CN109561712A - 直接喂饲的微生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于动物的大肠杆菌抑制的直接喂饲的微生物。更特别地，本发明涉及分离的芽孢杆菌菌株101、235、77、177和102，和具有这些菌株的所有识别特征的菌株，用于包括上述用途的用途。本发明也可用于植物的处理和食品加工。

Description

直接喂饲的微生物
相关申请的交叉参照
本申请依据35 U.S.C. § 119(e)要求美国临时申请序列号62/301,438 (2016年2月29日提交)和美国临时申请序列号62/364,271 (2016年7月19日提交)的优先权，其二者的公开内容通过参考以其全文明确地并入本文。
本公开内容的领域
本发明涉及用于动物的大肠杆菌(E. coli)抑制的直接喂饲的微生物。更特别地，本发明涉及分离的芽孢杆菌(Bacillus)菌株101、235、77、177和102，和具有这些菌株的所有识别特征的菌株，用于包括上述用途的用途。本发明也可用于植物的处理和食品加工。
本发明的背景和概述
本发明涉及用于动物的大肠杆菌抑制的直接喂饲的微生物(DFM)组合物和方法。动物的胃肠道不断受到在饲料、草垫和环境中存在的大量细菌、病毒和原生动物的攻击。胃肠道具有由物理、化学和免疫学防线组成的复杂系统来对抗这些潜在的病原体。有益的细菌是这个系统的重要部分，因为它们为动物提供有助于建立(或重建)正常的细菌分布的细菌，它们强化动物的免疫系统，并且它们有助于与疾病(例如，动物中由大肠杆菌引起的疾病)作斗争。由于预防和治疗动物的大肠杆菌病的重要性，对于农业产业和对于人类食物供应，需要抑制动物例如农业动物中的大肠杆菌的直接喂饲的微生物菌株。
申请人已经开发出导致动物中大肠杆菌抑制的直接喂饲的微生物。本文描述的直接喂饲的微生物和包含直接喂饲的微生物的组合物通过给动物，例如农业动物提供大肠杆菌抑制作用，提供商业利益。此外，本文描述的直接喂饲的微生物组合物导致抗生素使用的减少或排除，这降低了动物饲养的总成本。
提供了用于抑制动物中的大肠杆菌的方法和组合物。在各个实施方案中，所述动物可选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种，和伴侣动物。在其中所述动物是家禽物种的实施方案中，家禽物种可以是肉用仔鸡(broiler chicken)。在其中所述动物是猪物种的实施方案中，猪物种可选自育成猪(grow finish pig)、保育猪(nursery pig)、母猪(sow)，和原种猪(breeding stock pig)。
在各个实施方案中，用于本文描述的方法的组合物可以是商业包装、动物饲料组合物的饲料添加剂、动物的饮用水的添加剂或动物饲料组合物(如，完全饲料)，各自包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No.B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株。
在本文描述的方法的一个实施方案中，提供了一种喂养动物的方法。该方法包括给予动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102(NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株，其中所述芽孢杆菌菌株导致动物的大肠杆菌抑制。
在本文描述的方法的另一个实施方案中，提供了一种控制大肠杆菌的危害作用的方法。该方法包括给予动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水，和控制所述动物中的大肠杆菌的危害作用的步骤，所述添加剂包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株。
下列条款及其组合，提供在此描述的本发明的各个另外的说明性方面。在本专利申请的任何其它部分描述的各个实施方案，包括标题为“说明性实施方案的详细描述”的部分和实施例，适用于下文编号条款中描述的本发明的任何下列实施方案。
1. 一种喂养动物的方法，该方法包括给予动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株，其中所述芽孢杆菌菌株导致动物的大肠杆菌抑制。
2. 条款1的方法，其中所述动物选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。
3. 条款2的方法，其中家禽物种是肉用仔鸡。
4. 条款1-3的任一项的方法，其中大肠杆菌抑制作用预防动物的大肠杆菌病。
5. 条款1-3的任一项的方法，其中大肠杆菌抑制作用减轻动物的大肠杆菌病。
6. 条款2的方法，其中所述动物是猪物种且所述猪物种选自育成猪、保育猪、母猪和原种猪。
7. 条款1-6的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
8. 条款1-7的任一项的方法，其还包括给予所述动物另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
9. 条款1-8的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株。
10. 条款1-8的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL No.B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株。
11. 条款1-8的任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，在单一的组合物中组合给予。
12. 条款1-8的任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，以分开的组合物组合给予。
13. 条款1-12的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约5.0 x 1012 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
14. 条款1-12的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约1.0 x 107 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
15. 条款1-14的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以大于约7.0 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
16. 条款1-15的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约7.3 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
17. 条款1-16的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株从高品质育成猪分离。
18. 条款1-17的任一项的方法，其还包括给予所述动物抗生素的步骤。
19. 条款1-18的任一项的方法，其还包括给予所述动物选自半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合的酶的步骤。
20. 条款19的方法，其中所述酶是NSPase或植酸酶。
21. 条款1-20的任一项的方法，其中所述动物中的微生物平衡被维持。
22. 条款2的方法，其中所述动物是伴侣动物。
23. 条款22的方法，其中所述动物是犬科动物物种或猫科动物物种。
24. 条款2的方法，其中所述动物是母猪，芽孢杆菌菌株在哺乳期间给予。
25. 条款2的方法，其中所述动物是母猪，芽孢杆菌菌株在怀孕期间给予。
26. 条款1-25的任一项的方法，其中饲料组合物每日给予所述动物。
27. 条款1的方法，其中所述动物选自鸡、猪、马、小马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭、鱼、甲壳纲动物及其组合。
28. 一种控制大肠杆菌的危害作用的方法，该方法包括给予动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水，和控制所述动物中的大肠杆菌的危害作用的步骤，所述添加剂包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株。
29. 条款28的方法，其中所述动物选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。
30. 条款29的方法，其中家禽物种是肉用仔鸡。
31. 条款28-30的任一项的方法，其中控制大肠杆菌的危害作用包括抑制动物的大肠杆菌病。
32. 条款28-30的任一项的方法，其中控制大肠杆菌的危害作用包括减轻动物的大肠杆菌病。
33. 条款29的方法，其中所述动物是猪物种且所述猪物种选自育成猪、保育猪、母猪和原种猪。
34. 条款28-33的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
35. 条款28-34的任一项的方法，其还包括给予所述动物另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
36. 条款28-35的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL No.B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株。
37. 条款28-35的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL No.B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株。
38. 条款28-35的任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，在单一的组合物中组合给予。
39. 条款28-35的任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，以分开的组合物组合给予。
40. 条款28-39的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约5.0 x 1012 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
41. 条款28-40的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约1.0 x 107 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
42. 条款28-41的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以大于约7.0 x 104CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
43. 条款28-42的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约7.3 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
44. 条款28-43的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株从高品质育成猪分离。
45. 条款28-44的任一项的方法，其还包括给予所述动物抗生素的步骤。
46. 条款28-45的任一项的方法，其还包括给予所述动物选自半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合的酶的步骤。
47. 条款46的方法，其中所述酶是NSPase或植酸酶。
48. 条款28-47的任一项的方法，其中控制大肠杆菌的危害作用包括维持动物中的微生物平衡。
49. 条款29的方法，其中所述动物是伴侣动物。
50. 条款49的方法，其中所述动物是犬科动物物种或猫科动物物种。
51. 条款29的方法，其中所述动物是母猪，芽孢杆菌菌株在哺乳期间给予。
52. 条款29的方法，其中所述动物是母猪，芽孢杆菌菌株在怀孕期间给予。
53. 条款28-52的任一项的方法，其中饲料组合物每日给予所述动物。
54. 条款28的方法，其中所述动物选自鸡、猪、马、小马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭、鱼、甲壳纲动物及其组合。
55. 一种包含分离的芽孢杆菌菌株的商业包装，所述菌株选自芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRLNo. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No.B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合。
56. 一种包含分离的芽孢杆菌菌株的用于动物饲料的饲料添加剂，所述菌株选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No.B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合。
57. 一种用于动物的饮用水的添加剂，其包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No.B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株。
58. 一种包含分离的芽孢杆菌菌株的动物饲料组合物，所述菌株选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77(NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRLNo. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77(NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合。
59. 条款55-58的任一项的商业包装、饲料添加剂、饲料组合物，或用于动物的饮用水的添加剂，其中所述芽孢杆菌菌株造成选自预防大肠杆菌病、减轻大肠杆菌病、维持所述动物的微生物平衡及其组合的影响。
60. 条款55-59的任一项的商业包装、饲料添加剂、饲料组合物，或用于动物的饮用水的添加剂，其中所述芽孢杆菌菌株减轻动物的大肠杆菌病。
61. 条款56或57的饲料添加剂或用于动物的饮用水的添加剂，其呈现浓缩物的形式。
62. 条款56或57的饲料添加剂或用于动物的饮用水的添加剂，其呈现超浓缩物的形式。
63. 条款56-62的任一项的饲料添加剂、饲料组合物，或用于动物的饮用水的添加剂，其呈现干燥的形式。
64. 条款63的饲料组合物，其呈现丸剂的形式。
65. 条款55的商业包装，其中所述菌株存在于选自粉末、液体和丸剂形式的形式中。
66. 条款55-65的任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其还包含用于所述芽孢杆菌菌株的载体。
67. 条款66的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其中载体选自糠、稻壳、盐、糊精及其组合。
68. 条款55-67的任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其以袋装形式存在。
69. 条款68的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其中所述袋是塑料袋。
70. 条款55-69的任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其还包括一种或多种芽孢杆菌菌株的使用说明书。
71. 条款68-70的任一项的商业包装、饲料添加剂、饲料组合物，或用于动物的饮用水的添加剂，其存在于20-磅袋中。
72. 条款68-70的任一项的商业包装、饲料添加剂、饲料组合物，或用于动物的饮用水的添加剂，其存在于50-磅袋中。
73. 条款56、57、59-63，或66-72的任一项的饲料添加剂或用于动物的饮用水的添加剂，其呈现为粉末的形式。
74. 条款56、57、59-60，或68-70的任一项的饲料添加剂或用于动物的饮用水的添加剂，其呈现为液体的形式。
75. 条款55-74的任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其在一个商业用途的容器里。
76. 条款75的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其中容器包括塑料。
77. 条款75的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其中容器包括纸。
78. 条款55-77的任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其还包含粘合剂。
79. 条款78的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其中粘合剂选自粘土、酵母细胞壁成分、硅酸铝，和葡聚糖，或其组合。
80. 一种喂养动物的方法，该方法包括给予动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株。
81. 条款80的方法，其中所述动物选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。
82. 条款81的方法，其中家禽物种是肉用仔鸡。
83. 条款80-82的任一项的方法，其中所述菌株导致大肠杆菌抑制，从而预防动物的大肠杆菌病。
84. 条款80-82的任一项的方法，其中所述菌株导致大肠杆菌抑制，从而减轻动物的大肠杆菌病。
85. 条款81的方法，其中所述动物是猪物种且所述猪物种选自育成猪、保育猪、母猪和原种猪。
86. 条款80-85的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
87. 条款80-86的任一项的方法，其还包括给予所述动物另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
88. 条款80-87的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL No.B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株。
89. 条款80-87的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL No.B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株。
90. 条款80-87的任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，在单一的组合物中组合给予。
91. 条款80-87的任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，以分开的组合物组合给予。
92. 条款80-91的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约5.0 x 1012 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
93. 条款80-92的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约1.0 x 107 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
94. 条款80-93的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以大于约7.0 x 104CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
95. 条款80-94的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约7.3 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
96. 条款80-95的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株从高品质育成猪分离。
97. 条款80-96的任一项的方法，其还包括给予所述动物抗生素的步骤。
98. 条款80-97的任一项的方法，其还包括给予所述动物选自半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合的酶的步骤。
99. 条款98的方法，其中酶是NSPase或植酸酶。
100. 条款80-99的任一项的方法，其中所述动物中的微生物平衡被维持。
101. 条款81的方法，其中所述动物是伴侣动物。
102. 条款101的方法，其中所述动物是犬科动物物种或猫科动物物种。
103. 条款81的方法，其中所述动物是母猪，芽孢杆菌菌株在哺乳期间给予。
104. 条款81的方法，其中所述动物是母猪，芽孢杆菌菌株在怀孕期间给予。
105. 条款80-104的任一项的方法，其中饲料组合物每日给予所述动物。
106. 条款80的方法，其中所述动物选自鸡、猪、马、小马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭、鱼、甲壳纲动物及其组合。
107. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)或具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株。
108. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)或具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株。
109. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)，或具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株。
110. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中包括芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)、235 (NRRL No. B-67219)、77 (NRRL No. B-67274)、177 (NRRL No.B-67275)和102 (NRRL No. B-67276)的分离的芽孢杆菌菌株以分开的组合物组合给予。
111. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中包括芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)、235 (NRRL No. B-67219)、77 (NRRL No. B-67274)、177 (NRRL No.B-67275)和102 (NRRL No. B-67276)的分离的芽孢杆菌菌株在单一的组合物中组合给予。
112. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中包括芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)、235 (NRRL No. B-67219)、177 (NRRL No. B-67275)和102 (NRRLNo. B-67276)的分离的芽孢杆菌菌株以分开的组合物组合给予。
113. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中包括芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)、235 (NRRL No. B-67219)、177 (NRRL No. B-67275)和102 (NRRLNo. B-67276)的分离的芽孢杆菌菌株在单一的组合物中组合给予。
说明性实施方案的详细描述
提供了抑制动物，例如农业动物中的大肠杆菌的方法和组合物。在各个实施方案中，用于本文描述的方法的组合物可以是商业包装、用于动物饲料组合物的饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂，或动物饲料组合物(如，完全饲料)，各自包含选自芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRLNo. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No.B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株。
在本文描述的方法的一个实施方案中，提供了一种喂养动物的方法。该方法包括给予动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102(NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株，其中所述芽孢杆菌菌株引起动物的大肠杆菌抑制。
在本文描述的方法的另一个实施方案中，提供了一种控制大肠杆菌危害作用的方法。该方法包括给予动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水，和控制动物中的大肠杆菌的危害作用的步骤，所述添加剂包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株。
下列条款及其组合，提供在此描述的本发明的各个另外的说明性方面。在标题为“说明性实施方案的详细描述”的这个部分描述的各个实施方案适用于下文编号条款中描述的本发明的任何下列实施方案。
1. 一种喂养动物的方法，该方法包括给予动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株，其中所述芽孢杆菌菌株导致动物的大肠杆菌抑制。
2. 条款1的方法，其中所述动物选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。
3. 条款2的方法，其中家禽物种是肉用仔鸡。
4. 条款1-3的任一项的方法，其中大肠杆菌抑制作用预防动物的大肠杆菌病。
5. 条款1-3的任一项的方法，其中大肠杆菌抑制作用减轻动物的大肠杆菌病。
6. 条款2的方法，其中所述动物是猪物种且所述猪物种选自育成猪、保育猪、母猪和原种猪。
7. 条款1-6的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
8. 条款1-7的任一项的方法，其还包括给予所述动物另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
9. 条款1-8的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株。
10. 条款1-8的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL No.B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株。
11. 条款1-8的任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，在单一的组合物中组合给予。
12. 条款1-8的任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，以分开的组合物组合给予。
13. 条款1-12的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约5.0 x 1012 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
14. 条款1-12的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约1.0 x 107 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
15. 条款1-14的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以大于约7.0 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
16. 条款1-15的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约7.3 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
17. 条款1-16的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株从高品质育成猪分离。
18. 条款1-17的任一项的方法，其还包括给予所述动物抗生素的步骤。
19. 条款1-18的任一项的方法，其还包括给予所述动物选自半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合的酶的步骤。
20. 条款19的方法，其中酶是NSPase或植酸酶。
21. 条款1-20的任一项的方法，其中所述动物中的微生物平衡被维持。
22. 条款2的方法，其中所述动物是伴侣动物。
23. 条款22的方法，其中所述动物是犬科动物物种或猫科动物物种。
24. 条款2的方法，其中所述动物是母猪，芽孢杆菌菌株在哺乳期间给予。
25. 条款2的方法，其中所述动物是母猪，芽孢杆菌菌株在怀孕期间给予。
26. 条款1-25的任一项的方法，其中饲料组合物每日给予所述动物。
27. 条款1的方法，其中所述动物选自鸡、猪、马、小马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭、鱼、甲壳纲动物及其组合。
28. 一种控制大肠杆菌的危害作用的方法，该方法包括给予动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水，和控制所述动物中的大肠杆菌的危害作用的步骤，所述添加剂包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株。
29. 条款28的方法，其中所述动物选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。
30. 条款29的方法，其中家禽物种是肉用仔鸡。
31. 条款28-30的任一项的方法，其中控制大肠杆菌的危害作用包括抑制所述动物的大肠杆菌病。
32. 条款28-30的任一项的方法，其中控制大肠杆菌的危害作用包括减轻动物的大肠杆菌病。
33. 条款29的方法，其中所述动物是猪物种且所述猪物种选自育成猪、保育猪、母猪和原种猪。
34. 条款28-33的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
35. 条款28-34的任一项的方法，其还包括给予所述动物另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
36. 条款28-35的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL No.B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株。
37. 条款28-35的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL No.B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株。
38. 条款28-35的任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，在单一的组合物中组合给予。
39. 条款28-35的任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，以分开的组合物组合给予。
40. 条款28-39的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约5.0 x 1012 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
41. 条款28-40的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约1.0 x 107 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
42. 条款28-41的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以大于约7.0 x 104CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
43. 条款28-42的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约7.3 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
44. 条款28-43的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株从高品质育成猪分离。
45. 条款28-44的任一项的方法，其还包括给予所述动物抗生素的步骤。
46. 条款28-45的任一项的方法，其还包括给予所述动物选自半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合的酶的步骤。
47. 条款46的方法，其中所述酶是NSPase或植酸酶。
48. 条款28-47的任一项的方法，其中控制大肠杆菌的危害作用包括维持所述动物中的微生物平衡。
49. 条款29的方法，其中所述动物是伴侣动物。
50. 条款49的方法，其中所述动物是犬科动物物种或猫科动物物种。
51. 条款29的方法，其中所述动物是母猪，芽孢杆菌菌株在哺乳期间给予。
52. 条款29的方法，其中所述动物是母猪，芽孢杆菌菌株在怀孕期间给予。
53. 条款28-52的任一项的方法，其中饲料组合物每日给予所述动物。
54. 条款28的方法，其中所述动物选自鸡、猪、马、小马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭、鱼、甲壳纲动物及其组合。
55. 一种商业包装，其包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株。
56. 一种包含分离的芽孢杆菌菌株的用于动物饲料的饲料添加剂，所述菌株选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No.B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合。
57. 一种用于动物的饮用水的添加剂，其包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No.B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株。
58. 一种包含分离的芽孢杆菌菌株的动物饲料组合物，所述菌株选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77(NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRLNo. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77(NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合。
59. 条款55-58的任一项的商业包装、饲料添加剂、饲料组合物，或用于动物的饮用水的添加剂，其中所述芽孢杆菌菌株造成选自预防大肠杆菌病、减轻大肠杆菌病、维持所述动物的微生物平衡及其组合的影响。
60. 条款55-59的任一项的商业包装、饲料添加剂、饲料组合物，或用于动物的饮用水的添加剂，其中芽孢杆菌菌株减轻动物的大肠杆菌病。
61. 条款56或57的饲料添加剂或用于动物的饮用水的添加剂，其呈浓缩物的形式。
62. 条款56或57的饲料添加剂或用于动物的饮用水的添加剂，其呈超浓缩物的形式。
63. 条款56-62的任一项的饲料添加剂、饲料组合物，或用于动物的饮用水的添加剂，其呈干燥的形式。
64. 条款63的饲料组合物，其呈丸剂的形式。
65. 条款55的商业包装，其中所述菌株呈选自粉末、液体和丸剂形式的形式。
66. 条款55-65的任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其还包含用于芽孢杆菌菌株的载体。
67. 条款66的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其中所述载体选自糠、稻壳、盐、糊精及其组合。
68. 条款55-67的任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其呈现为袋装的形式。
69. 条款68的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其中所述袋是塑料袋。
70. 条款55-69的任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其还包括一种或多种芽孢杆菌菌株的使用说明书。
71. 条款68-70的任一项的商业包装、饲料添加剂、饲料组合物，或用于动物的饮用水的添加剂，其存在于20-磅袋中。
72. 条款68-70的任一项的商业包装、饲料添加剂、饲料组合物，或用于动物的饮用水的添加剂，其存在于50-磅袋中。
73. 条款56、57、59-63，或66-72的任一项的饲料添加剂或用于动物的饮用水的添加剂，其以粉末形式存在。
74. 条款56、57、59-60，或68-70的任一项的饲料添加剂或用于动物的饮用水的添加剂，其以液体形式存在。
75. 条款55-74的任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其存在于商业用途的容器里。
76. 条款75的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其中容器包括塑料。
77. 条款75的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其中容器包括纸。
78. 条款55-77的任一项的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其还包含粘合剂。
79. 条款78的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物，其中粘合剂选自粘土、酵母细胞壁成分、硅酸铝，和葡聚糖，或其组合。
80. 一种喂养动物的方法，该方法包括给予动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株。
81. 条款80的方法，其中所述动物选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。
82. 条款81的方法，其中家禽物种是肉用仔鸡。
83. 条款80-82的任一项的方法，其中所述菌株导致大肠杆菌抑制，从而预防动物的大肠杆菌病。
84. 条款80-82的任一项的方法，其中所述菌株导致大肠杆菌抑制，从而减轻动物的大肠杆菌病。
85. 条款81的方法，其中所述动物是猪物种且所述猪物种选自育成猪、保育猪、母猪和原种猪。
86. 条款80-85的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
87. 条款80-86的任一项的方法，其还包括给予所述动物另一种细菌菌株的步骤，所述另一种细菌菌株选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合。
88. 条款80-87的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL No.B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株。
89. 条款80-87的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL No.B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株。
90. 条款80-87的任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，在单一的组合物中组合给予。
91. 条款80-87的任一项的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，以分开的组合物组合给予。
92. 条款80-91的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约5.0 x 1012 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
93. 条款80-92的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约1.0 x 107 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
94. 条款80-93的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以大于约7.0 x 104CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
95. 条款80-94的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约7.3 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
96. 条款80-95的任一项的方法，其中所述芽孢杆菌菌株从高品质育成猪分离。
97. 条款80-96的任一项的方法，其还包括给予所述动物抗生素的步骤。
98. 条款80-97的任一项的方法，其还包括给予所述动物选自半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合的酶的步骤。
99. 条款98的方法，其中所述酶是NSPase或植酸酶。
100. 条款80-99的任一项的方法，其中所述动物中的微生物平衡被维持。
101. 条款81的方法，其中所述动物是伴侣动物。
102. 条款101的方法，其中所述动物是犬科动物物种或猫科动物物种。
103. 条款81的方法，其中所述动物是母猪，芽孢杆菌菌株在哺乳期间给予。
104. 条款81的方法，其中所述动物是母猪，芽孢杆菌菌株在怀孕期间给予。
105. 条款80-104的任一项的方法，其中饲料组合物每日给予所述动物。
106. 条款80的方法，其中所述动物选自鸡、猪、马、小马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭、鱼、甲壳纲动物及其组合。
107. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)或具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株。
108. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)或具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株。
109. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)，或具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株。
110. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中包括芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)、235 (NRRL No. B-67219)、77 (NRRL No. B-67274)、177 (NRRL No.B-67275)和102 (NRRL No. B-67276)的分离的芽孢杆菌菌株以分开的组合物组合给予。
111. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中包括芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)、235 (NRRL No. B-67219)、77 (NRRL No. B-67274)、177 (NRRL No.B-67275)和102 (NRRL No. B-67276)的分离的芽孢杆菌菌株在单一的组合物中组合给予。
112. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中包括芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)、235 (NRRL No. B-67219)、177 (NRRL No. B-67275)和102 (NRRLNo. B-67276)的分离的芽孢杆菌菌株以分开的组合物组合给予。
113. 条款1-8、28-35，或80-87的任一项的方法，其中包括芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)、235 (NRRL No. B-67219)、177 (NRRL No. B-67275)和102 (NRRLNo. B-67276)的分离的芽孢杆菌菌株在单一的组合物中组合给予。
在各个实施方案中，给予本文描述的饲料添加剂、饲料组合物，或饮用水的动物可选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。在其中所述动物是伴侣动物的实施方案中，伴侣动物可以是，例如，犬科动物物种或猫科动物物种。在其中所述动物是猪物种的实施方案中，猪物种可选自育成猪、保育猪、母猪和原种猪。在各个示例性实施方案中，所述动物可选自鸡(如，肉鸡或蛋鸡)、猪、马、小马、牛、火鸡、山羊、绵羊、鹌鹑、野鸡、鸵鸟、鸭、鱼(如，罗非鱼、鲶鱼、比目鱼或鲑鱼)、甲壳纲动物(如，虾或蟹)及其组合。在另一个实施方案中，芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177(NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合，可为了植物健康而被用来处理植物并可被用来处理土壤、直接处理植物或灌溉植物。
在本文描述的任何实施方案中，所述菌株可单独或以任何组合的方式给予，或可以是本文描述的任何组合物的形式，以便菌株单独或以任何组合的方式存在于本文描述的组合物中。示例性的组合包括一组分离的芽孢杆菌菌株，包括芽孢杆菌菌株101 (NRRL No.B-67218)、102 (NRRL No. B-67276)、235 (NRRL No. B-67219)、77 (NRRL No. B-67274)和177 (NRRL No. B-67275)，和一组分离的芽孢杆菌菌株，包括芽孢杆菌菌株101 (NRRLNo. B-67218)、235 (NRRL No. B-67219)、177 (NRRL No. B-67275)和102 (NRRL No. B-67276)。
在一个实施方案中，提供一种喂养动物的方法。该方法包括给予动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRLNo. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株。
在另一个实施方案中，提供一种喂养动物的方法。该方法包括给予动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRLNo. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株，其中所述芽孢杆菌菌株造成动物的大肠杆菌抑制。
在本发明的一个实施方案中，可给予有效量的所述芽孢杆菌菌株以抑制动物中的大肠杆菌。如本文所用的，“抑制大肠杆菌”可意味着减轻大肠杆菌病、预防大肠杆菌病、维持动物中的正常微生物平衡，减少动物中有害大肠杆菌的数量，降低大肠杆菌在动物中的活性，或减少动物的大肠杆菌病的症状，或其组合。所谓“有效量”意指如下所述的通过任何机制能够抑制大肠杆菌或能够控制大肠杆菌的危害作用的芽孢杆菌菌株(例如，菌株101，或235，或77，或177，或102)的量。
在本文描述的实施方案中，其中包含芽孢杆菌菌株101，和/或235，和/或77，和/或177，和/或102的本发明的组合物被给予动物，组合物优选地以饲料组合物或以饮用水经口服给予动物，但可利用本领域技术人员已知的任何其它有效的施用方法。在一个说明性实施方案中，所述芽孢杆菌菌株101，和/或235，和/或77，和/或177，和/或102以加入到动物的饮用水中的添加剂的形式提供。
在另一个说明性实施方案中，所述芽孢杆菌菌株101，和/或235，和/或77，和/或177，和/或102以一种加入到饲料组合物中的饲料添加剂的形式提供。饲料组合物可含有芽孢杆菌菌株101，和/或235，和/或77，和/或177，和/或102与动物饲料共混物，包括任何本领域-公认的动物饲料共混物或本文描述的任何动物饲料共混物一起的混合物。如本文所用的，“饲料组合物”或“动物饲料组合物”意指包含芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102与动物饲料共混物，以及可用于饲料组合物的任选的任何其它成分，包括其它细菌菌株，例如其它芽孢杆菌菌株或乳酸杆菌(Lactobacillus)菌株一起的混合物的饲料组合物。
任何动物饲料共混物，包括本领域已知的那些和本文描述的那些，可根据本专利申请中描述的方法和组合物使用，例如菜籽粉、棉籽粉、大豆粉、玉米粉、大麦、小麦、青贮饲料和窖藏半干草饲料。在各个实施方案中，所述动物饲料共混物可用芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102补充，但其它成分可任选地加入到动物饲料共混物中，包括其它细菌菌株，例如其它芽孢杆菌菌株或乳酸杆菌菌株。
在各个说明性实施方案中，所述动物饲料共混物的任选的成分包括糖和复杂的碳水化合物例如水溶性和不溶于水的单糖、二糖和多糖。其它任选的成分包括谷物干馏残液、脂肪(例如，粗脂肪)、磷、碳酸氢钠、石灰石、盐、植酸盐、钙、钠、硫、镁、钾、铜、铁、锰、锌、灰、鱼油、源自鱼粉的油、生种子(如，亚麻籽)、抗氧化剂和淀粉。在另一个实施方案中，可以矿物预混物的形式添加矿物质。
可加入到动物饲料共混物中的任选的氨基酸成分有精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、酪氨酸乙基HCl、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸钠、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、半胱氨酸乙基HCl，和类似物，及其盐。可任选地添加的维生素有硫胺HCl、核黄素、吡哆醇HCl、烟酸、烟酰胺、肌醇、氯化胆碱、泛酸钙、生物素、叶酸、抗坏血酸，和维生素A、B、K、D、E等。在另一个实施方案中，维生素可以维生素预混合物的形式添加。在又一个实施方案中，蛋白质成分可被加入到动物饲料共混物中并包括从肉粉、骨粉或鱼粉获得的蛋白质、液体鸡蛋或粉状鸡蛋、鱼溶物、粗蛋白质等。
在另一个说明性方面，本领域已知的任何药物成分可被加入到动物饲料共混物或用于动物的饮用水的添加剂中，例如抗生素。在各个实施方案中，抗生素选自氨比西林、氯霉素、环丙沙星、克林霉素、四环素、氯四环素、Denagard™、BMD™、Carbadox™、Stafac™、红霉素、左氧氟沙星、甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲噁唑、甲氧苄氨嘧啶、达托霉素、利福平、Tylan™、Pulmotil™、万古霉素及其组合。在另一个实施方案中，所述动物饲料共混物、饲料组合物、饲料添加剂，或用于动物的饮用水的添加剂可不含抗生素。
在另一个说明性实施方案中，一种或多种酶可被加入到动物饲料共混物中。在各个实施方案中，可被添加的酶包括半乳糖苷酶、植酸酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、其组合，和任何其它提高饲料组合物对大肠杆菌抑制的有效性或控制大肠杆菌的危害作用的酶。在又一个实施方案中，酵母、真菌(例如，曲霉属(Aspergillus)或木霉属(Trichoderma))，或微量营养素可被加入到动物饲料中。适合加入到用于动物的饮用水的添加剂的任何上述成分可作为如本文描述的用于动物饮用水的添加剂的成分加入。
在各个说明性实施方案中，芽孢杆菌菌株(如，芽孢杆菌菌株101，和/或235，和/或77，和/或177，和/或102)，或除了芽孢杆菌菌株101，和/或235，和/或77，和/或177，和/或102外还加入的任何其它细菌菌株，可以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约5.0 x 1012CFU/克饲料组合物的剂量或以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约1.0 x 107 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。在其它实施方案中，所述芽孢杆菌菌株(如，芽孢杆菌菌株101，和/或235，和/或77，和/或177，和/或102)以大于约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约1.1 x 103 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约1.25 x 103 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约1.5 x 103 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约1.75 x 103 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约1.0 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约2.0 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约3.0 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约4.0 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约5.0 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约6.0 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约7.0 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约8.0 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约1.0 x 105 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约1.0 x 106 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约1.0 x 107 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约1.0 x 108 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约1.0 x 109 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约1.0 x 1010 CFU/克饲料组合物的剂量，大于约1.0 x 1011 CFU/克饲料组合物的剂量，或大于约1.0 x 1012 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。在又一个实施方案中，所述芽孢杆菌菌株(如，芽孢杆菌菌株101，和/或235，和/或77，和/或177，和/或102)以约7.3 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。在另一个实施方案中，所述芽孢杆菌菌株(如，芽孢杆菌菌株101，和/或235，和/或77，和/或177，和/或102)，或除了芽孢杆菌菌株101，和/或235，和/或77，和/或177，和/或102外还加入的任何其它细菌菌株，可以约1.0 x 102 CFU/克饲料组合物-约5.0 x 1012 CFU/克饲料组合物的剂量，或约1.0 x 102 CFU/克饲料组合物-约1.0x 107 CFU/克饲料组合物的剂量，或以大于约1.0 x 102 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
在各个实施方案中，根据本文描述的方法和组合物使用的芽孢杆菌菌株(如，芽孢杆菌菌株101，和/或235，和/或77，和/或177，和/或102)可选自芽孢杆菌菌株101 (NRRLNo. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株，和具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株。芽孢杆菌菌株MDG 101和芽孢杆菌菌株MDG 235于2016年1月4日保藏于农业研究机构培养物保藏中心(NRRL)，National Center for Agricultural Utilization Research,Agricultural Research Service, USDA, 1815 North University Street, Peoria,Illinois 61604-3999，且分别给出保藏号B-67218和B-67219。芽孢杆菌菌株MGL77、芽孢杆菌菌株MGL177和芽孢杆菌菌株MGL102于2016年6月7日保藏于农业研究机构培养物保藏中心(NRRL)，National Center for Agricultural Utilization Research, AgriculturalResearch Service, USDA, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604-3999，且分别给出保藏号B-67274、B-67275和B-67276。保藏在根据布达佩斯条约为专利程序的目的对微生物保藏的国际认可的规定下进行。NRRL菌株命名为MDG 101、MDG 235、MGL77、MGL177和MGL102，其分别相当于芽孢杆菌菌株101、235、77、177和102，如本申请中所称谓的。
任何这些菌株可单独或以饲料组合物(如，包含动物饲料共混物的完全饲料)或用于动物的饮用水的形式组合给予。在一个实施方案中，多种菌株以单一组合物的形式组合给予。在另一个实施方案中，多种菌株以分开的组合物的形式组合给予。在一个说明性实施方案中，任何这些菌株从高品质育成猪分离。
在另一个实施方案中，在上述段落中描述的一种或多种芽孢杆菌菌株(如，芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102)可连同选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合的另一种细菌菌株一起给予动物。在又一个实施方案中，在上述段落中描述的一种或多种芽孢杆菌菌株(如，芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102)可连同有效抑制动物的大肠杆菌的任何其它细菌菌株一起给予动物。
如本文所用的“具有”芽孢杆菌菌株101，或芽孢杆菌菌株235，或芽孢杆菌菌株77，或芽孢杆菌菌株177，或芽孢杆菌菌株102“的所有识别特征的菌株”可以是具有芽孢杆菌菌株101，或芽孢杆菌菌株235，或芽孢杆菌菌株77，或芽孢杆菌菌株177，或芽孢杆菌菌株102的所有识别特征(如，基于对应于芽孢杆菌菌株101，或芽孢杆菌菌株235，或芽孢杆菌菌株77，或芽孢杆菌菌株177，或芽孢杆菌菌株102的DNA指纹的DNA分析的DNA指纹；对应于芽孢杆菌菌株101，或芽孢杆菌菌株235，或芽孢杆菌菌株77，或芽孢杆菌菌株177，或芽孢杆菌菌株102的酶活性；对应于芽孢杆菌菌株101，或芽孢杆菌菌株235，或芽孢杆菌菌株或77、芽孢杆菌菌株或177，或芽孢杆菌菌株102的抗微生物活性；对应于芽孢杆菌菌株101，或芽孢杆菌菌株235，或芽孢杆菌菌株77，或芽孢杆菌菌株177，或芽孢杆菌菌株102的抗生素敏感性和耐受性模式，或其组合)的突变体菌株。在替代实施方案中，突变可以是自然突变，或基因工程突变。在另一个实施方案中，“具有”芽孢杆菌菌株101，或芽孢杆菌菌株235，或芽孢杆菌菌株77，或芽孢杆菌菌株177，或芽孢杆菌菌株102“的所有识别特征的菌株”可以是例如通过从芽孢杆菌菌株101，或芽孢杆菌菌株235，或芽孢杆菌菌株77，或芽孢杆菌菌株177，或芽孢杆菌菌株102分离一种或多种质粒并将一种或多种质粒引入另一种细菌，如另一种芽孢杆菌菌株产生的菌株，只要一种或多种质粒含有提供芽孢杆菌菌株101，或芽孢杆菌菌株235，或芽孢杆菌菌株77，或芽孢杆菌菌株177，或芽孢杆菌菌株102的识别特征(如，基于对应于芽孢杆菌菌株101，或芽孢杆菌菌株235，或芽孢杆菌菌株77，或芽孢杆菌菌株177，或芽孢杆菌菌株102的DNA指纹的DNA分析的DNA指纹)的DNA。
包含芽孢杆菌菌株101，和/或235，和/或77，和/或177，和/或102的饲料组合物或饮用水可给予所述动物有效抑制大肠杆菌或控制大肠杆菌的危害作用，或其组合的任何时间段。例如，在一个实施方案中，饲料组合物或饮用水可每日提供给动物。在备选的实施方案中，饲料组合物或饮用水可在哺乳期间和/或怀孕期间给予动物。上述给予饲料组合物或饮用水的时间段是非限制性实例，并且应理解，可采用确定有效抑制大肠杆菌或控制大肠杆菌的危害作用，或其组合的任何时间段或给药时间表。
如本文描述的，一个方法实施方案是一种通过给予所述动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水喂养动物的方法，所述添加剂包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRLNo. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株，其中所述芽孢杆菌菌株控制大肠杆菌的危害作用。任何适用的上述实施方案都可以适用于本实施方案。
在该实施方案中，“控制大肠杆菌的危害作用”可意味着减轻大肠杆菌病、预防大肠杆菌病、维持动物中的正常微生物平衡，减少动物中有害大肠杆菌的数量，降低大肠杆菌在动物中的活性，或减少动物的大肠杆菌病的症状，或其组合。所谓“有效量”意指如上所述通过任何机制能够控制大肠杆菌的危害作用的芽孢杆菌菌株(例如，菌株101，或235，或77，或177，或102)的量。
在本发明的另外的实施方案中，提供包含芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102的组合物。在一个实施方案中，提供包含选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRLNo. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No.B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRLNo. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株的商业包装。
在另一个实施方案中，提供用于动物饲料的包含分离的芽孢杆菌菌株的饲料添加剂，所述芽孢杆菌菌株选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRLNo. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No.B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRLNo. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合。
在又一个实施方案中，提供用于动物饮用水的包含分离的芽孢杆菌菌株的添加剂，所述芽孢杆菌菌株选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRLNo. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No.B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRLNo. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合。
在本发明的又一个说明性方面，提供包含分离的芽孢杆菌菌株的动物饲料组合物，所述芽孢杆菌菌株选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235(NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRLNo. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No.B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRLNo. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合。
在另一个实施方案中，选自芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177(NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101(NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77 (NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合的分离的芽孢杆菌菌株可用于维持植物健康、水产养殖，或用于食品加工。
在一个实施方案中，加入动物饲料共混物中以产生完全饲料组合物的饲料添加剂可与动物饲料共混物混合，例如，使用自动微营养素输送系统，或例如，通过手工称重和添加来达到本文描述的任何剂量的芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株77、芽孢杆菌菌株177，和芽孢杆菌菌株102，用于以完全饲料组合物的形式给予动物。混合也可通过本领域已知的用于使直接喂饲的微生物与动物饲料共混物合并以获得均匀的混合物的任何其它合适的方法进行。在各个实施方案中，混合可进行任何合适的时间段(例如，约1-约4分钟)。在其中芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102以用于动物的饮用水的添加剂的形式存在的实施方案中，芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102可以呈现为例如，粉末、液体或丸剂的形式，并可使用本领域已知的任何合适的方法与饮用水混合，以获得本文描述的任何剂量的芽孢杆菌菌株101、芽孢杆菌菌株235、芽孢杆菌菌株77、芽孢杆菌菌株177，或芽孢杆菌菌株102，用于以动物的饮用水给予所述动物。芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102也可以粉末、液体或丸剂的形式直接经口腔(即，通过口腔插入)喂给所述动物。
在本文描述的任何组合物实施方案中，芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102可在动物中导致选自抑制大肠杆菌或控制大肠杆菌的危害作用的影响。这些影响是可造成芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102的影响类型的非限制性实例。
在一个说明性方面，饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物可呈现为商业包装的形式。在另一个说明性实施方案中，饲料添加剂或用于动物的饮用水的添加剂，或在商业包装中的芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102可呈浓缩物(例如，约1 x 108-约5 x109 CFU/g)或超浓缩物(例如，约1 x 1010-约5 x 1012 CFU/g)的形式。在另一个实施方案中，饲料添加剂、饲料组合物，或用于动物的饮用水的添加剂，或在商业包装的组合物中的芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102，可呈现为干燥的形式(如，粉末)、丸剂形式、液体形式、表面敷料(top-dressing)的形式，或凝胶的形式，或任何其它适合的形式。
在又一个实施方案中，在商业包装形式中的菌株可以例如，干燥的形式(如，粉末或冻干的形式)、丸剂形式或液体形式存在。
在另一个说明性实施方案中，商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物还可包含用于所述芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102的载体。所述载体可选自糠、稻壳、盐、矿物油、糊精(例如，麦芽糖精)、乳清、糖、石灰石、干燥淀粉、铝硅酸钠、植物油及其组合。在另一个实施方案中，所述载体可以是本领域已知用于直接喂饲的微生物的任何合适的载体。在另一个实施方案中，商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物还可包含粘合剂，例如粘土、酵母细胞壁成分、硅酸铝、葡聚糖，或其它已知的粘合剂。在另一个实施方案中，商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物还可包含无机/有机粘合剂、精油，和/或有机酸。
在还有的其它实施方案中，包含芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102的商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物存在于一个商业用途的容器里。在各个实施方案中，容器可以是例如袋(如，20-磅袋、50-磅袋、2-盎司袋、1-磅袋，或1-千克袋)、小袋、鼓形圆桶、瓶或盒子。在说明性方面，用于包含芽孢杆菌菌株101，和/或芽孢杆菌菌株235，和/或芽孢杆菌菌株77，和/或芽孢杆菌菌株177，和/或芽孢杆菌菌株102的商业包装、饲料添加剂、用于动物饮用水的添加剂，或饲料组合物的容器可包括塑料、金属、箔、纸、纤维或纸板(如，塑料桶、纸袋、箔袋、纤维鼓筒等)。商业包装、饲料添加剂、用于动物的饮用水的添加剂，或饲料组合物还可包括一种或多种芽孢杆菌菌株的使用说明书。
以下实施例仅仅是为了说明性目的。实施例是非限制性的，并不打算以任何方式限制本发明。
实施例1
酶活性筛选
这个实施例描述利用平板培养基筛选方法以检测DFM菌株101和235中的酶活性。酶测定培养基板通过补充胰蛋白酶大豆琼脂与0.5%和1%之间的各种底物来制备，所述底物包括多糖(玉米淀粉、羧甲基纤维素或木聚糖)、蛋白质(酪蛋白)和脂质(三丁酸甘油酯)。从新鲜的过夜培养物中获得的目的芽孢杆菌菌株(包括DFM菌株101和235)被点样在平板上(5 µL)并在各种温度下培养至多48小时。对于蛋白质和脂质琼脂板，无需进一步的处理，在产生酶的菌落周围可见清除区带。含多糖的平板用革兰氏碘液(Gram' s iodine)染色1分钟以看见清除区带。测量ZOC直径和菌落直径，但活性的是/否评分被用于筛选目的。48小时后，观察到DFM菌株101和235二者对蛋白酶、淀粉酶和木聚糖酶活性均为阳性并且在三丁酸甘油酯琼脂(脂肪酶)上观察到强阳性。
本文描述的芽孢杆菌菌株具有酶活性，包括但不限于淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶和脂肪酶。
实施例2
使用交叉划线法的抗菌筛选
对于测试的兼性厌氧病原体(大肠杆菌)，采用以下方案。从冰冻甘油库存中，以改良的BHI琼脂板的中心向下的单个1 cm宽的线性划线，接种目的芽孢杆菌菌株(101和235)。于37℃，将芽孢杆菌-划线平板有氧接种24小时，直至出现粗划线生长。在生物安全柜里，对要测试易感性的生物体大肠杆菌，以垂直于芽孢杆菌划线(至多1 mm)的线划线，并于37℃、有氧条件下培养24小时。每板使用的交错交叉线条不超过5条。培养平板，然后检查围绕初始的芽孢杆菌划线的抑制区带，每个抑制区带的宽度以毫米测量。MDG菌株101和235一致地抑制大肠杆菌。到目前为止，对58株不同的致病性大肠杆菌菌株测试了对菌株101的易感性，和对43株不同的菌株测试了对235的易感性。这些菌株的多种特征不同，包括毒素的存在和数量、在SMAC琼脂上的菌落形态、溶血素产生和美国各地的采样位置。菌株101在有氧和无氧生长时成功地抑制了58株大肠杆菌分离株中的46株，而菌株235在有氧和无氧生长时成功地抑制了43株大肠杆菌分离株中的42株。
实施例3
DFM菌株101和235的培养物生长
在本实施例中，DFM菌株101和235的生长可通过培养来实现。在小规模上，TSB或营养肉汤可用来培养DFM菌株101和235。
可使用23克营养琼脂(BD 213000)和1000 ml DI水生产琼脂培养基，接着于121℃高压消毒。肉汤培养基可使用8.0克营养肉汤(BD 234000)和1000 ml DI水生产，接着于121℃高压消毒。
为了培养DFM菌株101，使DFM菌株101的纯培养物在营养琼脂板上划线，并允许于32℃生长48小时。此后，将单一菌落在营养肉汤培养基中接种。于37℃和230-240 rpm培养单一菌落16-24小时。最后，使培养物在营养琼脂板上划线，以检查形态学。
为了培养DFM菌株235，使DFM菌株235的纯培养物在营养琼脂板上划线，并允许于32℃生长48小时。此后，将单一菌落在营养肉汤培养基中接种。于37℃和230-240 rpm培养单一菌落16-24小时。最后，使培养物在营养琼脂板上划线，以检查形态学。
实施例4
使用交叉划线法的抗菌筛选
对于测试的大肠杆菌，采用在实施例2中描述的方案。MGL菌株77、177和102一致地抑制大肠杆菌。到目前为止，测试了15株不同的致病性大肠杆菌菌株对菌株77、177和102的易感性。菌株77在有氧生长时成功地抑制了15株大肠杆菌分离株中的11株，菌株177在有氧生长时成功地抑制了15株大肠杆菌分离株中的12株，而菌株102在有氧生长时成功地抑制了15株大肠杆菌分离株中的15株(见下表1)。
表1。

Claims (20)

1. 一种喂养动物的方法，该方法包括给予动物包含有效量的添加剂的饲料组合物或饮用水的步骤，所述添加剂包含分离的选自以下的芽孢杆菌(Bacillus)菌株：芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)、芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)、芽孢杆菌菌株77(NRRL No. B-67274)、芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)、芽孢杆菌菌株102 (NRRLNo. B-67276)、具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株77(NRRL No. B-67274)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株177 (NRRL No. B-67275)的所有识别特征的菌株、具有芽孢杆菌菌株102 (NRRL No. B-67276)的所有识别特征的菌株及其组合，其中所述芽孢杆菌菌株导致动物的大肠杆菌(E. coli)抑制。
2.权利要求1的方法，其中所述动物选自家禽物种、猪物种、牛物种、羊物种、马物种和伴侣动物。
3.权利要求2的方法，其中家禽物种是肉用仔鸡。
4.权利要求1的方法，其中所述大肠杆菌抑制预防动物的大肠杆菌病。
5.权利要求1的方法，其中所述大肠杆菌抑制减轻动物的大肠杆菌病。
6.权利要求2的方法，其中所述动物是猪物种且所述猪物种选自育成猪、保育猪、母猪和原种猪。
7.权利要求1的方法，其中所述芽孢杆菌菌株产生选自α-半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、木聚糖酶、纤维素酶及其组合的酶。
8.权利要求1的方法，其还包括给予所述动物选自另一种芽孢杆菌菌株、乳酸细菌菌株及其组合的另一种细菌菌株的步骤。
9. 权利要求1的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株。
10. 权利要求1的方法，其中给予的菌株是芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株。
11. 权利要求1的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，在单一的组合物中组合给予。
12. 权利要求1的方法，其中芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)，或具有芽孢杆菌菌株101 (NRRL No. B-67218)的所有识别特征的菌株，和芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)，或具有芽孢杆菌菌株235 (NRRL No. B-67219)的所有识别特征的菌株，以分开的组合物组合给予。
13. 权利要求1的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约5.0 x 1012 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
14. 权利要求1的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约1.0 x 103 CFU/克饲料组合物-约1.0 x 107 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
15. 权利要求1的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以大于约7.0 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
16. 权利要求1的方法，其中所述芽孢杆菌菌株以约7.3 x 104 CFU/克饲料组合物的剂量在饲料组合物中给予。
17.权利要求1的方法，其中所述芽孢杆菌菌株从高品质育成猪分离。
18.权利要求1的方法，其还包括给予所述动物抗生素的步骤。
19.权利要求1的方法，其还包括给予所述动物选自半乳糖苷酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、半纤维素酶、阿拉伯木聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、NSPase、植酸酶及其组合的酶的步骤。
20.权利要求19的方法，其中所述酶是NSPase或植酸酶。
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