CN109568419B - 一种巴戟天总环烯醚萜苷及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种巴戟天总环烯醚萜苷及其制备方法和用途。所述的巴戟天总环烯醚萜苷是按照以下方法制备的：将巴戟天药材粉碎，通过渗漉提取、回流提取、浸渍提取或超声提取，得到提取液，浓缩，过滤，滤液通过大孔树脂吸附，用水及2.5％‑3.5％乙醇洗脱除去杂质，再用9％‑11％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至干。动物实验证实本发明的巴戟天总环烯醚萜苷具有显著的镇痛、抗炎活性，及减轻类风湿性关节炎动物模型足肿胀度和骨质丢失的作用，因此可用于制备抗类风湿性关节炎、骨质疏松症、疼痛或炎症的药物。

Description

一种巴戟天总环烯醚萜苷及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地说，涉及一种巴戟天总环烯醚萜苷及其制备方法和用途。

背景技术

类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性进行性的自身免疫性疾病，以关节滑膜炎及对称性、破坏性的关节病变为主要特征。其病理特点是多关节受累，滑膜炎持久反复发作，病情缠绵难愈，可导致关节内软骨和骨质的破坏，关节功能障碍，极易致残，严重影响患者的生活质量。

目前用于治疗RA的主要化学药物有非甾体抗炎药、抗风湿药和糖皮质激素等，但长期应用均会引起胃肠道不适、骨髓抑制、肝损伤、高血压等严重的不良反应。因此，寻求高效低毒的防治类风湿性关节炎的药物仍是世界医学界面临的一项任务。

巴戟天是茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How.的干燥根。性温，味辛、甘，归肝、肾经；具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的作用，用于阳痿遗精，宫冷不孕，月经不调，少腹冷痛，风湿痹痛和筋骨痿软。巴戟天中环烯醚萜苷类化合物，如水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸的含量较高，可达到2.0％左右。

专利文献CN101874839A，公开日2010.11.03，公开了一种巴戟天总有效部位提取物及其制备方法和在治疗鼾症的药物中的用途，该总有效部位由巴戟天总多糖(重量百分比50％～90％)、巴戟天总蒽醌(重量百分比2％～5％)、巴戟天总环烯醚萜苷类(重量百分比5％～30％)等组成，其制备方法为：将巴戟天烘干后粉碎至10～100目，用水加热回流提取，提取液上弱碱阴离子交换树脂柱，收集穿流液和水洗脱液，浓缩、干燥制得总多糖，药渣用石油醚或6#抽提溶剂油或其它与之极性相近的有机溶剂回流提取除去挥发油等低极性成分，剩余药渣最后用一定浓度的乙醇水溶液加热回流提取，将提取液浓缩制得总蒽醌和总环烯醚萜苷类，然后将这三类组分合并、干燥即得巴戟天总有效部位提取物。该巴戟天总有效部位提取物用于治疗鼾症具有疗效快而显著、无毒副作用、价格低廉、使用方便等优点。

中国期刊《东南国防医药》2011年7月第13卷第4期刊出的论文“巴戟天提取物对大鼠类风湿性关节炎作用的观察”，研究了巴戟天提取物对大鼠类风湿性关节炎的抗炎作用，具体是采用完全Freund′s佐剂诱导大鼠类风湿性关节炎和0.6％冰醋酸致小鼠疼痛扭体模型，分别以大鼠足踝关节周径、炎症介质PGE₂含量、小鼠扭体次数为指标，观察巴戟天提取物对实验性类风湿性关节炎的作用，结果表明巴戟天提取物中剂量、高剂量对完全Freund′s佐剂所致的大鼠足肿胀有明显抑制作用，能降低PGE₂的含量(P<0.05，P<0.01)，减少冰醋酸所致的小鼠扭体次数(P<0.01)，巴戟天提取物具有一定的抗类风湿性关节炎作用，其抗炎镇痛作用和降低炎症介质PGE₂含量密切相关。

中国期刊《药学实践杂志》，2017年第35卷第4期刊出的论文“巴戟天环烯醚萜苷类成分含量测定和提取方法的研究”，建立了测定巴戟天环烯醚萜苷类成分含量的方法，并研究了其最佳提取方法，优化的巴戟天环烯醚萜苷类成分的最佳提取方法为：巴戟天药材用16倍10％乙醇浸泡9h，渗漉提取，流速为0.8BV/h。

然而，深入研究巴戟天提取物，建立更优的制备方法，提取更高效的药效成分和开发新的制药用途，对于充分利用中草药资源和为疾病提供更丰富的治疗手段来说仍然是十分必要的。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供巴戟天总环烯醚萜苷、其制备方法和用途。

第一方面，本发明提供了巴戟天总环烯醚萜苷在制备防治类风湿性关节炎、骨质疏松症、疼痛或炎症的药物中的应用。

作为一个优选例，所述的骨质疏松症是由类风湿性关节炎引起的骨质疏松症。

作为一个优选例，所述的巴戟天总环烯醚萜苷是通过以下方法制备得到的：将巴戟天药材粉碎，通过渗漉提取、回流提取、浸渍提取或超声提取，得到提取液，提取液浓缩，过滤，滤液通过大孔树脂吸附，所述的大孔树脂为以苯乙烯为架桥材料的聚苯乙烯型多孔吸附树脂，用水及2.5％-3.5％乙醇洗脱除去杂质，再用9％-11％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至干，得所述的巴戟天总环烯醚萜苷。

更优选地，所述的巴戟天总环烯醚萜苷提取方式为渗漉提取。

更优选地，所述的巴戟天总环烯醚萜苷是通过以下方法制备得到的：

(1)称取巴戟天药材，过60-80目筛粉碎，用60％-80％乙醇以每小时0.7-0.9倍柱体积的流速渗漉提取，其中收集的浸出液和原生药比例为(130-150)L:(8-12)kg；提取液在-0.15～-0.05MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计0.8-1.2g/mL的浓度，离心后过滤；

(2)滤液调pH为1-3后，以每小时0.4-0.6倍柱体积的流速通过大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.4-1.6倍柱体积的洗脱流速，依次用水及2.5％-3.5％乙醇洗脱除去杂质，其中除杂用的水总体积为滤液体积的22-26倍，除杂用的乙醇总体积为滤液体积的8-10倍；再以每小时1.4-1.6倍柱体积的洗脱流速，用9％-11％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，其中洗脱用的乙醇总体积为滤液体积的22-26倍；洗脱液在-0.15～-0.05MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至干，得所述的巴戟天总环烯醚萜苷。

更优选地，所述的大孔树脂为D101、HPD-722、HPD400、XDA-1或AB-8型大孔树脂。

第二方面，本发明提供了一种巴戟天总环烯醚萜苷，所述的巴戟天总环烯醚萜苷是通过以下方法制备得到的：将巴戟天药材粉碎，通过渗漉提取、回流提取、浸渍提取或超声提取，得到提取液，提取液浓缩，过滤，滤液通过大孔树脂吸附，所述的大孔树脂为以苯乙烯为架桥材料的聚苯乙烯型多孔吸附树脂，用水及2.5％-3.5％乙醇洗脱除去杂质，再用9％-11％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至干，得所述的巴戟天总环烯醚萜苷。

作为一个优选例，所述的巴戟天总环烯醚萜苷提取方式为渗漉提取。

更优选地，所述的巴戟天总环烯醚萜苷是通过以下方法制备得到的：

(1)称取巴戟天药材，过60-80目筛粉碎，用60％-80％乙醇以每小时0.7-0.9倍柱体积的流速渗漉提取，其中收集的浸出液和原生药比例为(130-150)L:(8-12)kg；提取液在-0.15～-0.05MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计0.8-1.2g/mL的浓度，离心后过滤；

(2)滤液调pH为1-3后，以每小时0.4-0.6倍柱体积的流速通过大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.4-1.6倍柱体积的洗脱流速，依次用水及2.5％-3.5％乙醇洗脱除去杂质，其中除杂用的水总体积为滤液体积的22-26倍，除杂用的乙醇总体积为滤液体积的8-10倍；再以每小时1.4-1.6倍柱体积的洗脱流速，用9％-11％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，其中洗脱用的乙醇总体积为滤液体积的22-26倍；洗脱液在-0.15～-0.05MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至干，得所述的巴戟天总环烯醚萜苷。

第三方面，本发明提供了一种巴戟天总环烯醚萜苷的制备方法，包含以下步骤：将巴戟天药材粉碎，通过渗漉提取、回流提取、浸渍提取或超声提取，得到提取液，提取液浓缩，过滤，滤液通过大孔树脂吸附，所述的大孔树脂为以苯乙烯为架桥材料的聚苯乙烯型多孔吸附树脂，用水及2.5％-3.5％乙醇洗脱除去杂质，再用9％-11％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至干，得所述的巴戟天总环烯醚萜苷。

作为一个优选例，所述的制备方法具体为：

(1)称取巴戟天药材，过60-80目筛粉碎，用60％-80％乙醇以每小时0.7-0.9倍柱体积的流速渗漉提取，其中收集的浸出液和原生药比例为(130-150)L:(8-12)kg；提取液在-0.15～-0.05MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计0.8-1.2g/mL的浓度，离心后过滤；

(2)滤液调pH为1-3后，以每小时0.4-0.6倍柱体积的流速通过大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.4-1.6倍柱体积的洗脱流速，依次用水及2.5％-3.5％乙醇洗脱除去杂质，其中除杂用的水总体积为滤液体积的22-26倍，除杂用的乙醇总体积为滤液体积的8-10倍；再以每小时1.4-1.6倍柱体积的洗脱流速，用9％-11％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，其中洗脱用的乙醇总体积为滤液体积的22-26倍；洗脱液在-0.15～-0.05MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至干，得所述的巴戟天总环烯醚萜苷。

第四方面，本发明提供了一种药物组合物，所述的药物组合物含有如上任一所述的巴戟天总环烯醚萜苷，及药学上可接受的载体。所述的“药学上可接受的载体”是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂和水等，填充剂如淀粉、蔗糖，乳糖、微晶纤维素等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇、十二烷基硫酸钠；吸附载体如高龄土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。

本发明优点在于：

1、本发明证实了巴戟天总环烯醚萜苷具有显著的镇痛、抗炎活性，及减轻类风湿性关节炎动物模型足肿胀度和骨质丢失的作用，因此可用于制备抗类风湿性关节炎、骨质疏松症、疼痛或炎症的药物；

2、本发明提供了一种巴戟天总环烯醚萜苷，其生物活性十分突出；

3、本发明提供了一种巴戟天总环烯醚萜苷的制备方法，得到的提取物活性好，提取物中没有或很少有有机溶剂的残留，制备过程对环境污染小，步骤简单，更适于工业生产，更有利于巴戟天的药物开发利用。

附图说明

图1.水晶兰苷结构式。

图2.去乙酰基车叶草苷酸结构式。

图3.巴戟天总环烯醚萜对类风湿性关节炎大鼠足肿胀度的影响(n≧6)。

具体实施方式

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1本发明的巴戟天总环烯醚萜苷的制备(一)

(1)巴戟天药材10kg，过80目筛粉碎，用70％乙醇以每小时0.8倍柱体积的流速渗漉提取140L；提取液在-0.1MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计1.0g/mL的浓度，并于4000r/min离心10min后过滤。

(2)滤液调pH为2后，以每小时0.5倍柱体积的流速通过XDA-1型大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.5倍柱体积的洗脱流速，依次用240L的水及90L的3％乙醇洗脱除去杂质；再以每小时1.5倍柱体积的洗脱流速，用240L的10％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液在-0.1MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至干。得巴戟天总环烯醚萜苷276g，经HPLC检测，其中含水晶兰苷(结构式见图2)40.5％和去乙酰基车叶草苷酸(结构式见图3)21.5％。

实施例2本发明的巴戟天总环烯醚萜苷的制备(二)

(1)巴戟天药材10kg，过60目筛粉碎，用60％乙醇以每小时0.9倍柱体积的流速渗漉提取150L；提取液在-0.15MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计0.8g/mL的浓度，并于4000r/min离心10min后过滤。

(2)滤液调pH为1后，以每小时0.6倍柱体积的流速通过XDA-1型大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.6倍柱体积的洗脱流速，依次用220L的水及100L的2.5％乙醇洗脱除去杂质；再以每小时1.6倍柱体积的洗脱流速，用220L的9％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液在-0.15MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至干。得巴戟天总环烯醚萜苷256g，经HPLC检测，其中含水晶兰苷38.3％和去乙酰基车叶草苷酸22.3％。

实施例3本发明的巴戟天总环烯醚萜苷的制备(三)

(1)巴戟天药材10kg，过80目筛粉碎，用80％乙醇以每小时0.7倍柱体积的流速渗漉提取130L；提取液在-0.05MPa大气压，55-60℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计1.2g/mL的浓度，并于4000r/min离心10min后过滤。

(2)滤液调pH为3后，以每小时0.4倍柱体积的流速通过XDA-1型大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.4倍柱体积的洗脱流速，依次用260L的水及80L的3.5％乙醇洗脱除去杂质；再以每小时1.4倍柱体积的洗脱流速，用260L的11％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液在-0.05MPa大气压，55-60℃水浴条件下，减压浓缩至干。得巴戟天总环烯醚萜苷251g，经HPLC检测，其中含水晶兰苷37.2％和去乙酰基车叶草苷酸21.9％。

实施例4本发明的巴戟天总环烯醚萜苷的制备(四)

(1)巴戟天药材10kg，过80目筛粉碎，用70％乙醇以每小时0.8倍柱体积的流速渗漉提取140L；提取液在-0.1MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计1.0g/mL的浓度，并于4000r/min离心10min后过滤。

(2)滤液调pH为1后，以每小时0.6倍柱体积的流速通过HPD-722型大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.6倍柱体积的洗脱流速，依次用220L的水及100L的2.5％乙醇洗脱除去杂质；再以每小时1.6倍柱体积的洗脱流速，用220L的9％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液在-0.15MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至干。得巴戟天总环烯醚萜苷255g，经HPLC检测，其中含水晶兰苷36.5％和去乙酰基车叶草苷酸21.8％。

实施例5本发明的巴戟天总环烯醚萜苷的制备(五)

(1)巴戟天药材10kg，过80目筛粉碎，用70％乙醇以每小时0.8倍柱体积的流速渗漉提取140L；提取液在-0.1MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计1.0g/mL的浓度，并于4000r/min离心10min后过滤。

(2)滤液调pH为3后，以每小时0.4倍柱体积的流速通过D101型大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.4倍柱体积的洗脱流速，依次用260L的水及80L的3.5％乙醇洗脱除去杂质；再以每小时1.4倍柱体积的洗脱流速，用260L的11％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液在-0.05MPa大气压，55-60℃水浴条件下，减压浓缩至干。得巴戟天总环烯醚萜苷253g，经HPLC检测，其中含水晶兰苷35.7％和去乙酰基车叶草苷酸23.7％。

实施例6本发明的巴戟天总环烯醚萜苷的制备(六)

(1)巴戟天药材10kg，过60目筛粉碎，用60％乙醇以每小时0.9倍柱体积的流速渗漉提取150L；提取液在-0.15MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计0.8g/mL的浓度，并于4000r/min离心10min后过滤。

(2)滤液调pH为3后，以每小时0.4倍柱体积的流速通过HPD400型大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.4倍柱体积的洗脱流速，依次用260L的水及80L的3.5％乙醇洗脱除去杂质；再以每小时1.4倍柱体积的洗脱流速，用260L的11％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液在-0.05MPa大气压，55-60℃水浴条件下，减压浓缩至干。得巴戟天总环烯醚萜苷258g，经HPLC检测，其中含水晶兰苷38.7％和去乙酰基车叶草苷酸22.2％。

实施例7本发明的巴戟天总环烯醚萜苷的制备(七)

(1)巴戟天药材10kg，过80目筛粉碎，用80％乙醇以每小时0.7倍柱体积的流速渗漉提取130L；提取液在-0.05MPa大气压，55-60℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计1.2g/mL的浓度，并于4000r/min离心10min后过滤。

(2)滤液调pH为1后，以每小时0.6倍柱体积的流速通过AB-8型大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.6倍柱体积的洗脱流速，依次用220L的水及100L的2.5％乙醇洗脱除去杂质；再以每小时1.6倍柱体积的洗脱流速，用220L的9％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液在-0.15MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至干。得巴戟天总环烯醚萜苷267g，经HPLC检测，其中含水晶兰苷39.0％和去乙酰基车叶草苷酸22.8％。

实施例8本发明的巴戟天总环烯醚萜苷的制备(八)

(1)巴戟天药材10kg，过60目筛粉碎，用75％乙醇以每小时0.8倍柱体积的流速渗漉提取140L；提取液在-0.1MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计1.0g/mL的浓度，并于4000r/min离心10min后过滤。

(2)滤液调pH为2后，以每小时0.5倍柱体积的流速通过XDA-1型大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.5倍柱体积的洗脱流速，依次用240L的水及90L的3％乙醇洗脱除去杂质；再以每小时1.5倍柱体积的洗脱流速，用240L的10％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液在-0.1MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至干。得巴戟天总环烯醚萜苷259g，经HPLC检测，其中含水晶兰苷39.5％和去乙酰基车叶草苷酸20.3％。

实施例9本发明的巴戟天总环烯醚萜苷的制备(九)

巴戟天药材10kg，过60目筛粉碎，用100L 10％乙醇回流提取2次，每次1h，提取液在-0.1MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计1.0g/mL的浓度，并于4000r/min离心10min后过滤。滤液调pH为2后，以每小时0.5倍柱体积的流速通过XDA-1型大孔树脂吸附，充分吸附后，再以每小时1.5倍柱体积的洗脱流速，依次用240L的水及90L的3％乙醇洗脱除去杂质，再以每小时1.5倍柱体积的洗脱流速，用240L的10％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，以上述减压浓缩的条件浓缩至干，得巴戟天总环烯醚萜苷250g，经HPLC检测，其中含水晶兰苷38.6％和去乙酰基车叶草苷酸23.6％。

实施例10本发明的巴戟天总环烯醚萜苷的制备(十)

巴戟天药材10kg，过60目筛粉碎，用100L 10％乙醇浸渍提取12h，提取液在-0.1MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计1.0g/mL的浓度，并于4000r/min离心10min后过滤。滤液调pH为2后，以每小时0.5倍柱体积的流速通过XDA-1型大孔树脂吸附，充分吸附后，再以每小时1.5倍柱体积的洗脱流速，依次用240L的水及90L的3％乙醇洗脱除去杂质，再以每小时1.5倍柱体积的洗脱流速，用240L的10％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，以上述减压浓缩的条件浓缩至干，得巴戟天总环烯醚萜苷235g，经HPLC检测，其中含水晶兰苷34.9％和去乙酰基车叶草苷酸20.6％。

实施例11巴戟天总环烯醚萜苷的小鼠醋酸扭体镇痛试验

测定巴戟天总环烯醚萜苷对醋酸致小鼠扭体次数的抑制率，观察药物的镇痛作用。

1实验动物

昆明种清洁级小鼠，雄性，18-22g，1月龄，购于第二军医大学实验动物中心。每笼10只群养，自由觅食和饮水，室温23±2℃，自然光照。

2实验方法

小鼠适应性喂养3天后，按体重随机分为7组。连续灌胃给药3天，最后1次给药60min后，腹腔注射0.6％醋酸0.1mL/10g小鼠，记录15min内各组小鼠扭体次数。

3实验分组及各组给药剂量

空白对照组：蒸馏水0.5ml/20g；

模型组：蒸馏水0.5ml/20g；

阳性对照组：给予药物吲哚美辛(购于长海医院，4mg/kg)；

实验组：给予药物巴戟天总提取物(巴戟天总提取物提取方法为：巴戟天药材10kg，过80目筛粉碎，用70％乙醇以每小时0.8倍柱体积的流速渗漉提取140L；提取液在-0.1MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至干。)和实施例1制备的巴戟天总环烯醚萜苷低、中、高剂量组，剂量分别为3g/kg、50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg。

4数据处理

实验结果以

表示，作单尾双样本等方差t检验。

5实验结果与分析

从表1可以看出，与模型组相比，吲哚美辛、巴戟天总提取物、低、中、高剂量的巴戟天总环烯醚萜苷均显著减少了小鼠的扭体次数，表明巴戟天总环烯醚萜苷具有显著的镇痛作用。

表1.环烯醚萜苷类成分对冰醋酸所致小鼠扭体反应的影响(n＝10)

*：P＜0.05；**：P＜0.01。

实施例12巴戟天总环烯醚萜苷的大鼠棉球肉芽肿试验

1实验动物

Wistar清洁级大鼠，雄性，180-200g，购于第二军医大学实验动物中心。自由觅食和饮水，室温23±2℃，自然光照。

2实验方法

取Wistar大鼠按体重随机分为6组，分别为模型对照组、阳性药物组、巴戟天总提物组、环烯醚萜苷低、中、高剂量组，每组8只。各组大鼠腹腔注射水合氯醛(0.1g/ml)3ml麻醉，无菌条件下做胸部皮肤切口，将已称重灭菌的棉球(20mg)2个分别植入大鼠左右两腋窝皮下，缝合切口。当天各给药组按剂量灌胃给药，对照组给予等体积蒸馏水，每天1次，连续7d。处死大鼠，仔细剥离并取出棉球肉芽组织，在Sartorius BP211D十万分之一电子称上称湿重，并置于干燥箱中60℃恒温干燥6h后称干重，所得重量减去原球重，即得肉芽肿的湿重及干重。

3实验分组及各组给药剂量

模型组：蒸馏水2ml/200g；

阳性对照组：给予药物吲哚美辛(购于长海医院，2.5mg/kg)；

实验组：给予药物巴戟天总提取物(提取方法同实施例11)和实施例1制备的巴戟天总环烯醚萜苷低、中、高剂量组，剂量分别为1.5g/kg、25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg。

4数据处理

实验结果以

表示，作单尾双样本等方差t检验。

5实验结果与分析

从表2可以看出，与模型组相比，吲哚美辛组和巴戟天总提取物组、环烯醚萜苷低、中、高剂量组的肉芽肿湿重均显著降低；与模型组相比，吲哚美辛组和巴戟天总提取物组、环烯醚萜苷低、中、高剂量组的肉芽肿干重均有所降低。中、低剂量的巴戟天总环烯醚萜苷组的肉芽肿干重与模型组相比显著降低，表明巴戟天总环烯醚萜苷具有显著的抗炎作用。

表2.环烯醚萜苷各剂量组对大鼠气棉球肉芽肿的影响(n＝8)

*：P＜0.05；**：P＜0.01。

实施例13巴戟天总环烯醚萜苷对肾虚痹症关节炎模型小鼠的影响

1材料和方法

1.1实验动物

ICR清洁级小鼠，雌性，13月龄，购于第二军医大学实验动物中心。每笼8只群养，自由觅食和饮水，室温23±2℃，自然光照。

1.2药材及试剂

雷公藤多苷(TGs)，上海复旦华药业有限公司(批号：160903)；阿伦磷酸钠(Alen)，Savio Industrial S.r.L(批号：J20130085)；1L-6试剂盒购于Ebioscience公司，骨钙素和碱性磷酸酶试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.3仪器

连续波长酶标仪，Bio-TEK，American；美国GE公司eXplore Locus SP型显微CT。

1.4实验方法

去卵巢：取3月龄雌性ICR小鼠80只，体重约20g。去卵巢组每只小鼠腹腔注射4％的水合氯醛0.3ml，使其麻醉，腹位固定，于其最末肋骨下、腋中线与距离脊柱外侧约1cm之交叉处，切开皮肤和背部肌肉约0.5cm，分离脂肪团，然后摘除卵巢，同法摘除另一侧卵巢，缝合伤口。假手术组切下部分卵巢附近的脂肪团，即缝合伤口。切除卵巢的第1天腹腔注射青霉素钠0.2ml，其余每天注射0.1ml，连续注射4天。

CII免疫的具体方法：取适量CII溶液(浓度为2mg/m1)逐滴加入至等容积的完全弗氏佐剂中，CII终浓度为1mg/ml。冰浴中用匀浆器充分乳化，以滴加水中不扩散为度。切除卵巢3周时，每只于右后跖皮内注射乳化后的混合物按0.1ml致炎。切除卵巢4周时以每只0.1mL的剂量尾根部皮内多点激发注射1次，加强免疫。空白对照组以生理盐水注射，所有动物均在清洁环境中饲养，温度25±2℃，自由饮食。加强免疫后观察，筛选出关节炎指数大于4分的发病鼠，随机分为8组，即假手术组、模型组、雷公藤多苷组、阿仑膦酸钠组、巴戟天总提物组、巴戟天总环烯醚萜苷低、中、高剂量组，每组8只。加强免疫后第8天开始给药：阳性对照组给予药物雷公藤多苷(10mg/kg)和阿仑磷酸钠(2mg/kg)，巴戟天总提物组给予1.5g/kg巴戟天总提物组(提取方法同实施例11)，巴戟天总环烯醚萜苷低、中、高剂量组分别给予浓度25、50和100mg/kg实施例1制备的环烯醚萜苷，空白对照组和模型组给予等量生理盐水，每天一次，总共给药6周。给药时间固定在每日上午9时。6周后，摘眼球取血，分离血清，迅速剥离其脾脏和左侧股骨，并称取脾脏重量。

1.5指标测定

1.5.1血清生化指标测定测定血清IL-6、OCN和ALP含量，采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，具体步骤按照试剂盒说明书进行。

1.5.2骨密度测定股骨远端显微CT扫描测定其骨密度。

1.6统计学处理采用均值±标准差

表示，先进行正态分布检验，符合正态分布，再进行方差齐性检验，符合后进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，组间差异用LSD法，P<0.05认为有统计学意义。不符合正态分布或方差齐性分析的，使用秩和检验。采用SPSS 21.0分析软件。

2结果

2.1巴戟天总环烯醚萜对肾虚痹症关节炎模型小鼠足肿胀度的影响

由表3可见，与空白组比较，模型组小鼠的足肿胀度显著增加。与模型组比较，阳性对照药及巴戟天总提取物和总环烯醚萜苷给药组小鼠的足肿胀度显著减轻，表明巴戟天总环烯醚萜苷对肾虚痹症关节炎小鼠足肿胀度具有显著的抑制作用。

表3.巴戟天总环烯醚萜对肾虚痹症关节炎模型小鼠足肿胀度的影响(mm)

与空白组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.2巴戟天总环烯醚萜苷对肾虚痹症关节炎模型小鼠子宫重量的影响

由表4可见，小鼠去卵巢后，子宫发育受到抑制，与假手术组比较子宫重量显著减轻。阳性药物及不同剂量的巴戟天环烯醚萜苷对去卵巢大鼠的子宫重量均无显著的影响。说明巴戟天环烯醚萜苷对去卵巢小鼠子宫发育没有显著作用，所以作为抗骨质疏松和抗类风湿性关节炎药物，不会引起雌激素样的副作用。

表4.巴戟天环烯醚萜苷对肾虚痹症关节炎模型小鼠子宫重量的影响(n＝10)

与假手术组比较，##：P＜0.01。

2.3巴戟天环烯醚萜苷对肾虚痹症关节炎模型小鼠脾脏重量的影响

RA是一种慢性进行性的自身免疫性疾病，脾脏是机体的免疫器官，而CII诱导的去卵巢类风湿性关节炎常伴有脾脏肿大，会对机体自身的免疫器官造成损伤。

由表5可见，小鼠去卵巢并经过CII免疫，脾脏重量受到影响，与假手术组比较脾脏重量具有显著性差异。阳性药物和实验给药组都显著减轻了脾脏的重量。

表5.巴戟天环烯醚萜苷对肾虚痹症关节炎模型小鼠脾脏重量的影响(n＝10)

与假手术组比较，##：P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

2.4巴戟天总环烯醚萜苷对肾虚痹症关节炎模型小鼠血清IL-6含量的影响

从表6可以看出，小鼠去卵巢并经过CII免疫后，血清炎症指标白介素-6含量显著增加。阳性药物雷公藤多苷和各实验给药组与模型组比较，都有显著降低，且中剂量组效果最好。阳性药阿仑膦酸钠与模型组比较，对白介素-6的含量无显著影响，表明巴戟天总环烯醚萜苷可以显著降低肾虚痹症关节炎模型小鼠血清白细胞介素-6的水平。

表6.巴戟天环烯醚萜苷对肾虚痹症关节炎模型小鼠血清IL-6含量的影响(n＝10)

与假手术组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

2.5巴戟天总环烯醚萜苷对肾虚痹症关节炎模型小鼠血清骨钙素含量和股骨骨密度的影响

表7和表8表明小鼠去卵巢并经过CII免疫后，骨钙素含量和骨密度显著下降。与模型组比较，阳性药物阿仑膦酸钠和不同剂量的巴戟天总环烯醚萜苷均能显著增加小鼠的骨钙素含量和骨密度，且不同剂量的巴戟天总环烯醚萜苷呈现浓度依赖性。而雷公藤多苷与模型组比较，虽能增加骨钙素含量，但没有显著作用。说明巴戟天总环烯醚萜苷可提高去卵巢骨质疏松小鼠的骨钙素含量和骨密度，预防骨质丢失。

表7.巴戟天总环烯醚萜苷对肾虚痹症关节炎模型小鼠血清骨钙素含量的影响(n＝8)

与空白组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

表8.巴戟天总环烯醚萜苷对肾虚痹症关节炎模型小鼠股骨骨密度的影响(n＝8)

与空白组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

上述实验表明巴戟天总环烯醚萜苷通过调节免疫系统，可以缓解肾虚痹症小鼠的炎症反应，且不会引起雌激素样的副作用，并能提高骨钙素含量和骨密度，具有防治骨质疏松的作用。

实施例14巴戟天总环烯醚萜苷对II型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠的作用

1试验材料与方法

1.1动物

Wistar清洁级大鼠，雄性(170±10)g，购于上海西普尔比凯实验动物有限公司。

1.2药材及试剂

雷公藤多苷(TGs)，上海复旦华药业有限公司(批号：160903)；甲氨蝶呤(MTX)，上海信谊药厂有限公司(批号：036150201)；阿伦磷酸钠(Alen)，Savio Industrial S.r.L(批号：J20130085)；骨保护素(OPG)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)均购自南京建成生物工程研究所。

1.3仪器

电子显示卡尺，13050655，上海申韩量具有限公司；连续波长酶标仪，Bio-TEK，American；美国GE公司eXplore Locus SP型显微CT。

1.4实验方案

将大鼠随机分为9组，包括空白组、模型组、雷公藤多苷组、阿仑膦酸钠组、甲氨蝶呤组、巴戟天总提物组、低、中和高三个剂量的巴戟天总环烯醚萜苷治疗组。模型组每只大鼠距离尾根部2cm处皮内注射0.2ml乳化剂(胶原与弗氏不完全佐剂乳化而成)，空白对照组的相应部位注射相同体积的生理盐水；21天后用同样方法于相同部位加强注射一次。所有动物在23～27℃，通风良好的条件下饲养，第28天开始，每周进行一次足肿胀度和体重称量。空白组和模型组ig 0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，10ml/kg，每周6次；雷公藤多苷组ig 0.6mg/ml的雷公藤多苷，10ml/kg(6mg/kg)，每周6次；阿仑膦酸钠组ig 0.1mg/ml的阿仑膦酸钠，10ml/kg(7mg/kg)，每周6次；甲氨蝶呤组ig 0.05mg/mL的甲氨蝶呤，10ml/kg(1mg/kg)，每周2次；巴戟天总提物组用量1400mg/kg，每周6次，巴戟天总提物组的制备同实施例11；巴戟天总环烯醚萜苷用量分别为25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg，每周6次，巴戟天总环烯醚萜苷的制备方法如实施例1所述。8周后，将大鼠用10％水合氯醛麻醉，腹部切开皮肤、肌肉，暴露腹腔，腹动脉取血，分离血清，迅速剥离其胸腺和左侧股骨，称取胸腺重量，求出胸腺指数。

1.5血清生化指标测定以ELISA试剂盒测定血清OPG和TRACP含量，按照试剂盒说明书进行测定。

1.6骨密度测定股骨远端显微CT扫描测定其骨密度。

1.7统计学处理采用均值±标准差

表示，先进行正态分布检验，符合正态分布，再进行方差齐性检验，符合后进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，组间差异用LSD法，P<0.05认为有统计学意义。不符合正态分布或方差齐性分析的，使用秩和检验。采用SPSS 21.0分析软件。

2试验结果

2.1巴戟天总环烯醚萜苷对II型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠胸腺指数的影响

RA是一种慢性进行性的自身免疫性疾病，胸腺是机体的免疫器官，而CII诱导的类风湿性关节炎与RA极其相似，会对机体自身的免疫器官造成损伤。

由表9可见，CII诱导的类风关模型大鼠与空白组比较，胸腺指数具有显著性差异。三个阳性药物雷公藤多苷、阿仑膦酸钠、甲氨蝶呤对CIA模型大鼠的胸腺指数无显著影响。低剂量和中剂量的巴戟天总环烯醚萜苷对CIA模型大鼠的胸腺指数均无显著的影响，而高剂量的总环烯醚萜苷和巴戟天总提物对CIA模型大鼠的胸腺指数具有显著的影响。说明高剂量的巴戟天总环烯醚萜苷和巴戟天总提物对CIA模型大鼠的胸腺有一定的治疗作用。

表9.巴戟天总环烯醚萜苷对II型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠胸腺指数的影响(n＝8)

与空白组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.2巴戟天总环烯醚萜对II型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠足肿胀度的影响

由图3可知，大鼠从第28天开始模型组大鼠和空白组之间存在显著性差异，开始给药后，各组大鼠的足肿胀度均有不同程度的增加，直到第48天左右足肿胀度达到峰值，此后模型组大鼠足肿胀度基本保持稳定，各给药组大鼠足肿胀度缓慢减轻。给药后期，雷公藤多苷组较模型组具有显著性差异(P<0.05)，肿胀度较给药前减轻；阿仑膦酸钠组和甲氨蝶呤组较模型组，具有显著性差异(P<0.05)，但与给药前相比，肿胀度基本不变；巴戟天总提物组较模型组，具有显著性差异(P<0.05)，与给药前相比，肿胀度减轻；不同剂量巴戟天总环烯醚萜苷组，与模型组均存在显著性差异(P<0.05)，但低剂量和高剂量组较给药前肿胀度减轻。说明巴戟天总环烯醚萜苷对CIA模型大鼠的足肿胀，具有一定的治疗作用。

2.3巴戟天总环烯醚萜苷对II型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠血清TRACP的影响

抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)是骨吸收和破骨细胞活性的良好标志物，在动物体内TRACP的过度表达会造成骨质丢失。由表10可知，与空白组比较，模型大鼠血清TRACP显著升高(P<0.05)，骨丢失严重；与模型组对比，三个阳性药组TRACP的表达量显著降低(P<0.05)，接近空白组的TRACP水平；巴戟天环烯醚萜苷低、中、高剂量组与模型组比较均存在显著性差异(P<0.05)，且以剂量依赖的形式接近空白组的表达量；巴戟天总提物组的TRACP表达与模型组之间存在极显著的差异(P<0.05)；以上结果分析，各个给药组均能显著抑制模型大鼠的骨丢失，且巴戟天总环烯醚萜苷存在剂量依赖的情况。

骨保护素(OPG)被称为破骨细胞抑制因子，具有抑制破骨细胞的功能。由表10可知，与空白组相比，模型组大鼠血清OPG显著降低(P<0.05)，从而破骨细胞的功能亢进，骨丢失严重；巴戟天总环烯醚萜苷高剂量组与模型组比较，OPG的表达量显著升高(P<0.05)，有效抑制破骨细胞的功能，减缓骨丢失；阳性药组、巴戟天总提物组、环烯醚萜苷低剂量和中剂量组与模型组相比较，无显著统计学意义(P>0.05)。以上结果分析，高剂量巴戟天总环烯醚萜苷能有效提高动物体内OPG的量，减缓骨丢失。

表10.巴戟天总环烯醚萜苷对II型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠血清TRACP和OPG的影响(n＝8)

与空白组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.4巴戟天总环烯醚萜苷对II型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠骨密度的影响

表11结果表明，CIA模型大鼠骨密度显著下降，以骨密度降低最为显著。阳性药组能显著增加CIA模型大鼠的骨密度，巴戟天总提物组和不同剂量巴戟天总环烯醚萜苷组均能不同程度的提高CIA模型大鼠的骨密度。与模型组相比，三个阳性药组骨密度均显著升高(P<0.05)；巴戟天总提物组的骨密度较模型组，也显著升高(P<0.05)；不同剂量的巴戟天总环烯醚萜苷不同程度的增加CIA模型大鼠的骨密度，以高剂量效果最为显著(P<0.01)。说明巴戟天总环烯醚萜苷可以提高CIA模型大鼠的骨密度，具有防治骨丢失的作用。

表11.巴戟天总环烯醚萜苷对II型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠骨密度的影响(n＝8)

与空白组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

上述实验表明巴戟天总环烯醚萜苷可提高CIA模型大鼠的骨密度，预防骨质丢失，其机理与巴戟天总环烯醚萜苷增加骨保护素，降低抗酒石酸酸性磷酸酶的活性，降低骨吸收有关。

需要说明的是，实施例2-10制备的巴戟天总环烯醚萜苷对CIA模型大鼠也表现出提高骨密度，预防骨丢失的作用。

实施例15巴戟天总环烯醚萜苷提取条件的研究

发明人在实验的同时设置了大量的实验组，其中包含以下实验组：

实验组一：按照中国期刊《药学实践杂志》2017年第35卷第4期刊出的论文“巴戟天环烯醚萜苷类成分含量测定和提取方法的研究”所得出的最佳提取方法提取的巴戟天总环烯醚萜苷。

实验组二：

(1)巴戟天药材10kg，过80目筛粉碎，用70％乙醇以每小时0.8倍柱体积的流速渗漉提取140L；提取液在-0.1MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计1.0g/mL的浓度，并于4000r/min离心10min后过滤。

(2)滤液调pH为2后，以每小时0.5倍柱体积的流速通过XDA-1型大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.5倍柱体积的洗脱流速，用330L的3％乙醇洗脱除去杂质；再以每小时1.5倍柱体积的洗脱流速，用240L的10％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液在-0.1MPa大气压，50-55℃水浴条件下，减压浓缩至干。

实验组三：

(1)巴戟天药材10kg，过80目筛粉碎，用80％乙醇以每小时0.7倍柱体积的流速渗漉提取130L；提取液在-0.05MPa大气压，55-60℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计1.2g/mL的浓度，并于4000r/min离心10min后过滤。

(2)滤液调pH为3.5后，以每小时0.4倍柱体积的流速通过XDA-1型大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.4倍柱体积的洗脱流速，依次用260L的水及80L的3.5％乙醇洗脱除去杂质；再以每小时1.4倍柱体积的洗脱流速，用260L的11％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液在-0.05MPa大气压，55-60℃水浴条件下，减压浓缩至干。

实验组四：

(1)巴戟天药材10kg，过80目筛粉碎，用80％乙醇以每小时0.7倍柱体积的流速渗漉提取130L；提取液在-0.05MPa大气压，55-60℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计1.2g/mL的浓度，并于4000r/min离心10min后过滤。

(2)滤液调pH为3后，以每小时0.4倍柱体积的流速通过XDA-1型大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.4倍柱体积的洗脱流速，依次用260L的水及80L的3.5％乙醇洗脱除去杂质；再以每小时1.4倍柱体积的洗脱流速，用260L的12％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液在-0.05MPa大气压，55-60℃水浴条件下，减压浓缩至干。

按照实施例11和实施例14的方法研究不同提取条件下制备的巴戟天总环烯醚萜苷的镇痛作用和对于类风湿性关节炎治疗作用。

各组巴戟天总环烯醚萜苷对冰醋酸所致小鼠扭体反应的影响见表12。

表12.各组巴戟天总环烯醚萜苷类成分对冰醋酸所致小鼠扭体反应的影响(n＝10)

对结果进一步分析，与模型组相比，实验组一至四均显著减少了小鼠的扭体次数(P<0.05)，实施例3组达到极显著水平(P<0.01)，且实验组一至四的小鼠扭体次数与实施例3组的小鼠扭体次数分别比较，均具有统计学差异(P<0.05)。

各组巴戟天总环烯醚萜苷对CIA模型大鼠足肿胀度的影响见表13。

表13.各组巴戟天总环烯醚萜对II型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠足肿胀度的影响(n＝8)

对结果进一步分析，给药后期，各组大鼠足肿胀度与模型组均存在显著性差异(P<0.05)，其中实施例3组达到极显著水平(P<0.01)，且实验组一至四的大鼠足肿胀度与实施例3组大鼠足肿胀度分别比较，均具有统计学差异(P<0.05)。

各组巴戟天总环烯醚萜苷对CIA模型大鼠骨密度的影响见表14。

表14.各组巴戟天总环烯醚萜苷对II型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠骨密度的影响(n＝8)

对结果进一步分析，各组CIA模型大鼠的骨密度相比于模型组均显著提高(P<0.05)，其中实施例3组最为显著，与模型组差异达到极显著水平(P<0.01)，并且均高于其他各组的骨密度(P<0.05)。

上述实验表明，不同条件制备的巴戟天总环烯醚萜苷生物活性存在差异，本发明提供的巴戟天总环烯醚萜苷的制备方法，其提取物的药理活性十分突出，更便于巴戟天在临床上的开发利用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (4)

1.巴戟天总环烯醚萜苷在制备防治类风湿性关节炎或骨质疏松症的药物中的应用，所述的巴戟天总环烯醚萜苷是通过以下方法制备得到的：

（1）称取巴戟天药材，过60-80目筛粉碎，用60%-80%乙醇以每小时0.7-0.9倍柱体积的流速渗漉提取，其中收集的浸出液和原生药比例为（130-150）L:（8-12）kg；提取液在-0.1~-0.05MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计0.8-1.2g/mL的浓度，离心后过滤；

（2）滤液调pH为1-3后，以每小时0.4-0.6倍柱体积的流速通过大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.4-1.6倍柱体积的洗脱流速，依次用水及2.5%-3.5%乙醇洗脱除去杂质，其中除杂用的水总体积为滤液体积的22-26倍，除杂用的乙醇总体积为滤液体积的8-10倍；再以每小时1.4-1.6倍柱体积的洗脱流速，用9%-11%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，其中洗脱用的乙醇总体积为滤液体积的22-26倍；洗脱液在-0.1~-0.05MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至干，得所述的巴戟天总环烯醚萜苷；所述的大孔树脂为以苯乙烯为架桥材料的聚苯乙烯型多孔吸附树脂。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的骨质疏松症是由类风湿性关节炎引起的骨质疏松症。

3.一种巴戟天总环烯醚萜苷，其特征在于，所述的巴戟天总环烯醚萜苷是通过以下方法制备得到的：

（1）称取巴戟天药材，过60-80目筛粉碎，用60%-80%乙醇以每小时0.7-0.9倍柱体积的流速渗漉提取，其中收集的浸出液和原生药比例为（130-150）L:（8-12）kg；提取液在-0.1~-0.05MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计0.8-1.2g/mL的浓度，离心后过滤；

（2）滤液调pH为1-3后，以每小时0.4-0.6倍柱体积的流速通过大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.4-1.6倍柱体积的洗脱流速，依次用水及2.5%-3.5%乙醇洗脱除去杂质，其中除杂用的水总体积为滤液体积的22-26倍，除杂用的乙醇总体积为滤液体积的8-10倍；再以每小时1.4-1.6倍柱体积的洗脱流速，用9%-11%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，其中洗脱用的乙醇总体积为滤液体积的22-26倍；洗脱液在-0.1~-0.05MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至干，得所述的巴戟天总环烯醚萜苷；所述的大孔树脂为以苯乙烯为架桥材料的聚苯乙烯型多孔吸附树脂。

4.一种巴戟天总环烯醚萜苷的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

（1）称取巴戟天药材，过60-80目筛粉碎，用60%-80%乙醇以每小时0.7-0.9倍柱体积的流速渗漉提取，其中收集的浸出液和原生药比例为（130-150）L:（8-12）kg；提取液在-0.1~-0.05MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至无醇味后，浓缩液定容至原生药量计0.8-1.2g/mL的浓度，离心后过滤；

（2）滤液调pH为1-3后，以每小时0.4-0.6倍柱体积的流速通过大孔树脂吸附；充分吸附后，再以每小时1.4-1.6倍柱体积的洗脱流速，依次用水及2.5%-3.5%乙醇洗脱除去杂质，其中除杂用的水总体积为滤液体积的22-26倍，除杂用的乙醇总体积为滤液体积的8-10倍；再以每小时1.4-1.6倍柱体积的洗脱流速，用9%-11%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，其中洗脱用的乙醇总体积为滤液体积的22-26倍；洗脱液在-0.1~-0.05MPa大气压，50-60℃水浴条件下，减压浓缩至干，得所述的巴戟天总环烯醚萜苷；所述的大孔树脂为以苯乙烯为架桥材料的聚苯乙烯型多孔吸附树脂。

Images