CN109580953B - 一种薄荷及其饮片中掺有留兰香胶体金检测装置及制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明专利公开一种胶体金检测装置及其制备方法，旨在提供一种快速简便，灵敏度高，可检测薄荷及其饮片中掺有易混品留兰香的快筛试剂盒，适用于中药饮片掺入易混品的现场测定，属于生物检测技术领域。装置由试纸条及反应杯组成。其中试纸条包括底板，沿同一方向依次铺设的样品垫，硝酸纤维素膜和吸水纸，硝酸纤维素膜上包括检测线和质控线；反应杯内含有胶体金标记抗体。本发明应用层析式免疫胶体金原理，试纸中检测线与质控线比色来半定量检测样品中的香芹酮残留量，在短时间内快速准确地检测出样品是否含有香芹酮，能够满足中药饮片监管部门对薄荷及其饮片中掺有留兰香快速检测需求，能满足监管部门、检测机构现场监督执法的需要。

Description

一种薄荷及其饮片中掺有留兰香胶体金检测装置及制备方法 与用途

技术领域

本发明专利公开一种胶体金检测装置及其制备方法，旨在提供一种快速简便，灵敏度高，可检测薄荷及其饮片中掺有易混品留兰香（特征成分香芹酮）的快筛试剂盒，适用于中药饮片掺入易混品的现场测定，属于生物检测技术领域。

背景技术

薄荷为唇形科植物薄荷(Mentha haplocalyx Briq)的干燥地上部分，是常用的中药材。从日常药材检验及市场调研时发现，薄荷药材及饮片存在同属植物留兰香掺混或替代的问题。薄荷、留兰香同为唇形科薄荷属植物，为芳香类植物，均富含挥发油，薄荷素油除了药用外、同时作为香料使用，留兰香油多作为香料广泛使用。二者外观性状极其相近，难以区分，容易混淆使用，但二者在成分、功能主治等方面均不相同。薄荷的主要成分为薄荷脑、不含香芹酮，具有疏散风热、清利头目的功效；而留兰香类植物的主要成分为香芹酮、少含或不含薄荷脑，具有疏风、理气、止痛的功效，以留兰香替代薄荷药用将直接影响药效。因此以留兰香特征成分香芹酮为检查指标，对薄荷及其饮片中掺、混有的留兰香类植物进行快速筛查具有较大意义。

目前，在国内外，香芹酮的检测方法主要有气相-质谱联用（GC/MS）、气相（GC）、薄层鉴别（TLC）等，上述方法中所用仪器设备操作复杂、成本高、对操作人员技术要求高，且不能立即显示结果，不适用于各省、自治区、直辖市卫生厅局、中医药管理局等部门对怀疑对象进行快速的在线检测和监控。而免疫学检测分析技术以其高灵敏、特异性高、快速、操作简便等优点在药物残留检测领域已被广泛应用比起仪器等检验方法有很多优势。

综上，本领域亟需一种准确、快速、方便的检测薄荷及其饮片中掺有易混品留兰香（特征成分香芹酮）的快速检测方法。

发明内容

本发明为了克服目前技术不能现场快速检测的技术问题，提供一种使用方便，快速简便，灵敏度和准确度高，可现场测定香芹酮的胶体金检测装置及其制备方法与用途。

本发明申请公开一种薄荷及其饮片中掺有留兰香胶体金检测装置及制备方法与用途。

一种薄荷及其饮片中掺有留兰香胶体金检测装置，所述检测装置包括试纸条及反应杯；试纸条包括底板，底板上沿同一方向依次铺设有样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，硝酸纤维素膜上包括检测线和质控线；检测线为能与香芹酮单克隆抗体结合的香芹酮偶联抗原；所述质控线为能与香芹酮单克隆抗体结合的兔抗鼠抗体；所述反应杯中包含胶体金标记香芹酮单克隆抗体。

一种薄荷及其饮片中掺有留兰香胶体金检测装置的制备方法，包括以下步骤：

制备硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上形成检测线和质控线；

所述检测线为能与香芹酮单克隆抗体结合的香芹酮偶联抗原在所述硝酸纤维素膜上进行线状点样制得；所述质控线为能与香芹酮单克隆抗体结合的兔抗鼠抗体进行线性点样制得；

组装试纸条，在底板上沿同一方向依次搭接粘贴样品垫，硝酸纤维素膜及吸水纸；

制备反应杯，所述反应杯中包含胶体金标记香芹酮单克隆抗体；

所述胶体金标记香芹酮单克隆抗体使用制得的胶体金及香芹酮单克隆抗体偶联制得；

需要说明的是，用于制备检测线的香芹酮偶联抗原是通过以下方法获得：

取香芹酮半抗原0.1mmol溶于2mLDMF（N，N-二甲基甲酰胺）中，搅拌加入0.2mmolDCC（二环己基碳二亚胺）和0.1mmol NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）。4℃下磁力搅拌反应过夜（一般为12小时），离心后上清夜作为A液，称取人血清蛋白 (HSA)140mg 溶于10mL 浓度0.1mol/L的（磷酸缓冲盐溶液）PBS（pH8.0）中。加入DMF（N，N-二甲基甲酰胺） 1mL，搅拌溶解制备得到B液，磁力搅拌下，A液逐渐滴B液中，4℃下反应 12h。离心后，取上清液，4℃下用生理盐水透析3天，每天更换3次透析液。得到的全抗原以10mg/mL（稀释到该浓度）的浓度分装于0.5mL 离心管中。冻存于-20℃冰箱中备用。

需要说明的是，用于检测质控线的兔抗鼠抗体是通过以下方法获得：

用载体蛋白结合抗原免疫新西兰白兔，免疫剂量为50～100μg/次，背部皮下分多点注射；首免，用合成的人工抗原与等量弗氏完全佐剂乳化；加强免疫，用合成的人工抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化，连续免疫4～5次，每次间隔4～8周，最后一次免疫后10～15天，以ELISA法测其定效价达到105以上时，采血并分离收集高免血清，以饱和硫酸铵盐析法提取IgG 抗体，-20℃冻存备用。

需要说明的是，用于制备反应杯的胶体金标记抗体是通过以下方法获得：

胶体金的制备，取1％氯金酸溶液1mL，加99mL超纯水成终浓度0.01％的氯金酸溶液，加热沸腾后，取1％柠檬酸三钠1.6mL一次性迅速加入煮沸的氯金酸溶液中，继续加热至溶液由淡黄色转为蓝黑色最终变为亮红色，颜色稳定后继续加热5min，室温冷却，补充失水至原体积，得到胶体金溶液；

胶体金标记单克隆抗体的制备，调节胶体金溶液pH值至8.0，用恒速搅拌器均匀搅拌，同时逐滴加入香芹酮的单克隆抗体，1h后加入抗体量相当的PEG（聚乙二醇），充分反应30min后加入抗体量相当的BSA，加完后，继续搅拌30min。在9000rpm下离心30min获得均一性金标抗体沉淀，再加PNPB缓冲液或者PBS缓冲液重悬备用。

需要说明的是，香芹酮单克隆抗体的方法，包括以下步骤：

香芹酮半抗原的制备

在100mL的三颈瓶中依次加入1.5g香芹酮，1.4g羧甲氧基胺半盐酸盐，甲醇8mL，吡啶2mL，蒸馏水2mL，65℃反应5h。旋蒸完后，加水，用稀盐酸将溶液调为微酸性后再用乙酸乙酯萃取2-3遍，合并有机相，蒸干后拌样，过柱提纯得香芹酮半抗原。

香芹酮免疫抗原的制备

利用香芹酮半抗原制备免疫抗原。取香芹酮半抗原 0.1mmol 溶于2mLDMF（N，N-二甲基甲酰胺）中，搅拌加入0.2mmol DCC（二环己基碳二亚胺）和0.15mmol NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）。4℃下磁力搅拌反应过夜，离心后上清夜为A液，称取血蓝蛋白 (KLH)140mg溶于10mL浓度为0.1mol/L的PBS（pH8.0）中。加入DMF（N，N-二甲基甲酰胺）1mL，搅拌溶解制备得到B液，磁力搅拌下，A液逐渐滴入B液中，4℃下反应12h。离心后，取上清液，4℃下用生理盐水透析3天，每天更换3次透析液。得到的全抗原以1mg/mL（用前述方法就可以得到该浓度）的浓度分装于0.5mL离心管中。冻存于-20℃冰箱中。

香芹酮免疫抗原制备单克隆抗体的制备

利用香芹酮免疫抗原制备单克隆抗体。使用香芹酮免疫抗原并鉴定后免疫4只6周龄BALB/C小鼠，加强免疫三次后，采血测效价，待血清效价不再上升，用两倍剂量的抗原不加佐剂免疫小鼠，三天后脱颈致死小鼠，在无菌条件下取脾脏制备脾细胞，与生长旺盛的小鼠骨髓瘤细胞按个数比8:1的比例混合于50mL离心管，加入30mL无血清IPMI1640培养基，1100r/min离心5min弃上清，将细胞团轻轻振松，置于37℃水浴中。把 1mL50%PEG-4000（聚乙二醇-4000）缓缓加入细胞中，在1min内滴完，同时轻轻搅动底部沉淀，静置1min后，前30s沿管壁缓慢匀速加入无血清培养基 1mL，后30s加入2mL，然后快速加入27mL终止融合过程，1100r/min离心5min，弃上清，用HAT选择性培养基重悬后加到已铺有饲养细胞的96孔细胞培养板中，37℃、体积分数5%的CO₂条件下培养。7天后换成HT培养液，待孔内的杂交细胞数量达到300个以上时，用间接ELISA法筛选，选择强阳性、抑制效果好、细胞生长旺盛的孔进行有限稀释克隆化，经3次以上的克隆培养和检测，均呈阳性的孔内细胞即为分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞扩大培养以备单克隆抗体的制备。

采用体内诱生腹水法生产抗香芹酮单克隆抗体。选4只经产昆明小鼠，腹腔注射液体石蜡油 0.5mL/只，7天后腹腔注射杂交瘤细胞3～5×106/只，10天后，待小鼠腹部明显膨大时收集腹水。用正辛酸-硫酸铵沉淀法来纯化腹水，经紫外测定抗香芹酮单克隆抗体的含量。前述胶体金标记单克隆抗体的制备中逐滴加入的香芹酮的单克隆抗体的量就是本步骤所制备出的量。

一种薄荷及其饮片中掺有留兰香的胶体金快速检测装置的应用，其步骤是：

（1）样品的预处理：取2g已经切碎的某薄荷饮片中药材样品加入到25mL离心管中，分别加入浓度均为10.0mg/L香芹酮各100μL，然后加入8mL含有10%乙醇的pH值为7.2的PBS缓冲液的提取液，充分震荡混匀后即为待测液；阴性对照加100μL7.2的PBS缓冲液的提取液，其它操作不变；

（2）检测：吸取上述待测液200μL（9-10滴）于反应杯中的红色微孔，并上下抽吸10次混匀，20-40°C开始第一步反应，并计时3分钟；将试纸条插入到红色微孔中；20-40°C下开始第二步反应，并计时7分钟；从微孔中取出试纸条，轻轻刮去测试条下端的吸水海绵，并进行结果判读；胶体金标记抗体冻干后即为红色微孔；

（3）结果判读：比较检测线即T线与控制线即C线颜色深浅，如果T线颜色深度大于等于C线，结果为阴性，说明检测样品中不含香芹酮，或其残留量低于本产品的检出限；如果T线颜色深度小于C线或T线不显色，则结果为阳性，说明检测样品中香芹酮残留量等于或高于本产品的检出限。

本发明检测原理是利用样品垫形成的毛细管虹吸效应，使被检测物质首先与胶体金标记的抗香芹酮单抗发生竞争形式的结合，其后果是，当胶体金标记的抗香芹酮单抗过量时，多余的单抗泳动到检测线，与香芹酮偶联抗原结合并显色；而与检测物结合的胶体金标记的抗香芹酮多抗，其V区结合位点被检测物质占据，只能跨越检测线泳动到质控线以C区位点与兔抗鼠 IgG 抗体非特异性结合，同检测线进行比色而得到检测结果。

本发明的有益效果：本发明应用层析式免疫胶体金原理，试纸中检测线与质控线比色来半定量检测样品中的香芹酮残留量，在短时间内快速准确地检测出样品是否含有香芹酮，能够满足中药饮片监管部门对薄荷及其饮片中掺有留兰香（特征成为为香芹酮）快速检测需求，能满足监管部门、检测机构现场监督执法的需要。本发明与现有技术相比，具有使用方便、经济快捷、制作容易、成本低廉的特点。

附图说明

图1是本发明香芹酮胶体金检测装置的结构示意图；

图2是香芹酮半抗原的结构图。

具体实施方式

下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1 香芹酮半抗原的制备

在100mL的三颈瓶中依次加入1.5g香芹酮，1.4g羧甲氧基胺半盐酸盐，甲醇8mL，吡啶2mL，蒸馏水2mL，65℃反应5h。旋蒸完后，加水，用稀盐酸将溶液调为微酸性后乙酸乙酯萃取2-3遍，合并有机相，蒸干后拌样，过柱提纯得香芹酮半抗原。

实施例2 香芹酮免疫抗原的合成

利用香芹酮半抗原制备免疫抗原。取香芹酮半抗原 0.1mmol 溶于2mLDMF中，搅拌加入0.2mmol DCC和0.15mmol NHS。4℃下磁力搅拌反应过夜，离心后上清夜为A液，称取血蓝蛋白 (KLH)140mg溶于10mL浓度为0.1mol/L的PBS（pH8.0）中。加入DMF1mL，搅拌溶解制备B液，磁力搅拌下，A液逐渐滴入B液中，4℃下反应 12h。离心后，取上清液，4℃下用生理盐水透析3天，每天更换3次透析液。得到的全抗原以1mg/mL的浓度分装于0.5mL离心管中。冻存于 -20℃冰箱中。

实施例3 香芹酮单克隆抗体的制备

利用香芹酮免疫抗原制备单克隆抗体。使用香芹酮免疫抗原并鉴定后免疫4只6周龄BALB/C小鼠，加强免疫三次后，采血测效价，待血清效价不再上升，用两倍剂量的抗原不加佐剂免疫小鼠，三天后脱颈致死小鼠，在无菌条件下取脾脏制备脾细胞，与生长旺盛的小鼠骨髓瘤细胞按8:1的比例混合于50mL离心管，加入30mL无血清IPMI1640培养基，1100r/min离心5min弃上清，将细胞团轻轻振松，置于37℃水浴中。把 1mL50%PEG-4000缓缓加入细胞中，在1min内滴完，同时轻轻搅动底部沉淀，静置1min后，前30s沿管壁缓慢匀速加入无血清培养基 1mL，后30s加入2mL，然后快速加入27mL终止融合过程，1100r/min离心5min，弃上清，用HAT选择性培养基重悬后加到已铺有饲养细胞的96孔细胞培养板中，37℃、体积分数5%的CO2条件下培养。7天后换成HT培养液，待孔内的杂交细胞数量达到300个以上时，用间接ELISA法筛选，选择强阳性、抑制效果好、细胞生长旺盛的孔进行有限稀释克隆化，经3次以上的克隆培养和检测，均呈阳性的孔内细胞即为分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞扩大培养以备单克隆抗体的制备。

采用体内诱生腹水法生产抗香芹酮单克隆抗体。选4只昆明小鼠，腹腔注射液体石蜡油 0.5mL/只，7天后腹腔注射杂交瘤细胞3～5×106/只，10天后，待小鼠腹部明显膨大时收集腹水。用正辛酸-硫酸铵沉淀法来纯化腹水，经紫外测定抗香芹酮单克隆抗体的含量。

实施例4 香芹酮胶体金检测装置的制备

（1） 胶体金溶液的制备

取1％氯金酸溶液1mL，加99mL超纯水成终浓度0.01％的氯金酸溶液，加热沸腾后，取1％柠檬酸三钠1.6mL一次性迅速加入煮沸的氯金酸溶液中，继续加热至溶液由淡黄色转为蓝黑色最终变为亮红色，颜色稳定后继续加热5min，室温冷却，补充失水至原体积。

（2）胶体金标记单克隆抗体的制备

调节胶体金溶液pH值至8.0，用恒速搅拌器均匀搅拌，同时逐滴加入香芹酮的单克隆抗体，1h后加入抗体量相当的PEG，充分反应30min后加入抗体量相当的BSA，加完后，继续搅拌30min。在9000rpm 下离心30min获得均一性金标抗体沉淀，再加PNPB重悬备用。

（3）胶体金检测装置的制备

在底板上，沿同一方向依次将样品垫，喷涂有香芹酮-HSA（检测线）和兔抗鼠IgG（质控线）的硝酸纤维素膜和吸水纸依次搭接粘连；反应杯内加入胶体金标记抗体，冻干。

实施例5一种薄荷及其饮片中掺有留兰香的胶体金快速检测的应用，其步骤是：

（1）样品的预处理：取2g已经切碎的某薄荷饮片中药材样品加入到25mL离心管中，分别加入浓度均为10.0mg/L香芹酮各100μL，然后加入8mL含有10%乙醇的pH值为7.2的PBS缓冲液的提取液，充分震荡混匀后即为待测液；阴性对照加100μL7.2的PBS缓冲液的提取液，其它操作不变。

（2）检测：吸取上述待测液200μL（9-10滴）于红色微孔，并上下抽吸10次混匀。20-40°C开始第一步反应，并计时3分钟；将测试条插入到红色微孔中；20-40°C下开始第二步反应，并计时7分钟；从微孔中取出测试条，轻轻刮去测试条下端的吸水海绵，并进行结果判读。

（3）结果判读

（4）与验证方法结果对比

实施例6 香芹酮胶体金检测装置的灵敏度

通过实验，本发明中香芹酮胶体金检测装置的灵敏度为：香芹酮3μg/g。

实施例7 香芹酮胶体金检测装置的特异性实验

在阴性的提取液样品中，分别加入香芹酮3μg/g，薄荷脑10μg/g、薄荷酮10μg/g和胡薄荷酮10μg/g。实验结果发现，只有加入香芹酮的样品能够检出，而加入薄荷脑、薄荷酮和胡薄荷酮的样品无法检出，说明本检测装置对香芹酮的特异性较好，对其它类型香芹酮的交叉反应较少。

实施例8 香芹酮胶体金检测装置的保质期实验

用三批常规生产的产品分别做保质期实验，放置于室内室温环境保持，每隔1个月取12个装置，用质控样本检测，分别做阴性，重复三次，观察数据变化，考察保质期时间。阴性显色从13个月开始下降，在1年时间内产品品质无明显变化，因此确定保质期为1年。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种薄荷及其饮片中掺有留兰香胶体金检测装置的制备方法，用于制备一种薄荷及其饮片中掺有留兰香胶体金检测装置，所述检测装置包括试纸条及反应杯；试纸条包括底板，底板上沿同一方向依次铺设有样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，硝酸纤维素膜上包括检测线和质控线；检测线为能与香芹酮单克隆抗体结合的香芹酮偶联抗原；所述质控线为能与香芹酮单克隆抗体结合的兔抗鼠抗体；所述反应杯中包含胶体金标记香芹酮单克隆抗体；

其特征在于，包括以下步骤：

制备硝酸纤维素膜，在所述硝酸纤维素膜上形成检测线和质控线；

所述检测线为能与香芹酮单克隆抗体结合的香芹酮偶联抗原在所述硝酸纤维素膜上进行线状点样制得；所述质控线为能与香芹酮单克隆抗体结合的兔抗鼠抗体进行线性点样制得；

组装试纸条：在底板上沿同一方向依次搭接粘贴样品垫、硝酸纤维素膜及吸水纸；

制备反应杯：所述反应杯中包含胶体金标记香芹酮单克隆抗体；

所述胶体金标记香芹酮单克隆抗体使用制得的胶体金及香芹酮单克隆抗体偶联制得；所述香芹酮单克隆抗体采用以下步骤制备：

香芹酮半抗原的制备

在100mL的三颈瓶中依次加入1.5g香芹酮，1.4g羧甲氧基胺半盐酸盐，甲醇8mL，吡啶2mL，蒸馏水2mL，65℃反应5h，旋蒸完后，加水，用稀盐酸将溶液调为微酸性后再用乙酸乙酯萃取2-3遍，合并有机相，蒸干后拌样，过柱提纯得香芹酮半抗原；

香芹酮免疫抗原的制备

取香芹酮半抗原 0.1mmol 溶于2mLN，N-二甲基甲酰胺中，搅拌加入0.2mmol 二环己基碳二亚胺和0.15mmol N-羟基琥珀酰亚胺，4℃下磁力搅拌反应过夜，离心后上清夜为A液；称取血蓝蛋白 140mg溶于10mL浓度为0.1mol/L、pH8.0的磷酸缓冲盐溶液中，再加入N，N-二甲基甲酰胺1mL，搅拌溶解制备得到B液；磁力搅拌下，A液逐渐滴入B液中，4℃下反应12h；离心后，取上清液，4℃下用生理盐水透析3天，每天更换3次透析液；

得到的全抗原以1mg/mL的浓度分装于0.5mL离心管中；冻存于-20℃冰箱中；

香芹酮免疫抗原制备单克隆抗体

使用香芹酮免疫抗原并鉴定后免疫4只6周龄BALB/C小鼠，加强免疫三次后，采血测效价，待血清效价不再上升，用两倍剂量的抗原不加佐剂免疫小鼠，三天后脱颈致死小鼠，在无菌条件下取脾脏制备脾细胞，与生长旺盛的小鼠骨髓瘤细胞按个数比8:1的比例混合于50mL离心管，加入30mL无血清IPMI1640培养基，1100r/min离心5min弃上清，将细胞团轻轻振松，置于37℃水浴中；把 1mL质量百分比浓度为50%的聚乙二醇-4000缓缓加入细胞中，在1min内滴完，同时轻轻搅动底部沉淀，静置1min后，前30s沿管壁缓慢匀速加入无血清培养基 1mL，后30s加入2mL无血清培养基，然后快速加入27mL无血清培养基终止融合过程，1100r/min离心5min，弃上清，用HAT选择性培养基重悬后加到已铺有饲养细胞的96孔细胞培养板中，37℃、体积分数5%的CO₂条件下培养；7天后换成HT培养液，待孔内的杂交细胞数量达到300个以上时，用间接ELISA法筛选，选择强阳性、抑制效果好、细胞生长旺盛的孔进行有限稀释克隆化，经3次以上的克隆培养和检测，均呈阳性的孔内细胞即为分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞扩大培养以备单克隆抗体的制备；

采用体内诱生腹水法生产抗香芹酮单克隆抗体：选4只经产昆明小鼠，腹腔注射液体石蜡油 0.5mL/只，7天后腹腔注射杂交瘤细胞3～5×10⁶/只，10天后，待小鼠腹部明显膨大时收集腹水；用正辛酸-硫酸铵沉淀法来纯化腹水，经紫外测定抗香芹酮单克隆抗体的含量。

2.如权利要求1所述的一种薄荷及其饮片中掺有留兰香胶体金检测装置的制备方法，其特征在于，用于制备检测线的香芹酮偶联抗原是通过以下方法获得：

取香芹酮半抗原0.1mmol溶于2mLN，N-二甲基甲酰胺中，搅拌加入0.2mmol 二环己基碳二亚胺和0.1mmol N-羟基琥珀酰亚胺，4℃下磁力搅拌反应12小时，离心后上清夜作为A液；称取人血清蛋白 140mg 溶于10mL 浓度0.1mol/L、pH为8.0的磷酸缓冲盐溶液，再加入N，N-二甲基甲酰胺1mL，搅拌溶解制备得到B液；磁力搅拌下，A液逐渐滴B液中，4℃下反应 12h；离心后，取上清液，4℃下用生理盐水透析3天，每天更换3次透析液，得到的全抗原以10mg/mL浓度可控的浓度分装于0.5mL 离心管中，冻存于-20℃冰箱中备用。

3.如权利要求1所述的一种薄荷及其饮片中掺有留兰香胶体金检测装置的制备方法，其特征在于，反应杯的胶体金标记香芹酮单克隆是通过以下方法获得：

胶体金的制备，取质量比浓度为1％的氯金酸溶液1mL，加99mL超纯水成终浓度0.01％的氯金酸溶液，加热沸腾后，取1％柠檬酸三钠1.6mL一次性迅速加入煮沸的氯金酸溶液中，继续加热至溶液由淡黄色转为蓝黑色最终变为亮红色，颜色稳定后继续加热5min，室温冷却，补充失水至原体积，得到胶体金溶液；

胶体金标记单克隆抗体的制备，调节胶体金溶液pH值至8.0，用恒速搅拌器均匀搅拌，同时逐滴加入香芹酮的单克隆抗体，1h后加入抗体量相当的聚乙二醇，充分反应30min后加入抗体量相当的牛血清白蛋白，加完后，继续搅拌30min，在9000rpm下离心30min获得均一性金标抗体沉淀，再加PNPB缓冲液或者磷酸缓冲盐溶液重悬备用。

4.一种薄荷及其饮片中掺有留兰香的胶体金检测装置的应用，采用权利要求1所述制备方法制备的检测装置，其特征是，包括如下步骤：

（1）样品的预处理：取2g已经切碎的某薄荷饮片中药材样品加入到25mL离心管中，加入浓度为10.0mg/L香芹酮100μL，然后加入8mL含有10%乙醇的pH值为7.2的磷酸缓冲盐溶液的提取液，充分震荡混匀后即为待测液；阴性对照加100μLpH值为7.2的磷酸缓冲盐溶液的提取液，其它操作不变；

（2）检测：吸取上述待测液200μL于反应杯中的红色微孔，并上下抽吸10次混匀，20-40°C开始第一步反应，并计时3分钟；将试纸条插入到红色微孔中；20-40°C下开始第二步反应，并计时7分钟；从微孔中取出试纸条，轻轻刮去测试条下端的吸水海绵，并进行结果判读；胶体金标记抗体冻干后即为红色微孔；

（3）结果判读：比较检测线即T线与控制线即C线颜色深浅，如果T线颜色深度大于等于C线，结果为阴性，说明检测样品中不含香芹酮，或其残留量低于本产品的检出限；如果T线颜色深度小于C线或T线不显色，则结果为阳性，说明检测样品中香芹酮残留量等于或高于本产品的检出限。

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