CN109674913A - 一种添加复合菌发酵制备胆南星的工艺 - Google Patents

一种添加复合菌发酵制备胆南星的工艺 Download PDF

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Abstract

本发明涉及中药炮制工艺领域，尤其涉及一种添加复合菌发酵制备胆南星的工艺。本发明提供了一种添加复合菌发酵制备胆南星的工艺，由包括以下体积比的原料制备而成：胆南星细粉与添加复合菌液的猪胆汁体积比为1:1~1.5，复合菌液的猪胆汁为天然猪胆汁与108cfu/ml复合菌液体积比为19~21:1，复合菌液为108cfu/ml铅黄肠球菌液与108cfu/ml肠球菌液体积比为0.8~1.2:0.8~1.2。本发明中经实验证明添加复合菌发酵制备胆南星能够在相同的发酵周期发酵环境下，使游离型胆酸含量更加升高，结合型胆酸更加降低，即在相同的发酵周期下，添加复合菌发酵制备胆南星的工艺能够使胆南星发酵更加完全，能够缩短发酵周期。

Description

一种添加复合菌发酵制备胆南星的工艺
技术领域
本发明涉及中药炮制工艺领域，尤其涉及一种添加复合菌发酵制备胆南星的工艺。
背景技术
胆南星为制天南星的细粉与牛、羊或猪胆汁经加工而成，或为生天南星细粉与牛、羊或猪胆汁经发酵加工而成。经炮制后，能够缓和燥烈之性，降低毒性，并使药性发生转变，性由温转凉，味由辛转苦，具有清化热痰，息风定惊等功效，具有良好的药用价值。
《中国药典》自1977年版开始收载胆南星，记载其为制天南星的细粉与牛、羊或猪胆汁经加工而成，或为生天南星细粉与牛、羊或猪胆汁经发酵加工而成。尚未对胆汁加入量、发酵时间、蒸制等作明确规定。
1988年版《全国中药炮制规范》规定了胆南星的制法有两种，一为混合制：取制南星细粉，加入猪胆汁（或胆膏粉及适量水）拌匀，蒸60分钟至透，取出放凉，制成小块，干燥。二为发酵制：取生南星粉，加入猪胆汁（或胆膏粉及适量水），搅拌均匀，放温暖处，发酵7-15天后，再连续蒸或隔水炖9昼夜，每隔2小时搅拌一次，除去腥臭气，至呈黑色浸膏状，口尝无麻味为度，取出，晾干。再蒸软，趁热制成小块。天南星：牛（或猪、羊）胆汁为1：4。
地方炮制规范中，多地亦收载了混合制（用制南星）和发酵制（用生南星）两种方法。其中安徽、江苏、陕西、河南等与《全国中药炮制规范》的胆南星制法相似，贵州、江西、北京、湖南、云南、宁夏、甘肃、辽宁、吉林、山西等均收载比较详细的胆南星制备方法，与《全国中药炮制规范》有所不同。各地炮制规范胆南星的制法中多是用猪、牛或羊胆汁，加入比例在1:1-1:7之间，拌入胆汁1-5次不等，胆膏、胆粉均有涉及，还有加入川贝末（江西）、白酒（云南）、黄酒（北京）等炮制辅料。
由此可见，发酵法制胆南星是历史上的主流方法，但目前胆南星尚缺少统一规范的炮制工艺、没有完善的质控标准。胆南星属试行批准文号制，要求有生产资质的企业才能生产，生产工艺实行备案制。经调研表明，在现代生产中，存在着许多问题，如个别厂家发酵时间短导致发酵不充分，与古代的久时发酵相悖；部分厂家发酵时间特长，1个月至数月，虽发酵充分但耗费时间长，生产效率低。本发明在研究发酵原理、成分转化、传统工艺研究、菌种分离等基础上，确立添加复合菌种的发酵工艺。采用本新工艺，能够解决缩短发酵周期，保证发酵程度，提升产品质量。
发明内容
针对现有技术存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种添加复合菌发酵制备胆南星的工艺，本发明提供的添加复合菌发酵制备胆南星的工艺能够使胆南星发酵更加完全，能够缩短发酵周期。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案。
一种添加复合菌发酵制备胆南星的工艺，由包括以下体积比的原料制备而成：胆南星细粉与添加复合菌液的猪胆汁体积比为1:1~1.5，复合菌液的猪胆汁为天然猪胆汁与108cfu/ml复合菌液体积比为19~21:1，复合菌液为108cfu/ml铅黄肠球菌液与108cfu/ml肠球菌液体积比为0.8~1.2:0.8~1.2。
进一步，加复合菌发酵制备胆南星的工艺，菌种是从传统发酵胆南星中分离培养所得，具体由包括以下步骤的方法制备获得：1）对胆汁及胆南星深层样品中的有氧菌和厌氧菌分别进行分离纯化。2）对二者菌种的数量及长势进行观察总结，从中挑选出胆南星中明显增量的菌种作为复合菌液的材料。
一种添加复合菌发酵制备胆南星的工艺的发酵方法，包括以下步骤。
1）取天南星细粉过五号筛，得到细粉。
2）将108cfu/ml铅黄肠球菌液与108cfu/ml肠球菌液按比例混合得复合菌液。
3）按所述步骤2）中的108cfu/ml复合菌液与天然猪胆汁按体积比1:19~21制成含有复合菌液的猪胆汁。
4）按所述步骤1）中的细粉与所述步骤3）中的添加复合菌液的猪胆汁按比例混合均匀。
5）按所述步骤4）中的混合物，置恒温恒湿培养箱中发酵。
6）按所述步骤5）中的发酵物置常压蒸制容器中蒸至透，趁热切成1.5-2cm的小块，晒至黑褐色，即得。
优选的，步骤2）中所述108cfu/ml铅黄肠球菌液与108cfu/ml肠球菌液体积比为0.8~1.2:0.8~1.2。
优选的，步骤4）中所述步骤1）中的细粉与所述步骤3）中的添加复合菌液的猪胆汁体积比为1:1~1.5。
优选的，步骤5）中所述温度为30~34℃，湿度为70~85％。
优选的，步骤5）中所述发酵时间为15天以上。
优选的，步骤6）中所述蒸制时间为0.75~1.5h。
与现有技术比较，本发明具有以下有益效果。
本发明的添加复合菌发酵制备胆南星的工艺，以胆南星发酵过程中胆酸类成分的变化规律，即结合型胆酸转化成游离型胆酸，游离型胆酸含量增高，来评价胆南星发酵的新工艺。经实验验证明添加复合菌发酵制备胆南星能够在相同的发酵周期发酵环境下，使游离型胆酸含量更加升高，结合型胆酸更加降低，即在相同的发酵周期下，添加复合菌发酵制备胆南星的工艺能够使胆南星发酵更加完全，能够缩短发酵周期。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的一种添加复合菌发酵制备胆南星的工艺进行详细的说明，以下所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
一种添加复合菌发酵制备胆南星的工艺，由包括以下比例的原料制备而成：胆南星细粉与添加复合菌液的猪胆汁体积比为1:1~1.5，含有复合菌液的猪胆汁为天然猪胆汁与108cfu/ml复合菌液体积比为19~21:1，复合菌液为108cfu/ml铅黄肠球菌液与108cfu/ml肠球菌液体积比为0.8~1.2:0.8~1.2。
在本发明的具体实施过程中，所述菌种优选为从胆南星深层样品中分离得到的明显增量的菌种作为复合菌液的材料。
在本发明中，所述发酵时间优选为15天以上，通过对抗炎、镇咳祛痰、抗惊厥、细胞毒性、游离型胆酸的含量等来比较不同发酵时间的差异，得出一定要保证足够的发酵时间（大于15天）。
在本发明中，所述蒸制时间优选为0.75~1.5h，根据在指标性成分的含量变化优选出最佳蒸制时间。
在本发明中，所述菌种是由传统发酵胆南星中分离培养所得，具体由包括以下步骤的方法制备获得：1）对胆汁及胆南星深层样品中的有氧菌和厌氧菌分别进行分离纯化。2）对二者菌种的数量及长势进行观察总结，从中挑选出胆南星中明显增量的菌种作为复合菌液的材料。
在本发明中，所述发酵温度优选为30~34℃，更优选为32℃。发酵湿度优选为70-85%，更优选为80%。
在本发明中，所述南星细粉与天然猪胆汁体积比例优选为1:1~1.5。
实施例 1 一种添加复合菌发酵制备胆南星的方法。
取天南星细粉过五号筛，加入添加复合菌液的猪胆汁（每98ml混有5ml复合菌液（108cfu/ml），复合菌液由分离菌株中的铅黄肠球菌液（108cfu/ml）与肠球菌液（108cfu/ml）比例1:1.1（v/v）混合），1:1.2（v/v）比例拌匀，置31℃，70%湿度的恒温恒湿培养箱中发酵16天，至常压蒸制容器中蒸1.1h至透，趁热切成1.5-2cm的小块，晒至黑褐色，即得。
实施例 2 一种添加复合菌发酵制备胆南星的方法。
取天南星细粉过五号筛，加入混有复合菌液的猪胆汁（每102ml混有5ml复合菌液（108cfu/ml），复合菌液由分离菌株中铅黄肠球菌液（108cfu/ml）与肠球菌液（108cfu/ml）比例0.9:1（v/v）混合)，1:1.3（v/v）比例拌匀，置31℃，75%湿度的恒温恒湿培养箱中发酵17天，至常压蒸制容器中蒸1.5h至透，趁热切成1.5-2cm的小块，晒至黑褐色，即得。
实施例 3 一种添加复合菌发酵制备胆南星的方法。
取天南星细粉过五号筛，加入混有复合菌液的猪胆汁（每100ml混有5ml复合菌液（108cfu/ml），复合菌液由分离菌株中铅黄肠球菌液（108cfu/ml）与肠球菌液（108cfu/ml）比例1:1（v/v）混合)，约1:1（v/v）比例拌匀，置32℃，80%湿度的恒温恒湿培养箱中发酵15天，至常压蒸制容器中蒸1h至透，趁热切成1.5-2cm的小块，晒至黑褐色，即得。
实施例 4 本发明的指标性成分含量测定实。
本发明以对胆南星发酵原理研究时发现的规律，即随着胆南星发酵时间延长，游离型胆酸会逐渐增加，结合型胆酸会逐渐减少。游离型胆酸类成分的含量用来评价胆南星发酵的新工艺。对照品为购自中国食品药品检定研究院的猪胆酸、猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸。
含量测定试验过程包括以下步骤。
1）混合对照品制备。
取猪胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含猪胆酸0.03mg、猪去氧胆酸0.04 mg、鹅去氧胆酸0.06mg的混合溶液，即得。
2）供试品溶液的制备。
取胆南星粉末（过五号筛）约0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加入甲醇40ml，超声处理（功率200W，频率40kHz）50分钟，放至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3）色谱条件。
色谱柱为Waters C18色谱柱(250mm×4.6mm, 5μm)，流动相为乙腈-0.5%（体积分数）冰乙酸溶液（体积比60:40），流速：1.0ml·min-1；漂移管温度：105℃，气体流速：3.0L·min-1；柱温为30℃，对照品进样体积为5µl、20µl，样品进样量为5µl，按上述条件进行测定。
测试结果，数据表见表1。
由以上实施例可知，本发明的添加复合菌发酵制备胆南星的工艺，以胆南星发酵过程中胆酸类成分的变化规律，即结合型胆酸转化成游离型胆酸，游离型胆酸含量增高，来评价胆南星发酵的新工艺。经试验证明复合菌液的加入确能够在相同的发酵周期发酵环境下，使游离型胆酸含量更加升高，结合型胆酸更加降低，即在相同的发酵周期下，加入复合菌液能够使胆南星发酵更加完全，能够缩短发酵周期。

Claims (8)

1.一种添加复合菌发酵制备胆南星的工艺，其特征在于，由包括以下体积比的原料制备而成：胆南星细粉与添加复合菌液的猪胆汁体积比为1:1~1.5，复合菌液的猪胆汁为天然猪胆汁与108cfu/ml复合菌液体积比为19~21:1，复合菌液为108cfu/ml铅黄肠球菌液与108cfu/ml肠球菌液体积比为0.8~1.2:0.8~1.2。
2.如权利1所述的添加复合菌发酵制备胆南星的工艺，其特征在于，所述菌种是从传统发酵胆南星中分离培养所得，具体由包括以下步骤的方法制备获得：1）对胆汁及胆南星深层样品中的有氧菌和厌氧菌分别进行分离纯化；2）对二者菌种的数量及长势进行观察总结，从中挑选出胆南星中明显增量的菌种作为复合菌液的材料。
3.一种添加复合菌发酵制备胆南星的工艺的发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）取天南星细粉过五号筛，得到细粉；
2）将108cfu/ml铅黄肠球菌液与108cfu/ml肠球菌液按比例混合得复合菌液；
3) 按所述步骤2）中的108cfu/ml复合菌液与天然猪胆汁按体积比1:19~21制成含有复合菌液的猪胆汁；
4) 按所述步骤1）中的细粉与所述步骤3）中的添加复合菌液的猪胆汁按比例混合均匀；
5）按所述步骤4）中的混合物，置恒温恒湿培养箱中发酵；
6）按所述步骤5）中的发酵物置常压蒸制容器中蒸至透，趁热切成1.5-2cm的小块，晒至黑褐色，即得。
4.如权利3所述的添加复合菌发酵制备胆南星的工艺的发酵方法，其特征在于，步骤2）中所述108cfu/ml铅黄肠球菌液与108cfu/ml肠球菌液体积比为0.8~1.2:0.8~1.2。
5.如权利3所述的添加复合菌发酵制备胆南星的工艺的发酵方法，其特征在于，步骤4）中所述步骤1）中的细粉与所述步骤3）中的添加复合菌液的猪胆汁体积比为1:1~1.5。
6.如权利3所述的添加复合菌发酵制备胆南星的工艺的发酵方法，其特征在于，步骤5）中所述温度为30~34℃，湿度为70~85％。
7.如权利3所述的添加复合菌发酵制备胆南星的工艺的发酵方法，其特征在于，步骤5）中所述发酵时间为15天以上。
8.如权利3所述的添加复合菌发酵制备胆南星的工艺的发酵方法，其特征在于，步骤6）中所述蒸制时间为0.75~1.5h。
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