CN109632742A - 一种共振能量转移荧光的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种共振能量转移荧光的检测方法，包括步骤依次如下：S1：光源发射光束通过第一滤光片，透射大部分光源波长的光，光束经过半透半反二向分色片a，反射365nm的激发光，改边光束方向，在凸透镜的作用下，聚焦照射到待测样本检测线和质控线上的荧光物质；S2：被检测的待测样本，在激发光照射下，通过量子点供体受激发能量共振转移产生690nm的荧光；本发明，采用共振能量转移荧光检测方法可以采集不同性质光强信息，通过对不同波长光强信号的处理，减少干扰，大大增加检测灵敏度，本光路设计不限光学器件的波长，根据不同的共振能量转移荧光的供体和受体组的光学特性，可以替换器件参数，该检测方法具有普适性。
Description
技术领域
本发明涉及光学检测通道设计领域，具体为一种共振能量转移荧光的检测方法。
背景技术
荧光共振能量转移(FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer)指的是一种非辐射能量跃迁，通过分子间的电偶极相互作用，将能量从受到激发的荧光基团通过非辐射的方式转移到另一荧光基团的物理现象。FRET具有高分辨率、高灵敏度、重现性好、专属性强的特点。主要应用于生物大分子的结构、功能和性质的研究，还有无机离子的测定、核酸检测、免疫分析，定量分析等领域。
但是现有的共振能量转移荧光的检测方法存在以下缺陷：共振能量转移荧光的强度弱，激发效率不高，多干扰的问题；针对这些缺陷，所以我们设计一种共振能量转移荧光的检测方法是很有必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种共振能量转移荧光的检测方法，采用共振能量转移荧光检测方法可以采集不同性质光强信息，通过对不同波长光强信号的处理，减少干扰，大大增加检测灵敏度，本光路设计不限光学器件的波长，根据不同的共振能量转移荧光的供体和受体组的光学特性，可以替换器件参数，该检测方法具有普适性。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种共振能量转移荧光的检测方法，包括步骤依次如下：
S1：光源发射光束通过第一滤光片，透射大部分光源波长的光，光束经过半透半反二向分色片a，反射365nm的激发光，改边光束方向，在凸透镜的作用下，聚焦照射到待测样本检测线和质控线上的荧光物质；
S2：被检测的待测样本，在激发光照射下，通过量子点供体受激发能量共振转移产生690nm的荧光，发射荧光包含部分量子点供体激发产生的610nm荧光辐射，还有被检测的待测样本发射的690nm能量共振转移荧光，发射荧光具有发散性，经过凸透镜的汇聚照射到半透半反二向分色片b上，反射610nm的荧光，透射大部分690nm的荧光，两个波长的荧光经由不同光路，通过第二滤光片和第三滤光片分别由光电二极管a和光电二极管b接收转化为电信号，610nm荧光经过第二滤光片进一步滤除干扰由光电二极管a接收，690nm荧光经过第三滤光片进一步滤除干扰由光电二极管b接收；
其中，光源用LED1表示；
半透半反二向分色片a用M1表示；半透半反二向分色片b用M2表示；
第一滤光片用F1表示；第二滤光片用F2表示；第三滤光片用F3表示；
光电二极管a用PD1表示；光电二极管b用PD2表示；
凸透镜用LEN表示；待测样本用OBJ表示。
作为本发明进一步的方案：所述光源为发射平行光的点光源，且所述光源的波长为365nm。
作为本发明进一步的方案：所述半透半反二向分色片a型号参数为R365-T680，所述半透半反二向分色片b型号参数为R610-T680。
本发明的有益效果：检测步骤依次如下：S1：光源发射光束通过第一滤光片，透射大部分光源波长的光，光束经过半透半反二向分色片a，反射365nm的激发光，改边光束方向，在凸透镜的作用下，聚焦照射到待测样本检测线和质控线上的荧光物质，提高荧光物质的激发效率；S2：被检测的待测样本，在激发光照射下，通过量子点供体受激发能量共振转移产生690nm的荧光，发射荧光包含部分量子点供体激发产生的610nm荧光辐射，还有被检测的待测样本发射的690nm能量共振转移荧光，发射荧光具有发散性，经过凸透镜的汇聚照射到半透半反二向分色片b上，反射610nm的荧光，透射大部分690nm的荧光，两个波长的荧光经由不同光路，通过第二滤光片和第三滤光片分别由光电二极管a和光电二极管b接收转化为电信号，610nm荧光经过第二滤光片进一步滤除干扰由光电二极管a接收，690nm荧光经过第三滤光片进一步滤除干扰由光电二极管b接收，消除干扰光的光路设计，提高到达光电二极管a和光电二极管b的荧光精度，其中，光源为发射平行光的点光源，且光源的波长为365nm，半透半反二向分色片a型号参数为R365-T680，半透半反二向分色片b型号参数为R610-T680；该设计，采用共振能量转移荧光检测方法可以采集不同性质光强信息，通过对不同波长光强信号的处理，减少干扰，大大增加检测灵敏度，本光路设计不限光学器件的波长，根据不同的共振能量转移荧光的供体和受体组的光学特性，可以替换器件参数，该检测方法具有普适性。
附图说明
为了便于本领域技术人员理解，下面结合附图对本发明作进一步的说明。
图1为本发明光学检测光路图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
如图1所示，一种共振能量转移荧光的检测方法，包括步骤依次如下：
S1：光源发射光束通过第一滤光片，透射大部分光源波长的光，光束经过半透半反二向分色片a，反射365nm的激发光，改边光束方向，在凸透镜的作用下，聚焦照射到待测样本检测线和质控线上的荧光物质，提高荧光物质的激发效率；
S2：被检测的待测样本，在激发光照射下，通过量子点供体受激发能量共振转移产生690nm的荧光，发射荧光包含部分量子点供体激发产生的610nm荧光辐射，还有被检测的待测样本发射的690nm能量共振转移荧光，发射荧光具有发散性，经过凸透镜的汇聚照射到半透半反二向分色片b上，反射610nm的荧光，透射大部分690nm的荧光，两个波长的荧光经由不同光路，通过第二滤光片和第三滤光片分别由光电二极管a和光电二极管b接收转化为电信号，610nm荧光经过第二滤光片进一步滤除干扰由光电二极管a接收，690nm荧光经过第三滤光片进一步滤除干扰由光电二极管b接收，消除干扰光的光路设计，提高到达光电二极管a和光电二极管b的荧光精度；
其中，光源用LED1表示；
半透半反二向分色片a用M1表示；半透半反二向分色片b用M2表示；
第一滤光片用F1表示；第二滤光片用F2表示；第三滤光片用F3表示；
光电二极管a用PD1表示；光电二极管b用PD2表示；
凸透镜用LEN表示；待测样本用OBJ表示；
其中，光源为发射平行光的点光源，且光源的波长为365nm，半透半反二向分色片a型号参数为R365-T680，半透半反二向分色片b型号参数为R610-T680。
本发明的工作原理：检测步骤依次如下：S1：光源发射光束通过第一滤光片，透射大部分光源波长的光，光束经过半透半反二向分色片a，反射365nm的激发光，改边光束方向，在凸透镜的作用下，聚焦照射到待测样本检测线和质控线上的荧光物质，提高荧光物质的激发效率；S2：被检测的待测样本，在激发光照射下，通过量子点供体受激发能量共振转移产生690nm的荧光，发射荧光包含部分量子点供体激发产生的610nm荧光辐射，还有被检测的待测样本发射的690nm能量共振转移荧光，发射荧光具有发散性，经过凸透镜的汇聚照射到半透半反二向分色片b上，反射610nm的荧光，透射大部分690nm的荧光，两个波长的荧光经由不同光路，通过第二滤光片和第三滤光片分别由光电二极管a和光电二极管b接收转化为电信号，610nm荧光经过第二滤光片进一步滤除干扰由光电二极管a接收，690nm荧光经过第三滤光片进一步滤除干扰由光电二极管b接收，消除干扰光的光路设计，提高到达光电二极管a和光电二极管b的荧光精度，其中，光源为发射平行光的点光源，且光源的波长为365nm，半透半反二向分色片a型号参数为R365-T680，半透半反二向分色片b型号参数为R610-T680；该设计，采用共振能量转移荧光检测方法可以采集不同性质光强信息，通过对不同波长光强信号的处理，减少干扰，大大增加检测灵敏度，本光路设计不限光学器件的波长，根据不同的共振能量转移荧光的供体和受体组的光学特性，可以替换器件参数，该检测方法具有普适性。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
Claims (3)
1.一种共振能量转移荧光的检测方法，其特征在于，包括步骤依次如下：
S1：光源发射光束通过第一滤光片，透射大部分光源波长的光，光束经过半透半反二向分色片a，反射365nm的激发光，改边光束方向，在凸透镜的作用下，聚焦照射到待测样本检测线和质控线上的荧光物质；
S2：被检测的待测样本，在激发光照射下，通过量子点供体受激发能量共振转移产生690nm的荧光，发射荧光包含部分量子点供体激发产生的610nm荧光辐射，还有被检测的待测样本发射的690nm能量共振转移荧光，发射荧光具有发散性，经过凸透镜的汇聚照射到半透半反二向分色片b上，反射610nm的荧光，透射大部分690nm的荧光，两个波长的荧光经由不同光路，通过第二滤光片和第三滤光片分别由光电二极管a和光电二极管b接收转化为电信号，610nm荧光经过第二滤光片进一步滤除干扰由光电二极管a接收，690nm荧光经过第三滤光片进一步滤除干扰由光电二极管b接收；
其中，光源用LED1表示；
半透半反二向分色片a用M1表示；半透半反二向分色片b用M2表示；
第一滤光片用F1表示；第二滤光片用F2表示；第三滤光片用F3表示；
光电二极管a用PD1表示；光电二极管b用PD2表示；
凸透镜用LEN表示；待测样本用OBJ表示。
2.根据权利要求1所述的一种共振能量转移荧光的检测方法，其特征在于，所述光源为发射平行光的点光源，且所述光源的波长为365nm。
3.根据权利要求1所述的一种共振能量转移荧光的检测方法，其特征在于，所述半透半反二向分色片a型号参数为R365-T680，所述半透半反二向分色片b型号参数为R610-T680。
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