CN109593668A - 一株高产异戊醛的乳酸乳球菌乳酸亚种及其应用 - Google Patents

一株高产异戊醛的乳酸乳球菌乳酸亚种及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株高产异戊醛的乳酸乳球菌乳酸亚种及其应用，属于微生物技术领域。本发明的乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032具有生长速度快、产酸快、异戊醛产量高的优势，能有效提升乳制品的焦香麦芽气，且有利于工业发酵，在发酵乳制品的制备中具有很重要的应用。

Description

一株高产异戊醛的乳酸乳球菌乳酸亚种及其应用
技术领域
本发明涉及一株高产异戊醛的乳酸乳球菌乳酸亚种及其应用，属于微生物技术领域。
背景技术
发酵乳制品是以牛乳作为主要原料，经乳酸菌发酵或乳酸菌、酵母菌共同发酵制成的酸性乳制品，其作为一种乳产品，凭借独特的口感与风味深受人们的喜爱，已经畅销市场多年。有研究表明，影响消费者购买发酵乳制品的主要因素有风味、价格、可用性和品牌，其中，风味占比最重，因此，提升发酵乳制品的风味无疑是企业迎合市场最重要的手段。
支链醛类芳香物质可以赋予乳制品特色风味，例如青草香、果香味、麦芽香和巧克力香，其中，异戊醛(3-甲基丁醛)是支链醛的典型芳香物质，它天然存在于柑桔、柠檬等精油中。
有研究表明，异戊醛具有浓厚的麦香气，是麦芽风味的重要组成物质之一，并且，也有研究表明，异戊醛的平均风味阈值在0.06μg/mL，远远低于与异戊醛有相似风味贡献的2-甲基丁醛和2-甲基丙醛的风味阈值，这意味着，在乳制品中稍微增加异戊醛的含量对焦香麦芽气有显著影响。
因此，通过增加乳制品中异戊醛的含量以提升乳制品的风味无疑是一种高效的途径。
但是，目前发现的可产异戊醛的乳酸菌较少(主要为副干酪乳杆菌)且这些乳酸菌的异戊醛产量也较低，尚未达到明显改善发酵乳制品风味的要求。
因此，找到一种高产异戊醛的乳酸菌，以期作为发酵剂应用于乳制品中，提升乳制品的焦香麦芽气，是本领域亟待解决的技术问题。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一株乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis) CCFM1032，此乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032具有生长速度快(在MRS培养基中培养6h即进入稳定期，在脱脂乳中培养4h即进入稳定期)、产酸快 (将此菌株以1.4×107CFU/mL的接种量接种至牛乳中发酵8h，即可使发酵乳的pH达4.7)、异戊醛产量高(将此菌株以1.4×107CFU/mL的接种量接种至牛乳中发酵12h，即可使发酵乳中异戊醛的含量达60.26μg/kg)的优势，能有效提升乳制品的焦香麦芽气，且有利于工业发酵，在发酵乳制品的制备中具有很重要的应用。
本发明的技术方案如下：
本发明提供了一株乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032，所述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032已于2018年09月20日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.60449，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
所述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032是从中国四川阿坝牦牛酸乳中分离得到的，该菌株经测序分析，其16S rRNA序列如SEQ ID NO.1所示，将该序列在GenBank中进行比对，结果显示此菌株为乳酸乳球菌乳酸亚种，命名为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032。
其分类学特征为：原核微生物，归属于硬壁菌门，杆菌纲，乳杆菌目，链球菌科，乳球菌属，细胞呈球形或卵圆形，革兰氏阳性，兼性厌氧，不产荚膜和芽孢。
其菌落特征为：在MRS固体培养基上生长48h时菌落呈乳白色，有光泽，边缘光滑，凸起，中等大小。
其生长特性为：在MRS培养基中培养时，最适温度为30℃，在脱脂乳中培养时，最适温度为37℃；生长快，用MRS培养基在最适宜温度30℃的条件下培养6h，即达到对数末期；产酸快，用脱脂乳在最适温度为37℃的条件下发酵8h，脱脂乳pH即达4.7；耐盐，在6％(m/v)NaCl浓度的MRS培养基中仍可生长，OD600为0.561。
所述脱脂乳是指是将牛乳中的脂肪脱去后得到的乳液。
本发明提供了含有上述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis)CCFM1032 的菌剂。
在本发明的一种实施方式中，所述菌剂的剂型为液体制剂或粉剂。
本发明提供了上述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032或上述菌剂在制备食品方面的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述食品为使用上述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032或上述菌剂生产得到的发酵乳制品。
在本发明的一种实施方式中，所述发酵乳制品包含发酵乳、发酵乳饮料、奶酪或马奶酒。
本发明提供了一种发酵乳的制备方法，所述方法为使用上述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032或上述菌剂。
在本发明的一种实施方式中，所述方法为将牛乳经均质、巴氏杀菌后冷却，得到发酵原料；在发酵原料中接种上述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis)CCFM1032 或上述菌剂进行发酵，得到发酵乳。
在本发明的一种实施方式中，所述牛乳包含原料乳、复原乳或脱脂乳。
所述脱脂乳是指是将牛乳中的脂肪脱去后得到的乳液；所述原料乳是指从奶牛乳房挤出未经过任何处理的生牛奶；所述复原乳是指把牛奶浓缩、干燥成为浓缩乳或乳粉，再添加适量水，制成与原乳中水、固体物比例相当的乳液。
在本发明的一种实施方式中，所述方法为将牛乳在压力14MPa～21MPa、温度40～85℃的条件下均质后进行巴氏杀菌，得到灭菌后的牛乳；将灭菌后的牛乳冷却至21～30℃，得到发酵原料；在发酵原料中接种上述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis) CCFM1032或上述菌剂后于30～37℃下发酵8～12h，得到发酵乳；将酸奶在4℃的条件下放置24～48h，得到后熟后的发酵乳成品。
在本发明的一种实施方式中，所述方法为将牛乳在压力20MPa、温度55℃的条件下均质后进行巴氏杀菌，得到灭菌后的牛乳；将灭菌后的牛乳冷却至25℃，得到发酵原料；在发酵原料中接种上述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032或上述菌剂后于37℃下发酵12h，得到发酵乳；将酸奶在4℃的条件下放置24h，得到后熟后的发酵乳成品。
在本发明的一种实施方式中，所述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis) CCFM1032或菌剂在发酵原料中的接种量为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp. lactis)在发酵原料中的活菌数达1×107～2×107CFU/mL。
在本发明的一种实施方式中，所述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis) CCFM1032或菌剂在发酵原料中的接种量为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp. lactis)CCFM1032在发酵原料中的活菌数达1.4×107CFU/mL。
本发明提供了应用上述制备方法制备得到的发酵乳。
有益效果：
(1)本发明的乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032具有生长速度快、产酸快、异戊醛产量高的优势，能有效提升乳制品的焦香麦芽气，且有利于工业发酵，在发酵乳制品的制备中具有很重要的应用；
(2)本发明的乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032在MRS 培养基中培养6h即进入稳定期，在脱脂乳中培养4h即进入稳定期，生长速度快，有利于工业发酵；
(3)将本发明的乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032以 1.4×107CFU/mL的接种量接种至牛乳中发酵8h，即可使发酵乳的pH达4.7，产酸快，有利于工业发酵；
(4)将本发明的乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032以 1.4×107CFU/mL的接种量接种至牛乳中发酵12h，即可使发酵乳中异戊醛的含量达60.26 μg/kg，异戊醛产量高，能有效提升乳制品的焦香麦芽气；
(5)利用本发明的乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032制备得到的发酵乳具有焦香麦芽气，巧克力风味十足，具有极强的市场竞争力。
生物材料保藏
一株乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032，分类学命名为 Lactococcus lactis，已于2018年09月20日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为 GDMCC No.60449，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
图1：本发明菌株的革兰氏染色特征；
图2：本发明菌株菌落特征；
图3：本发明菌株在MRS培养基中的生长状况；
图4：本发明菌株在MRS培养基中的pH变化情况；
图5：本发明菌株在脱脂乳中发酵的活菌数变化情况；
图6：本发明菌株在脱脂乳中发酵的酸度变化情况。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的阐述。
下述实施例中涉及的脱脂乳购自光明乳业。
下述实施例中涉及的培养基如下：
MRS固体培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖20g/L、无水乙酸钠2g/L、七水硫酸镁0.5g/L、一水硫酸锰0.25g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、三水磷酸氢二钾2.6g/L、吐温80 1mL/L、琼脂粉20g/L；
MRS液体培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖20g/L、无水乙酸钠2g/L、七水硫酸镁0.5g/L、一水硫酸锰0.25g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、三水磷酸氢二钾2.6g/L、吐温80 1mL/L。
下述实施例中涉及的检测方法如下：
活菌数的检测方法：利用紫外分光光度计测定OD600吸光度以及平板计数。
pH检测方法：采用pH计测量。
挥发性物质含量检测：GC-MS测发酵后酸奶中的挥发性物质含量；
气谱条件为：Rtx-WAX毛细管柱；柱子规格：30m×0.25mm×0.25mm，进口温度为250℃，分流比5，柱流速1mL/min，载气为氦气；程序升温：初始温度40℃，保持3min；10℃/min升温至90℃；5℃/min升温至200℃，保持5分钟；
质谱条件为：离子化方式EI，发射能量为70eV，发射电流为200μA，检测器电压为1.4kV，离子源温度250℃，接口温度230℃，四级杆温度：150℃，质荷比30-500；
化合物检索结果与NIST和Varian2个标准谱库进行匹配，相似度达到80％以上确认为目的化合物，以2μL的0.05mg/mL癸酸乙酯为内标，计算异戊醛含量。
实施例1：菌株的筛选及鉴定
1、筛选
(1)制备合适的样品稀释梯度并培养
分别将-80℃冰箱中贮藏的四川阿坝牦牛酸乳以及酸奶油甘油样品取出，置于冰上解冻，震荡混匀后取0.5mL样品加入4.5mL无菌生理盐水中，完成一次10倍稀释，振荡混匀后再从该稀释液中取出0.5mL稀释液加入4.5mL无菌生理盐水中，完成第二次10倍稀释，以此类推，直至稀释到10-6，从每个梯度的稀释液中吸取100μL，均匀涂布于MRS固体培养基平板上，倒置，放于37℃厌氧下培养48h，并及时观察。
(2)划线分离与纯化
将长出菌落的平板取出后，选取单菌落明显的梯度平板，挑取不同菌落形态的菌落，进行二次划线，直至纯化出所有单菌落。
(3)菌种保藏
将纯化完成后的每株菌株的单菌落挑入5mL MRS液体培养基中，置于37℃厌氧下静置培养24h，吸取0.5mL菌液至保菌管中，加入0.5mL 30％无菌甘油溶液，混匀，置于-80℃保存。
2、鉴定
(1)16S rDNA序列扩增
吸取1mL上述菌液6000rpm离心3min，倾去上清，水洗两次，离心倾去上清液，获得菌泥，以此为模板，进行PCR扩增，流程如下：
1)扩增体系20μL：
其中模板量为1μL(27F 1μL、1492R 1μL)，Taq酶MasterMix为10μL，ddH2O为7μL，所用引物为27F：AGA GTT TGA TCC TGG CCT CA(SEQ ID No 2)和1492R：GGT TAC CTT GTTACG ACT T(SEQ ID No 3)。
2)扩增条件：
预变性温度：105℃
第一步变性：95℃5min；95℃30s
第二步退火：55℃30s
第三步延伸：72℃1min
循环次数：95℃30s，30次循环
第四步最后延伸：72℃7min
第五步保持：12℃10min
(2)琼脂糖凝胶电泳
称取80mL琼脂糖加入锥形瓶中，加入80mL 1xTAE，微波间断式加热4min，至液体澄清透明，稍稍冷却，加入2‰核酸染料，摇匀，无气泡，倒入胶板槽中，冷却40min凝固后，置于电泳槽中，排气泡，依次加入PCR扩增产物，每个孔中加入4μL PCR扩增产物， 120V 30min跑胶结束后取出，置于凝胶电泳成像仪中拍照保存，记录PCR成功样品的编号，将成功的PCR产物置于-20℃冰箱中保藏。
(3)菌株序列送测与鉴定
将PCR成功的样品送到华大基因进行检测，根据华大基因反馈的序列结果，结合NCBI 菌株序列数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast)进行BLAST检索，选取匹配度最高的菌株信息进行结果记录，PCR成功的三株菌株均为乳酸乳球菌乳酸亚种，分别命名为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032、乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)MA14以及乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcuslactis subsp.lactis)6G5。
实施例2：菌株的培养
乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032在MRS固体培养基上培养48h，观察并挑取菌落进行镜检、革兰氏颜色和生长特性测定。
经观察，其分类学特征为：菌体呈球状，革兰氏染色结果为紫色，即为革兰氏阳性菌(见图1)。
其菌落特征为：菌落呈乳白色，有光泽，边缘光滑，凸起，中等大小(见图2)。
其生长特性为：在pH为4.0～6.5的MRS液体培养基中可以生长，较耐酸；在6％(m/v) 及以下NaCl浓度的MRS液体培养基中可以生长，耐盐；只能在胆盐浓度为0.05％及以下的 MRS液体培养基中生长，不耐胆盐(见表1)。
表1菌株生物学特性表
实施例3：菌株在MRS培养基中的生长特性
1、乳酸乳球菌乳酸亚种在MRS培养基中生长12h的生长曲线
从-80℃保存的甘油管中蘸取乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis) CCFM1032、乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)MA14以及乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)6G5菌液分别在MRS固体培养基上划线，30℃培养 48h，挑取单菌落接种到5mL液体MRS培养基中，30℃培养24h，再按2％接种量接种到5mL 液体MRS培养基中，30℃培养10h，一共活化3代，然后按2％接种量接种到5mL液体MRS 培养基中培养12h，从起点开始每隔2h取1mL菌液振荡混匀，利用紫外分光光度计测定OD600吸光度，平行两次，并按时间绘制生长曲线，同时，取出菌液100μL均匀涂布于固体MRS 培养基上，倒置，30℃下培养36-48h，平板计数，结果见图3。
由图3可知，乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032在MRS 培养基中生长6h即进入稳定期，生长速率比乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcuslactis subsp. lactis)MA14以及乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis)6G5更快。
2、乳酸乳球菌乳酸亚种在MRS培养基中生长12h的pH变化
从-80℃保存的甘油管中蘸取乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis) CCFM1032、乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)MA14以及乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)6G5菌液分别在MRS固体培养基上划线，30℃培养 48h，挑取单菌落接种到5mL液体MRS培养基中，30℃培养24h，再按2％接种量接种到5mL 液体MRS培养基中，30℃培养10h，一共活化3代，然后按2％接种量接种到5mL液体MRS 培养基中培养12h，从起点开始每隔2h取菌液，振荡混匀，利用pH计测定pH值，平行两次并记录，结果见图4。
由图4可知，乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032在发酵6 h后pH即可达4.7，产酸速率比比乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis)MA14 以及乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)6G5快。
实施例4：菌株在乳体系中的生长特性
1、乳酸乳球菌乳酸亚种在脱脂乳中12h内的活菌数变化
从-80℃保存的甘油管中蘸取乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis) CCFM1032、乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)MA14以及乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)6G5菌液分别在MRS固体培养基上划线，30℃培养 48h，挑取单菌落接种到5mL液体MRS培养基中，30℃培养24h，再按2％接种量接种到5mL 液体MRS培养基中，30℃培养10h，一共活化3代，取菌液按2％的接种量接种至无菌脱脂乳中培养12h，从起点开始每隔2h取发酵液100μL均匀涂布于固体MRS培养基上，倒置，30℃下培养36-48h，平板计数，结果见图5。
由图5可知，乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032在脱脂乳中的生长4h即进入稳定期，比在MRS培养基中的生长速度快，且快于在同样在脱脂乳中生长的乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)MA14以及乳酸乳球菌乳酸亚种 (Lactococcus lactis subsp.lactis)6G5。
2、乳酸乳球菌乳酸亚种在脱脂乳中12h内的产酸能力、凝乳能力
从-80℃保存的甘油管中蘸取乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis)
CCFM1032、乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)MA14以及乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)6G5菌液分别在MRS固体培养基上划线，30℃培养 48h，挑取单菌落接种到5mL液体MRS培养基中，30℃培养24h，再按2％接种量接种到5mL 液体MRS培养基中，30℃培养10h，一共活化3代，取菌液按2％的接种量接种至无菌脱脂乳中培养12h，从起点开始每隔2h取发酵液，振荡混匀，利用pH计测定pH值，平行两次，结果见图6，同时，每个时间点进行发酵乳的质地观察，可通过倾斜震荡以观察是否凝固，结果如表2所示。
由图6和表2可知，与乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)MA14以及乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)6G5相比，乳酸乳球菌乳酸亚种 (Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032在发酵8h后pH即可达4.7，可更快发酵脱脂乳产酸，这将有利于快速凝乳，产生活跃的酶系水解脱脂乳的成分形成芳香物质。
表2不同时间点凝乳情况
实施例5：菌株的应用
从-80℃保存的甘油管中蘸取乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis) CCFM1032、乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)MA14以及乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)6G5菌液分别在MRS固体培养基上划线，30℃培养48h，挑取单菌落接种到5mL液体MRS培养基中，30℃培养24h，再按2％接种量接种到5mL 液体MRS培养基中，30℃培养10h，一共活化3代，取菌液按2％的接种量接种至无菌脱脂乳中培养12h，从起点开始每隔2h取发酵液6g，置于顶空气相瓶中，迅速拧紧气相瓶瓶盖，测定其挥发性风味，结果如表3所示。
由表3可知，乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)CCFM1032可在12h 内产生60.26μg/kg的异戊醛，远远高于乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcuslactis subsp.lactis) MA14以及乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis)6G5。
表3不同时间点异戊醛产量
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
序列表
<110> 江南大学
<120> 一株高产异戊醛的乳酸乳球菌乳酸亚种及其应用
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1408
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
gccctccttg cggttaggca acctacttcg ggtactccca actcccgtgg tgtgacgggc 60
ggtgtgtaca aggcccggga acgtattcac cgcggcgtgc tgatccgcga ttactagcga 120
ttccgacttc atgtaggcga gttgcagcct acaatccgaa ctgagaatgg ttttaagaga 180
ttagctaaac atcactgtct cgcgactcgt tgtaccatcc attgtagcac gtgtgtagcc 240
caggtcataa ggggcatgat gatttgacgt catccccacc ttcctccggt ttatcaccgg 300
cagtctcgtt agagtgccca acttaatgat ggcaactaac aataggggtt gcgctcgttg 360
cgggacttaa cccaacatct cacgacacga gctgacgaca accatgcacc acctgtatcc 420
cgtgtcccga aggaacttcc tatctctagg aatagcacga gtatgtcaag acctggtaag 480
gttcttcgcg ttgcttcgaa ttaaaccaca tgctccaccg cttgtgcggg cccccgtcaa 540
ttcctttgag tttcaacctt gcggtcgtac tccccaggcg gagtgcttat tgcgttagct 600
gcgatacaga gaacttatag ctccctacat ctagcactca tcgtttacgg cgtggactac 660
cagggtatct aatcctgttt gctccccacg ctttcgagcc tcagtgtcag ttacaggcca 720
gagagccgct ttcgccaccg gtgttcctcc atatatctac gcatttcacc gctacacatg 780
gaattccact ctcctctcct gcactcaagt ctaccagttt ccaatgcata caatggttga 840
gccactgcct tttacaccag acttaataaa ccacctgcgc tcgctttacg cccaataaat 900
ccggacaacg ctcgggacct acgtattacc gcggctgctg gcacgtagtt agccgtccct 960
ttctgggtag ttaccgtcac ttgatgagct ttccactctc accaacgttc ttctctacca 1020
acagagtttt acgatccgaa aaccttcttc actcacgcgg cgttgctcgg tcagactttc 1080
gtccattgcc gaagattccc tactgctgcc tcccgtagga gtttgggccg tgtctcagtc 1140
ccaatgtggc cgatcaccct ctcaggtcgg ctatgtatca tcgccttggt gagcctttac 1200
ctcaccaact agctaataca acgcgggatc atctttgagt gatgcaattg catctttcaa 1260
acttaaaact tgtgtttaaa gtttttatgc ggtattagca ttcgtttcca aatgttgtcc 1320
cccgctcaaa ggcagattcc ccacgcgtta ctcacccgtt cgctgctcat ccagtcggta 1380
caagtaccaa ccttcagcgc tcaactgc 1408
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
agagtttgat cctggcctca 20
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ggttaccttg ttacgactt 19

Claims (10)

1.一株乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)，其特征在于，所述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)已于2018年09月20日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.60449，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
2.含有权利要求1所述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)的菌剂。
3.如权利要求2所述的发酵剂，其特征在于，所述菌剂的剂型为液体制剂或粉剂。
4.权利要求1所述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)或权利要求2或3所述菌剂在制备食品方面的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述食品为使用权利要求1所述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)或权利要求2或3所述菌剂生产得到的发酵乳制品。
6.如权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述发酵乳制品包含发酵乳、发酵乳饮料、奶酪或马奶酒。
7.一种发酵乳的制备方法，特征在于，所述方法为使用权利要求1所述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)或权利要求2或3所述菌剂。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述方法为将牛乳经均质、巴氏杀菌后冷却，得到发酵原料；在发酵原料中接种权利要求1所述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcuslactis subsp.lactis)或权利要求2或3所述菌剂进行发酵，得到发酵乳。
9.如权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，所述方法为将牛乳在压力14MPa～21MPa、温度40～85℃的条件下均质后进行巴氏杀菌，得到灭菌后的牛乳；将灭菌后的牛乳冷却至21～30℃，得到发酵原料；在发酵原料中接种权利要求1所述乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)或权利要求2或3所述菌剂后于30～37℃下发酵8～12h，得到发酵乳；将酸奶在4℃的条件下放置24～48h，得到后熟后的发酵乳成品。
10.应用权利要求7-9任一所述的制备方法制备得到的发酵乳。
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