CN109562102A - 用于预防和/或治疗癌症的化合物、组合物和方法 - Google Patents

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C·娜塔莉
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Abstract

本发明包括可用于预防或治疗受试者中黑素瘤或任何其他Myc‑表达的癌症的化合物、组合物和方法。在某些实施方式中，化合物包含雌激素(包括雌激素衍生物或类似物)、选择性GPER激动剂和/或另一种增加癌细胞分化的小分子G蛋白‑偶联受体(GPCR)激动剂。

Description

用于预防和/或治疗癌症的化合物、组合物和方法
相关申请的交叉引用
本申请在35U.S.C§119(e)下要求2016年6月17日提交的美国临时专利申请号62/351,599和2016年7月27日提交的美国临时专利申请号62/367,174的优先权，所有这些申请通过引用整体并入本文。
关于联邦政府资助的研究或开发的声明
本发明是在国家癌症研究所授予的F31CA206325的政府支持下完成的。政府拥有本发明的某些权利。
背景技术
黑素瘤是最致命的皮肤癌形式，并且由称为黑素细胞的含色素的细胞发展。黑素瘤通常发生在皮肤中，但也可能发生在口腔、肠道或眼睛中。黑素瘤的主要原因是紫外线暴露引起的DNA损伤，特别是那些皮肤色素(黑色素)含量低的浅肤色的个体中。大部分黑素瘤由先前存在的痣(nevi)(痣(moles))发展而来。基线皮肤色素水平低、痣多、受影响的家庭成员病史和免疫功能低下的人患黑素瘤的风险更高。美国每年有超过80,000例黑素瘤病例。目前治疗方案有限，只有30％的黑素瘤转移患者存活超过5年。
本领域需要可用于预防和/或治疗受试者的黑素瘤和其他癌症的化合物、组合物和方法。此类化合物、组合物和方法应当表现出与目前的抗癌治疗剂相当和/或更高的临床功效，或者可选地，当用于联合疗法时，增加其他抗癌治疗剂的功效。本发明满足了这种需要。
发明内容
本发明提供了治疗或预防受试者中GPCR-表达的癌症的方法。本发明进一步提供了治疗或预防受试者中Myc-表达的癌症的方法。本发明进一步提供了组合物，其包含(i)雌激素和/或GPCR激动剂和(ii)化学疗法、工程化CAR T-细胞和/或免疫检查点抑制剂。本发明进一步提供了试剂盒，其包含(i)雌激素和/或GPCR激动剂和(ii)化学疗法、工程化CART-细胞、免疫检查点抑制剂和/或放射疗法，以及其用于治疗或预防受试者中的癌症的指导材料。
在某些实施方式中，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的增加癌症中的细胞分化的雌激素和/或G蛋白-偶联受体(GPCR)激动剂。在其他实施方式中，受试者进一步被共同施用至少一种免疫治疗剂。在又其他实施方式中，受试者进一步被共同施用至少一种组蛋白脱乙酰酶抑制剂(HDAC)。
在某些实施方式中，GPCR激动剂包含选择性G-蛋白偶联的雌激素受体(GPER)激动剂。
在某些实施方式中，Myc-表达的癌症是选自黑素瘤、伯基特淋巴瘤、白血病、肉瘤、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脑癌、成神经细胞瘤、成神经管细胞瘤、星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、甲状腺癌、肝癌、前列腺癌、食道癌、肾癌、膀胱癌和胆囊癌中的至少一种。在其他实施方式中，Myc-表达的癌症是选自黑素瘤、胰腺癌和肺癌中的至少一种。
在某些实施方式中，GPCR-表达的癌症是选自黑素瘤、伯基特淋巴瘤、白血病、肉瘤、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脑癌、成神经细胞瘤、成神经管细胞瘤、星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、甲状腺癌、肝癌、前列腺癌、食道癌、肾癌、膀胱癌和胆囊癌中的至少一种。在其他实施方式中，GPCR-表达的癌症是选自黑素瘤、胰腺癌和肺癌中的至少一种。
在某些实施方式中，癌症选自黑素瘤、胰腺癌和肺癌。
在某些实施方式中，免疫治疗剂包含免疫检查点抑制剂。在其他实施方式中，免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂、TIGIT抑制剂、LAG3抑制剂、IDO(1/2)抑制剂和B7-H3抑制剂。
在某些实施方式中，至少一种HDAC抑制剂选自丙戊酸、伏立诺他(vorinostat)、罗米地辛(romidepsin)、曲古抑菌素(trichostatin)A和帕比司他(panobinostat)。
在某些实施方式中，将雌激素和/或GPCR激动剂和至少一种免疫检查点抑制剂共同施用于受试者。在其他实施方式中，共同配制雌激素和/或GPCR激动剂和至少一种免疫检查点抑制剂。
在某些实施方式中，将雌激素和/或GPCR激动剂和至少一种HDAC共同施用于受试者。在其他实施方式中，共同配制雌激素和/或GPCR激动剂和至少一种HDAC。
在某些实施方式中，雌激素和/或GPCR激动剂是施用于受试者的唯一抗癌剂。在其他实施方式中，雌激素和/或GPCR激动剂是以足以治疗或预防受试者中的癌症的量施用于受试者的唯一抗癌剂。
在某些实施方式中，GPCR选自G-蛋白偶联的雌激素受体(GPER)、MC1R、CYSLTR2、F2R、HRH2、LPAR2/3/6、PTGER1、S1PR2、S1PR3和TBXA2R。在其他实施方式中，GPCR选自GPER、F2R、PTGER1和TBXA2R。
在某些实施方式中，雌激素包括选自雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(estriol)(E3)、雌四醇(estetrol)(E4)、17β-雌二醇、27-羟基胆固醇、脱氢表雄酮(DHEA)、7-氧代-DHEA、7α-羟基-DHEA、16α-羟基-DHEA、7β-羟基表雄酮、Δ4-雄烯二酮、Δ5-雄烯二醇、3α-雄甾烷二醇、3β-雄甾烷二醇、2-羟基雌酮、16-羟基雌酮、环戊丙酸雌二醇酯、戊酸雌二醇酯、乙酸雌二醇酯、苯甲酸雌二醇酯、乙炔基雌二醇(EE)、美雌醇、莫克雌醇、炔雌醚、己烯雌酚苯雌酚、己二烯雌酚、己二烯雌酚乙酸酯、己烯雌酚二丙酸酯、磷雌酚(fosfestrol)、己烷雌酚、美雌酚二丙酸酯、外源雌激素(xenoestrogen)、植物雌激素(phytoestrogen)和霉菌雌激素(mycoestrogen)，或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体中的至少一种。
在某些实施方式中，GPER激动剂包括选自G-1、他莫西芬、氟维司群(fulvestrant)和雷洛昔芬(raloxifene)，或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体中的至少一种。
在某些实施方式中，GPER激动剂包含选自下列的至少一种：
式(I)的分子：其中在(I)中：
R1选自＝O、＝N-OH、＝N-NHC(＝O)(对甲氧基苯基)、＝N-NHC(＝O)CH(OMe)苯基和＝N-NH(5-碘-吡啶-2-基)；R2选自C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基；键a是单键或双键，使得：如果键a是双键，则R3和R4是H，和如果键a是单键，则R3选自H、-OH、-OAc和卤素；R4选自H、-OH、-OAc和-S(邻硝基苯基)；或R3和R4结合形成选自-CH2-、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基；R5选自H、苄基、C1-C4烷基和乙酰基；R6选自H、卤素、-NO2、C1-C4烷基、-C≡CH、-C≡C-Si(CH3)3(或-C≡C-TMS)、-O-苄基、-OH、-OAc、C1-C4烷氧基、-COOH和-COO(C1-C4烷基)；R7选自H、卤素、-NO2、C1-C4烷基、-OH、-OAc和C1-C4烷氧基；R8选自H、卤素、-NO2、C1-C4烷基、-O-苄基、-N(R)(R)、-SR、-COOH、-COO(C1-C4烷基)、-OH、-OAc、C1-C4烷氧基、3-硫杂环丁二烯基(thietyl)-甲氧基、-SO2(吗啉代)和-OCH2CH＝CH2，其中每次出现的R独立地选自H和C1-C4烷基；R9选自H、卤素、-NO2、C1-C4烷基、-OH、-OAc和C1-C4烷氧基，或R8和R9结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-、-OC(CH3)2O-、-O(CH2)2O-、-O-CH＝CH-和-CH＝CH-O-的双基；R10选自H、C1-C4烷基和卤素；其中每次出现的苄基独立地任选地被选自C1-C4烷基、-OH、C1-C4烷氧基、卤素和-NO2的至少一种基团取代；和
式(II)的分子：其中在(II)中：
R1选自＝O和＝N-OH；R2是C1-C4烷基；R5选自H、苄基和C1-C4烷基；R8和R9独立地选自H和C1-C4烷氧基，或R8和R9结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基，或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体、或其任何混合物。
在某些实施方式中，GPER激动剂包含选自下列的至少一种：
式(I-1)的分子：其中在(I-1)中：
R1选自＝O和＝N-OH；R2是C1-C4烷基；键a是单键或双键，使得：如果键a是双键，则R3和R4是H，和如果键a是单键，则R3和R4独立地选自H和-OH，或R3和R4结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基；R5选自H、苄基和C1-C4烷基；R6选自H和卤素；R8和R9独立地选自H和C1-C4烷氧基，或R8和R9结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基；和
式(II)的分子：其中在(II)中：
R1选自＝O和＝N-OH；R2是C1-C4烷基；R5选自H、苄基和C1-C4烷基；R7和R8独立地选自H和C1-C4烷氧基，或R7和R8结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基，或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体、或其任何混合物。
在某些实施方式中，GPER激动剂包含选自下列的至少一种：G-1；CMPD1(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD2(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-5-甲基-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD3(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-2,3,3a,4,5,9b-六氢-1H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD4(rel-1-((3aS,4R,9bR)-5-苄基-4-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD5(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-溴苯基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD6(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮肟)；CMPD7(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苯基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD8(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-氯苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD9(rel-1-((6R,6aS,7aS,10aR,10bR)-6-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-9,9-二甲基-6,6a,7,7a,10a,10b-六氢-5H-[1,3]间二氧杂环戊烯并[4',5':3,4]环戊二烯并[1,2-c]喹啉-2-基)乙-1-酮)；CMPD10(rel-1-((1R,2S,3aS,4R,9bR)-4-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-1,2-二羟基-2,3,3a,4,5,9b-六氢-1H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD11(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苯基)-2,3,3a,4,5,9b-六氢-1H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；和CMPD12(rel-1-((4S,5aS,6R,11aR)-4,5,5a,6,11,11a-六氢-4,6-桥亚甲基[1,3]间二氧杂环戊烯并[4',5':5,6]苯并[1,2-c]吖啶-8-基)乙-1-酮)，或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体、或其任何混合物。
在某些实施方式中，GPCR激动剂选自下列：阿法诺肽(afamelanotide)(N-乙酰基-L-丝氨酰-L-酪氨酰-L-丝氨酰-L-正亮氨酰-L-α-谷氨酰-L-组氨酰-D-苯丙氨酰-L-精氨酰-L-色氨酰甘氨酰-L-赖氨酰-L-脯氨酰-L-缬氨酰胺)、N-甲基LTC4(N-甲基-5S-羟基-6R-(S-谷胱甘酰)-7E,9E,11Z,14Z-二十碳四烯酸)、TFLLR-NH2(Thr-Phe-Leu-Leu-Arg-NH2)、英普咪定(2-[3-(1H-咪唑-5-基)丙基]-1-[2-[(5-甲基-1H-咪唑-4-基)甲基巯基]乙基]胍)、碳酰胆碱(2-[(氨基羰基)氧基]–N,N,N-三甲基氯化乙铵)、硫前列酮((Z)-7-[(1R,3R)-3-羟基-2-[(E,3R)-3-羟基-4-苯氧基丁-1-烯基]-5-氧代环戊基]-N-甲基磺酰基庚-5-烯酰胺)、FTY720(2-氨基-2-[2-(4-辛基-苯基)-乙基]-丙烷-1,3-二醇盐酸盐)和U46619((E)-7-((1R,4R,5S,6R)-6-((S,Z)-3-羟基辛-1-烯-1-基)-2-氧杂双环[2.2.1]庚-5-基)庚-5-烯酸)。
在某些实施方式中，雌激素或GPCR激动剂作为药物组合物施用于受试者，药物组合物进一步包含至少一种药学上可接受的载体。在其他实施方式中，进一步给受试者施用至少一种另外的抗癌治疗。在又其他实施方式中，至少一种另外的抗癌治疗包括化学疗法、工程化嵌合抗原受体(CAR)T-细胞、免疫检查点抑制剂和/或放射疗法。在又其他实施方式中，化学疗法选自组蛋白脱乙酰酶抑制剂(HDAC)、替莫唑胺(temozolomide)、达卡巴嗪(dacarbazine)(DTIC)、维莫非尼(vemurafenib)、达拉非尼(dabrafenib)和曲美替尼(trametinib)。在又其他实施方式中，免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂、LAG3抑制剂、IDO(1/2)抑制剂、TIGIT抑制剂和B7-H3抑制剂。在又其他实施方式中，雌激素或GPCR激动剂通过至少一种选自下列的施用途径施用于受试者：吸入、口服、直肠、阴道、肠胃外、外用、透皮、肺、鼻内、颊、眼睛、鞘内、颅内和静脉内。在某些实施方式中，受试者是哺乳动物。在其他实施方式中，哺乳动物是人。
在某些实施方式中，受试者患有癌症或已被诊断为患有癌症。在其他实施方式中，受试者未患有癌症或未被诊断为患有癌症。在又其他实施方式中，雌激素和/或GPCR激动剂在3周或更短的时期内施用于受试者。在其他实施方式中，雌激素或GPCR激动剂在2周或更短的时期内施用于受试者。在又其他实施方式中，雌激素或GPCR激动剂在1周或更短的时期内施用于受试者。
附图说明
当结合附图阅读时，将更好地理解本发明的具体实施方式的以下详细描述。为了说明本发明的目的，附图中描绘的是一些实施方式。然而，应该理解，本发明不限于附图中所显示的实施方式的精确布置和手段。
图1是性激素如何影响黑素细胞中正常色素产生和/或分化程序的非限制性示意模型。
图2图解了在正常稳态条件下分化和增殖的非限制性平衡，而更大程度分化的细胞通常被认为具有较低的致瘤性。
图3是一组图和图像，其图解了黑素细胞暴露于连续妊娠相关的生理水平的雌激素增加黑素细胞分化状态——如通过增加的黑色素生成所指示的——的发现。短暂暴露于相同浓度的雌激素仅4天，诱导持久的和在雌激素停药后无限期地持续存在的黑素细胞分化的相同变化。
图4A-4F图解了GPER信号传导减缓增殖并驱动小鼠和人黑素瘤分化的发现。图4A：用雌激素(E2)处理的B16F10、WM46(BRAFV600E)、WM51(BRAFV600E)和WM3702(NRASQ61L)细胞的5天增殖测定，*表示通过双尾T检验的显著性，每组n＝3。图4B：E2处理的B16F10、WM46(BRAFV600E)、WM51(BRAFV600E)和WM3702(NRASQ61L)细胞的5天黑色素测定，*表示通过双尾T检验的显著性，每组n＝3。图4C：用GPER激动剂(G-1)处理的B16F10、WM46(BRAFV600E)、WM51(BRAFV600E)和WM3702(NRASQ61L)细胞的5天增殖测定，*表示通过双尾T检验的显著性，每组n＝3。图4D：用G-1处理的B16F10、WM46(BRAFV600E)、WM51(BRAFV600E)和WM3702(NRASQ61L)细胞的5天黑色素测定，*表示通过双尾T检验的显著性，每组n＝3。图4E：用剂量反应的G-1处理的B16F10细胞的3天增殖测定，*表示单因素方差分析与Tukey多重比较检验的显著性，每组n＝5。图4F：用饱和剂量反应的G-1处理16小时的B16F10细胞的蛋白质印迹。所有误差条均等于样品的标准偏差。
图5是图解雌激素预处理抑制黑素瘤细胞系体内生长的发现的一组图和图像。
图6是图解用G-1体内处理抑制小鼠黑素瘤细胞系B16F10体内生长的发现的图。
图7A-7C图解了多胎妊娠抑制黑素瘤发生的发现。图7A：蛋白质印迹验证用强力霉素诱导BRAF(V600E)、显性失活p53(R248W)、活性CDK4(R24C)和hTERT转导正常人黑素细胞。图。图7B：具有人设计的黑素瘤异种移植的SCID小鼠的代表性照片。图7C：所有非繁殖和繁殖小鼠的MITF免疫组织化学，*表示图1中所示的重复，比例尺＝100μM。
图8A-8E图解了多次妊娠抑制黑素瘤发生和驱动分化的发现。图8A：SCID小鼠上遗传定义的人异种移植黑素瘤的实验时间线，每组n＝5。图8B：代表性正位皮肤和所得肿瘤的组织学表征，包括苏木精和曙红(H/E)、黑素细胞和增殖标记物MITF、Ki67/MART和FontanaMasson(黑色素)，比例尺＝100μM。图8C-8E：表皮MITF染色(图8C)，Ki67增殖指数(图8D)和表皮角质形成细胞中的黑色素染色(图8E)的定量，*表示通过曼-惠特尼(Mann-Whitney)检验的显著性。
图9是一组柱状图，其图解了MSH(阿法诺肽的内源性等价物)和阿法诺肽(也称为美兰诺肽(melanotide)II或NDP-α-MSH)增加人黑素细胞中的色素产生(上图)和分化(下图)的发现。
图10A-10D是一组柱状图，其图解了某些与黑素细胞GPCR(CCR10、F2R、PTGER1和TBXA2R)相关的炎症的激动剂调节人黑素细胞中的黑色素合成的发现。图10A展示了减少的分化，而图10B-10D每个展示了增加的分化。
图11A-11E图解了GPER信号传导在正常人黑素细胞和在黑素瘤中驱动稳定分化的发现。图11A：长期黑色素测定，其中用孕酮(P4)或雌激素(E2)短暂处理正常人黑素细胞。在第27天用另外的P4短暂脉冲处理这些组的子集(红色)。误差条等于样品的标准偏差。图11B：用载体或雌激素短暂4天处理然后是8天的停药期之后的黑素细胞分化标志物的蛋白质印迹。图11C：雌激素或GPER激动剂(G-1)预处理小鼠和人黑素瘤细胞的实验时间线，每组n＝5。图11D：用雌激素预处理的小鼠和人黑素瘤的相对肿瘤重量，*表示通过曼-惠特尼检验的显著性。图11E：用G-1预处理的小鼠和人黑素瘤的相对肿瘤重量，*表示通过曼-惠特尼检验的显著性。
图12图解了GPER信号传导导致黑素瘤中c-Myc失去的发现。图片A-C：用E2短暂处理3天然后4天停药期的heMel(图片A)、WM46(图片B)和B16F10(图片C)黑素瘤的蛋白质印迹。图片D：用特异性GPER激动剂(G-1)处理16小时的WM46细胞的蛋白质印迹。图片E：用G-1处理16小时的荧光素酶或c-Myc转导的WM46细胞的蛋白质印迹。图片F：在整个时间过程中用G-1处理的WM46细胞的蛋白质印迹。图片G：用G-1、100μM PKA抑制剂Rp-8-Br-cAMPS(PKAi)或两者处理1小时的WM46细胞的蛋白质印迹。图片H：用G-1、2.5μM蛋白酶体抑制剂(MG132)或两者处理1小时的WM46细胞的蛋白质印迹。图片I：用含有和不含G-1的10μg/ml环己酰胺(CHX)处理的WM46细胞的蛋白质印迹。
图13A-13G图解了短暂GPER活化抑制增殖并增强对黑素瘤免疫治疗的反应的发现。图13A-13C：用妊娠相关浓度的E2(25nM)或优化浓度的G-1(500nM)短暂处理后B16F10(图13A)、WM46(图13B)和YUMM1.7(图13C)黑素瘤细胞的蛋白质印迹。图13D：载体或G-1预处理B16F10细胞，然后用αPD-1抗体或同种型抗体对照(2A3)处理的实验时间线，每组n＝5。图13E：第14天的治疗组的肿瘤体积，*表示使用单因素方差分析和Tukey多重比较检验的显著性。图13F：具有如此肿瘤的小鼠的存活曲线，该肿瘤用载体或G-1预处理，然后是同种型抗体对照(2A3)或αPD-1抗体。通过Log-Rank(Mantel-Cox)测试的组之间的显著性列于下表中。图13G：用G-1处理16小时的荧光素酶或c-Myc转导的WM46细胞的蛋白质印迹。
图14A-14F图解了用G-1和αPD-1免疫疗法治疗携带黑素瘤的小鼠显著延长了存活期的发现。图14A：用载体或G-1以及αPD-1抗体或同种型抗体对照(2A3)处理的携带B16F10的小鼠的实验时间线，每组n＝10。图14B：第14天的治疗组的肿瘤体积，*表示使用单因素方差分析和Tukey多重比较检验的显著性。图14C：用载体或G-1以及同种型抗体对照(2A3)或αPD-1抗体处理的小鼠的存活曲线。通过Log-Rank(Mantel-Cox)测试的组之间的显著性列于下表中。图14D：用载体或G-1以及同种型抗体对照(2A3)或αPD-1抗体处理的携带YUMM1.7的小鼠的实验概要。在肿瘤直径达到4-5mm后第14天开始处理，每组n＝5。图14E：治疗组随时间的肿瘤体积。图14F：用载体或G-1以及αPD-1抗体或同种型抗体对照(2A3)处理的小鼠的存活曲线。通过Log-Rank(Mantel-Cox)测试的组之间的显著性列于图14F的表中。
图15A-15C图解了体内G-1处理改变肿瘤浸润性免疫细胞的发现。图15A：携带YUMM1.7黑素瘤小鼠的载体或G-1处理的实验时间线。图15B：总结了跨越生物重复品的免疫谱的热图，每组n＝5，*表示假设每个免疫群是免疫激活的独立测量，通过双因素方差分析的显著性。图15C：来自图15B的个体免疫群的定量，每组n＝5。
图16A-16C图解了G-1处理驱动组蛋白乙酰化并与黑素瘤中的HDAC抑制剂协同作用的发现。图16A：用雌激素短暂处理的正常人黑素细胞的质谱，红色数据点(*)表示CBP/p300调节的组蛋白乙酰化的显著上调。图16B：用G-1、HDACi或组合处理后黑素瘤细胞中p-RB、c-Myc和H3K56ac的蛋白质印迹。图16C：用G-1、HDACi或组合处理后B16F10黑素瘤细胞的增殖测定。
图17A-17D图解了GPER信号传导在体外和体内减少胰腺导管腺癌(PDAC)细胞增殖的发现。图17A：用500nM G-1处理1小时的几种PDAC细胞系中c-Myc的蛋白质印迹。图17B：用500nM G-1处理5天的几种PDAC细胞系的增殖测定。图17C：携带PDAC肿瘤的小鼠的载体或G-1处理的实验时间线。图17D：用载体或G-1处理的携带PDAC肿瘤的小鼠的肿瘤重量。
图18A-18G图解了GPER信号传导在体外和体内减少NSCLC细胞增殖并且与αPD-1免疫疗法具有组合效应的发现。图18A：用500nM G-1处理30分钟的LLC1细胞的pCREB的蛋白质印迹。图18B：用500nM G-1处理6天的LLC1的增殖测定。图18C：用500nM G-1处理6天的LLC1细胞的c-Myc的蛋白质印迹。图18D：在一段时间内用500nM G-1处理的LLC1细胞的c-Myc的蛋白质印迹。图18E：用500nM G-1处理1小时的TC-1细胞的pCREB和c-Myc的蛋白质印迹。图18F：用载体或G-1以及αPD-1抗体或同种型抗体对照(2A3)处理的携带LLC1肿瘤的小鼠的肿瘤体积随时间的变化。图18G：用载体或G-1以及αPD-1抗体或同种型抗体对照(2A3)处理的小鼠的存活曲线。通过Log-Rank(Mantel-Cox)测试的组之间的显著性列于下表中。
图19是源自用增加剂量的G-1处理的WM46黑素瘤细胞的蛋白质印迹图像。数据显示响应于GPER激动剂G-1浓度的增加，pRB和c-myc水平降低，以及GPER表达升高。
具体实施方式
本发明涉及如此意外发现：雌激素和/或小分子G蛋白-偶联受体(GPCR)激动剂增加黑素细胞分化，并且可用于预防和/或治疗受试者中的GPCR-表达(例如GPER-表达)和/或Myc-表达的癌症，例如但不限于黑素瘤、胰腺癌和/或非小细胞肺癌。在某些实施方式中，GPCR是G-蛋白偶联的雌激素受体(GPER)、黑皮质素受体(MC1R)或激活类似下游信号传导事件的其他GPCR。
Myc蛋白是一种转录因子，其通过结合增强子盒序列和/或募集组蛋白乙酰转移酶来激活几种基因的表达。Myc还可以作为转录阻遏蛋白，抑制某些靶基因的表达。Myc在控制DNA复制、细胞增殖、分化、癌症侵袭、血管生成、细胞存活和癌细胞逃避免疫监视方面具有直接作用。Myc在许多癌症类型中表达并且在功能上是重要的。因此，它是具有生物学吸引力的治疗靶标。然而，用药理化合物靶向Myc非常困难，目前尚未批准癌症药物直接靶向Myc。
Myc被各种促有丝分裂信号例如血清刺激，或被Wnt、Shh和EGF(通过MAPK/ERK途径)激活。Myc是一种强癌基因蛋白，发现其经常在许多类型的癌症——如黑素瘤、伯基特淋巴瘤、白血病、肉瘤、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脑癌、成神经细胞瘤、成神经管细胞瘤、星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、甲状腺癌、肝癌、前列腺癌、食道癌、肾癌、膀胱癌和/或胆囊癌——中上调。
黑素细胞是黑素瘤的起源细胞，而许多其他人类细胞类型表达非经典类固醇激素受体G-蛋白偶联的雌激素受体1(GPER1)。如本文所证明的，发现通过雌激素或示例性非限制性的选择性GPER特异性激动剂(G-1)激活黑素细胞中的GPER增加人黑素细胞的分化状态。这样做，GPER激动剂抑制黑素细胞增殖的能力，增加它们的黑色素和黑素细胞分化抗原蛋白的产生(图1)，并降低它们形成癌症的能力。这反映了这样的事实：通常认为分化和增殖在正常条件下处于平衡，其中更大程度分化的黑素细胞的致瘤性较低(图2)。
在一个方面，本发明涉及如此意外发现：雌激素和/或GPCR激动剂(例如选择性GPER激动剂，例如G-1)可用于不仅治疗和/或预防对雌激素和其他性激素具有经典反应性的癌症——其包括(例如，在生殖组织中发展的癌症，例如但不限于乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌和/或子宫内膜癌)，而且治疗和/或预防癌细胞表达GPER或任何其他GPCR的任何癌症，例如但不限于Myc-表达的癌症。不希望受任何理论的限制，雌激素和/或GPCR激动剂与GPCR结合，导致癌细胞中Myc的下调。如图19所示的，用雌激素或GPCR激动剂(例如G-1作为GPER的选择性激动剂)处理GPER-表达的细胞导致Myc蛋白的明显消耗，和GPER蛋白的意外增加。GPER本身的这种增加进一步使癌细胞对G-1和/或其他GPCR激动剂的作用敏感化。
如本文所示，小鼠和人黑素瘤细胞对雌激素类似地反应，其使肿瘤细胞增殖减缓。用雌激素或特异性合成GPER激动剂G-1处理的人和小鼠黑素瘤细胞在小鼠中生长得更慢，并且形成显著更小的肿瘤(图5-6)。短暂的一次暴露于雌激素或G-1足以观察到抗肿瘤效果。不希望受任何理论的限制，短暂雌激素暴露足以诱导表观遗传记忆，使细胞处于更加分化的状态。本文陈述的数据显示，用雌激素短暂处理的黑素细胞维持许多主要黑素细胞分化标记物——包括酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白、MC1R、Melan-A和多巴色素互变异构酶——的上调表达(图3)。
这一发现有助于解释如此临床观察：患有黑素瘤的女性通常比患有在其他方面相同肿瘤的男性具有更好的预后。此外，曾经怀孕并且因此暴露于高浓度GPER激动剂雌激素的女性在被诊断患有黑素瘤时，具有比年龄匹配的从未生育的女性更好的预后，并且这种保护随着先前妊娠的数量而增加。不希望受任何具体理论的束缚，这表明妊娠的激素影响降低了黑素瘤的风险。
在某些方面，用雌激素、G-1或任何其他GPCR激动剂(例如选择性GPER激动剂)治疗(包括短暂治疗)降低了女性和男性二者的长期黑素瘤风险。根据本发明的方法，可以在两种性别中捕获妊娠的有益抗黑素瘤作用，而不必忍受实际怀孕。
在某些方面，对黑素瘤患者的GPCR激动剂治疗有助于减缓肿瘤生长并延长总体存活。
在某些方面，受试者进一步用组蛋白脱乙酰酶抑制剂——例如但不限于丙戊酸、伏立诺他(SAHA)、罗米地辛、曲古抑菌素A(TSA)、JQ1或其他溴结构域靶向抑制剂——治疗。这些化合物出乎意料地增强了GPCR激动剂——包括G-1作为选择性GPER激动剂——的作用。
在某些方面，受试者进一步用抗癌治疗——例如但不限于化学疗法、工程化嵌合抗原受体(CAR)T-细胞、任何免疫治疗剂(例如免疫检查点抑制剂)和/或放射疗法——进行治疗。靶向黑素瘤细胞的CAR可以基于蛋白质——包括但不限于MC1R、HGFR(Met)、MART-1、VEGFR、神经节苷脂GD3、GP100、酪氨酸酶和NY-ESO-1——的胞外域。本发明还考虑针对分化蛋白——例如但不限于MC1R、MART、TYR和/或DCT——的疫苗。
免疫检查点疗法(例如但不限于靶向PD-1和/或CTLA4的抑制剂)通过激活识别肿瘤细胞上的抗原的细胞毒性T-细胞起作用。黑素瘤上的这些抗原通常包括黑素细胞分化标记物(酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白、MC1R、Melan-A和多巴色素互变异构酶)。用雌激素、G-1或任何其他GPCR激动剂(例如GPER激动剂)治疗受试者增加这些抗原蛋白的表达。在某些实施方式中，用雌激素和/或GPER激动剂治疗受试者增加免疫疗法——包括具有针对分化蛋白的免疫检查点抑制剂和/或疫苗的当前标准护理方案——的功效。
在某些实施方式中，处于增加风险的黑素瘤(例如，患有先前黑素瘤发生、黑素瘤家族史和/或移植受体的受试者)，或任何其他类型的GPCR-表达(例如GPER-表达)和/或Myc-表达的癌症下的受试者可以受益于用雌激素和/或GPCR激动剂(例如选择性GPER激动剂)的治疗。在其他实施方式中，一般受试者可受益于用雌激素和/或GPCR激动剂(例如选择性GPER激动剂)的治疗，其作为预防或维持治疗以防止将来出现GPCR-表达(例如GPER-表达)和/或Myc-表达的癌症。在又其他实施方式中，目前的癌症患者可以受益于雌激素和/或GPCR激动剂(例如选择性GPER激动剂)单独使用、与HDAC组合和/或与任何其他疗法——包括但不限于免疫疗法(使用例如免疫检查点抑制剂)、靶向化学疗法、传统的非选择性化学疗法或放射疗法——组合的治疗。
在某些实施方式中，雌激素和/或GPER激动剂(例如G-1)和/或任何其他GPCR激动剂被配制用于口服施用(例如，作为药丸)、静脉内或肌肉内施用和/或外用施用(例如，外用乳膏、凝胶和/或软膏)。在其他实施方式中，雌激素、GPER激动剂(例如G-1)和/或其他GPCR激动剂用于降低良性痣(即黑素细胞痣)发展成黑素瘤的可能性。
不应将本发明解释为限于在GPCR-表达(例如GPER-表达)和/或Myc-表达的癌症(例如但不限于黑素瘤)的治疗中使用GPER激动剂。除了GPER之外，在其他组织类型中出现的黑素细胞和肿瘤也表达其他G蛋白-偶联受体(表1中突出显示的黑素细胞GPCR)，其在被激活时通过与GPER相同的下游途径发出信号以类似地驱动分化(图9)。在某些实施方式中，这些受体的激动剂单独和/或与其他治疗剂——包括但不限于免疫治疗剂——组合具有抗肿瘤活性。此类受体配体的非限制性实例包括MSH肽衍生物，例如阿法诺肽，也称为美兰诺肽II或NDP-α-MSH。图10A-10D图解了炎性黑素细胞GPCR的某些激动剂如何调节人黑素细胞中的黑色素合成。因此，增加黑素细胞分化的GPCR激动剂在本发明中是有用的。在某些实施方式中，此类GPCR激动剂的非限制性实例包括针对MC1R、CYSLTR2、F2R、HRH2、LPAR2/3/6、PTGER1、S1PR2、S1PR3和/或TBXA2R的激动剂。在其他实施方式中，此类GPCR激动剂的非限制性实例包括针对F2R、PTGER1和/或TBXA2R的激动剂。在又其他实施方式中，可用于本发明的激动剂的非限制性实例包括阿法诺肽(N-乙酰基-L-丝氨酰-L-酪氨酰-L-丝氨酰-L-正亮氨酰-L-α-谷氨酰基-L-组氨酰-D-苯丙氨酰-L-精氨酰-L-色氨酰甘氨酰-L-赖氨酰-L-脯氨酰-L-缬氨酰胺)、N-甲基LTC4(N-甲基-5S-羟基-6R-(S-谷胱甘酰)-7E,9E,11Z,14Z-二十碳四烯酸)、TFLLR-NH2(Thr-Phe-Leu-Leu-Arg-NH2)、英普咪定(2-[3-(1H-咪唑-5-基)丙基]-1-[2-[(5-甲基-1H-咪唑-4-基)甲基巯基]乙基]胍)、碳酰胆碱(2-[(氨基羰基)氧基]-N,N,N-三甲基氯化乙铵)、硫前列酮((Z)-7-[(1R),3R)-3-羟基-2-[(E,3R)-3-羟基-4-苯氧基丁-1-烯基]-5-氧代环戊基]-N-甲基磺酰基庚-5-烯酰胺)、FTY720(2-氨基-2-[2-(4-辛基-苯基)-乙基]-丙烷-1,3-二醇盐酸盐或芬戈莫德盐酸盐)和U46619((E)-7-((1R,4R,5S,6R)-6-((S,Z)-3-羟基辛-1-烯-1-基)-2-氧杂双环[2.2.1]庚-5-基)庚-5-烯酸)。
表1.当被天然或合成配体激活时促进细胞分化和黑色素生成的黑素细胞GPCR。
定义
如本文所用，以下术语中的每一个具有与本节中相关的含义。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语通常具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。通常，本文使用的命名法和细胞培养、分子遗传学和化学中的实验室程序是本领域公知和常用的那些。
本文使用的冠词“一(a)”和“一(an)”是指该冠词的一个或多于一个(即至少一个)语法对象。举例来说，“一个元素”表示一个元素或多于一个元素。
如本文所用，术语“约”将为本领域普通技术人员所理解，并且在某种程度上根据其使用的上下文而变化。如本文所用，当提及诸如量、持续时间等的可测量值时，术语“约”意指包括从具体值±20％或±10％、±5％、±1％或±0.1％的变化，因为这样的变化适合于执行所公开的方法。
如本文所用，除非另有说明，单独使用或与其它术语组合使用的术语“烷氧基”是指具有指定碳原子数的烷基，如本文其他地方所定义的，通过氧原子与分子的其余部分连接，例如，甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基(或异丙氧基)和更高级的同系物和异构体。具体实例是(C1-C3)烷氧基，例如但不限于乙氧基和甲氧基。
除非另有说明，本文所用的术语“烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指具有指定碳原子数的直链或支链烃(即，C1-C10表示1至10个碳原子)并包括直链、支链或环状取代基。实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基和环丙基甲基。具体实施方式是(C1-C4)烷基，例如但不限于乙基、甲基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基和环丙基甲基。
“疾病”是动物的健康状态，其中动物不能维持体内平衡，并且其中如果疾病没有改善则动物的健康继续恶化。相反，动物中的“紊乱”是动物能够维持体内平衡的健康状态，但其中动物的健康状态不如没有紊乱时的健康状态。如果不及时治疗，紊乱并不一定会导致动物的健康状态进一步下降。
“有效量”或“治疗有效量”在本文中可互换使用，并且是指如本文所述的化合物、制剂、材料或组合物的量，其有效实现具体的生物学结果或提供治疗或预防益处。这些结果可包括但不限于通过本领域适合的任何手段测定的抗肿瘤活性。
如本文所用，“内源的”是指来自生物体、细胞、组织或系统内部或在其内部产生的任何材料。
如本文所用，“雌激素(estrogen)”或“雌激素(oestrogen)”是指天然或合成的任何物质(包括雌激素的类似物和衍生物)，其模拟天然激素——雌激素——的作用。雌激素的类型包括但不限于雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、雌四醇(E4)、17β-雌二醇、27-羟基胆固醇、脱氢表雄酮(DHEA)、7-氧代-DHEA、7α-羟基-DHEA、16α-羟基-DHEA、7β-羟基表雄酮、Δ4-雄烯二酮、Δ5-雄烯二醇、3α-雄甾烷二醇、3β-雄甾烷二醇、2-羟基雌酮、16-羟基雌酮、环戊丙酸雌二醇酯、戊酸雌二醇酯、乙酸雌二醇酯、苯甲酸雌二醇酯、乙炔基雌二醇(EE)、美雌醇、莫克雌醇、炔雌醚、己烯雌酚苯雌酚、己二烯雌酚、己二烯雌酚乙酸酯、己烯雌酚二丙酸酯、磷雌酚、己烷雌酚、美雌酚二丙酸酯、外源雌激素、植物雌激素和/或霉菌雌激素。
除非另有说明，本文所用的术语“卤代”或“卤素”单独或作为另一取代基的一部分是指氟、氯、溴或碘原子。
如本文所用，术语“GPCR”是指G蛋白-偶联受体。
如本文所用，术语“GPER”是指G蛋白-偶联的雌激素受体，其是一种类型的GPCR。
如本文所用，“指导材料”包括出版物、记录、图表或任何其他表达介质，其可用于传达本发明的组合物和方法的有用性。例如，本发明的试剂盒的指导材料可以固定在含有本发明的核酸、肽和/或组合物的容器上，或者与含有核酸、肽和组合物的容器一起运输。可选地，指导材料可以与容器分开运输，意图是指导材料和化合物由接收者合作使用。
如本文所用，“免疫检查点抑制剂”是指触发免疫系统攻击癌细胞的药物(例如小分子、肽和/或抗体)。免疫检查点抑制剂的实例包括但不限于抗体、PD-1抑制剂(即，派姆单抗(Pembrolizumab)、纳武单抗(Nivolumab)、抗PD-1)、PD-L1抑制剂(即阿特珠单抗(Atezolizumab)、抗PD-L1)、CTLA-4抑制剂(即伊匹莫单抗(Ipilimumab)、抗B7-1/B7-2、抗CTLA-4)、吲哚胺(2,3)-双加氧酶(IDO1/2)抑制剂、B7同源物3(B7-H3)抑制剂、淋巴细胞激活基因3(LAG3)抑制剂和TIGIT(具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)靶向抗体和试剂。
本文所用的术语“经修饰的”是指本发明的分子或细胞的改变的状态或结构。可以以许多方式——包括化学地、结构上和功能上——修饰分子。可以通过引入核酸来修饰细胞。
本文所用的术语“调节”是指与不存在治疗或化合物的受试者中的反应水平相比，和/或与其他相同但未经治疗的受试者的反应水平相比较，介导受试者中反应水平的可检测的增加或减少。该术语包括扰乱和/或影响天然信号或响应，从而在受试者，优选地人中介导有益的治疗反应。
如本文所用，术语“Myc-表达的癌症”是指一种类型的癌症，其起源和/或繁殖依赖于Myc激活、失调、突变和/或异常功能和/或由Myc激活、失调、突变和/或异常功能加速。Myc-表达的癌症的非限制性实例包括黑素瘤、伯基特淋巴瘤、白血病、肉瘤、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脑癌、成神经细胞瘤、成神经管细胞瘤、星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、甲状腺癌、肝癌、前列腺癌、食道癌、肾癌、膀胱癌和胆囊癌。
免疫原性组合物的“肠胃外”施用包括例如皮下(s.c.)、静脉内(i.v.)、肌肉内(i.m.)或胸骨内注射，或输注技术。
如本文所用，术语“药物组合物”或“组合物”是指至少一种本发明中有用的化合物与其他化学组分的混合物，所述其他化学组分例如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂。药物组合物有助于将化合物施用于生物体。本领域存在多种施用化合物的技术，包括但不限于：静脉内、口服、气溶胶、肠胃外、眼睛、肺、颅内、透皮和外用施用。在某些实施方式中，施用包括外用施用。
如本文所用，术语“药学上可接受的”是指诸如载体或稀释剂的材料，其不会消除组合物的生物活性或性质，并且是相对无毒的，即，可以将该材料施用于个体不会引起不期望的生物效应或以有害的方式与包含其的组合物的任何组分相互作用。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指药学上可接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填料、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或包封材料，其参与在受试者内或向受试者内运送或运输本发明有用的化合物，使其可以发挥其预期的功能。通常，这种构建体从一个器官或身体的一部分运送或运输到另一个器官或身体的另一部分。在与制剂的其他成分相容的意义上，每种载体必须是“可接受的”，其包括在本发明中有用并且对受试者无害的化合物。可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；黄蓍粉；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲液；和药物制剂中使用的其他无毒相容物质。如本文所用，“药学上可接受的载体”还包括与本发明中有用的化合物的活性相容的并且对于受试者是生理学上可接受的任何和所有包衣、抗细菌和抗真菌剂，和吸收延迟剂等。补充的活性化合物也可以并入组合物中。“药学上可接受的载体”可以进一步包括可用于本发明的化合物的药学上可接受的盐。可以包括在本发明实践中使用的药物组合物中的其他额外的成分是本领域已知的并且描述于例如Remington’s Pharmaceutical Sciences(Genaro,Ed.,Mack Publishing Co.,1985,Easton,PA)，其通过引用并入本文。
如本文所用，语言“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒酸和/或碱制备的施用化合物的盐，包括无机酸、无机碱、有机酸、无机碱、溶剂化物(包括水合物)和其包合物。
如本文所用，化合物的“药学有效量”，“治疗有效量”或“有效量”是足以对施用该化合物的受试者提供有益效果的化合物的量。
本文所用的术语“预防(prevent)”，“预防(preventing)”或“预防(prevention)”是指避免或延迟与受试者的疾病或病症相关的症状的发作，在药剂或化合物开始施用时受试者未发生这些症状。疾病、病症(condition)和紊乱(disorder)在此可互换使用。
本文所用术语“特异性结合(specifically bind)”或“特异性结合(specificallybinds)”是指第一分子优先结合第二分子(例如具体的受体或酶)，但不一定仅结合该第二分子。
术语“受试者”旨在包括可以引发免疫应答的活生物体(例如哺乳动物)。如本文使用的“受试者”或“患者”可以是人或非人哺乳动物。非人哺乳动物包括例如家畜和宠物，例如绵羊、牛科、猪、犬科、猫科和鼠科哺乳动物。优选地，受试者是人。
如本文所用，“基本上纯化的”细胞是基本上不含其他细胞类型的细胞。基本上纯化的细胞还指已经与其天然存在状态下正常相关联的其他细胞类型分离的细胞。在某些实施方式中，基本上纯化的细胞群是指同源的细胞群。在其他实施方式中，该术语仅指已经与其天然状态下天然相关联的细胞分离的细胞。在又其他实施方式中，细胞在体外培养。在又其他实施方式中，细胞不在体外培养。
本文所用的术语“治疗剂”是指治疗和/或预防。通过抑制、缓解或根除疾病状态获得治疗效果。
如本文所用，“外用施用”或“外用施加”是指药物应用于身体表面例如皮肤或粘膜。
“治疗”疾病作为本文使用的术语，意指降低受试者经历的疾病或紊乱的至少一种体征或症状的频率或严重性。如本文所用，术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”定义为施加或施用治疗剂，即在本发明中可用的组合物(单独或与另一药剂组合)至受试者，或施加或施用治疗剂至来自患有疾病或紊乱、具有疾病或紊乱的症状或具有发展疾病或紊乱的可能性的受试者的分离的组织或细胞系(例如，用于诊断或离体应用)，目的是治愈、痊愈、缓解、减轻、改变、补救、改良、改善或影响疾病或紊乱、疾病或紊乱的症状或发展疾病或紊乱的可能性。基于从药物基因组学领域获得的知识，可以具体地定制或修改这些治疗。
如本文所用，术语“UV”是指紫外线。
“异种的”是指源自不同物种的动物的任何物质。
贯穿本公开内容，本发明的各个方面可以以范围形式呈现。应当理解，范围形式的描述仅仅是出于方便和简洁，不应该被解释为对本发明范围的僵硬限制。因此，应该考虑范围的描述具体公开了所有可能的子范围以及该范围内的单个数值。例如，应该考虑对诸如1到6的范围的描述已经具体公开了子范围，例如从1到3、1到4、1到5、2到4、2到6、3到6等，以及在该范围内的单个数字，例如，1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。无论范围的宽度如何，这都适用。
化合物和组合物
在一个方面，本发明考虑结合并激活GPCR——例如G蛋白-偶联的雌激素受体GPER——的雌激素和/或其他小分子。这诱导增加肿瘤细胞分化状态的细胞信号传导事件。这减缓了肿瘤细胞增殖，减缓了整体肿瘤生长，并使肿瘤细胞对免疫细胞更加可见和/或对免疫疗法易感。在某些实施方式中，本发明考虑了充当其他GPCR的激动剂的其他分子。这些分子通过参与由GPER激活的许多相同的下游途径诱导细胞分化。
在某些实施方式中，本发明的化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体是式(I)的化合物的至少一种：
其中在(I)中：
R1选自＝O、＝N-OH、＝N-NHC(＝O)(对甲氧基苯基)、＝N-NHC(＝O)CH(OMe)苯基和＝N-NH(5-碘-吡啶-2-基)；
R2选自C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基(例如但不限于-CF3)；
键a是单键或双键，使得：
如果键a是双键，则R3和R4是H，和
如果键a是单键，则R3选自H、-OH、-OAc和卤素；R4选自H、-OH、-OAc和-S(邻硝基苯基)；或R3和R4结合形成选自-CH2-、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基；
R5选自H、苄基、C1-C4烷基和乙酰基；
R6选自H、卤素、-NO2、C1-C4烷基、-C≡CH、-C≡C-Si(CH3)3(或-C≡C-TMS)、-O-苄基、-OH、-OAc、C1-C4烷氧基、-COOH和-COO(C1-C4烷基)；
R7选自H、卤素、-NO2、C1-C4烷基、-OH、-OAc和C1-C4烷氧基；
R8选自H、卤素、-NO2、C1-C4烷基、-O-苄基、-N(R)(R)、-SR、-COOH、-COO(C1-C4烷基)、-OH、-OAc、C1-C4烷氧基、3-硫杂环丁二烯基-甲氧基、-SO2(吗啉代)和-OCH2CH＝CH2，其中每次出现的R独立地选自H和C1-C4烷基；
R9选自H、卤素、-NO2、C1-C4烷基、-OH、-OAc和C1-C4烷氧基，
或R8和R9结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-、-OC(CH3)2O-、-O(CH2)2O-、-O-CH＝CH-和-CH＝CH-O-的双基；
R10选自H、C1-C4烷基和卤素；
其中每次出现的苄基独立地任选地被至少一种选自C1-C4烷基、-OH、C1-C4烷氧基、卤素和-NO2的基团取代。
在某些实施方式中，本发明化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体是式(I-1)化合物的至少一种：
其中在(I-1)中：
R1选自＝O和＝N-OH；
R2是C1-C4烷基；
键a是单键或双键，使得：
如果键a是双键，则R3和R4是H，和
如果键a是单键，则R3和R4独立地选自H和-OH，或R3和R4结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基；
R5选自H、苄基和C1-C4烷基；
R6选自H和卤素；
R8和R9独立地选自H和C1-C4烷氧基，或R8和R9结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基。
在某些实施方式中，该化合物不是G-1。在其他实施方式中，化合物是G-1。
在某些实施方式中，R1是＝O。在其他实施方式中，R1是＝N-OH。
在某些实施方式中，R2选自甲基、三氟甲基、乙基、1-丙基和2-丙基。在其他实施方式中，R2是甲基或三氟甲基。
在某些实施方式中，键a是双键，并且R3和R4是H。
在某些实施方式中，键a是单键，并且R3和R4独立地选自H和-OH。在其他实施方式中，键a是单键，并且R3和R4是H。在又其他实施方式中，键a是单键，并且R3和R4是-OH。在又其他实施方式中，键a是单键，和R3和R4是-OH并且彼此是顺式的。在又其他实施方式中，键a是单键，和R3和R4是-OH并且彼此反式。
在某些实施方式中，键a是单键，并且R3和R4结合形成-OC(CH3)2O-。
在某些实施方式中，R5选自H、苄基、甲基、乙基、1-丙基和2-丙基。在某些实施方式中，R5选自H、苄基和甲基。
在某些实施方式中，R6选自H、F、Cl、Br和I。在某些实施方式中，R5选自H、Cl和Br。
在某些实施方式中，R8和R9独立地选自H和C1-C4烷氧基。在其他实施方式中，R8和R9独立地选自H、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基和2-丙氧基。在又其他实施方式中，R8和R9独立地选自H和甲氧基。
在某些实施方式中，R8和R9结合形成选自-OCH2O-、-O(CH2)2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基。
在某些实施方式中，化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体是选自下组的至少一种：
在某些实施方式中，化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体是选自下组的至少一种：
在某些实施方式中，化合物是A1。在其他实施方式中，化合物是A2。在又其他实施方式中，化合物是A3。在又其他实施方式中，化合物是A4。在又其他实施方式中，化合物是A5。在又其他实施方式中，化合物是A6。在又其他实施方式中，化合物是A7。在又其他实施方式中，化合物是A8。在又其他实施方式中，化合物是A9。在又其他实施方式中，化合物是A10。在又其他实施方式中，化合物是A11。在又其他实施方式中，化合物是A12。在又其他实施方式中，化合物是A13。在又其他实施方式中，化合物是A14。在又其他实施方式中，化合物是A15。
在某些实施方式中，该化合物不是A1。在其他实施方式中，化合物不是A2。在又其他实施方式中，化合物不是A3。在又其他实施方式中，化合物不是A4。在又其他实施方式中，化合物不是A5。在又其他实施方式中，化合物不是A6。在又其他实施方式中，化合物不是A7。在又其他实施方式中，化合物不是A8。在又其他实施方式中，化合物不是A9。在又其他实施方式中，化合物不是A10。在又其他实施方式中，化合物不是A11。在又其他实施方式中，化合物不是A12。在又其他实施方式中，化合物不是A13。在又其他实施方式中，化合物不是A14。在又其他实施方式中，化合物不是A15。
在某些实施方式中，化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体是选自下组的至少一种：
在某些实施方式中，化合物是A16。在其他实施方式中，化合物是A17。在又其他实施方式中，化合物是A18。在又其他实施方式中，化合物是A19。在又其他实施方式中，化合物是A20。在又其他实施方式中，化合物是A21。在又其他实施方式中，化合物是A22。在又其他实施方式中，化合物是A23。在又其他实施方式中，化合物是A24。在又其他实施方式中，化合物是A25。在又其他实施方式中，化合物是A26。在又其他实施方式中，化合物是A27。在又其他实施方式中，化合物是A28。在又其他实施方式中，化合物是A29。在又其他实施方式中，化合物是A30。在又其他实施方式中，化合物是A31。在又其他实施方式中，化合物是A32。在又其他实施方式中，化合物是A33。在又其他实施方式中，化合物是A34。在又其他实施方式中，化合物是A35。在又其他实施方式中，化合物是A36。在又其他实施方式中，化合物是A37。在又其他实施方式中，化合物是A38。在又其他实施方式中，化合物是A39。在又其他实施方式中，化合物是A40。在又其他实施方式中，化合物是A41。在又其他实施方式中，化合物是A42。在又其他实施方式中，化合物是A43。在又其他实施方式中，化合物是A44。在又其他实施方式中，化合物是A45。在又其他实施方式中，化合物是A46。在又其他实施方式中，化合物是A47。在又其他实施方式中，化合物是A48。在又其他实施方式中，化合物是A49。在又其他实施方式中，化合物是A50。在又其他实施方式中，化合物是A51。在又其他实施方式中，化合物是A52。在又其他实施方式中，化合物是A53。在又其他实施方式中，化合物是A54。在又其他实施方式中，化合物是A55。在又其他实施方式中，化合物是A56。在又其他实施方式中，化合物是A57。在又其他实施方式中，化合物是A58。在又其他实施方式中，化合物是A59。在又其他实施方式中，化合物是A60。在又其他实施方式中，化合物是A61。在又其他实施方式中，化合物是A62。在又其他实施方式中，化合物是A63。在又其他实施方式中，化合物是A64。在又其他实施方式中，化合物是A65。在又其他实施方式中，化合物是A66。在又其他实施方式中，化合物是A67。在又其他实施方式中，化合物是A68。在又其他实施方式中，化合物是A69。在又其他实施方式中，化合物是A70。在又其他实施方式中，化合物是A71。在又其他实施方式中，化合物是A72。在又其他实施方式中，化合物是A73。在又其他实施方式中，化合物是A74。在又其他实施方式中，化合物是A75。在又其他实施方式中，化合物是A76。在又其他实施方式中，化合物是A77。在又其他实施方式中，化合物是A78。在又其他实施方式中，化合物是A79。在又其他实施方式中，化合物是A80。在又其他实施方式中，化合物是A81。在又其他实施方式中，化合物是A82。在又其他实施方式中，化合物是A83。在又其他实施方式中，化合物是A84。在又其他实施方式中，化合物是A85。在又其他实施方式中，化合物是A86。在又其他实施方式中，化合物是A87。在又其他实施方式中，化合物是A88。在又其他实施方式中，化合物是A89。在又其他实施方式中，化合物是A90。在又其他实施方式中，化合物是A91。在又其他实施方式中，化合物是A92。在又其他实施方式中，化合物是A93。在又其他实施方式中，化合物是A94。在又其他实施方式中，化合物是A95。在又其他实施方式中，化合物是A96。在又其他实施方式中，化合物是A97。在又其他实施方式中，化合物是A98。在又其他实施方式中，化合物是A99。在又其他实施方式中，化合物是A100。在又其他实施方式中，化合物是A101。在又其他实施方式中，化合物是A102。在又其他实施方式中，化合物是A103。在又其他实施方式中，化合物是A104。
在某些实施方式中，化合物不是A16。在其他实施方式中，化合物不是A17。在又其他实施方式中，化合物不是A18。在又其他实施方式中，化合物不是A19。在又其他实施方式中，化合物不是A20。在又其他实施方式中，化合物不是A21。在又其他实施方式中，化合物不是A22。在又其他实施方式中，化合物不是A23。在又其他实施方式中，化合物不是A24。在又其他实施方式中，化合物不是A25。在又其他实施方式中，化合物不是A26。在又其他实施方式中，化合物不是A27。在又其他实施方式中，化合物不是A28。在又其他实施方式中，化合物不是A29。在又其他实施方式中，化合物不是A30。在又其他实施方式中，化合物不是A31。在又其他实施方式中，化合物不是A32。在又其他实施方式中，化合物不是A33。在又其他实施方式中，化合物不是A34。在又其他实施方式中，化合物不是A35。在又其他实施方式中，化合物不是A36。在又其他实施方式中，化合物不是A37。在又其他实施方式中，化合物不是A38。在又其他实施方式中，化合物不是A39。在又其他实施方式中，化合物不是A40。在又其他实施方式中，化合物不是A41。在又其他实施方式中，化合物不是A42。在又其他实施方式中，化合物不是A43。在又其他实施方式中，化合物不是A44。在又其他实施方式中，化合物不是A45。在又其他实施方式中，化合物不是A46。在又其他实施方式中，化合物不是A47。在又其他实施方式中，化合物不是A48。在又其他实施方式中，化合物不是A49。在又其他实施方式中，化合物不是A50。在又其他实施方式中，化合物不是A51。在又其他实施方式中，化合物不是A52。在又其他实施方式中，化合物不是A53。在又其他实施方式中，化合物不是A54。在又其他实施方式中，化合物不是A55。在又其他实施方式中，化合物不是A56。在又其他实施方式中，化合物不是A57。在又其他实施方式中，化合物不是A58。在又其他实施方式中，化合物不是A59。在又其他实施方式中，化合物不是A60。在又其他实施方式中，化合物不是A61。在又其他实施方式中，化合物不是A62。在又其他实施方式中，化合物不是A63。在又其他实施方式中，化合物不是A64。在又其他实施方式中，化合物不是A65。在又其他实施方式中，化合物不是A66。在又其他实施方式中，化合物不是A67。在又其他实施方式中，化合物不是A68。在又其他实施方式中，化合物不是A69。在又其他实施方式中，化合物不是A70。在又其他实施方式中，化合物不是A71。在又其他实施方式中，化合物不是A72。在又其他实施方式中，化合物不是A73。在又其他实施方式中，化合物不是A74。在又其他实施方式中，化合物不是A75。在又其他实施方式中，化合物不是A76。在又其他实施方式中，化合物不是A77。在又其他实施方式中，化合物不是A78。在又其他实施方式中，化合物不是A79。在又其他实施方式中，化合物不是A80。在又其他实施方式中，化合物不是A81。在又其他实施方式中，化合物不是A82。在又其他实施方式中，化合物不是A83。在又其他实施方式中，化合物不是A84。在又其他实施方式中，化合物不是A85。在又其他实施方式中，化合物不是A86。在又其他实施方式中，化合物不是A87。在又其他实施方式中，化合物不是A88。在又其他实施方式中，化合物不是A89。在又其他实施方式中，化合物不是A90。在又其他实施方式中，化合物不是A91。在又其他实施方式中，化合物不是A92。在又其他实施方式中，化合物不是A93。在又其他实施方式中，化合物不是A94。在又其他实施方式中，化合物不是A95。在又其他实施方式中，化合物不是A96。在又其他实施方式中，化合物不是A97。在又其他实施方式中，化合物不是A98。在又其他实施方式中，化合物不是A99。在又其他实施方式中，化合物不是A100。在又其他实施方式中，化合物不是A101。在又其他实施方式中，化合物不是A102。在又其他实施方式中，化合物不是A103。在又其他实施方式中，化合物不是A104。
在某些实施方式中，本发明化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体是选自下列的至少一种化合物：
在其他实施方式中，化合物不是A105。在其他实施方式中，化合物不是A106。
在某些实施方式中，本发明化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体是
在其他实施方式中，化合物不是A107。
在某些实施方式中，该化合物是选自下列的至少一种：
G1或G-1(rel-1-[4-(6-溴-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-3aR,4S,5,9bS-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基]-乙酮)：
CMPD4(rel-1-((3aS,4R,9bR)-5-苄基-4-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)：
CMPD5(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-溴苯基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)：
CMPD6(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮肟)：
CMPD7(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苯基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)：
CMPD8(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-氯苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)：
CMPD9(rel-1-((6R,6aS,7aS,10aR,10bR)-6-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-9,9-二甲基-6,6a,7,7a,10a,10b-六氢-5H-[1,3]间二氧杂环戊烯并[4',5':3,4]环戊二烯并[1,2-c]喹啉-2-基)乙-1-酮)：
CMPD10(rel-1-((1R,2S,3aS,4R,9bR)-4-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-1,2-二羟基-2,3,3a,4,5,9b-六氢-1H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)：
CMPD11(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苯基)-2,3,3a,4,5,9b-六氢-1H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)：
在某些实施方式中，本发明化合物或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体是式(II)的至少一种化合物：
其中：
R1选自＝O和＝N-OH；
R2是C1-C4烷基；
R5选自H、苄基和C1-C4烷基；
R8和R9独立地选自H和C1-C4烷氧基，或R8和R9结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基。
在某些实施方式中，式(II)的化合物是
CMPD12(rel-1-((4S,5aS,6R,11aR)-4,5,5a,6,11,11a-六氢-4,6-桥亚甲基[1,3]间二氧杂环戊烯并[4',5':5,6]苯并[1,2-c]吖啶-8-基)乙-1-酮)：
在某些实施方式中，可用于本发明方法的化合物或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体是美国专利申请公开号US 2008/0167334和US 2011/0092533——所有其全部内容通过引用并入本文——中所述的至少一种GPER激动剂：
其中：
X是＝N-、O、S或N-R，条件是当X是N-R且R是键时，N与R1一起形成5-至7-元任选取代的杂环基；
R是键、H、-OH、-NO2、任选取代的C1-C6烃基(例如任选取代的烷基)、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、任选取代的-C(O)-(C1-C6)烷基(酰胺)、任选取代的-C(O)-O-(C1-C6)烷基(氨基甲酸乙酯)、任选取代的-C(O)-NH(C1-C6)烷基(脲)、任选取代的-C(O)-N(C1-C6)二烷基、任选取代的-C(O)-NH(芳基)、任选取代的-C(O)-N(二芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂芳基)、任选取代的-C(O)-N(二杂芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂环)或任选取代的-C(O)-N(二杂环)；
R1、R2和R5各自独立地选自H、-OH、-NO2、卤素、C1-C6任选取代的羧酸基团、任选取代的O-(C1-C6)烷基、任选取代的C1-C6烃基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、任选取代的-C(O)-(C1-C6)烷基(酮)、任选取代的-C(O)-O-(C1-C6)烷基(酯)、任选取代的O-C(O)-(C1-C6)烷基(酯)、任选取代的-C(O)-NH(C1-C6)烷基(脲)、任选取代的-C(O)-N(C1-C6)二烷基、任选取代的-C(O)-NH(芳基)、任选取代的-C(O)-N(二芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂芳基)、任选取代的-C(O)-N(二杂芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂环)或任选取代的-C(O)-N(二杂环)；
R3和R4各自独立地选自H、-OH、-NO2、卤素、C1-C6任选取代的羧酸基团、任选取代的O-(C1-C6)烷基、任选取代的C1-C6烃基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、任选取代的-C(O)-(C1-C6)烷基(酮)、任选取代的-C(O)-O-(C1-C6)烷基(酯)、任选取代的O-C(O)-(C1-C6)烷基(酯)、任选取代的-C(O)-NH(C1-C6)烷基(脲)、任选取代的-C(O)-N(C1-C6)二烷基、任选取代的-C(O)-NH(芳基)、任选取代的-C(O)-N(二芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂芳基)、任选取代的-C(O)-N(二杂芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂环)或任选取代的-C(O)-N(二杂芳基)或R3和R4一起形成5-或6-元任选取代的碳环(其可以是饱和的或不饱和的)、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或任选取代的杂环基；
R6和R7各自独立地不存在或选自H、-OH、-NO2、卤素、C1-C6任选取代的羧酸基团、任选取代的O-(C1-C6)烷基、任选取代的C1-C6烃基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、任选取代的-C(O)-(C1-C6)烷基(酮)、任选取代的-C(O)-O-(C1-C6)烷基(酯)、任选取代的O-C(O)-(C1-C6)烷基(酯)、任选取代的-C(O)-NH(C1-C6)烷基(脲)、任选取代的-C(O)-N(C1-C6)二烷基、任选取代的-C(O)-NH(芳基)、任选取代的-C(O)-N(二芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂芳基)、任选取代的-C(O)-N(二杂芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂环)或任选取代的-C(O)-N(二杂芳基)，或R6和R7一起形成4-、5-、6-或7-元任选取代的碳环(其可以是饱和的或不饱和的)、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或任选取代的杂环基，或5-至9-元任选取代的碳环或杂环双环基团，条件是当R7'和R7”均不存在时R7不存在；
R6'为不存在、H、C1-C6任选取代的烃基(如H、CH3或CH2CH3)或与R6一起形成＝O；
R7'为不存在、H、任选取代的烃基(如H、CH3或CH2CH3)，或与R7一起形成＝O；
R7”为不存在、H、-OH、卤素、任选取代的O-(C1-C6)烷基、任选取代的C1-C6烃基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、任选取代的-C(O)-(C1-C6)烷基(酮)、任选取代的-C(O)-O-(C1-C6)烷基(酯)、任选取代的OC(O)-(C1-C6)烷基(酯)、任选取代的-C(O)-NH(C1-C6)烷基(脲)、任选取代的-C(O)-N(C1-C6)二烷基、任选取代的-C(O)-NH(芳基)、任选取代的-C(O)-N(二芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂芳基)、任选取代的-C(O)-N(二杂芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂环)或任选取代的-C(O)-N(二杂芳基)；
R8'为不存在(当R8'连接的碳和R6连接的碳形成任选的双键时)、H、CH3或CH2CH3；
R10、R11、R12和R13各自独立地为H、-OH、-NO2、卤素、C1-C6任选取代的羧酸基团、任选取代的O-(C1-C6)烷基、任选取代的C1-C6烃基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、任选取代的-C(O)-(C1-C6)烷基(酮)、任选取代的-C(O)-O-(C1-C6)烷基(酯)、任选取代的O-C(O)-(C1-C6)烷基(酯)、任选取代的-C(O)-NH(C1-C6)烷基(脲)、任选取代的-C(O)-N(C1-C6)二烷基、任选取代的-C(O)-NH(芳基)、任选取代的-C(O)-N(二芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂芳基)、任选取代的-C(O)-N(二杂芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂环)或任选取代的-C(O)-N(二杂芳基)；
R14是H、-OH、-NO2、卤素、C1-C6任选取代的羧酸基团、任选取代的O-(C1-C6)烷基、任选取代的C1-C6烃基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环、任选取代的-C(O)-(C1-C6)烷基(酮)、任选取代的-C(O)-O-(C1-C6)烷基(酯)、任选取代的O-C(O)-(C1-C6)烷基(酯)、任选取代的-C(O)-NH(C1-C6)烷基(脲)、任选取代的-C(O)-N(C1-C6)二烷基、任选取代的-C(O)-NH(芳基)、任选取代的-C(O)-N(二芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂芳基)、任选取代的-C(O)-N(二杂芳基)、任选取代的-C(O)-NH(杂环)或任选取代的-C(O)-N(二杂环)，或与R7连接的碳一起形成5-、6-或7-元任选取代的碳环(其可以是饱和的或不饱和的)、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或任选取代的杂环；
Y是任选取代的(CH2)n基团——其中n是0、1或2，任选取代的＝CH-基团、C＝O基团、O、S、任选取代的N-(C1-C6)烷基、任选取代的N-芳基、任选取代的N-杂芳基、任选取代的N-杂环、任选取代的N-C(O)-(C1-C6)烷基、任选取代的N-C(O)-芳基、任选取代的N-C(O)-杂芳基、任选取代的N-C(O)-杂环；
Z是任选取代的(CH2)n基团——其中n是1或2，任选取代的＝CH-基团、C＝O基团、O、S、任选取代的N-(C1-C6)烷基、任选取代的N-芳基、任选取代的N-杂芳基、任选取代的N-杂环、任选取代的N-C(O)-(C1-C6)烷基、任选取代的N-C(O)-芳基、任选取代的N-C(O)-杂芳基、任选取代的N-C(O)-杂环。
在某些实施方式中，本发明的化合物或其盐、溶剂化物、对映异构体或非对映异构体是PCT专利申请号WO 2016/014847——其通过引用整体并入本文——中所述的至少一种GPER激动剂：
其中在(i)-(iv)中：
环A是含有一个或多个杂原子如N、O或S的芳族或杂芳族五或六元环；
R1独立地选自SO2NH2、SO2NRaRb、COOH、CONH2和CONRaRb、以及H。在R1中，每次出现的Ra和Rb独立地选自H、烷基(C1-C6)、链烯基(C2-C6)、炔基(C2-C6)、烷氧基(C2-C6)、环烷基(C3-C7)、烷硫基、烷芳基、及芳环和杂芳环。芳环和杂芳环可以进一步被吸电子和给电子基团取代。Ra和Rb可以形成环状环(C3-C7)或芳环，其任选地含有一个或多个杂原子。这类芳环可以进一步被吸电子基团如卤素、-COOH、-CN、-NO2等，或给电子基团如烷基取代；
R2是H、卤素或杂原子如N、O或S；
环A是芳环或杂芳环(5或6元环)；
环B是在指定位置含有N的六元饱和环或芳环。环B的氮任选地可以被烷基、芳基或烷芳基取代基取代；
环C独立地是取代或未取代的碳环、双环、芳环、稠合芳环或杂芳环。额外地，当它是碳环时，它可以含有一个或多个双键和一个或多个杂原子如N、O或S。它还可以具有α-β不饱和酮官能团(function)；
R3独立地选自H、卤素、-OH、CN、(C1-C6)烷基、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)炔基、(C1-C6)烷氧基、(C3-C7)环烷基、(C1-C6)烷硫基、NRaRb、RaRb或卤代烷基(例如CF3)。在R3中，每次出现的Ra和Rb独立地为氢或(C1-C6)烷基，或Ra和Rb形成含有3-7个环原子的饱和或不饱和杂环，该环可任选地含有另一个选自N、O和S的杂原子，和可以任选地被1-3个可以相同或不同并且选自(C1-C4)烷基、苯基和苄基的基团取代；和m是1-4；
在某些实施方式中，环B和C是顺式稠合的；
环D和B直接连接或通过间隔(C1-C2)连接。当直接连接时，它们相对于环B和C的稠合可以是顺式或反式。环D是含有一个或多个杂原子如N、O或S的芳环或杂芳环。它可以任选地被独立选择的R5和R6基团取代或被-R6R5或R5R6取代；
R5独立地选自H、卤素、给电子基团和吸电子基团，如烷基、卤代烷基、烷氧基、-NO2、-SF5、-CN等；
R6可以是NHC(O)ORc、OC(O)NHRc、C(O)O(CH2)nRc、OC(O)(CH2)nRc、C(O)NHRc或NHC(O)Rc，其中n＝0-4；或R6可以是烷基、支链烷基(C1-C10)、炔基(C1-C10)、碳环、链烯基(C1-C10)、卤素、CN、COOH、CONH2、-OH或NH2。Rc是烷基、支链烷基(C1-C10)、烷氧基、烷基氨基、酰基、炔基(C1-C8)或链烯基(C1-C6)。R6也可以是X(CH2)nE，其中X是NH、O、S、C≡C或HC＝CH，和n＝0-2，和E独立地是取代或未取代的碳环、双环、芳环、稠合芳环或杂芳环；
在某些实施方式中，R1选自羧基、甲酰胺、羧烷基、羧芳基、氰基、硝基、羟基、磺酰基、磺酰胺、烷基磺酰胺、芳基磺酰胺、烷基磺酰基、芳烷基磺酰胺、三氟甲基磺酰胺、三氟甲基磺酰基甲酰胺和磺酰基脲。在某些实施方式中，R1是磺酰胺、烷基磺酰胺或芳基磺酰胺。R2可以是3-、4-、5-或6-元饱和或芳族碳环或环系统，其任选地含有一个或两个选自N、O和S的杂原子，该环或环系统任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：氰基、卤素、酰基、酰氧基、烷基、烷氧基、杂烷基、烷基酯、烷基酰氨基、烷基氨基、芳基、芳氧基、芳烷基、芳基酯、叠氮基、烷基卤、链烯基、炔基、烷基醚、硝基、硫代卤和硫代氰基。R3可以是H、或C1-C5烷基或环烷基，其任选被氰基、硝基和一个或多个含有N、O或S的芳族或杂芳族基团的一个或多个取代。A和D可以独立地选自CH、CH2、N和O，并且连接它们的键是适合于所选原子的单键或双键。X、Y和Z独立地选自无原子(即，它们不存在)、CH、C-卤素、N、O和S；
在某些实施方式中，R2是由-RdReRf或-RdCOReRf表示的取代基；其中Rd、Re和Rf独立地选自3-、4-、5-或6-元饱和或芳族碳环或环系统，其任选地含有一个或两个选自N、O和S的杂原子，该环或环系统任选被一个或多个选自下列的取代基取代：氰基、卤素、酰基、酰氧基、烷基、烷氧基、杂烷基、烷基酯、烷基酰氨基、烷基氨基、芳基、芳氧基、芳烷基、芳基酯、叠氮基、烷基卤、链烯基、炔基、烷基醚、硝基、硫代卤和硫代氰基；
本发明化合物可根据本文所述的方法、本领域已知的方法和/或某些参考文献中描述的方法制备，例如但不限于：PCT申请公开号WO 2004/072046和WO 2016/014847；美国申请号10/511,083；美国专利申请公开号US 2008/0167334和US 2011/0092533；和Burai,et al.,2010,Org.&Biomol.Chem.8:2252-2259；所有这些都通过引用整体包括在本文中。
本发明的化合物可具有一个或多个立构中心，并且每个立构中心可以以(R)或(S)构型独立存在。在某些实施方式中，本文描述的化合物以旋光或外消旋形式存在。本文所述的化合物包括具有本文所述治疗有用性质的外消旋、旋光、区域异构和立体异构形式或其组合。旋光形式的制备以任何合适的方式——包括通过非限制性实例，通过用重结晶技术拆分外消旋形式、从旋光原料合成、手性合成、或使用手性固定相进行色谱分离——实现。本文通过外消旋配方表示的化合物进一步代表两种对映异构体中的任一种或其混合物，或者在存在两种或更多种手性中心的情况下，所有非对映异构体或其混合物。
在某些实施方式中，本发明的化合物作为互变异构体存在。所有互变异构体都包括在本文所述化合物的范围内。
本文所述的化合物还包括同位素标记的化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子数但原子质量或质量数不同于通常在自然界中发现的原子质量或质量数的原子取代。适合包含在本文所述化合物中的同位素的实例包括但不限于2H、3H、11C、13C、14C、36Cl、18F、123I、125I、13N、15N、15O、17O、18O、32P和35S。在某些实施方式中，用较重的同位素例如氘取代提供了更高的化学稳定性。同位素标记的化合物通过任何合适的方法或通过使用适当的同位素标记的试剂代替另外使用的未标记的试剂的方法来制备。
在某些实施方式中，本文所述的化合物通过其他方式标记，其包括但不限于使用发色团或荧光部分、生物发光标记或化学发光标记。
在本文提供的所有实施方式中，合适的任选取代基的实例不旨在限制要求保护的发明的范围。本发明的化合物可含有本文提供的任何取代基或取代基的组合。
在某些实施方式中，本发明进一步提供药物组合物，其包含至少一种本发明的化合物和至少一种药学上可接受的载体。在其他实施方式中，配制药物组合物用于吸入、口服、直肠、阴道、肠胃外、外用、透皮、肺、鼻内、颊、眼睛、鞘内、颅内或静脉内施用。本发明所考虑的化合物的每种制剂可用于治疗或预防GPCR-表达(例如GPER-表达)和/或Myc-表达的癌症，例如但不限于黑素瘤。
在某些实施方式中，本发明的药物组合物包含至少一种另外的抗癌剂和至少一种本发明的化合物。另外的抗癌剂的实例包括但不限于化学疗法和免疫检查点抑制剂。化学疗法的非限制性实例包括但不限于HDAC、替莫唑胺、达卡巴嗪(DTIC)、维莫非尼、达拉非尼和曲美替尼。检查点抑制剂的非限制性实例包括但不限于PD-1抑制剂(即，派姆单抗、纳武单抗、抗PD-1)、PD-L1抑制剂(即阿特珠单抗、抗PD-L1)、CTLA-4抑制剂(即伊匹莫单抗、抗B7-1/B7-2、抗CTLA-4)、吲哚胺(2,3)-双加氧酶(IDO1/2)抑制剂、B7同源物3(B7-H3)抑制剂、淋巴细胞激活基因3(LAG3)抑制剂和TIGIT(具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)靶向抗体和试剂。
本发明还涉及可用于本文所述的任何本发明方法的试剂盒。此类试剂盒包含可用于本文所述任何方法的组分，其包括例如用于治疗或预防受试者例如人中的GPCR-表达(例如GPER-表达)和/或Myc-表达的癌症——例如但不限于黑素瘤——的组合物和方法，用于包含在本文别处描述的本发明的任何实施方式的组分的一个或多个容器(例如，试管、细胞培养皿、细胞培养板、细胞培养瓶、细胞培养袋)和指导材料。
盐
本文所描述的化合物可与酸或碱形成盐，并且这些盐包括在本发明中。术语“盐”包括可用于本发明方法的游离酸或碱的加成盐。术语“药学上可接受的盐”是指具有在药学应用中提供效用的范围内的毒性特征(toxicity profile)的盐。在某些实施方式中，盐是药学上可接受的盐。尽管如此，药学上不可接受的盐可具有诸如高结晶度的性质，其在本发明的实践中具有实用性，例如在本发明方法中有用的化合物的合成、纯化或配制过程中具有实用性。
合适的药学上可接受的酸加成盐可以由无机酸或有机酸制备。无机酸的实例包括硫酸盐、硫酸氢盐、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、碳酸、硫酸和磷酸(包括磷酸氢盐和磷酸二氢盐)。合适的有机酸可选自脂族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、羧酸和磺酸类有机酸，其实例包括甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、葡萄糖醛酸、马来酸、富马酸、丙酮酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸、邻氨基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、苯乙酸、扁桃酸、亚甲基双羟萘酸(embonic)(或帕莫酸(pamoic))、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、泛酸、磺胺酸、2-羟基乙磺酸、三氟甲磺酸、对甲苯磺酸、环己基氨基磺酸、硬脂酸、海藻酸、β-羟基丁酸、水杨酸、半乳糖二酸、半乳糖醛酸、甘油膦酸和糖精(saccharin)(例如糖精(saccharinate)、糖二酸盐(saccharate))。相对于本发明的任何化合物，盐可以由数分之一摩尔当量、一摩尔当量或多于一摩尔当量的酸或碱组成。
本发明化合物的合适的药学上可接受的碱加成盐包括例如铵盐和金属盐，其包括碱金属、碱土金属和过渡金属盐，例如钙、镁、钾、钠和锌盐。药学上可接受的碱加成盐还包括由碱性胺——例如N,N'-二苄基乙烯-二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(或N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因——制成的有机盐。所有这些盐可以由相应的化合物通过使例如适当的酸或碱与化合物反应制备。
方法
本发明提供了治疗或预防受试者中GPCR-表达(例如GPER-表达)和/或Myc-表达的癌症的方法，所述癌症例如但不限于黑素瘤、胰腺癌和/或肺癌(例如但不限于非小细胞肺癌)。在某些实施方式中，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的雌激素和/或GPCR激动剂——其增加肿瘤细胞分化，由此在受试者中GPCR-表达(例如GPER-表达)和/或Myc-表达的癌症得到治疗或预防。
在某些实施方式中，GPCR是GPER。在其他实施方式中，GPER激动剂包含G-1。在某些实施方式中，GPER激动剂选自雌二醇(E2)、他莫西芬、氟维司群和雷洛昔芬(也称为6-羟基-2-(4-羟基苯基)-苯并噻吩-3-基]-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-甲酮)。
在某些实施方式中，雌激素是模拟天然激素雌激素作用的任何天然或合成物质。本发明中考虑的雌激素的实例包括但不限于雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、雌四醇(E4)、17β-雌二醇、27-羟基胆固醇、脱氢表雄酮(DHEA)、7-氧代-DHEA、7α-羟基-DHEA、16α-羟基-DHEA、7β-羟基表雄酮、Δ4-雄烯二酮、Δ5-雄烯二醇、3α-雄甾烷二醇、3β-雄甾烷二醇、2-羟基雌酮、16-羟基雌酮、环戊丙酸雌二醇酯、戊酸雌二醇酯、乙酸雌二醇酯、苯甲酸雌二醇酯、乙炔基雌二醇(EE)、美雌醇、莫克雌醇、炔雌醚、己烯雌酚苯雌酚、己二烯雌酚、己二烯雌酚乙酸酯、己烯雌酚二丙酸酯、磷雌酚、己烷雌酚、美雌酚二丙酸酯、外源雌激素、植物雌激素和/或霉菌雌激素。
在某些实施方式中，雌激素和/或GPCR激动剂作为药物组合物施用于受试者，所述药物组合物进一步包含至少一种药学上可接受的载体。
在某些实施方式中，进一步给受试者施用至少一种抗癌治疗。抗癌治疗的实例包括但不限于化学疗法、放射疗法、手术和/或免疫检查点抑制剂。化学疗法的实例包括但不限于HDAC、替莫唑胺、达卡巴嗪(DTIC)、维莫非尼、达拉非尼和曲美替尼。免疫检查点抑制剂的实例包括但不限于PD-1抑制剂(即，派姆单抗、纳武单抗、抗PD-1)、PD-L1抑制剂(即阿特珠单抗、抗PD-L1)、CTLA-4抑制剂(即伊匹莫单抗、抗B7-1/B7-2、抗CTLA-4)、吲哚胺(2,3)-双加氧酶(IDO1/2)抑制剂、B7同源物3(B7-H3)抑制剂、淋巴细胞激活基因3(LAG3)抑制剂和TIGIT(具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)靶向抗体和试剂。在其他实施方式中，化学疗法或免疫检查点抑制剂与雌激素或GPCR激动剂共同施用或共同配制。
在某些实施方式中，雌激素或GPCR激动剂通过下列施用途径施用于受试者：吸入、口服、直肠、阴道、肠胃外、外用、透皮、肺、鼻内、颊、眼睛、鞘内、颅内和静脉内。在其他实施方式中，雌激素或GPCR激动剂是施用于受试者的唯一抗癌剂。在又其他实施方式中，雌激素或GPCR激动剂是以足以治疗或预防受试者中的癌症的量施用于受试者的唯一抗癌剂。
在某些实施方式中，癌症是乳腺癌。在其他实施方式中，癌症不是乳腺癌。在又其他实施方式中，癌症是卵巢癌。在又其他实施方式中，癌症不是卵巢癌。在又其他实施方式中，癌症是前列腺癌。在又其他实施方式中，癌症不是前列腺癌。在又其他实施方式中，癌症是去势抵抗性前列腺癌(CRPC)。在又其他实施方式中，癌症不是CRPC。在又其他实施方式中，癌症是子宫内膜癌。在又其他实施方式中，癌症不是子宫内膜癌。在又其他实施方式中，受试者是哺乳动物。在又其他实施方式中，哺乳动物是人。
本发明进一步提供选择患有癌症的患者——其将受益于用雌激素和/或GPCR激动剂(例如选择性GPCR激动剂)治疗——的方法。该方法包括从受试者的癌症中获得样本并确定来自该样本的至少一种癌细胞是否表达GPER和/或另一种GPCR。可以使用本文描述的任何方法或本领域已知的任何方法完成样品中GPER和/或另一种GPCR的检测和/或定量。在某些实施方式中，如果癌细胞表达GPER和/或另一种GPCR，则建议受试者接受如此癌症治疗，其包含雌激素和/或选择性GPER激动剂和/或另一种GPCR激动剂，任选地与至少一种免疫治疗剂和/或HDAC抑制剂组合。在其他实施方式中，如果癌细胞表达GPER和/或另一种GPCR，则向受试者施用如此癌症治疗，其包含雌激素和/或选择性GPER激动剂和/或另一种GPCR激动剂，任选地与至少一种免疫治疗剂和/或HDAC抑制剂组合。在其他实施方式中，如果癌细胞不表达GPER和/或另一种GPCR，则建议受试者不接受如此癌症治疗，其包含雌激素和/或选择性GPER激动剂和/或另一种GPCR激动剂，任选地与至少一种免疫治疗剂和/或HDAC抑制剂组合。在又其他实施方式中，如果癌细胞不表达GPER，则不向受试者施用如此癌症治疗，其包含雌激素和/或选择性GPER激动剂和/或另一种GPCR激动剂，任选地与至少一种免疫治疗剂和/或HDAC抑制剂组合。
制剂/施用
本发明药物组合物中活性成分、药学上可接受的载体和任何其他成分的相对量将根据所治疗的受试者的身份、大小和状况而变化。举例来说，组合物可包含约0.005％和约100％(w/w)之间的活性剂或其任何分数或倍数。
在某些实施方式中，可以施用可用于实施本发明方法的药物组合物以递送在1ng/kg/天和100mg/kg/天之间的剂量，诸如例如1-50mg/kg/天。在其他实施方式中，可以施用可用于实施本发明的药物组合物以递送在1ng/kg/天和1,000mg/kg/天之间的剂量。
包含本发明所考虑的化合物的组合物可以每天数次频繁地施用于哺乳动物，或者可以较不频繁地——例如每天一次、每周一次、每两周一次、每月一次，或者甚至更不频繁——例如每几个月一次甚至一年一次或更少——施用。
应当理解，在非限制性实例中，每天给药的化合物的量可以每天、隔天、每2天、每3天、每4天或每5天施用。例如，隔天施用每天0.5-5mg剂量可以在周一开始，第一个随后每天0.5-5mg剂量在周三施用，第二个随后每天0.5-5mg剂量在周五施用等等。剂量的频率对于技术人员来说是显而易见的，并且取决于许多因素，例如但不限于所治疗疾病的类型和严重程度、动物的类型和年龄等等。
尽管本文提供的药物组合物的描述主要涉及适合于对人类进行伦理施用的药物组合物，但本领域技术人员将理解，此类组合物通常适合施用于各种动物。修改适合于对人施用的药物组合物以便使该组合物适于施用于各种动物是很好理解的，并且普通技术的兽医药理学家可以仅通过普通的——如果有的话——实验来设计和进行这种修改。考虑施用本发明药物组合物的受试者包括但不限于人和其他灵长类动物、哺乳动物——包括商业上相关的哺乳动物，如牛、猪、马、绵羊、猫和狗。
在某些实施方式中，使用一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体配制包含本发明考虑的化合物的组合物。在某些实施方式中，本发明的药物组合物包含治疗有效量的至少一种本发明考虑的化合物和药学上可接受的载体。可用的药学上可接受的载体包括但不限于甘油、水、盐水、乙醇和其他药学上可接受的盐溶液，例如磷酸盐和有机酸盐。Remington’s Pharmaceutical Sciences(1991,Mack Publication Co.,New Jersey)中描述了这些和其他药学上可接受的载体的实例。
制剂可以与常规赋形剂——即适用于口服、肠胃外、鼻内、静脉内、皮下、肠内或本领域已知的任何其它合适施用方式的药学上可接受的有机或无机载体物质——混合使用。在某些实施方式中，施用包括外用施用。药物制品可以灭菌，并且如果需要，可以与助剂——例如润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、影响渗透压缓冲剂的盐、着色剂、调味剂和/或芳香物质等——混合。它们也可以根据需要与其他活性剂例如其他镇痛剂组合。
如本文所用，“另外的成分”包括但不限于以下一种或多种：赋形剂；表面活性剂；分散剂；惰性稀释剂；制粒和崩解剂；粘合剂；润滑剂；甜味剂；调味剂；着色剂；防腐剂；生理可降解的组合物，如明胶；含水载体和溶剂；油性载体和溶剂；悬浮剂；分散剂或润湿剂；乳化剂、润药；缓冲剂；盐；增稠剂；填料；乳化剂；抗氧化剂；抗生素；抗真菌剂；稳定剂；和药学上可接受的聚合或疏水材料。可以包括在本发明的药物组合物中的其他“另外的成分”是本领域已知的并且描述于例如Genaro,ed.(1985,Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,PA)，其通过引用并入本文。
外用施用
外用施用药物的障碍是表皮的角质层。角质层是由蛋白质、胆固醇、鞘脂、游离脂肪酸和各种其他脂质组成的高度抗性层，并且包括角质化活细胞。限制化合物穿过角质层的渗透速率(通量)的因素之一是可以加载或施加到皮肤表面上的活性物质的量。每单位面积皮肤施加的活性物质的量越大，皮肤表面和皮肤下层之间的浓度梯度越大，转而活性物质通过皮肤的扩散力越大。因此，含有较高浓度活性物质的制剂更可能导致活性物质穿透皮肤，并且与所有其他方面相同、具有较低浓度的制剂相比，更多活性物质且以更一致的速率穿透皮肤。
适于外用施用的制剂包括但不限于液体或半液体制品，例如搽剂，洗剂，水包油或油包水乳剂——例如乳膏、软膏或糊剂，以及溶液或悬浮液。这些制剂可以直接或通过使用拭子、涂药器、刮刀等，以及以透皮贴剂的形式施加于皮肤。在某些实施方式中，贴剂使通过洗涤、摩擦、刮擦和/或按摩皮肤造成的药物损失最小化。在其他实施方式中，贴剂增加药物通过皮肤的吸收，同时使皮肤暴露于药物最小化。
可以使用渗透增强剂。这些材料增加了药物穿透皮肤的速度。本领域的典型增强剂包括乙醇、甘油单月桂酸酯、PGML(聚乙二醇单月桂酸酯)、二甲基亚砜等。其它增强剂包括油酸、油醇、乙氧基二甘醇、月桂氮酮、链烷羧酸、二甲基亚砜、极性脂质或N-甲基-2-吡咯烷酮。用于外用递送本发明的一些组合物的一种可接受的载体可含有脂质体。脂质体的组成及其用途是本领域已知的(例如，美国专利号6,323,219)。
肠胃外施用
如本文所用，药物组合物的“肠胃外施用”包括任何施用途径：其特征在于物理破坏受试者的组织和通过组织中的破口施用药物组合物。因此，肠胃外施用包括但不限于通过注射组合物、通过手术切口施加组合物、通过组织穿透非手术伤口施加组合物等来施用药物组合物。具体地，考虑肠胃外施用包括但不限于皮下、静脉内、腹膜内、肌肉内、胸骨内注射和肾透析输注技术。
控制释放制剂和药物递送系统
在某些其他实施方式中，本发明的制剂可以是但不限于短期的、快速补偿的(rapid-offset)、以及受控的例如持续释放、延迟释放和脉冲释放制剂。
术语持续释放以其常规意义使用，是指药物制剂在延长的时间段内提供药物逐渐释放，并且——尽管不是必需的——可以导致在延长的时间段内药物的血液水平基本恒定。该时间段可以长达一个月或更长，并且应该是比以弹丸形式施用的相同量的药剂更长的释放。
对于持续释放，化合物可以用合适的聚合物或疏水材料——其为化合物提供持续释放性质——配制。因此，可用于本发明方法的化合物可以以微粒的形式施用，例如通过注射或通过植入以晶片或盘的形式施用。
在本发明的一个实施方式中，使用持续释放制剂将本发明化合物单独或与另一种药剂组合施用于患者。
术语延迟释放在本文中以其常规意义使用，是指药物制剂在药物施用后一段延迟之后提供药物的初始释放，并且——尽管不是必需的——可包括从约10分钟上至约12个小时的延迟。
术语脉冲释放在本文中以其常规意义使用，是指药物制剂以在药物施用后产生药物的脉冲血浆轮廓的方式提供药物释放。
术语立即释放以其常规意义使用，是指药物制剂在药物施用后立即提供药物释放。
如本文所用，短期是指药物施用后上至并包括约8小时、约7小时、约6小时、约5小时、约4小时、约3小时、约2小时、约1小时、约40分钟、约20分钟、约10分钟、或约1分钟的任何时间段和药物施用后其任何或全部或部分增量。
如本文所用，快速补偿是指药物施用后上至并包括约8小时、约7小时、约6小时、约5小时、约4小时、约3小时、约2小时、约1小时、约40分钟、约20分钟、约10分钟、或约1分钟的任何时间段和其任何或全部或部分增量。
本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验确定本文所描述的具体程序、实施方式、权利要求和实施例的许多等同物。这些等同物被认为是在本发明的范围内，并且由所附权利要求覆盖。例如，应该理解，利用本领域公认的替代方案并且仅使用常规实验修改反应条件——包括但不限于反应时间、反应尺寸/体积和实验试剂——例如溶剂、催化剂、压力、大气条件例如氮气氛和还原/氧化剂——在本申请的范围内。
应当理解，在本文无论何处提供值和范围，这些值和范围所涵盖的所有值和范围都包括在本发明的范围内。此外，本申请还考虑了落入这些范围内的所有值，以及值的范围的上限或下限。
以下实施例进一步说明了本发明的各方面。然而，它们决不是对本文所述的本发明的教导或公开内容的限制。
实施例
现在参考以下实施例描述本发明。提供这些实施例仅出于说明的目的，并且本发明不限于这些实施例，而是包括由于本文提供的教导而显而易见的所有变化。
实施例1：在体外和体内雌激素和G-1治疗减慢黑素瘤细胞增殖并驱动分化
在用雌激素或G-1——一种特异性GPER激动剂——处理后，小鼠和人黑素瘤细胞中的肿瘤细胞增殖都减慢。小鼠和人黑素瘤细胞系在体外用雌激素(25nM E2)(图4A-4F)、GPER激动剂G-1(100nM G1)或递送载体处理。测量细胞增殖和分化(黑色素产生)。结果显示在体外雌激素和G-1处理均减慢黑素瘤细胞增殖并驱动分化(图4A-4F)。
用雌激素或特异性GPER激动剂G-1处理的人和小鼠黑素瘤细胞在小鼠中生长更慢，并且形成显著更小的肿瘤(图5-6)。将小鼠(B16)和人(WM46)细胞系用雌激素、G-1或载体在体外预处理一周，然后以相同的数量注射到小鼠的左侧腹(载体处理的)或右侧腹(E2处理的)，诱导肿瘤形成(每组N＝5只小鼠)(图5)。14-16天后，对小鼠成像，收获肿瘤并称重。用雌激素预处理约3倍抑制体内肿瘤生长(图5)。类似地，用G-1处理抑制体内肿瘤生长(图6)。
短暂的雌激素暴露足以诱导表观遗传记忆，其维持更加分化的状态。正常的人黑素细胞接受雌激素的脉冲治疗——这由4天的雌激素治疗、然后8天的停药(withdraw)组成。RNAseq显示用雌激素短暂处理的黑素细胞维持所有主要黑素细胞分化标志物——包括酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白(TRP1)、黑皮素1受体(MC1R)、Melan-A(MLANA)和多巴色素互变异构酶(DCT)——的上调表达，并且降低了侵袭性黑素瘤标志物如前黑素体蛋白(PMEL)的表达(图3)。在蛋白质水平上黑素细胞分化标志物的量的变化甚至更加明显。雌激素处理的细胞也产生更多的色素，这表明与对照(载体处理的)细胞相比它们更加分化(图3)。
实施例2：多胎妊娠限制黑素瘤发生并驱动分化
细胞系和皮下肿瘤经常用于癌症研究，因为它们快速且容易，但它们可能不是生理上忠实的真人类疾病模型。本文描述了工程化的人异种移植模型，其提供了更好的人黑素瘤模型。
用慢病毒改造人黑素瘤异种移植物以表达已知与黑素瘤相关的突变癌蛋白进入正常人黑素细胞。用diBRAfV600E、CDK4R24C、dnp53R248W和hTERT转导原代黑素细胞(图7A)。接着，在体外建立器官型皮肤，然后移植到雌性小鼠的背部(图7B)。将小鼠分成两组，非繁殖和繁殖(每组N＝3只小鼠)，并在随后的15周内形成黑素瘤。收获组织并测定突变的基因。在非繁殖组中，观察到具有向上扩散的黑素细胞的大的增殖巢，其是径向生长期黑素瘤的特征(图7C))。将有限量的黑色素转移至表皮，这表明黑素细胞不再发挥其分化功能。在繁殖组中，未观察到大的增殖巢，并且看到转移至表皮的黑色素量的增加，这表明黑素细胞比繁殖对照更好地发挥其分化功能。总之，这表明多胎妊娠(本实验中有3例)可用于限制黑素瘤发生并驱动分化。
如图8A-8E所示，在移植物愈合后，将小鼠随机化并分成非繁殖或繁殖组，并且然后提供强力霉素饲料以在所有动物中诱导BRAFV600E致癌基因。在繁殖组中15周和3次连续妊娠(或非繁殖组中没有妊娠)后，收获人组织并进行组织学分析(图8A)。来自非繁殖组的移植物发展成黑素细胞肿瘤，其具有人黑素瘤的标志性特征，包括具有细胞异型性的大的有丝分裂活性的黑素细胞巢。相比之下，来自繁殖组的组织相对不明显并且主要包含静息的、单一的、不增殖的黑素细胞，其被限制在基底表皮层中。这些结果显示重复妊娠抑制BRaf-驱动的人黑素细胞瘤形成的生长(图8B-8D)。
完全分化的表皮黑素细胞的主要作用是产生保护皮肤免受紫外线辐射的黑色素。与大多数细胞类型一样，黑素细胞分化和增殖呈负相关，并且正常皮肤中的黑素细胞很少在循环毛囊外增殖。黑素瘤组织通常比正常黑素细胞或良性痣较少分化。在目前的异种移植研究中，与非繁殖组相比，妊娠与黑素细胞分化的增加相关，如相对缺乏增殖的黑素细胞和相应的表皮黑色素的增加所证明的。虽然发育黑素瘤的非繁殖组与繁殖组相比在移植皮肤中具有显著更多的黑素细胞，但是周围表皮角质形成细胞内的黑色素丰度显著降低(图8E)。因此，妊娠通过诱导黑素细胞分化来抑制黑素瘤的发展。
实施例3：GPER信号传导驱动正常人黑素细胞和黑素瘤中的稳定分化
为了测试妊娠相关激素是否诱导黑素细胞分化的长期变化——其可能影响其未来转化易感性，将原代人黑素细胞短暂暴露于雌激素或孕酮(图11A-11E)。雌激素驱动分化，其与黑色素产生增加相关，而孕酮具有相反的作用(图11A)。
激素停药后，孕酮处理的细胞迅速恢复到黑色素产生的基线水平。相反，雌激素处理的细胞在雌激素停药后仍然保持更加分化，并且在随后的50天内通过连续细胞分裂稳定地产生更多的黑色素。随后用孕酮处理通过短暂暴露于雌激素而分化的细胞子集。这逆转了雌激素的作用，并且黑色素的产生减少到初始孕酮处理时所见的亚基线水平。在孕酮停药后，这些细胞完全恢复到由初始雌激素暴露诱导的升高的分化状态。与细胞分化增加一致，雌激素暴露与经典黑素细胞分化抗原——包括酪氨酸酶和MC1R——的稳定增加相关(图11B)。这些结果表明，短暂雌激素诱导黑素细胞中持久、长期的分化程序。
为了测试短暂GPER信号传导是否在黑素瘤细胞中诱导持续的分化状态——其影响随后的体内肿瘤生长，在体外用雌激素、G-1或载体处理黑素瘤细胞，并且随后将相同数量的处理细胞注射到宿主小鼠中(图11C)。用雌激素或G-1预处理显著减少随后的肿瘤大小(图11D-11E)，这表明短暂GPER活化对肿瘤生长具有持久作用。
实施例4：GPER信号传导导致黑素瘤中C-Myc的失去
扩增c-Myc(一种拮抗分化和促进增殖、存活和逃避免疫监视的转录因子)是包括黑素瘤在内的人类癌症中最常见的遗传改变之一。GPER信号传导消耗c-Myc蛋白(图12，图片A-C)。
此外，GPER信号传导诱导相对生长停滞，这与小鼠和人黑素瘤细胞中Rb的磷酸化相关(图12，图片D)。面对GPER活化工程化以维持c-Myc蛋白的黑素瘤细胞对G-1具有抗性，这表明c-Myc失去是抗增殖GPER效应的主要介质(图12，图片E)。
GPER活化后的c-Myc失去是快速的并且PKA依赖性的，这表明经典的刺激性G蛋白-偶联受体信号传导使c-Myc蛋白不稳定(图12，图片F-G)。与此一致，c-Myc半衰期以蛋白酶体依赖性方式在GPER活化后显著缩短(图12，图片H-I)。
实施例5：体内G-1处理改变免疫调节蛋白
除了其在增殖和分化中的作用外，c-Myc还能正调节包括PDL1在内的多种抑制性免疫检查点调节剂的表达。黑素瘤细胞中的短暂药理学GPER活化导致c-Myc和PD-L1两者平行降低(图13A-13C)。在GPER激动剂存在下工程改造以维持c-Myc的细胞中，PD-L1被保留(图13G)。
实施例6：短暂GPER活化抑制增殖并增加对免疫疗法的反应
如本文所证明的，GPER信号传导诱导肿瘤细胞的稳定变化，其拮抗肿瘤增殖并降低免疫抑制蛋白的肿瘤细胞表达。因此，研究了GPER活化是否增强了免疫检查点阻断抑制剂的抗肿瘤活性。
为了确定肿瘤细胞固有的GPER信号传导是否影响黑素瘤对免疫检查点治疗的脆弱性，基于观察到GPER驱动的分化是长期的，进行了研究。在鼠科B16F10黑素瘤细胞中，G-1用于在体外激活GPER并驱动分化(图13D)。然后，将相同数量的载体或G-1处理的肿瘤细胞注射到同基因的C57BL/6小鼠中，并用αPD-1抗体或同种型抗体对照处理动物。
与对照相比，单独的G-1预处理抑制随后的肿瘤生长并延长存活期。αPD-1抗体单一疗法也同样延长了存活期。然而，G-1预处理与αPD-1抗体的组合显著延长了存活期，其超过单独使用任一种药剂所见的存活期，这表明肿瘤细胞中的GPER活性诱导肿瘤的持续变化，其足以改善全身施用αPD-1疗法的抗肿瘤活性(图13E-13F)。
实施例7：用G-1和aPD-1免疫疗法治疗携带黑素瘤的小鼠显著地延长存活期
为了确定在具有或不具有免疫检查点抑制剂的情况下，G-1是否具有作为全身递送药剂的治疗性效用，用皮下G-1、αPD-1抗体或两者处理携带B16F10黑素瘤的同基因小鼠，并且与用载体和同种型抗体对照(具体是非特异性同种型对照抗体2A3)处理的匹配小鼠比较存活(图14A)。在5-50天后评估总肿瘤体积。
G-1在小鼠中耐受良好，并且单一疗法使存活期延长至与αPD-1相同的程度。每种单一疗法和用αPD-1和G-1的组合治疗减慢肿瘤生长(图14B)。引人注目的是，与单独使用任一种药剂相比，αPD-1和G-1的组合治疗延长了存活期7倍，这表明显著的协同效应(图14C)。
尽管B16F10黑素瘤是黑素瘤免疫学研究中最常用的模型，并且实验结果已经在很大程度上平移至人类，但B16F10缺乏大多数人类黑素瘤中存在的BRaf或NRas癌驱动基因(oncodriver)突变。为了测试GPER信号传导在潜在地医学上更相关的模型中是否具有相似的抗黑素瘤活性，使用来自耶鲁大学小鼠黑素瘤集合(Yale University Mouse Melanomacollection)(YUMM)的遗传定义的黑素瘤细胞。该资源包含由已建立的遗传工程小鼠模型产生的黑素瘤系，其与C57BL/6背景特异性地回交以促进免疫学研究。将YUMM 1.7细胞(BRafV600E/wt Pten-/-Cdkn2-/-)注射到C57BL/6小鼠中并在肿瘤直径达到3至4mm(第14天)后，在具有和不具有αPD-1的情况下开始G-1处理(图14D)。
与用B16F10黑素瘤观察到的结果类似，G-1或αPD-1单一疗法导致适度但显著的存活增加，而组合治疗进一步显著地延长存活期，包括长期存活者(图14E-14F)。
实施例8：体内G-1处理改变肿瘤浸润性免疫细胞
本结果表明GPER抗肿瘤活性不依赖于肿瘤癌驱动基因。与GPER活化改变免疫浸润性质的假设一致，携带黑素瘤的小鼠中G-1治疗增加了几种免疫细胞亚群——其包括T细胞和NK细胞，这表明更稳健的炎症反应(图15A-15C)。
实施例9：G-1处理驱动组蛋白乙酰化并与黑素瘤中的HDAC抑制剂协同作用
为了开始鉴定GPER活化后稳定的黑素细胞分化下可能的表观遗传变化，使用质谱法获得雌激素处理的MC中组蛋白翻译后修饰的整体分析。与涉及CREB活性的机制一致，在由CREB结合配偶体CBP/P300——包括H3K122、H3K23和H3K18——调节的许多组蛋白乙酰化标记中观察到显著增加(在3个独立的生物学重复中)(图16A)。
相比之下，未由CBK/P300书写(write)的H3K9ac标记在雌激素处理后降低。由于组蛋白翻译后修饰——包括乙酰化——在其他环境中介导可遗传的转录记忆，在某些非限制性实施方式中，CBP/P300调节的组蛋白修饰负责维持跨细胞分裂的增强的分化的黑素细胞状态。与黑素瘤组织和致瘤黑素瘤细胞系相比，在良性人类痣和非致瘤性黑素瘤细胞中具有更高水平的CBP-书写组蛋白乙酰基标记。合在一起，这表明组蛋白乙酰化可以维持GPER刺激的黑素瘤细胞的分化、抗增殖、非致瘤状态。
组蛋白乙酰基标记通过几种组蛋白脱乙酰酶(HDAC)——其在许多癌症中异常地调节——除去。尽管HDAC抑制剂被批准作为用于皮肤淋巴瘤、骨髓瘤和胰腺癌的抗癌剂，但它们在黑素瘤中的实用性尚不清楚。在人体试验中，HDAC抑制剂(HDACi)通常仅作为单一治疗剂展示出适度的抗黑素瘤活性。HDAC效力可能受到以下事实的限制：在没有分化驱动因素(driver)的情况下进行试验以促进乙酰化标记在组蛋白或其他关键癌蛋白(例如c-Myc)——其然后由HDACi稳定——上的形成。不希望受任何理论的限制，HDAC抑制剂的抗癌作用可以通过组合药物方案——其也在功能关键位点处促进组蛋白乙酰化——增强。HDACi和GPER激动剂独立地促进黑素瘤细胞分化，并且还合作以增强彼此的活性(图16B-16C)。
实施例10：GPER信号传导减少体外和体内PDAC细胞增殖
胰腺癌在女性中比在男性中少见，并且在仅使用雌激素的激素疗法的使用者中也较少见，这表明GPER也可以在胰腺癌中具有肿瘤阻遏作用。使用新近获得的同基因胰腺导管腺癌(PDAC)细胞系组，检测GPER活化对c-Myc蛋白水平的影响。在暴露于G-1后，c-Myc和pRB在这些细胞系中减少，这与在黑素瘤细胞系中观察到的变化一致(图17A)。
除了这些信号分子的水平变化之外，这些细胞系的增殖速率也通过G-1的GPER活化而被抑制(图17B)。
为了证明全身G-1施用改变体内肿瘤生长，PDAC肿瘤在小鼠中生长18天，然后连续3天给予标准G-1剂(图17C)。
即使在治疗后4天的短暂随访时间，在2个独立的PDAC细胞系中肿瘤显著更小，这表明GPER活化可在PDAC中具有有效的抗肿瘤作用(图17D)。
实施例11：GPER信号传导减少体外和体内NSCLC细胞增殖并且与αPD-1免疫疗法具有组合效应
生殖史也会影响肺癌。女性患肺癌的降低风险与她们孩子的数量相关。为表明G-1/GPER信号传导在NSCLC系LLC1中具有活性，该系用G-1处理，并且在30分钟后观察到升高的pCREB水平(图18A)。
用G-1长期处理LLC1导致降低的增殖(图18B)和c-Myc蛋白减少(图18C)。
c-Myc的消耗迅速发生(图18D)，并且在另外的NSCLC系TC-1中也发生相同的信号传导效应(图18E)。
为了测试G-1是否具有体内活性并与PD-1免疫疗法协同作用，LLC1肿瘤在用皮下G-1、αPD-1抗体或两者处理的小鼠中生长，并且与用载体和同种型抗体对照处理的匹配小鼠比较存活。用G-1或αPD-1单一疗法最初减慢肿瘤生长(图18F)，但最终没有显著改变存活(图18G)。用G-1和αPD-1的组合疗法进一步减慢肿瘤生长(图18F)并且显著延长存活期(图18G)。
本文引用的每篇专利、专利申请和出版物的公开内容均通过引用整体并入本文。虽然已经参考具体实施方式公开了本发明，但是显而易见的是，在不脱离本发明的真实精神和范围的情况下，本领域的其他技术人员可以设计出本发明的其他实施方式和变型。所附权利要求旨在被解释为包括所有这样的实施方式和等同变型。

Claims (42)

1.一种治疗或预防受试者中Myc-表达的癌症的方法，所述方法包括向有需要的所述受试者施用治疗有效量的增加所述癌症中细胞分化的雌激素和/或G蛋白-偶联受体(GPCR)激动剂，其中所述受试者进一步共同施用至少一种免疫治疗剂。
2.权利要求1所述的方法，其中所述GPCR激动剂包含选择性G-蛋白偶联的雌激素受体(GPER)激动剂。
3.权利要求1所述的方法，其中所述Myc-表达的癌症是选自黑素瘤、伯基特淋巴瘤、白血病、肉瘤、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脑癌、成神经细胞瘤、成神经管细胞瘤、星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、甲状腺癌、肝癌、前列腺癌、食道癌、肾癌、膀胱癌和胆囊癌中的至少一种。
4.权利要求3所述的方法，其中所述Myc-表达的癌症是选自黑素瘤、胰腺癌和肺癌中的至少一种。
5.权利要求1所述的方法，其中所述免疫治疗剂包括免疫检查点抑制剂。
6.权利要求5所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂、TIGIT抑制剂、LAG3抑制剂、IDO(1/2)抑制剂和B7-H3抑制剂。
7.权利要求1所述的方法，其中将所述雌激素和/或GPCR激动剂和所述至少一种免疫检查点抑制剂共同施用于所述受试者。
8.权利要求7所述的方法，其中共同配制所述雌激素和/或GPCR激动剂和所述至少一种免疫检查点抑制剂。
9.一种治疗或预防受试者中Myc-表达的癌症的方法，所述方法包括向有需要的所述受试者施用治疗有效量的增加所述癌症中细胞分化的雌激素和/或G蛋白-偶联受体(GPCR)激动剂，其中所述受试者进一步共同施用至少一种组蛋白脱乙酰酶抑制剂(HDAC)。
10.权利要求9所述的方法，其中所述Myc-表达的癌症是选自黑素瘤、伯基特淋巴瘤、白血病、肉瘤、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脑癌、成神经细胞瘤、成神经管细胞瘤、星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、甲状腺癌、肝癌、前列腺癌、食道癌、肾癌、膀胱癌和胆囊癌中的至少一种。
11.权利要求10所述的方法，其中所述Myc-表达的癌症是选自黑素瘤、胰腺癌和肺癌中的至少一种。
12.权利要求9所述的方法，其中所述GPCR激动剂包含选择性G-蛋白偶联的雌激素受体(GPER)激动剂。
13.权利要求9所述的方法，其中所述至少一种HDAC抑制剂选自丙戊酸、伏立诺他、罗米地辛、曲古抑菌素A和帕比司他。
14.权利要求9所述的方法，其中将所述雌激素和/或GPCR激动剂和所述至少一种HDAC共同施用于所述受试者。
15.权利要求14所述的方法，其中共同配制所述雌激素和/或GPCR激动剂和所述至少一种HDAC。
16.一种治疗或预防受试者中癌症的方法，所述方法包括向有需要的所述受试者施用治疗有效量的增加所述癌症中细胞分化的雌激素和/或G蛋白-偶联受体(GPCR)激动剂，其中所述癌症选自黑素瘤、胰腺癌和肺癌。
17.权利要求16所述的方法，其中所述GPCR激动剂包含选择性G-蛋白偶联的雌激素受体(GPER)激动剂。
18.权利要求16所述的方法，其中所述雌激素和/或GPCR激动剂是施用于所述受试者的唯一抗癌剂。
19.权利要求16所述的方法，其中所述雌激素和/或GPCR激动剂是以足以治疗或预防所述受试者中的所述癌症的量施用于所述受试者的唯一抗癌剂。
20.权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述GPCR选自G-蛋白偶联的雌激素受体(GPER)、MC1R、CYSLTR2、F2R、HRH2、LPAR2/3/6、PTGER1、S1PR2、S1PR3和TBXA2R。
21.权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述GPCR选自GPER、F2R、PTGER1和TBXA2R。
22.权利要求1-19中任一项所述的方法，其中雌激素包括选自雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、雌四醇(E4)、17β-雌二醇、27-羟基胆固醇、脱氢表雄酮(DHEA)、7-氧代-DHEA、7α-羟基-DHEA、16α-羟基-DHEA、7β-羟基表雄酮、Δ4-雄烯二酮、Δ5-雄烯二醇、3α-雄甾烷二醇、3β-雄甾烷二醇、2-羟基雌酮、16-羟基雌酮、环戊丙酸雌二醇酯、戊酸雌二醇酯、乙酸雌二醇酯、苯甲酸雌二醇酯、乙炔基雌二醇(EE)、美雌醇、莫克雌醇、炔雌醚、己烯雌酚苯雌酚、己二烯雌酚、己二烯雌酚乙酸酯、二丙酸己烯雌酚二丙酸酯、磷雌酚、己烷雌酚、美雌酚二丙酸酯、外源雌激素、植物雌激素和霉菌雌激素，或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体中的至少一种。
23.权利要求20所述的方法，其中GPER激动剂包括选自G-1、他莫西芬、氟维司群和雷洛昔芬，或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体的至少一种。
24.权利要求20所述的方法，其中所述GPER激动剂包括选自下列的至少一种：
式(I)的分子：
其中在(I)中：
R1选自＝O、＝N-OH、＝N-NHC(＝O)(对甲氧基苯基)、＝N-NHC(＝O)CH(OMe)苯基和＝N-NH(5-碘-吡啶-2-基)；
R2选自C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基；
键a是单键或双键，使得：
如果键a是双键，则R3和R4是H，和
如果键a是单键，则R3选自H、-OH、-OAc和卤素；R4选自H、-OH、-OAc和-S(邻硝基苯基)；或R3和R4结合形成选自-CH2-、-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基；
R5选自H、苄基、C1-C4烷基和乙酰基；
R6选自H、卤素、-NO2、C1-C4烷基、-C≡CH、-C≡C-Si(CH3)3(或-C≡C-TMS)、-O-苄基、-OH、-OAc、C1-C4烷氧基、-COOH和-COO(C1-C4烷基)；
R7选自H、卤素、-NO2、C1-C4烷基、-OH、-OAc和C1-C4烷氧基；
R8选自H、卤素、-NO2、C1-C4烷基、-O-苄基、-N(R)(R)、-SR、-COOH、-COO(C1-C4烷基)、-OH、-OAc、C1-C4烷氧基、3-硫杂环丁二烯基-甲氧基、-SO2(吗啉代)和-OCH2CH＝CH2，其中每次出现的R独立地选自H和C1-C4烷基；
R9选自H、卤素、-NO2、C1-C4烷基、-OH、-OAc和C1-C4烷氧基，
或R8和R9结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-、-OC(CH3)2O-、-O(CH2)2O-、-O-CH＝CH-和-CH＝CH-O-的双基；
R10选自H、C1-C4烷基和卤素；
其中每次出现的苄基独立地任选地被选自C1-C4烷基、-OH、C1-C4烷氧基、卤素和-NO2的至少一种基团取代；
和式(II)的分子：
其中在(II)中：
R1选自＝O和＝N-OH；
R2是C1-C4烷基；
R5选自H、苄基和C1-C4烷基；
R8和R9独立地选自H和C1-C4烷氧基，或R8和R9结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基，
或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体、或其任何混合物。
25.权利要求20所述的方法，其中GPER激动剂包括选自下列的至少一种：
式(I-1)的分子：
其中在(I-1)中：
R1选自＝O和＝N-OH；
R2是C1-C4烷基；
键a是单键或双键，使得：
如果键a是双键，则R3和R4是H，和
如果键a是单键，则R3和R4独立地选自H和-OH，或R3和R4结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基；
R5选自H、苄基和C1-C4烷基；
R6选自H和卤素；
R8和R9独立地选自H和C1-C4烷氧基，或R8和R9结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基；和
式(II)的分子：
其中在(II)中：
R1选自＝O和＝N-OH；
R2是C1-C4烷基；
R5选自H、苄基和C1-C4烷基；
R7和R8独立地选自H和C1-C4烷氧基，或R7和R8结合形成选自-OCH2O-、-OCH(CH3)O-和-OC(CH3)2O-的双基，
或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体、或其任何混合物。
26.权利要求20所述的方法，其中所述GPER激动剂包含选自下列的至少一种：G-1；CMPD1(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD2(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-5-甲基-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD3(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-2,3,3a,4,5,9b-六氢-1H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD4(rel-1-((3aS,4R,9bR)-5-苄基-4-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD5(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-溴苯基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD6(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮肟)；CMPD7(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苯基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD8(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(6-氯苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-3a,4,5,9b-四氢-3H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD9(rel-1-((6R,6aS,7aS,10aR,10bR)-6-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-9,9-二甲基-6,6a,7,7a,10a,10b-六氢-5H-[1,3]间二氧杂环戊烯并[4',5':3,4]环戊二烯并[1,2-c]喹啉-2-基)乙-1-酮)；CMPD10(rel-1-((1R,2S,3aS,4R,9bR)-4-(6-溴苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-1,2-二羟基-2,3,3a,4,5,9b-六氢-1H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；CMPD11(rel-1-((3aS,4R,9bR)-4-(2-溴-4,5-二甲氧基苯基)-2,3,3a,4,5,9b-六氢-1H-环戊二烯并[c]喹啉-8-基)乙-1-酮)；和CMPD12(rel-1-((4S,5aS,6R,11aR)-4,5,5a,6,11,11a-六氢-4,6-桥亚甲基[1,3]间二氧杂环戊烯并[4',5':5,6]苯并[1,2-c]吖啶-8-基)乙-1-酮)，或其盐、溶剂化物、互变异构体、对映异构体或非对映异构体、或其任何混合物。
27.权利要求20所述的方法，其中所述GPCR激动剂选自下列：阿法诺肽(N-乙酰基-L-丝氨酰-L-酪氨酰-L-丝氨酰-L-正亮氨酰-L-α-谷氨酰-L-组氨酰-D-苯丙氨酰-L-精氨酰-L-色氨酰甘氨酰-L-赖氨酰-L-脯氨酰-L-缬氨酰胺)、N-甲基LTC4(N-甲基-5S-羟基-6R-(S-谷胱甘酰)-7E,9E,11Z,14Z-二十碳四烯酸)、TFLLR-NH2(Thr-Phe-Leu-Leu-Arg-NH2)、英普咪定(2-[3-(1H-咪唑-5-基)丙基]-1-[2-[(5-甲基-1H-咪唑-4-基)甲基巯基]乙基]胍)、碳酰胆碱(2-[(氨基羰基)氧基]–N,N,N-三甲基氯化乙铵)、硫前列酮((Z)-7-[(1R,3R)-3-羟基-2-[(E,3R)-3-羟基-4-苯氧基丁-1-烯基]-5-氧代环戊基]-N-甲基磺酰基庚-5-烯酰胺)、FTY720(2-氨基-2-[2-(4-辛基-苯基)-乙基]-丙烷-1,3-二醇盐酸盐)和U46619((E)-7-((1R,4R,5S,6R)-6-((S,Z)-3-羟基辛-1-烯-1-基)-2-氧杂双环[2.2.1]庚-5-基)庚-5-烯酸)。
28.权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述雌激素或GPCR激动剂作为药物组合物施用于所述受试者，所述药物组合物进一步包含至少一种药学上可接受的载体。
29.权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述受试者进一步被施用至少一种另外的抗癌治疗。
30.权利要求29所述的方法，其中所述至少一种另外的抗癌治疗包括化学疗法、工程化嵌合抗原受体(CAR)T-细胞、免疫检查点抑制剂和/或放射疗法。
31.权利要求30所述的方法，其中所述化学疗法选自组蛋白脱乙酰酶抑制剂(HDAC)、替莫唑胺、达卡巴嗪(DTIC)、维莫非尼、达拉非尼和曲美替尼。
32.权利要求30所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂、LAG3抑制剂、IDO(1/2)抑制剂、TIGIT抑制剂和B7-H3抑制剂。
33.权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述雌激素或GPCR激动剂通过至少一种选自下列的施用途径施用于所述受试者：吸入、口服、直肠、阴道、肠胃外、外用、透皮、肺、鼻内、颊、眼睛、鞘内、颅内和静脉内。
34.权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述受试者未患有所述癌症或未被诊断为患有所述癌症，并且其中所述雌激素和/或GPCR激动剂在3周或更短的时期内施用于所述受试者。
35.权利要求34所述的方法，其中所述雌激素或GPCR激动剂在2周或更短的时期内施用于所述受试者。
36.权利要求35所述的方法，其中所述雌激素或GPCR激动剂在1周或更短的时期内施用于所述受试者。
37.权利要求1-36中任一项所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。
38.权利要求37所述的方法，其中所述哺乳动物是人。
39.一种组合物，其包含(i)雌激素和/或GPCR激动剂和(ii)化学疗法、工程化CAR T-细胞和/或免疫检查点抑制剂。
40.权利要求39所述的组合物，其中所述免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂、LAG3抑制剂、IDO(1/2)抑制剂、TIGIT抑制剂和B7-H3抑制剂。
41.一种试剂盒，其包含(i)雌激素和/或GPCR激动剂和(ii)化学疗法、工程化CAR T-细胞、免疫检查点抑制剂和/或放射疗法，以及其用于治疗或预防受试者中的癌症的指导材料。
42.权利要求41所述的试剂盒，其中所述免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂、LAG3抑制剂、IDO(1/2)抑制剂、TIGIT抑制剂和B7-H3抑制剂。
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