CN109619659A - 一种烟草核酸提取物的制备方法及其在烟草中的应用 - Google Patents

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    • A24B15/00—Chemical features or treatment of tobacco; Tobacco substitutes, e.g. in liquid form
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    • A24B15/24—Treatment of tobacco products or tobacco substitutes by extraction; Tobacco extracts

Abstract

一种烟草核酸提取物的制备方法及其在烟草中的应用，取1～2g新鲜烟草叶片，置于预冷的研钵中，研磨成略有流动性的糊状，转入离心管中；离心管内事先加入10～100ml用无菌去离子水配制的质量浓度5％的Chelex‑100溶液，在40℃～65℃下保温30～60分钟，振荡5～15秒钟；在80℃～120℃保温5～15分钟，振荡5～15秒钟；5000～20000rpm离心5～15分钟，上清液即为烟草核酸提取物，在‑20℃～10℃下保存。按每1000g烟叶或烟丝添加0.05～0.50g烟草核酸提取物的比例，将烟草核酸提取物喷洒添加至烟叶或烟丝上。本发明能够制备得到商品化的烟草核酸提取物，不使用任何有毒的有机溶剂，工艺简单。

Description

一种烟草核酸提取物的制备方法及其在烟草中的应用
技术领域
本发明属于卷烟添加剂技术领域，具体涉及一种能有效提高卷烟抽吸品质的烟草核酸提取物及其在卷烟中的应用方法。
背景技术
核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸，其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。对烟草核酸进行提取和产品制备，并应用于烟草的生产加工中，目前尚未见研究报道。
虽然近年来已出现了大量的核酸提取方法，如CTAB法、SDS法、磁珠法等，但传统的CTAB法、SDS法方法操作繁琐、耗时长，且应用了有毒的有机试剂。磁珠法更适合微量核酸的自动提取仪，价格较高，较适合于基因检测。烟草中蛋白质、糖类、色索、烟碱及酚类等物质含量较高，给烟草核酸的分离和纯化工作带来了干扰和困难。为此，有必要研究一种快速安全、经济有效的烟草核酸制备方法，形成实用的商品化产品。
Chelex-100是一种苯乙烯和苯二乙烯共聚体组成的螯合树脂，其悬液在碱性环境下，可导致细胞膜破裂，核酸从细胞核释放，同时Chelex-100能结合许多可能影响下一步分析的非核酸物质。由于Chelex-100能有效除去非核酸有机物，并且通过结合金属离子，防止核酸降解，具有经济、简便、高效等优点，目前已被用于从微量血液、组织斑块、精斑和骨骼等法医物证检材。
中国专利CN102807975A涉及一种从生物样本中快速提取核酸的方法。其所述生物样本选自病理组织石蜡切片样本、血斑精斑或精液样本、组织液样本、脑脊液样本、血液样本、血清样本、血浆样本、尿液样本、积液样本、毛发样本、组织细胞样本，通过Chelex-100的水溶液或chelex-100的DEPC水溶液处理后，用于PCR反应。但该方法仅适用于医学领域，得到的少量DNA用于PCR扩增检测，不属于植物及烟草领域，未能开发出商品化产品。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种快速安全、经济有效的烟草核酸提取物的制备方法，得到可实用的草核酸提取物产品。并将烟草核酸提取物添加于卷烟中，以提高卷烟抽吸品质。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种烟草核酸提取物的制备方法，取1～2g新鲜烟草叶片，置于预冷的研钵中，研磨成略有流动性的糊状，转入离心管中；离心管内事先加入10～100ml用无菌去离子水配制的质量浓度5％的Chelex-100溶液，在40℃～65℃下保温30～60分钟，振荡5～15秒钟；在80℃～120℃保温5～15分钟，振荡5～15秒钟；5000～20000rpm离心5～15分钟，上清液即为烟草核酸提取物，在-20℃～10℃下保存。
烟草核酸提取物在烟草中的应用，按每1000g烟叶或烟丝添加0.05～0.50g烟草核酸提取物的比例，将烟草核酸提取物喷洒添加至烟叶或烟丝上。
本发明直接以新鲜烟草汁液为原料，应用于烟草核酸提取和产品制备，不使用任何有毒的有机溶剂，工艺简单，成本适中，能够制备得到商品化的烟草核酸提取物。将烟草核酸提取物应用于烟草的生产加工中，可以明显降低卷烟的刺激性，柔和烟香，调节烟气pH值，特别是对高生物碱含量的烟草有良好作用，能使烟气醇和，提升抽吸品质。
具体实施方式
实施例1
一种烟草核酸提取物的制备方法，取1g新鲜烟草叶片，置于预冷的研钵中，迅速研磨成略有流动性的糊状，转入离心管中。离心管内事先加入10ml用无菌去离子水配制的5％(w/v)Chelex-100溶液。在40℃下保温30分钟，振荡5秒钟。在80℃下保温5分钟，振荡5秒钟。5000rpm离心5分钟，上清液即为烟草核酸提取物，在-20℃下保存备用。将制得的烟草核酸提取物按每1000g烟叶添加0.05g烟草核酸提取物的比例喷洒添加至烟叶上。
实施例2
一种烟草核酸提取物的制备方法，取2g新鲜烟草叶片，置于预冷的研钵中，迅速研磨成略有流动性的糊状，转入离心管中。离心管内事先加入100ml用无菌去离子水配制的5％(w/v)Chelex-100溶液。在65℃下保温60分钟，振荡15秒钟。在120℃下保温15分钟，振荡15秒钟。20000rpm离心15分钟，上清液即为烟草核酸提取物，在10℃下保存备用。将制得的烟草核酸提取物按每1000g烟丝添加0.50g烟草核酸提取物的比例喷洒添加至烟丝上。
实施例3
一种烟草核酸提取物的制备方法，取1.5g新鲜烟草叶片，置于预冷的研钵中，迅速研磨成略有流动性的糊状，转入离心管中。离心管内事先加入50ml用无菌去离子水配制的5％(w/v)Chelex-100溶液。在56℃下保温45分钟，振荡10秒钟。在100℃下保温10分钟，振荡10秒钟。10000rpm离心10分钟，上清液即为烟草核酸提取物，在4℃下保存备用。将制得的烟草核酸提取物按每1000g烟丝添加0.25g烟草核酸提取物的比例喷洒添加至烟丝上。
实施例4
一种烟草核酸提取物的制备方法，取1.2g新鲜烟草叶片，置于预冷的研钵中，迅速研磨成略有流动性的糊状，转入离心管中。离心管内事先加入50ml用无菌去离子水配制的5％(w/v)Chelex-100溶液。在60℃下保温40分钟，振荡15秒钟。在100℃下保温10分钟，振荡5秒钟。15000rpm离心5分钟，上清液即为烟草核酸提取物，在5℃下保存备用。将制得的烟草核酸提取物按每1000g烟丝添加0.20g烟草核酸提取物的比例喷洒添加至烟叶上。
批量化生产时，按本发明方法放大批量即可。本发明所述的Chelex-100树脂为Sigma公司、Bio-Rad公司产品，可市购得到。

Claims (2)

1.一种烟草核酸提取物的制备方法，其特征在于，取1～2g新鲜烟草叶片，置于预冷的研钵中，研磨成略有流动性的糊状，转入离心管中；离心管内事先加入10～100ml用无菌去离子水配制的质量浓度5％的Chelex-100溶液，在40℃～65℃下保温30～60分钟，振荡5～15秒钟；在80℃～120℃保温5～15分钟，振荡5～15秒钟；5000～20000rpm离心5～15分钟，上清液即为烟草核酸提取物，在-20℃～10℃下保存。
2.如权利要求1所述方法制备得到的烟草核酸提取物在烟草中的应用，其特征在于，按每1000g烟叶或烟丝添加0.05～0.50g烟草核酸提取物的比例，将烟草核酸提取物喷洒添加至烟叶或烟丝上。
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