CN109709344A - 一种活化凝血检测试剂、其制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种活化凝血检测试剂、其制备方法及其应用，涉及凝血检测技术领域，具体而言，该制备方法采用高岭土、脑磷脂、氯化钠及反渗透水混合制备活化凝血检测试剂，通过控制活化凝血检测试剂的浊度和pH值提高检测稳定性，能够更加精准地反应样品的凝血状态。

Description

一种活化凝血检测试剂、其制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及凝血检测技术领域，具体而言，涉及一种活化凝血检测试剂、其制备方法及其应用。

背景技术

目前医院对患者凝血状态检测，主要也凝血四项+2，判断患者凝血状态，高凝正常、低凝，纤溶(DIC)。该技术采用化学发光法：

(1)凝血酶原时间测定(PT)原理：

待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶，重新钙化的血浆在组织因子存在时通过外原性激活途径激活因子X成Xa，Xa使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转化为纤维蛋白而凝固，测定凝固所需时间即为凝血酶原时间。

(2)活化部分凝血酶时间测定(APTT)原理：

待测血浆加入凝血活酶，在钙离子的参与下纤维蛋白原转化为不溶性的纤维蛋白而凝固，测定凝固所需要的时间即为活化部分凝血酶时间。

(3)凝血酶时间测定(TT)原理：

待测血浆加入适量凝血酶，纤维蛋白原转化为不溶性的纤维蛋白而凝固，测定所需时间即为凝血酶时间。

(4)纤维蛋白原浓度测定(FBG)原理：

高浓度的凝血酶存在时，待测稀释血浆的凝固时间与其纤维蛋白原(FIB)含量成反比关系。测量该稀释血浆凝固时间，换算即得纤维蛋白原浓度。

(5)D2聚体(DD2)：检测DIC

(6)血小板计数：检测血小板数量。

但是现有实验操作繁琐，人为操作误差大，需对全血进行离心处理，处理过程中红细胞比积过大或过小，都得会对检测结果产生影响，对血小板及凝血因子有损耗，且耗时长。且检测样本为离心血浆，不能动态实时监测真实全血凝固情况。

正常凝血过程是凝血因子、纤维蛋白原、血小板共同的作用，凝血四项+2针对非正常凝血功能患者样本，不能具体反映高凝、低凝是由那种物质导致，在临床上不利于指导成分输血。

此外。有溶血、黄胆、脂血患者样本对检测结果有影响。检测DIC不能反映是原发性DIC还是继发性DIC，血小板计数检测仅反映血小板数量，不能反映血液凝固强度，血小板贡献。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种活化凝血检测试剂的制备方法，该制备方法采用高岭土、脑磷脂、氯化钠及反渗透水混合制备活化凝血检测试剂，通过控制活化凝血检测试剂的浊度和pH值提高检测稳定性，能够更加精准地反应样品的凝血状态。

本发明的第二目的在于提供一种活化凝血检测试剂，该试剂具有检测稳定性高，结果准确度好的优点。

本发明的第三目的在于提供上述活化凝血检测试剂盒或上述制备方法制备的试剂盒在血栓弹力图试验或凝血检测中的应用，该应用检测时间短，实验操作简单，人为误差小，全血检测不需处理样本，对血小板和凝血因此无损失，可实时检测凝血因子、纤维蛋白原以及血小板在凝血块形成过程中的贡献。

本发明是这样实现的：

一种活化凝血检测试剂的制备方法，其包括将：高岭土、脑磷脂、氯化钠及反渗透水混合制得活化凝血检测试剂。

具体地，按照质量份数比，在活化凝血检测试剂中，高岭土的重量份数可以为0.02份、0.04份、0.06份、0.08份或0.1份，在一些实施例中，高岭土的重量份数可以在0.02-0.10份中任意选择，优选为0.03-0.09。

脑磷脂的重量份数可以为0.01份、0.03份、0.05份或0.07份，在一些实施例中，脑磷脂的重量份数可以在0.01-0.07份中选择，选择范围优选为0.01-0.05份。

氯化钠的重量份数可以为0.02份、0.04份、0.06份或0.08份，在一些实施例中，氯化钠的重量份数可以在0.01-0.08份的范围内选择，选择范围优选为0.01-0.06份。

反渗透水的重量份数可以为80份、90份、95份、100份、110份或120份，在一些实施例中，反渗透水的重量份数可以在80～120份中选择，选择范围优选为90～110份。

进一步地，制得的活化凝血检测试剂的浊度为15NTU、17NTU、19NTU、21NTU、23NTU、25NTU、27NTU、29NTU、31NTU、33NTU、35NTU、37NTU、39NTU、41NTU、43NTU、45NTU、47NTU、49NTU、51NTU、53NTU、55NTU、57NTU、59NTU、61NTU、63NTU、65NTU、67NTU、69NTU、71NTU、73NTU、75NTU、77NTU、79NTU、81NTU、83NTU或85NTU；在一些实施例中，活化凝血检测试剂的浊度可以在15～85NTU中选择设置，浊度范围优选为20～80NTU。

进一步地，活化凝血检测试剂的pH可以为7.20、7.30、7.40、7.50或7.60，需要说明的是，活化凝血检测试剂的pH可以在7.20～7.60之间选择，活化凝血检测试剂的pH优选范围为7.30～7.50。

在上述活化凝血检测试剂的浊度与pH选择范围内，活化凝血检测试剂的检测稳定性更高，检测结果更精确。

进一步地，在本发明的一些优选实施例中，制备步骤包括：将0.03-0.09份高岭土与15～25份反渗透水混合进行第一次搅拌，搅拌时间为25～35min；

然后加入0.01-0.05份脑磷脂以及0.01-0.06份氯化钠混合进行第二次搅拌，搅拌时间为15～25min；

最后加入65～95份反渗透水混合进行第三次搅拌，搅拌时间为25～35min。

本发明实施例还提供一种活化凝血检测试剂，其由上述制备方法制得。

本发明实施例还提供一张活化凝血检测试剂盒，其包括有上述活化检测试剂。

本发明实施例还提供一种上述的活化凝血检测试剂在血栓弹力图试验或凝血检测中的应用。

本发明具有以下有益效果：

本发明实施例提供了一种活化凝血检测试剂及其制备方法，该制备方法采用高岭土、脑磷脂、氯化钠及反渗透水混合，通过控制活化凝血检测试剂的浊度和pH值提高检测稳定性，能够更加精准地反应样品的凝血状态。

此外，本发明实施例还提供了上述活化凝血检测试剂盒或上述制备方法制备的试剂盒在血栓弹力图试验或凝血检测中的应用，该应用检测时间短，实验操作简单，人为误差小，全血检测不需处理样本，对血小板和凝血因此无损失，可实时检测凝血因子、纤维蛋白原以及血小板在凝血块形成过程中的贡献。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供的活化凝血检测试剂盒的制备方法，其包括以下步骤：

将0.06份高岭土置于烧杯底部，加入20份反渗透水混合，在烧杯中放入磁力搅拌子，将磁力搅拌器转速调至最大，进行第一次搅拌，搅拌时间30min；

然后加入0.03份脑磷脂以及0.03份氯化钠混合进行第二次搅拌，最大转速搅拌20min；

最后加入65～95份反渗透水混合进行第三次搅拌，搅拌时间为30min，搅拌后，活化凝血试剂为悬浊剂，浊度为20～80NTU，pH为7.30～7.50。

实施例2

本实施例提供的活化凝血检测试剂盒的制备方法，与实施例1提供的制备方法大致相同，区别在于参数的不同，区别如下：

其包括以下步骤：将0.06份高岭土置于烧杯底部，加入25份反渗透水混合，在烧杯中放入磁力搅拌子，将磁力搅拌器转速调至最大，进行第一次搅拌，搅拌时间35min；

然后加入0.03份脑磷脂以及0.03份氯化钠混合进行第二次搅拌，最大转速搅拌25min；

最后加入90份反渗透水混合进行第三次搅拌，搅拌时间为35min，搅拌后，活化凝血试剂为悬浊剂，浊度为20～80NTU，pH为7.30～7.50。

实施例3

本实施例提供的活化凝血检测试剂盒的制备方法，与实施例1、2提供的制备方法大致相同，区别在于参数的不同，区别如下：

其包括以下步骤：将0.05份高岭土置于烧杯底部，加入25份反渗透水混合，在烧杯中放入磁力搅拌子，将磁力搅拌器转速调至最大，进行第一次搅拌，搅拌时间30min；

然后加入0.04份脑磷脂以及0.04份氯化钠混合进行第二次搅拌，最大转速搅拌25min；

最后加入100份反渗透水混合进行第三次搅拌，搅拌时间为30min，搅拌后，活化凝血试剂为悬浊剂，浊度为20～80NTU，pH为7.30～7.50。

实施例4

本实施例提供的活化凝血检测试剂盒的制备方法，与实施例1～3提供的制备方法大致相同，区别在于参数的不同，区别如下：

其包括以下步骤：将0.06份高岭土置于烧杯底部，加入25份反渗透水混合，在烧杯中放入磁力搅拌子，将磁力搅拌器转速调至最大，进行第一次搅拌，搅拌时间30min；

然后加入0.05份脑磷脂以及0.04份氯化钠混合进行第二次搅拌，最大转速搅拌25min；

最后加入100份反渗透水混合进行第三次搅拌，搅拌时间为30min，搅拌后，活化凝血试剂为悬浊剂，浊度为20～80NTU，pH为7.30～7.50。

实施例5

本实施例提供的活化凝血检测试剂盒的制备方法，与实施例1～4提供的制备方法大致相同，区别在于参数的不同，区别如下：

其包括以下步骤：将0.07份高岭土置于烧杯底部，加入25份反渗透水混合，在烧杯中放入磁力搅拌子，将磁力搅拌器转速调至最大，进行第一次搅拌，搅拌时间30min；

然后加入0.04份脑磷脂以及0.05份氯化钠混合进行第二次搅拌，最大转速搅拌25min；

最后加入100份反渗透水混合进行第三次搅拌，搅拌时间为30min，搅拌后，活化凝血试剂为悬浊剂，浊度为20～80NTU，pH为7.30～7.50。

实施例6

本实施例提供的活化凝血检测试剂盒的制备方法，与实施例1～5提供的制备方法大致相同，区别在于参数的不同，区别如下：

其包括以下步骤：将0.09份高岭土置于烧杯底部，加入25份反渗透水混合，在烧杯中放入磁力搅拌子，将磁力搅拌器转速调至最大，进行第一次搅拌，搅拌时间30min；

然后加入0.05份脑磷脂以及0.06份氯化钠混合进行第二次搅拌，最大转速搅拌20min；

最后加入100份反渗透水混合进行第三次搅拌，搅拌时间为30min，搅拌后，活化凝血试剂为悬浊剂，浊度为20～80NTU，pH为7.30～7.50。

实施例7

验证实施例1提供的活化凝血检测试剂的性能。

实验方法

采用实施例1制备的活化凝血检测试剂在JJ-8000血栓弹力图仪进行测试，检测结果如下。

	R值	K值	ANGLE值	MA值
					实施例1	6	1.5	64.3	61.0
现有技术	3	1.6	63.4	62.3

国家诊断学第八版教科书产考范围R：5-10，K1-3，ANGLE：53-72，MA:50-70。

本发明实施例提供的试剂检测凝血功能正常患者，其值均在教科书范围内。

综上，本发明实施例提供了一种活化凝血检测试剂及其制备方法，该制备方法采用高岭土、脑磷脂、氯化钠及反渗透水混合，通过控制活化凝血检测试剂的浊度和pH值提高检测稳定性，能够更加精准地反应样品的凝血状态。

此外，本发明实施例还提供了上述活化凝血检测试剂盒或上述制备方法制备的试剂盒在血栓弹力图试验或凝血检测中的应用，该应用检测时间短，实验操作简单，人为误差小，全血检测不需处理样本，对血小板和凝血因此无损失，可实时检测凝血因子、纤维蛋白原以及血小板在凝血块形成过程中的贡献。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种活化凝血检测试剂的制备方法，其特征在于，其包括：将高岭土、脑磷脂、氯化钠及反渗透水混合制得活化凝血检测试剂，所述活化凝血检测试剂的浊度为15～85NTU，pH为7.20～7.60。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述活化凝血检测试剂的浊度为20～80NTU，pH为7.30～7.50。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述活化凝血检测试剂的浊度为25～75NTU，pH为7.35～7.45。

4.根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于，按照质量份数比，所述制备方法包括：将0.02-0.10份高岭土、0.01-0.07份脑磷脂、0.01-0.08份氯化钠及反80～120份渗透水混合。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，按照质量份数比，所述制备方法包括：将0.03-0.09份高岭土、0.01-0.05份脑磷脂、0.01-0.06份氯化钠及反90～110份渗透水混合。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将0.03-0.09份高岭土与15～25份反渗透水混合，然后加入0.01-0.05份脑磷脂以及0.01-0.06份氯化钠混合，最后加入65～95份反渗透水。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述制备步骤包括：将0.03-0.09份高岭土与15～25份反渗透水混合搅拌25～35min，然后加入0.01-0.05份脑磷脂以及0.01-0.06份氯化钠混合搅拌15～25min，最后加入65～95份反渗透水混合搅拌25～35min。

8.一种活化凝血检测试剂，其特征在于，其由权利要求1～7任一项所述的制备方法制得。

9.一种活化凝血检测试剂盒，其特征在于，其包括有权利要求8所述的活化凝血检测试剂。

10.如权利要求8所述的活化凝血检测试剂在血栓弹力图试验或凝血检测中的应用。