung zur therapie von digitalis-intoxikationen
US4767720A (en) 1985-08-29 1988-08-30 Hsc Research Development Corporation Antidigoxin antibodies
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4938948A (en) 1985-10-07 1990-07-03 Cetus Corporation Method for imaging breast tumors using labeled monoclonal anti-human breast cancer antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5091513A (en) 1987-05-21 1992-02-25 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
US5824311A (en) 1987-11-30 1998-10-20 Trustees Of The University Of Pennsylvania Treatment of tumors with monoclonal antibodies against oncogene antigens
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
US4870287A (en) 1988-03-03 1989-09-26 Loma Linda University Medical Center Multi-station proton beam therapy system
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
JPH049249A (ja) 1990-04-27 1992-01-14 Kusuda:Kk 塗型剤吹き付け機
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
CA2090126C (en) 1990-08-02 2002-10-22 John W. Schrader Methods for the production of proteins with a desired function
US5164296A (en) 1990-08-31 1992-11-17 University Of Maryland At Baltimore Assay methods involving ouabain
US5656434A (en) 1990-12-28 1997-08-12 Suntory Limited Monoclonal antibody against cardiac glycoside and utilization thereof
US5858657A (en) 1992-05-15 1999-01-12 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
DE69230142T2 (de) 1991-05-15 2000-03-09 Cambridge Antibody Technology Ltd. Verfahren zur herstellung von spezifischen bindungspaargliedern
US6800738B1 (en) 1991-06-14 2004-10-05 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US20030148406A1 (en) 1992-03-17 2003-08-07 David John King Multivalent antigen-binding proteins
US5770376A (en) 1992-12-02 1998-06-23 Biomedical Sciences Research Laboratories, Inc. Method of diagnosing and treating myocardial infarction and hypertension
US5846945A (en) 1993-02-16 1998-12-08 Onyx Pharmaceuticals, Inc. Cytopathic viruses for therapy and prophylaxis of neoplasia
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
US5420253A (en) 1993-09-09 1995-05-30 Willmar Poultry Company, Inc. Method for purifying egg yolk immunoglobulins
GB9325182D0 (en) 1993-12-08 1994-02-09 T Cell Sciences Inc Humanized antibodies or binding proteins thereof specific for t cell subpopulations exhibiting select beta chain variable regions
ES2247204T3 (es) 1994-01-31 2006-03-01 Trustees Of Boston University Bancos de anticuerpos policlonales.
US5861499A (en) 1994-02-10 1999-01-19 Imclone Systems Incorporated Nucleic acid molecules encoding the variable or hypervariable region of a monoclonal antibody that binds to an extracellular domain
GB9506466D0 (en) 1994-08-26 1995-05-17 Prolifix Ltd Cell cycle regulated repressor and dna element
US5760395A (en) 1996-04-18 1998-06-02 Universities Research Assoc., Inc. Method and apparatus for laser-controlled proton beam radiology
US5739169A (en) 1996-05-31 1998-04-14 Procept, Incorporated Aromatic compounds for inhibiting immune response
US6709659B1 (en) 1996-08-02 2004-03-23 Zymogenetics, Inc. Antibodies that bind testis-specific insulin homolog polypeptides
US6406867B1 (en) 1996-08-16 2002-06-18 Human Genome Sciences, Inc. Antibody to human endokine alpha and methods of use
US6709873B1 (en) 1997-04-09 2004-03-23 Isodiagnostika Inc. Method for production of antibodies to specific sites of rapamycin
US6861572B1 (en) 1997-11-14 2005-03-01 Origen Therapeutics, Inc. Production of proteins in eggs
US6913745B1 (en) 1997-12-02 2005-07-05 Neuralab Limited Passive immunization of Alzheimer's disease
US6982323B1 (en) 1997-12-23 2006-01-03 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Chimeric proteins for diagnosis and treatment of diabetes
US6432673B1 (en) 1998-12-07 2002-08-13 Zymogenetics, Inc. Growth factor homolog ZVEGF3
US20020064528A1 (en) 2000-01-28 2002-05-30 Zhenping Zhu Antibodies specific to KDR and uses thereof
US6946546B2 (en) 2000-03-06 2005-09-20 Cambridge Antibody Technology Limited Human antibodies against eotaxin
US6849259B2 (en) 2000-06-16 2005-02-01 Symphogen A/S Polyclonal antibody composition for treating allergy
US6753407B2 (en) 2000-08-15 2004-06-22 North Carolina State University Antimicrobial peptides isolated from fish
US8178098B2 (en) 2001-04-03 2012-05-15 National Jewish Health Method to inhibit airway hyperresponsiveness using aerosolized T cell receptor antibodies
US6891024B2 (en) 2001-05-24 2005-05-10 The Curators Of The University Of Missouri Monoclonal antibodies to Sarcocystis neurona and uses therefor
JP2005538706A (ja) 2001-07-12 2005-12-22 ジェファーソン フーテ， スーパーヒト化抗体
JP2005516914A (ja) * 2001-12-12 2005-06-09 ファルマシア・コーポレーション エポキシ−ステロイド系アルドステロン受容体アンタゴニストで眼病を治療する方法
BRPI0312818B8 (pt) 2002-07-19 2021-05-25 Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc uso de uma medida do nível do polipeptídeo sflt-1 em uma amostra de uma paciente e uso de uma medida dos níveis de pelo menos dois dos peptídeos sflt1, vegf livre ou polipeptídio pigf livre em uma amostra de um paciente usando um métrico
US20050281815A1 (en) * 2004-02-26 2005-12-22 Dani Eshel CD40 splice variants and their uses
US20080187954A1 (en) 2004-03-10 2008-08-07 Lonza Ltd. Method For Producing Antibodies
WO2006004988A2 (en) 2004-06-30 2006-01-12 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-dc binding antibody
US20090041783A1 (en) 2005-04-28 2009-02-12 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Anti-platelet membrane glycoprotein vi monoclonal antibody
NZ563193A (en) 2005-05-09 2010-05-28 Ono Pharmaceutical Co Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
WO2007124361A2 (en) 2006-04-20 2007-11-01 Mayo Foundation For Medical Education And Research Soluble b7-h1
US20080118978A1 (en) 2006-04-28 2008-05-22 Takashi Sato Anti-tumor agent
EP2170959B1 (en) 2007-06-18 2013-10-02 Merck Sharp & Dohme B.V. Antibodies to human programmed death receptor pd-1
JP2011504740A (ja) 2007-11-27 2011-02-17 アブリンクス エン．ヴェー． ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体に指向性を有するアミノ酸配列、並びにこれを含むポリペプチド
WO2009089149A1 (en) 2008-01-03 2009-07-16 The Johns Hopkins University B7-h1 (cd274) antagonists induce apoptosis of tumor cells
CA2998281C (en) 2008-09-26 2022-08-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Human anti-pd-1 antobodies and uses therefor
EP2198884A1 (en) 2008-12-18 2010-06-23 Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) Monoclonal antibodies directed against LG4-5 domain of alpha3 chain of human laminin-5
WO2010142534A1 (en) 2009-05-27 2010-12-16 Ablynx Nv Biparatopic protein constructs directed against il-23
DK3279215T3 (da) 2009-11-24 2020-04-27 Medimmune Ltd Målrettede bindemidler mod b7-h1
CA2791648A1 (en) 2010-03-01 2011-09-09 The J. David Gladstone Institutes Antibody specific for apolipoprotein and methods of use thereof
CN102321923B (zh) 2011-05-30 2014-04-16 江苏大学 肿瘤粘蛋白糖肽抗原决定部位的单克隆抗体库的制备方法
CA2845259A1 (en) 2011-08-15 2013-02-21 The University Of Chicago Compositions and methods related to antibodies to staphylococcal protein a
EP2755688A4 (en) 2011-10-27 2014-08-06 Nkt Therapeutics Inc HUMANIZED ANTIBODIES AGAINST INKT
SI2785375T1 (sl) 2011-11-28 2020-11-30 Merck Patent Gmbh Protitelesa proti PD-L1 in uporabe le-teh
CN115093480A (zh) 2012-05-31 2022-09-23 索伦托药业有限公司 与pd-l1结合的抗原结合蛋白
JP6298762B2 (ja) 2012-07-02 2018-03-20 協和発酵キリン株式会社 抗ｂｍｐ９抗体を有効成分とする、腎性貧血、がん性貧血などの貧血に対する治療剤
CN104994873B (zh) 2012-10-04 2017-12-22 达纳－法伯癌症研究所公司 人单克隆抗‑pd‑l1抗体和使用方法
CN112457403B (zh) 2013-09-13 2022-11-29 广州百济神州生物制药有限公司 抗pd1抗体及其作为治疗剂与诊断剂的用途
HUE046249T2 (hu) 2013-12-12 2020-02-28 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd PD-1 antitest, antigén-kötõ fragmense, és gyógyászati alkalmazása
KR20160089531A (ko) 2013-12-17 2016-07-27 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 항-her2 항체를 사용하여 her2-양성 암을 치료하는 방법
US20170106065A1 (en) * 2013-12-31 2017-04-20 Bavarian Nordic A/S Combination Therapy for Treating Cancer with a Poxvirus Expressing a Tumor Antigen and an Antagonist of TIM-3
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
US10836827B2 (en) 2015-03-30 2020-11-17 Stcube, Inc. Antibodies specific to glycosylated PD-L1 and methods of use thereof
SI3356404T1 (sl) 2015-10-02 2021-11-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Protitelesa proti PD1 in postopki uporabe
JP7003036B2 (ja) 2015-12-02 2022-02-04 エスティーキューブ，インコーポレイテッド グリコシル化ｐｄ－１に対して特異的な抗体およびその使用方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015061668A1 (en) * 2013-10-25 2015-04-30 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Anti-pd-l1 monoclonal antibodies and fragments thereof
WO2016092419A1 (en) * 2014-12-09 2016-06-16 Rinat Neuroscience Corp. Anti-pd-1 antibodies and methods of use thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AGATA, Y等: "Expression of the PD-1 antigen on the surface of stimulated mouse T and B lymphocytes", 《INTERNATIONAL IMMUNOLOGY》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110982824A (zh) * 2019-10-09 2020-04-10 天津大学 拮抗pd-1的抗体类似物bp基因及蛋白和应用
CN110982824B (zh) * 2019-10-09 2022-04-15 天津大学 拮抗pd-1的抗体类似物bp基因及蛋白和应用

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