CN109580831A - 丙戊酸钠口服溶液有关物质测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种丙戊酸钠口服溶液有关物质测定方法，本发明公开了一种丙戊酸钠口服溶液有关物质的分析方法。本方法采用气相色谱法，以聚乙二醇PEG‑20M为固定液的毛细管（DB‑WAX UI：30m×0.32mm×0.5µm），载气为氮气，柱流速为1.5ml/min，尾吹为30ml/min，分流比为10:1，提高了方法对各已知杂质的检测能力。本方法专属性强，重复性好，能保证丙戊酸钠中工艺和降解杂的可控性。

Description

丙戊酸钠口服溶液有关物质测定方法

技术领域

本发明涉及测定药物有关物质的技术领域，特别涉及一种丙戊酸钠口服溶液有关物质测定方法。

背景技术

癫痫(epilepsy)即俗称的“羊角风”或“羊癫风”，是由各种原因引起的脑组织局部神经元异常高频放电，并向周围组织扩散，导致大脑功能短暂失调的综合征。而丙戊酸钠(抗癫灵，二丙基乙酸钠)Sodium 2-Propylvalerate,SodiumValproate,DPA：不抑制癫痫病灶放电，而是阻止异常放电的扩散。对所有类型的癫痫都有效，尤其是对小发作优于乙琥胺。

丙戊酸钠的主要药理作用德巴金系广谱抗癫痫病药物，主要作用于中枢神经系统，对动物的药理研究发现德巴金对各种癫痫的实验模型(全身性和部分性)均有抗惊厥作用，同样德巴金被发现对人的各种类型癫痫发作有抑制作用，德巴金主要的作用机理可能与增加γ-氨基丁酸的浓度有关。

对丙戊酸钠口服溶液的有关物质控制也体现极为重要。

发明内容

一种丙戊酸钠有关物质的检测方法，具体为采用气相色谱法，以聚乙二醇(PEG-20M)为固定液的毛细管柱，FID检测器，选用适当的分流比和升温程序。

其中，以聚乙二醇(PEG-20M)为固定液的毛细管柱(DB-WAX UI：30m×0.32mm×0.5μm)；采用FID检测器；分离比为10:1。其中所述升温程序起始温度130℃，维持2分钟，以20℃/分钟速率升温至170℃，维持5min，再以10℃/分钟速率升温至230℃；进样口温度为230℃；检测器温度为230℃。柱流量为1.5ml/min

具体操作为：取本品12.5ml(约含丙戊酸钠500mg)，置于分液漏斗中，加水10ml，再加2mol/mL的盐酸溶液10ml，用二氯甲烷提取3次，每次20ml，合并二氯甲烷液，用水10ml洗涤后，加无水硫酸钠适量，振摇，滤过，滤液置旋转蒸发器上蒸干(温度不超过30℃)至约8ml，定量转移至10ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品储备液；精密量取1ml，置10ml量瓶中用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

取2-苯乙醇约10mg，置100ml量瓶中，加二氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，取1ml置20ml量瓶中，加供试品储备液2ml，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。供试品溶液、对照溶液与系统适应性溶液的进样量为1μl。

确定原料、自制品、被仿制品及自制品降解试验确定本品的杂质普：未知杂质1、未知杂质2、杂质B、杂质K、未知杂质3、杂质A。其中，杂质A二烯丙基乙酸；杂质B为2-异丙基戊酸；杂质K为(2RS)-2-乙基-2-甲基戊酸。

附图说明

图1.pdf-1为采用本发明的色谱柱(安捷伦DB-WAX UI：30m×0.32mm×0.5μm)的混合对照中各杂质分离度的图谱。

图2.pdf-2为采用本发明的流速为1.5ml/min的图谱。

图3.pdf-3为采用本发明色谱条件10的图谱。

图4.pdf-4为采用本发明分流比为10:1的图谱。

图5.pdf-5为采用本发明系统适用性的图谱。

具体实施方式：

为解决上述技术问题，本发明提供一种专属性好、分离度好、能将可能的降解杂质和工艺杂质与主成分有效分开，且灵敏度高，可应用于丙戊酸钠口服溶液的质量控制。

本发明人针对国内外质量标准进行对比研究，国内外质量标准对比见下表1：表1国内外质量标准对比

续表

各国标准中有关物质都应采用气相色谱法测定，YBH01302004国家标准、JX20040095进口注册标准、BP2013丙戊酸钠片、BP2013丙戊酸钠口服溶液、JP16丙戊酸钠标准采用恒温控制法，而CP2015丙戊酸钠、CP2015丙戊酸钠片、CP2015注射用丙戊酸钠、USP36丙戊酸、EP8.0丙戊酸、EP8.0丙戊酸钠、BP2013丙戊酸、BP2013丙戊酸钠以及原申报资料均采用程序升温法控制杂质，由于标准的更新以及仪器更换(气相色谱由GC-14C升级为GC-2014C)，需对有关物质检测条件进行重新筛选。

丙戊酸钠口服溶液主成分为丙戊酸钠，其在水中极易溶解，在甲醇或乙醇中易溶，在丙酮中几乎不溶。对比各标准不同版本，除BP2013/EP8.0丙戊酸钠中采用稀硫酸酸化外，其余标准处理过程均无变化，因此参照原申报资料处理方法：取样品适量(约含丙戊酸钠0.5g)于10ml的水中，振摇混匀，用2mol/ml的盐酸10ml酸化，再用二氯甲烷提取三次，每次20ml，合并二氯甲烷提取液。用10ml水冲洗萃取液，然后加入无水硫酸钠适量脱水，过滤，滤液用旋转蒸发仪以低于30℃的温度挥干至约8ml，再用二氯甲烷定容至10ml，作为供试液贮备液。

对照品及样品信息见下表2：

表2对照品及样品信息

主要仪器与设备信息见下表3：

表3仪器与设备信息

名称	型号	厂家
			电子天平	BP211D	Sartorious
气相色谱仪	岛津GC-2014C	岛津公司

色谱柱筛选

各标准对丙戊酸钠有关物质的检测主要使用以聚乙二醇为填料的色谱柱，根据实际情况，玻璃填充柱使用很少，因此选择以聚乙二醇(PEG-20M)为固定液的毛细管柱，柱长30m，分别对不同内径和膜厚的毛细管柱进行筛选(见附图1)。

表4色谱柱筛选结果统计

结论：由上表可知，三根色谱柱检出的杂质个数及杂质含量总量基本一致；色谱柱(安捷伦DB-WAX：30m×0.32mm×0.5μm)和[德国(MN)OPTIMA-WAX：30m×0.25mm×0.25μm]的混合对照中有三个杂质未分开，重叠在一起；色谱柱(安捷伦DB-WAX UI：30m×0.32mm×0.5μm)的混合对照中各杂质分离度相对较好；因此选择毛细管柱(DB-WAX UI：30m×0.32mm×0.5μm)作为该试验的色谱柱。

柱流速

采用上述筛选的色谱条件及色谱柱，改变柱流速为3.0ml/min，取自制品供试溶液1μl进行测定(见附图2)，结果如下：

表5改变柱流速试验结果

结论：由上表可知改变柱流速，对主峰的保留时间无明显影响，只能缩短防腐剂羟苯甲酯钠和羟苯丙酯钠的出峰时间，且在改变柱流速过程中，杂质与杂质间的分离度变差，因此选择柱流速为1.5ml/min。

改变升温程序、检测器及进样口的温度

取混合对照(丙酸、丁酸、辛酸、戊酰胺、戊酸、USP杂质A、USP杂质B、杂质K、2-苯乙醇，防腐剂：羟苯甲酯钠、羟苯丙酯钠)溶液1μl，按下述条件分别试验(见附图3)。

表6优化条件统计

表7方法优化结果

结论：由上表可知，色谱条件10运行时间较短，各杂质间及杂质与主峰间分离度较好，各项考察指标均较好；因此通过对升温程序、进样口及检测器温度的选择和优化，选择色谱条件10：起始温度130℃，维持2min，以20℃/min升温至170℃，维持5min，再以10℃/min升温至230℃，维持31分钟；总的运行时间为46分钟，杂质与主成分的分离度大于2.0，各项考察指标均较好。

分流比的选择

取混合对照溶液1μl，按下述分流比分别试验，记录各杂质及主成分峰面积(见附图4)，对比各分流比中杂质的峰面积，确定合适的分流比。

表8分流比选择结果

结论：由上表可知，在各分流比下杂质及主成分峰峰型均较好，各个杂质的分离度及理论板数基本一致，分流比为10:1时，各杂质峰响应值最高，峰面积最大；因此选择分流比为10:1，提高杂质峰响应值确保各杂质的检出，并保证试验的准确度。

通过对方法及色谱柱的选择、色谱条件的优化(柱流速的改变、升温程序优化、进样口及检测器口的温度选择和分流比选择)，初步确定本品有关物质色谱条件为：以聚乙二醇(PEG-20M)为固定液的毛细管柱(安捷伦DB-WAX UI：30m×0.32mm×0.5μm)为色谱柱；起始温度130℃，维持2min，以20℃/min升温至170℃，维持5min，再以10℃/min升温至230℃，维持31分钟；进样口温度为230℃，检测器温度为230℃，柱流量为1.5ml/min，分流比为10:1。

系统适用性

系统适用性溶液：分别精密量取2-苯乙醇、戊酸、杂质B对照品、杂质A、丙戊酸贮备液适量，加二氯甲烷稀释制成含2-苯乙醇、戊酸、杂质B、杂质A为5μg/ml，杂质K为7.5μg/ml，丙戊酸含量为5mg/ml的混合溶液，作为系统适用性溶液。

精密量取上述溶液1μl，按确定的色谱条件试验，连续进样6次，记录色谱图(附图5)，结果见下表。

表9系统适用性试验结果

备注：戊酸在系统适用性试验中最先流出，然后流出的是杂质B，杂质K、2-苯乙醇、丙戊酸与杂质A。

结论：在系统适用性试验中，各项指标均符合要求。该色谱系统方法可用于本品有关物质的测定。

最终确定丙戊酸钠口服溶液有关物质测定方法为：以聚乙二醇(PEG-20M)为固定液的毛细管柱(安捷伦DB-WAX UI：30m×0.32mm×0.5μm)为色谱柱；起始温度130℃，维持2min，以20℃/min升温至170℃，维持5min，再以10℃/min升温至230℃，维持31分钟；进样口温度为230℃，检测器温度为230℃，柱流量为1.5ml/min，分流比为10:1。

Claims (7)

1.一种丙戊酸钠有关物质的检测方法，其特征在于：

采用气相色谱法，以聚乙二醇 为固定液的毛细管柱，FID检测器，选用适当的分流比和升温程序；以聚乙二醇为固定液的毛细管柱：DB-WAX UI：30m×0.32mm×0.5µm）；采用FID检测器；分离比为10:1。

2.根据权利要求1所述的丙戊酸钠有关物质的检测方法，其中所述升温程序起始温度130℃，维持2分钟，以20℃/分钟速率升温至170℃，维持5min，再以10℃/分钟速率升温至230℃；进样口温度为230℃；检测器温度为230℃。

3.根据权利要求1所述的丙戊酸钠有关物质的检测方法，其特征在于：柱流量为1.5ml/min。

4.根据权利要求1所述的丙戊酸钠有关物质的检测方法，其特征在于：取本品含丙戊酸钠500mg的溶液12.5ml ，置于分液漏斗中，加水10ml，再加2mol/mL的盐酸溶液10ml，用二氯甲烷提取3次，每次20ml，合并二氯甲烷液，用水10ml洗涤后，加无水硫酸钠适量，振摇，滤过，滤液置温度不超过30°C旋转蒸发器上蒸干 至约8ml，定量转移至10ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品储备液；精密量取1ml，置10ml量瓶中用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

5.根据权利要求1所述的丙戊酸钠有关物质的检测方法，其特征在于：取2-苯乙醇约10mg，置100ml量瓶中，加二氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，取lml置20ml量瓶中，加供试品储备液2ml，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。

6.根据权利要求1所述的丙戊酸钠有关物质的检测方法，其特征在于：供试品溶液、对照溶液与系统适应性溶液的进样量为1μl。

7.根据权利要求1-7任一项确定原料、自制品、被仿制品及自制品降解试验确定本品的杂质普：未知杂质1、未知杂质2、杂质B、杂质K、未知杂质3、杂质A， 其中，杂质A 二烯丙基乙酸 ；杂质B为 2-异丙基戊酸 ；杂质K为：（2RS）-2-乙基-2-甲基戊酸。