CN109593067B - 四氮唑类分子探针化合物或组合物及其应用 - Google Patents

四氮唑类分子探针化合物或组合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种四氮唑类分子探针化合物或组合物及其制备方法和应用。本发明的四氮唑类分子探针化合物或组合物包括以下化合物中的至少一种：
Figure DDA0001426505530000011
本发明的四氮唑类分子探针能够在复杂的生物体系内专一性地标记膜联蛋白(Annexins)，再通过检测探针标记的结果，可以分析得出膜联蛋白在体内的表达量高低情况、生物活性状态、丰度以及在细胞和组织中的分布等生物性质，实现对细胞凋亡的准确检测，达到对癌症等相关疾病的早期诊断与治疗的目的。本发明的分子探针能够在复杂的生物环境下高选择性、高专一性、高效率地标记、检测目标蛋白(Annexins)，具有较高的灵敏度与可操作性。

Description

四氮唑类分子探针化合物或组合物及其应用
技术领域
本发明涉及化学生物检测技术领域，特别是涉及一种四氮唑类分子探针化合物或组合物及其应用。
背景技术
膜联蛋白(Annexins)是一类广泛分布于动植物各种组织和细胞中的依赖钙离子的磷脂结合蛋白家族，具有与磷脂膜可逆结合及与钙离子结合的能力。膜联蛋白与细胞凋亡之间有着密切关系，其表达变化被作为癌症发生的一种检测手段；同时也是各类试剂盒的目标蛋白，用于细胞凋亡的检测与分析，例如Annexin A5就是一种检测细胞凋亡的目标蛋白。其家族包括了数种亚型Annexin A1,Annexin A2,and Annexin A5，均与与细胞增殖分化凋亡密切相关，可以作为一些疾病如癌症的标志物。在复杂的生物体系内专一性地标记膜联蛋白(Annexins)，从而实现对其体内的表达量高低进行检测，对于癌症等相关疾病的早期诊断治疗具有重要意义。
发明内容
基于此，本发明提供了一类新的四氮唑类分子探针化合物或组合物。该类分子探针能够在复杂的生物环境下高选择性、高专一性、高效率地标记膜联蛋白，具有较高的灵敏度与可操作性。
具体技术方案如下：
一种四氮唑类分子探针化合物或组合物，所述四氮唑类分子探针化合物或组合物包括以下化合物中的至少一种：
Figure GDA0003219494140000021
其中，R1选自：C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C3-C6杂环烷基、酯基、5元-6元芳基、1-5个取代的5元-6元芳基、8-12元的双环并环，取代的8-12元的双环并环，所述双环并环为饱和的双环并环、部分不饱和的双环并环或者芳香的双环并环，并且所述双环并环上的环碳原子被0至5个杂原子取代，所述杂原子是指O、N或S；
R2选自：氨基，胺基，烷氧基；
R3选自：炔键，叠氮基，环丙烯，反式环辛烯，四氮嗪等正交反应基团；
n等于0-10的整数。
在其中一些实施例中，R2选自如下基团，但不限于如下基团：
Figure GDA0003219494140000022
在其中一些实施例中，n选自：1-3之间的整数。
在其中一些实施例中，所述四氮唑类分子探针化合物或组合物包括以下化合物中的至少一种：
Figure GDA0003219494140000031
Figure GDA0003219494140000041
本发明还提供了上述四氮唑类分子探针化合物或组合物的应用。
具体技术方案如下：
上述的四氮唑类分子探针化合物或组合物在制备膜联蛋白检测试剂盒中的应用。
本发明还提供了一种膜联蛋白检测试剂盒。
具体技术方案如下：
一种膜联蛋白检测试剂盒，所述试剂盒包括有上所述的四氮唑类分子探针化合物或组合物。
在其中一些实施例中，所述试剂盒还包括点击化学试剂；或者所述试剂盒还包括点击化学试剂和荧光染料。
本发明还提供了一种检测膜联蛋白的方法。
具体技术方案如下：
一种检测膜联蛋白的方法，包括以下步骤：
(1)在待测样品中加入上述的四氮唑类分子探针化合物或组合物进行孵育，得孵育后的样品混合物；
(2)将孵育后的样品混合物用紫外光源进行照射；
(3)检测分析所得待测样品。
在其中一些实施例中，所述检测膜联蛋白的方法包括以下步骤：
(1)在待测样品中加入上述的四氮唑类分子探针化合物或组合物进行孵育，得孵育后的样品混合物；
(2)将孵育后的样品混合物用紫外光源进行照射；
(3)经过步骤(2)处理后的样品通过点击化学反应引入荧光基团或者生物素基团或者化学发光基团；
(4)检测分析所得待测样品。
在其中一些实施例中，所述四氮唑类分子探针化合物或组合物的使用终浓度为1pmol/L-1mol/L。
在其中一些实施例中，所述四氮唑类分子探针化合物或组合物的使用终浓度为0.1μmol/L-10μmol/L。
在其中一些实施例中，孵育的温度为35-40℃，所述孵育的时间为10分钟-72小时。
在其中一些实施例中，所述紫外光源的波长为250nm-400nm，所述照射的时间为1分钟-12小时。
在其中一些实施例中，所述点击化学反应的反应试剂包括TBTA、TCEP和CuSO4的组合物，所述点击化学反应的反应条件为室温反应1-3小时。
在其中一些实施例中，所述待测样品为细胞、血液、组织或者体液。
在其中一些实施例中，所述检测分析的方法包括：酶标法，聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后多功能成像法，化学发光成像法，激光共聚焦成像法，高内涵筛选法，亲和层析与蛋白质免疫印记联用法，质谱检测法。
本发明合成得到了一系列新型的具有特定结构的四氮唑类分子探针，这类四氮唑类分子探针能够在复杂的生物体系内专一性地标记膜联蛋白(Annexins)，再运用酶标仪，聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后多功能成像仪，化学发光成像仪，激光共聚焦成像，高内涵筛选，亲和层析与蛋白质免疫印记联用等仪器检测探针标记的结果，可以分析得出膜联蛋白在体内的表达量高低情况、生物活性状态、丰度以及在细胞和组织中的分布等生物性质，实现对细胞凋亡的准确检测，达到对癌症等相关疾病的早期诊断与治疗的目的。本发明的分子探针能够在复杂的生物环境下高选择性、高专一性、高效率地标记、检测目标蛋白(Annexins)，具有较高的灵敏度与可操作性。
附图说明
图1为实施例2的凝胶荧光成像仪获取的标记实验结果图；
图2为实施例3的凝胶荧光成像仪和R250染色获取的标记实验结果图；
图3为实施例4的凝胶荧光成像仪和R250染色获取的标记实验结果图；
图4为实施例5的蛋白质免疫印记结果图；
图5为实施例6的激光共聚焦显微镜进行细胞成像的结果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的四氮唑类分子探针化合物或组合物及其应用做进一步详细的描述。
实施例1四氮唑类分子探针化合物的制备
探针化合物的结构：
Figure GDA0003219494140000061
Figure GDA0003219494140000071
Figure GDA0003219494140000081
探针化合物的合成方法：
(1)Tz1化合物
Figure GDA0003219494140000082
将对氨基苯甲酸甲酯(10mmol)溶解到4mL 50％硼氟酸溶液中，降温至0℃后，缓慢加入10mL亚硝酸钠(10mmol)水溶液。0℃继续反应30分钟后，抽滤。滤饼用少量丙酮溶解后，加入乙醚重结晶得到硼氟酸重氮盐并干燥。取所得的硼氟酸重氮盐(10mmol)与甲基脒盐酸盐(10mmol)加入到DMSO中,再加入碳酸钾(50mmol)后室温搅拌一小时。然后缓慢加入碘(12mmol)和碘化钾(15mmol),继续室温搅拌一小时。将反应液经萃取干燥并使用柱层析纯化得到四氮唑化合物，收率为40％。所得的四氮唑溶解于20mL 50％甲醇水溶液中加入10mL10％氢氧化钠溶液中,回流两小时后加稀盐酸调pH＝4，抽滤得粗产品，烘干。取1mmol该粗产品加入DMSO中，加入炔丙基胺(1.1mmol)及EDCI，HOBT，TEA(各1.5mmol)，室温搅拌过夜。反应完毕后加入水和乙酸乙酯萃取后，有机层干燥并浓缩，再经柱层析纯化后得到Tz1化合物(收率82％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22(d,J＝8.7Hz,2H),8.00(d,J＝8.7Hz,2H),6.45(s,1H),4.32(dd,J＝5.2,2.5Hz,2H),2.68(s,3H),2.34(s,1H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ165.70,163.64,138.92,134.42,128.69,119.68,79.10,72.27,30.01,11.01.LC-MS(ESI)calcd for[M-1]-240.1；Found 240.1.
(2)Tz2化合物：
Figure GDA0003219494140000091
将对氨基苯甲酸甲酯(10mmol)溶解到4mL 50％乙醇水溶液中，降温至0°℃后，缓慢加入1mL浓盐酸，随后滴加2mL亚硝酸钠(10mmol)水溶液。0℃继续反应30分钟后待用。
将相应的醛和对甲苯磺酰肼(各10mmol)加入20mL甲醇中，室温过夜后浓缩去除溶剂，并加入10mL吡啶溶解，冰浴冷却至零度后滴加预制的重氮盐。滴加完毕后继续零度搅拌1h后升至室温。反应液经稀盐酸酸化后加入乙酸乙酯萃取，有机层干燥后浓缩再经柱层析纯化得到四氮唑中间体。所得纯化的中间体加入20mL 50％甲醇水溶液中加入10mL 10％氢氧化钠溶液中,回流两小时后加稀盐酸调pH＝4，抽滤得粗产品，烘干。取1mmol该粗产品加入20mL DMF中，加入炔丙基胺(1.1mmol)及EDCI，HOBT，TEA(各1.5mmol)，室温搅拌过夜。反应完毕，加入水和乙酸乙酯萃取后，有机层干燥并浓缩，经柱层析纯化后得到Tz2化合物(收率63％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.37–8.27(m,2H),8.08–7.99(m,2H),6.46(s,1H),4.59(q,J＝7.1Hz,2H),4.30(dd,J＝5.2,2.6Hz,2H),2.32(t,J＝2.5Hz,1H),1.50(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(75MHz,CDCl3)δ165.44,158.03,157.61,138.36,135.67,128.93,120.39,79.04,72.26,63.03,30.02,14.20.HR-MS(ESI)Calcd[M+H]+300.1097；Found 300.1090.
Tz3-20化合物的合成类似于Tz2的合成：
Tz3化合物的收率为45％：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.88(d,J＝4.2Hz,1H),8.40(dd,J＝8.3,6.6Hz,3H),8.04(d,J＝8.8Hz,2H),7.95(td,J＝7.8,1.7Hz,1H),7.54–7.45(m,1H),6.40(s,1H),4.33(dd,J＝5.2,2.5Hz,2H),2.35(t,J＝2.5Hz,1H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ167.07,151.97,147.73,140.23,138.72,136.36,130.18,126.72,124.41,121.56,80.54,73.67,31.42.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+305.1151；Found 305.1148.
Tz4化合物的收率为55％：1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.21(t,J＝5.4Hz,1H),8.29(d,J＝8.7Hz,2H),8.24–8.12(m,4H),7.67–7.58(m,3H),4.12(dd,J＝5.4,2.4Hz,2H),3.18(t,J＝2.4Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ165.15,138.37,135.43,131.57,129.86,129.76,127.18,126.74,120.20,81.52,73.58,29.14.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+304.1198；Found 304.1193.
Tz5化合物的收率为51％：1H NMR(300MHz,DMSO)δ9.22(t,J＝5.5Hz,1H),9.09(d,J＝4.9Hz,2H),8.32(d,J＝8.8Hz,2H),8.18(d,J＝8.8Hz,2H),7.74(t,J＝4.9Hz,1H),4.11(dd,J＝5.4,2.5Hz,2H),3.18(t,J＝2.4Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ165.15,164.36,158.82,155.66,138.37,135.72,129.83,123.04,120.46,81.50,73.60,29.15.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+306.1103；Found306.1162.
Tz6化合物的收率为58％：1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.46(s,1H),8.25(d,J＝8.3Hz,2H),8.03(d,J＝8.6Hz,1H),7.79–7.69(m,3H),7.56(d,J＝3.0Hz,1H),6.68(d,J＝2.9Hz,1H),5.19(s,2H),3.64(s,2H),3.47(s,1H),3.39(s,6H),1.42(s,9H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ167.82,165.80,153.70,136.85,136.66,136.59,129.94,128.87,128.49,119.92,119.73,119.51,117.64,110.90,102.33,79.13,78.89,75.73,46.81,41.45,35.22,27.92.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+512.2410；Found 512.2405.
Tz7化合物的收率为72％：1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.46(d,J＝0.9Hz,1H),8.25(d,J＝8.6Hz,2H),8.02(dd,J＝8.6,1.4Hz,1H),7.74(dd,J＝8.8,2.4Hz,3H),7.55(d,J＝3.2Hz,1H),6.68(d,J＝3.0Hz,1H),5.19(d,J＝2.3Hz,2H),3.66(s,6H),3.46(t,J＝2.4Hz,1H),3.40(s,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ168.28,166.37,137.29,137.23,137.15,130.51,129.47,129.07,120.50,120.29,120.08,118.22,111.47,102.90,79.46,76.30,66.52,48.11,42.61,35.79.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+413.1726；Found 413.1717.
Tz8化合物的收率为88％：1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.72(s,1H),8.47(s,1H),8.28(d,J＝7.8Hz,2H),8.14(d,J＝7.6Hz,2H),8.03(d,J＝8.6Hz,1H),7.75(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(s,1H),6.96(s,1H),6.68(s,1H),5.19(s,2H),3.46(s,1H),3.15(s,2H),1.38(s,9H).13C NMR(75MHz,DMSO)δ166.41,165.58,156.21,138.26,137.24,135.98,130.52,129.65,129.07,120.51,120.13,119.91,118.18,111.47,102.91,79.48,78.16,76.30,35.79,28.71.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+486.2254；Found 486.2230.
Tz9化合物的收率为85％：1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.51–8.42(m,1H),8.27(d,J＝8.1Hz,1H),8.19(s,1H),8.03(d,J＝8.5Hz,1H),7.77(dd,J＝14.2,7.8Hz,2H),7.64(d,J＝7.5Hz,1H),7.55(d,J＝2.8Hz,1H),6.67(s,1H),5.18(s,2H),3.64(s,2H),3.42(d,J＝26.6Hz,7H),1.41(s,10H).13C NMR(75MHz,DMSO)δ164.16,161.81,149.77,132.32,125.44,124.35,123.84,123.05,116.28,116.17,115.86,113.98,113.65,105.19,98.37,75.76,72.56,69.26,31.29,23.63.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+512.2410；Found:512.2393.
Tz10化合物的收率为81％：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.57(s,1H),8.30(d,J＝8.7Hz,2H),8.15(dd,J＝8.6,1.5Hz,1H),7.99(d,J＝8.6Hz,2H),7.54(d,J＝8.6Hz,1H),7.30(dd,J＝6.0,2.6Hz,3H),6.94(d,J＝8.6Hz,2H),6.66(d,J＝3.2Hz,1H),6.37(s,1H),4.94(d,J＝2.5Hz,2H),4.60(d,J＝5.4Hz,2H),3.28–3.19(m,4H),2.64–2.55(m,4H),2.45(t,J＝2.5Hz,1H),2.37(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.59,165.91,150.89,138.82,137.06,135.12,129.17,129.09,128.64,128.57,121.06,120.64,119.61,118.70,116.20,109.92,103.13,74.01,54.99,48.91,46.07,43.92,36.04.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+531.2621；Found531.2615.
Tz11化合物的收率为75％：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.57(s,1H),8.30(d,J＝8.7Hz,2H),8.15(d,J＝8.6Hz,1H),7.99(d,J＝8.5Hz,2H),7.54(d,J＝8.7Hz,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,3H),6.92(d,J＝8.4Hz,2H),6.66(d,J＝2.9Hz,1H),6.41(s,1H),4.94(d,J＝2.3Hz,2H),4.61(d,J＝5.4Hz,2H),3.93–3.81(m,4H),3.22–3.11(m,4H),2.45(s,1H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ166.62,165.90,150.97,138.88,137.08,135.08,129.92,129.23,129.11,129.01,128.56,121.06,120.65,119.65,118.71,115.88,109.92,103.14,77.24,74.00,66.85,49.25,43.91,36.05.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+518.2304；Found518.2349.
Tz12化合物的收率为78％：1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.58(s,1H),8.47(s,1H),8.28(d,J＝8.9Hz,1H),8.02(dd,J＝11.8,9.4Hz,2H),7.76(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(s,1H),7.56(d,J＝2.8Hz,1H),6.69(d,J＝2.6Hz,1H),5.20(s,2H),3.76(s,4H),3.47(s,5H),1.44(s,10H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ166.28,159.00,154.35,154.23,150.62,137.19,133.17,130.49,129.07,128.19,120.46,120.00,119.31,118.39,114.59,113.91,111.88,111.46,102.89,79.76,79.49,76.30,35.79,28.51.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+552.2359；Found552.2337.
Tz13化合物的收率为98％：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.24(d,J＝8.6Hz,1H),7.60(d,J＝8.7Hz,1H),7.26(s,1H),6.84(dt,J＝4.4,2.7Hz,1H),4.76(d,J＝2.5Hz,1H),3.61(d,J＝85.4Hz,4H),2.51(t,J＝2.5Hz,1H),1.47(s,4H).13CNMR(126MHz,CDCl3)δ169.34,162.65,154.60,137.85,136.17,128.70,122.02,121.27,119.86,111.84,108.61,80.57,77.36,77.10,76.85,74.64,60.45,58.47,53.49,39.17,28.43,21.09,18.48,14.25,1.07.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+462.2254；Found:462.2236.
Tz14化合物的收率为68％：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.25(d,J＝1.7Hz,1H),8.83(d,J＝1.8Hz,1H),8.42–8.29(m,2H),7.69(t,J＝7.9Hz,1H),7.57(t,J＝6.0Hz,2H),6.70(d,J＝3.6Hz,1H),5.23(d,J＝2.5Hz,2H),3.98–3.35(m,8H),2.48(t,J＝2.5Hz,1H),1.50(s,9H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ168.78,164.56,154.50,147.42,141.66,137.29,136.93,130.27,128.81,128.31,128.09,120.99,120.93,118.50,116.04,101.68,80.53,77.57,73.79,34.19,28.38.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+513.2363；Found 513.2376.
Tz15化合物的收率为55％：1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.21(d,J＝8.4Hz,2H),7.66(dd,J＝20.7,8.1Hz,4H),7.09(d,J＝8.3Hz,1H),4.34(s,4H),3.68(s,2H),3.34(s,3H),3.21(s,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ168.18,164.78,146.32,144.35,137.65,136.98,129.34,120.48,120.40,119.80,118.57,115.72,79.41,76.55,64.83,64.59,55.36,51.79,51.25,47.46,46.35,41.94,31.16.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+431.1832；Found431.1830.
Tz16化合物的收率为53％：1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.22(d,J＝8.5Hz,2H),7.80–7.66(m,3H),7.63(d,J＝1.3Hz,1H),7.16(d,J＝8.1Hz,1H),6.17(s,2H),3.68(s,2H),3.22(s,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ168.15,164.94,150.09,148.61,137.70,136.98,129.35,121.88,120.53,120.42,109.65,106.99,102.33,79.41,76.57,55.38,46.35,31.17.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+431.1832；Found 431.1830.
Tz17化合物的收率为59％：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.86(d,J＝4.3Hz,1H),8.37(t,J＝8.7Hz,3H),7.95(td,J＝7.7,1.6Hz,1H),7.65(d,J＝8.6Hz,2H),7.49(dd,J＝7.1,5.4Hz,1H),3.90(s,2H),3.56(s,2H),3.43(d,J＝2.3Hz,2H),2.68(d,J＝28.0Hz,4H),2.33(d,J＝2.2Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ168.83,164.99,150.46,146.30,137.41,137.35,136.92,128.71,125.28,122.98,120.19,77.23,74.39,46.73.HR-MS(ESI)Calcdfor[M+H]+373.1729；Found374.1723.
Tz18化合物的收率为57％：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32–8.22(m,2H),7.67(dd,J＝1.7,0.6Hz,1H),7.66–7.64(m,1H),7.63(d,J＝1.9Hz,1H),7.26(dd,J＝3.4,0.6Hz,1H),6.62(dd,J＝3.5,1.8Hz,1H),3.86(s,2H),3.51(s,2H),3.38(d,J＝2.4Hz,2H),2.62(d,J＝48.0Hz,4H),2.31(t,J＝2.4Hz,1H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ168.75,158.52,144.79,142.42,137.26,137.00,128.74,119.94,112.40,111.95,77.88,73.92,51.91,51.42,47.58,46.81,42.09.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+363.1569；Found 363.1562.
Tz19化合物的收率为56％：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.27(d,J＝8.6Hz,2H),8.21(dd,J＝3.0,1.1Hz,1H),7.81(dd,J＝5.1,1.0Hz,1H),7.65(d,J＝8.6Hz,2H),7.50(dd,J＝5.0,3.0Hz,1H),3.88(s,2H),3.55(s,2H),3.42(d,J＝2.3Hz,2H),2.66(d,J＝29.9Hz,4H),2.33(t,J＝2.3Hz,1H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ168.86,162.04,137.46,136.71,128.72,128.32,127.00,126.32,126.18,119.87,77.76,74.04,51.87,51.37,47.53,46.78,42.06.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+379.134；Found 379.1268.
Tz20化合物的收率为55％：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝8.4Hz,2H),8.12(d,J＝3.1Hz,1H),7.65(dd,J＝10.8,5.8Hz,3H),3.88(s,2H),3.53(s,2H),3.40(d,J＝2.1Hz,2H),2.64(d,J＝32.7Hz,4H),2.33(d,J＝2.1Hz,1H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ168.63,160.81,154.23,144.85,137.43,137.10,128.80,122.03,120.16,77.87,73.94,51.89,51.37,47.58,46.79,42.09.HR-MS(ESI)Calcd for[M+H]+380.1294；found380.1327.
实施例2活细胞标记实验
本实施例以分别加入Tz4,Tz6，Tz8，Tz12为例，进行活细胞标记实验。
将探针Tz4,Tz6，Tz8,Tz12分别加入人乳腺癌细胞的培养基中，控制四种探针浓度分别均为5微摩尔每升(5μmol/L)，在37℃细胞培养箱中孵育1-5小时后，去除培养基，用磷酸缓冲液(PBS)洗涤两次，随即运用手持紫外灯进行照射，控制波长为302nm，时间为10分钟，然后运用RIPA细胞裂解液将细胞裂解。裂解后用BCA蛋白定量试剂盒进行定量至1毫克每毫升。取1mL该细胞裂解液加入点击化学试剂(50μmol TBTA,100μmol TCEP,100μmolCuSO4)以及50μmol荧光染料TARMA-Azide，进行点击化学反应，反应条件为室温孵育2小时。随后加入5mL冰冻的丙酮溶液将蛋白变性析出并离心去除有机溶剂。得到的蛋白固体加入100μL上样缓冲液，取20μL该样品通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离。最后通过凝胶荧光成像仪获取实验结果。
实验效果如图1所示，由图1结果可见：Tz4、Tz6，Tz8，Tz12均能高特异性的在活细胞环境中标记肿瘤标识蛋白Annexin A2(37kDa)，并随孵育时间增加，标记效果增强，显示这些探针具有较好的专一性。
实施例3：标记一系列肿瘤细胞内生Annexin蛋白的实验
本实施例以Tz6分子为例。将探针Tz6加入种有不同肿瘤细胞的不同培养皿中(每个培养皿中含有一种不同细胞)，控制探针浓度为5微摩尔每升(5μmol/L)，在37℃细胞培养箱中孵育1-5小时后，去除培养基，用磷酸缓冲液(PBS)洗涤两次，随即运用手持紫外灯进行照射，控制波长为302nm，时间为5-20分钟。然后运用RIPA细胞裂解液将细胞裂解，裂解后可用BCA蛋白定量试剂盒进行定量至1毫克每毫升。取1mL该细胞裂解液加入点击化学试剂(50μmol TBTA,100μmol TCEP,100μmol CuSO4)以及50μmol荧光染料TARMA-Azide，进行点击化学反应，反应条件为室温孵育2小时。随后加入冰冻的丙酮溶液将蛋白变性析出并离心去除有机溶剂。得到的蛋白固体加入上样缓冲液，随后运用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离，并通过凝胶荧光成像仪和R250染色获取实验结果。
标记效果如图2所示，由图2结果可见。四氮唑分子Tz6能够特异性地检测到不同肿瘤细胞中的Annexin A2(37kDa)，且标记强度与该细胞株的Annexin A2表达量有关。
实施例4：标记重组Annexin蛋白的实验
以Tz6分子高效标记Annexin A2蛋白为例。将1.25pmol，5pmol，12.5pmol重组人Annexin A2蛋白与一定浓度梯度的Tz6分子(0.1,0.5,2μmol/L)加入100μL PBS缓冲液中并室温孵育10-30分钟。随即运用手持紫外灯进行照射，控制波长为302nm，时间为5-20分钟。随后加入点击化学试剂(0.01mmol TBTA,0.1mmol TCEP,0.1mmol CuSO4)以及0.025mmol荧光染料TARMA-Azide，进行点击化学反应，反应条件为室温孵育2小时。随后加入冰冻的丙酮溶液将蛋白变性析出并离心去除有机溶剂。得到的蛋白固体加入上样缓冲液。运用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离，并通过凝胶荧光成像仪和R250染色获取实验结果。
实验效果如图3所示，由图3结果可见：Tz6能在0.1μmol/L低浓度条件下，高效高灵敏度的标记重组人Annexin A2蛋白(1.25pmol的蛋白即可被成功监测)，并且随着探针和蛋白有效量的增加，标记强度呈现增加的趋势，显示出极好标记能力。
实施例5:人乳腺癌细胞(MCF-7)细胞Annexin A2蛋白的标记和纯化
以Tz6，Tz8，Tz12为例。将探针Tz6，Tz8，Tz12加入种有人乳腺癌细胞的培养皿中，控制三种探针浓度为均为5微摩尔每升(5μmol/L)，在37℃细胞培养箱中孵育1-5小时后，去除培养基，用磷酸缓冲液(PBS)洗涤两次，随即运用手持紫外灯进行照射，控制波长为302nm，时间为10分钟，然后运用RIPA细胞裂解液将细胞裂解。裂解后用BCA蛋白定量试剂盒进行定量至1毫克每毫升。取1mL该细胞裂解液加入点击化学试剂(50μmol TBTA,100μmolTCEP,100μmol CuSO4)及50μmol Biotin-Azide，进行点击化学反应，反应条件为室温孵育2小时。随后加入冰冻的丙酮溶液将蛋白变性析出并离心去除有机溶剂。得到的蛋白固体复溶于1％的十二烷基磺酸钠的PBS溶液，随后通过亲和层析技术，即加入连接有抗生物素蛋白的琼脂糖将标记有生物素的Annexin A2蛋白进行富集纯化，随后运用Annexin A2抗体进行蛋白质免疫印记验证。
实验效果如图4所示，由图4结果可见。Tz6，Tz8,Tz12系列化合物能够成功在活体肿瘤细胞体内(MCF-7)特异性标记Annexin A2，并能运用亲和层析技术将该内源性AnnexinA2进行纯化分离，并运用蛋白质免疫印记技术进行鉴定。
实施例6：活体细胞的膜联蛋白分布成像实验
以上述Tz6为例。将Tz6加入种有人乳腺癌细胞的培养皿中，控制探针浓度为2微摩尔每升(2μmol/L)，37℃孵育两小时后，除去培养基并用磷酸缓冲液清洗两次。随即运用手持紫外灯进行照射，控制波长为302nm，时间为5-20分钟。然后运用4％多聚甲醛对细胞固定10分钟。然后用0.1％Triton X-100溶液孵育15分钟，进行细胞穿孔。随后加入点击化学试剂(0.01mmol TBTA,0.1mmol TCEP,0.1mmol CuSO4)及0.025mmol荧光染料TARMA-Azide，进行点击化学反应，室温孵育两小时后使用0.1％吐温20的PBS溶液进行洗涤数次，最后对细胞核使用hoechest染色，再利用激光共聚焦显微镜进行细胞成像。
实验效果如图5所示，由图5结果可见：Tz6系列化合物能专一性标记成像活细胞体内的Annexin A2蛋白，并能够在细胞荧光成像中定位细胞中的Annexin A2蛋白的表达和分布，从荧光强度即可判断肿瘤细胞内该肿瘤标志物的表达量高低。
实施例7：标记肿瘤细胞内生Annexin蛋白并运用生物质谱进行检验
以Tz6分子标记检测Annexin A2为例。将探针Tz6加入种植人乳腺癌细胞的培养皿中，控制探针浓度为5微摩尔每升(5μmol/L)，在37℃培养箱中孵育5小时后，去除培养基，用磷酸缓冲液(PBS)洗涤两次。随即运用手持紫外灯进行照射，控制波长为302nm，时间为5-20分钟。然后运用细胞裂解液将细胞裂解。向获得的细胞裂解液中加入点击化学试剂(50μmolTBTA,100μmol TCEP,100μmol CuSO4)及50μmol Biotin-Azide，进行点击化学反应，条件为室温孵育2小时。随后通过亲和层析技术，即利用连接有抗生物素蛋白的琼脂糖将连接有生物素的Annexin A2蛋白进行富集纯化。运用聚丙烯酰胺凝胶电泳将纯化的蛋白进行分离，并将得到的凝胶上相应的条带切离并运用胰酶进行消化处理，最后通过液质联用进行分析。
实验结果，对比蛋白数据库：
Figure GDA0003219494140000171
通过生物质谱技术能高可信度地确认Tz6系列化合物与Annexin A2蛋白在活细胞体内的特异性结合。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (12)

1.一种四氮唑类分子探针化合物，其特征在于，所述四氮唑类分子探针化合物为以下结构化合物：
Figure FDA0003219494130000011
其中，R1选自：5元-6元芳基、8-12元的双环并环，所述双环并环为芳香的双环并环，并且所述双环并环上的环碳原子被0至5个杂原子取代，所述杂原子是指O、N或S；
R2选自：
Figure FDA0003219494130000012
R3选自：炔基；
n等于0-10的整数。
2.根据权利要求1所述的四氮唑类分子探针化合物，其特征在于，所述四氮唑类分子探针化合物为以下结构化合物：
Figure FDA0003219494130000013
3.权利要求1或2所述的四氮唑类分子探针化合物在制备膜联蛋白检测试剂盒中的应用。
4.一种膜联蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括有权利要求1或2所述的四氮唑类分子探针化合物。
5.根据权利要求4所述的膜联蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括点击化学试剂；或者所述试剂盒还包括点击化学试剂和荧光染料。
6.一种非疾病诊断治疗目的的检测膜联蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在待测样品中加入权利要求1或2所述的四氮唑类分子探针化合物进行孵育，得孵育后的样品混合物；
(2)将孵育后的样品混合物用紫外光源进行照射；
(3)检测分析所得待测样品。
7.根据权利要求6所述的非疾病诊断治疗目的的检测膜联蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在待测样品中加入权利要求1或2所述的四氮唑类分子探针化合物进行孵育，得孵育后的样品混合物；
(2)将孵育后的样品混合物用紫外光源进行照射；
(3)经过步骤(2)处理后的样品通过点击化学反应引入荧光基团；
(4)检测分析所得待测样品。
8.根据权利要求6或7所述的非疾病诊断治疗目的的检测膜联蛋白的方法，其特征在于，所述四氮唑类分子探针化合物的使用终浓度为1pmol/L-1mol/L。
9.根据权利要求6或7所述的非疾病诊断治疗目的的检测膜联蛋白的方法，其特征在于，孵育的温度为35-40℃，所述孵育的时间为10分钟-72小时。
10.根据权利要求6或7所述的非疾病诊断治疗目的的检测膜联蛋白的方法，其特征在于，所述紫外光源的波长为250nm-400nm，所述照射的时间为1分钟-12小时。
11.根据权利要求7所述的非疾病诊断治疗目的的检测膜联蛋白的方法，其特征在于，所述点击化学反应的反应试剂包括TBTA、TCEP和CuSO4的组合物，所述点击化学反应的反应条件为室温反应1-3小时。
12.根据权利要求6或7所述的非疾病诊断治疗目的的检测膜联蛋白的方法，其特征在于，所述待测样品为细胞、血液、组织或者体液。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5847121A (en) * 1992-06-09 1998-12-08 Neorx Corporation Production of nitro-benzyl-dota via direct peptide cyclization
CN1431319A (zh) * 2002-12-19 2003-07-23 中国人民解放军第二军医大学 一种细胞凋亡检测试剂盒
WO2009117444A1 (en) * 2008-03-17 2009-09-24 Northeastern University Inhibitors of fatty acid amide hydrolase and monoacylglycerol lipase for modulation of cannabinoid receptors
CN104302630A (zh) * 2012-04-16 2015-01-21 阿勒根公司 作为甲酰肽受体2调节剂的(2-脲基乙酰氨基)烷基衍生物
CN106470964A (zh) * 2014-04-25 2017-03-01 新加坡国立大学 具有聚集诱导发光性质的聚合物和寡聚物在成像和成像引导的治疗中的应用
CN106537124A (zh) * 2014-05-14 2017-03-22 新加坡科技研究局 丙烯酸的检测

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5847121A (en) * 1992-06-09 1998-12-08 Neorx Corporation Production of nitro-benzyl-dota via direct peptide cyclization
CN1431319A (zh) * 2002-12-19 2003-07-23 中国人民解放军第二军医大学 一种细胞凋亡检测试剂盒
WO2009117444A1 (en) * 2008-03-17 2009-09-24 Northeastern University Inhibitors of fatty acid amide hydrolase and monoacylglycerol lipase for modulation of cannabinoid receptors
CN104302630A (zh) * 2012-04-16 2015-01-21 阿勒根公司 作为甲酰肽受体2调节剂的(2-脲基乙酰氨基)烷基衍生物
CN106470964A (zh) * 2014-04-25 2017-03-01 新加坡国立大学 具有聚集诱导发光性质的聚合物和寡聚物在成像和成像引导的治疗中的应用
CN106537124A (zh) * 2014-05-14 2017-03-22 新加坡科技研究局 丙烯酸的检测

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