CN109549936A

CN109549936A - 虫草酸在制备预防或治疗肺动脉高压的药物中的应用

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Publication number: CN109549936A
Application number: CN201910070554.1A
Authority: CN
Inventors: 雷桅; 陈晓盈; 何原; 税晓容; 朱莹; 黄石安; 陈灿
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2019-01-25
Filing date: 2019-01-25
Publication date: 2019-04-02

Abstract

本发明涉及虫草酸在制备预防或治疗肺动脉高压的药物中的应用，属于中药资源、天然药物、临床药理、化合物药理技术领域。本发明提供了虫草酸在制备预防或治疗肺动脉高压的药物中的应用。本发明的虫草酸能促进肺动脉内皮细胞增殖、减轻肺动脉内皮细胞在低氧下的凋亡，对肺动脉高压所致右心室肥厚、肺血管重构、肺小动脉管壁增厚、管腔狭窄有明显的症状减轻作用，能用于制备预防或治疗肺动脉高压的药物。

Description

虫草酸在制备预防或治疗肺动脉高压的药物中的应用

技术领域

本发明涉及虫草酸在制备预防或治疗肺动脉高压的药物中的应用，属于中药资源、天然药物、临床药理、化合物药理技术领域。

背景技术

肺动脉高压(PAH)是一组特发的由某些疾病引起的肺血流动力学异常的疾病，主要表现为肺血管阻力增加、肺血管重构、原位血栓形成，最终可导致右心室肥厚，并进行性发展为右心衰竭直至死亡，是极严重的慢性肺循环疾病，也是肺源性心脏病的关键环节。肺动脉高压致残率和病死率很高、预后极差，与恶性肿瘤相仿，而且尚未有特异性治疗药物和标准化治疗方案，因此被称为心血管病中的癌症，造成这一现状的根本原因还是人们对肺动脉高压发病机制缺乏足够深入的认识。

肺动脉高压防治是目前亟待研究和解决的重大难题，至今仍缺乏理想药物，而且在临床实践还长期存在靶向药物耐药问题，必须适时更换药物或联合治疗，从而给肺动脉高压治疗和预后康复带来严峻挑战。因此，针对肺动脉高压发病过程中的主要病理基础——肺血管重构，通过研究多通路的交互作用和协同效应，能够全面系统地阐释肺动脉高压发生的新机制，并为肺动脉高压防治提供新思路和新方向。中医药及其天然活性成分具有独特药理作用、多靶点效应、安全健康和价格适宜等优势，在治疗肺动脉高压及改善生活质量等方面均展示出重要价值和广阔前景。

冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis(syn.Cordyceps sinensis)是青藏高原特色名贵药材，与人参、鹿茸并称为著名的“中药三宝”，具有十分重大的药用和经济价值，其主要活性成分包括虫草酸等。早在公元710年，古籍《月王药珍》首次提及冬虫夏草可治愈肺部疾病，而公元780年的《藏本草》则记载了其两个主要的传统药效“润肺”和“补肾”。《中华人民共和国药典》2010年版(国家药典委员会，2010)记载，其性味归经为“甘，平，归肺、肾经”，功能主治是“补肺益肾，止血化痰”。上世纪70年代以来，人们陆续发现冬虫夏草及其提取物在抗炎、免疫调节、抑制肿瘤、清除自由基、抗菌抗病毒和治疗白血病方面有独特疗效，部分中成药或保健品已进入临床试验。而在心血管领域，冬虫夏草还具有显著的降压、强心、阻碍RNA/DNA合成和提高酪氨酸激酶(TPK)活性等功能，以及增强心肺系统的耐缺氧能力。但至今还未见其在肺动脉高压的防治和药理等方面的报道。

公开号为CN103622985A的专利公开了一种苦龙胆酯苷治疗肺动脉高压的新作用及其应用，但大剂量苦龙胆酯苷会产生麻醉作用；公开号为CN1319526C的专利公开了一种大豆异黄酮在制备防治缺氧性肺动脉高压症药物中的应用，但大豆异黄酮作为一种植物雌激素也存在一定副作用；公开号为CN102824339A的专利公开了丁酸钠在制备缺氧性肺动脉高压防治药物中的应用，但其作用效果有限。

至今尚未发现冬虫夏草及其有效成分虫草酸用于制备治疗肺动脉高压药物的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供虫草酸在制备预防或治疗肺动脉高压的药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：虫草酸在制备预防或治疗肺动脉高压的药物中的应用。

作为本发明所述应用的优选实施方式，所述药物为促进肺动脉内皮细胞增殖、减轻肺动脉内皮细胞在低氧下的凋亡的药物。

作为本发明所述应用的优选实施方式，所述肺动脉高压为动脉性肺动脉高压、左心疾病所致肺动脉高压、缺氧和/或肺部疾病引起的肺动脉高压、慢性血栓栓塞性肺动脉高压、多种机制和/或不明机制引起的肺动脉高压中的至少一种。

作为本发明所述应用的优选实施方式，所述药物为预防或治疗肺动脉高压所致的右心室肥厚、肺源性心脏病或肺血管重构的药物。

作为本发明所述应用的优选实施方式，所述虫草酸为植物提取物的天然产物或人工化学合成的化合物。

第二方面，本发明提供了一种预防或治疗肺动脉高压的药物，所述药物含有虫草酸。

作为本发明所述预防或治疗肺动脉高压的药物的优选实施方式，所述药物还含有药学上可接受的载体。

作为本发明所述预防或治疗肺动脉高压的药物的优选实施方式，所述药学上可接受的载体为稀释剂、赋形剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、粘合剂、表面活性剂、吸收促进剂、润滑剂中的至少一种。

作为本发明所述预防或治疗肺动脉高压的药物的优选实施方式，所述药物的剂型为口服制剂或注射制剂。

作为本发明所述预防或治疗肺动脉高压的药物的优选实施方式，所述药物的剂型为注射液、注射用冻干粉针剂、大输液、软胶囊剂、滴丸、丸剂、颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液或乳剂。

作为本发明所述预防或治疗肺动脉高压的药物的优选实施方式，所述药物为虫草酸与其他预防或治疗肺动脉高压的药物联合使用。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明的虫草酸能促进肺动脉内皮细胞增殖、减轻肺动脉内皮细胞在低氧下的凋亡，对肺动脉高压所致右心室肥厚、肺血管重构、肺小动脉管壁增厚、管腔狭窄有明显的症状减轻作用，能用于制备预防或治疗肺动脉高压的药物。

附图说明

图1为不同浓度虫草酸对肺动脉内皮细胞活性影响的统计图。

图2为采用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测后细胞凋亡变化情况的统计图。

图3为采用TUNEL法流式细胞术检测后细胞凋亡变化情况图。

具体实施方式

为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如《分子克隆》(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1虫草酸对肺动脉内皮细胞活性的干预作用

1.实验材料

实验对象：人肺动脉内皮细胞(HPAECs)购于science cell公司，使用生长良好的对数生长期第6代HPAECs，经胰酶消化后接种，待细胞长至70％左右时，用无血清的DMEM低糖培养基饥饿化处理18h，然后分别常氧、低氧、低氧+药物干预。

主要试剂：虫草酸、胎牛血清、PBS(磷酸缓冲溶液)、胰酶、DMEM低糖培养基、ECM完全培养基、CCK-8试剂盒。

主要仪器：细胞培养皿、细胞培养箱、96孔板、显微镜、生物安全柜、酒精灯、巴氏管、15ml/50ml离心管、移液器、酒精棉球、酶标仪。

2.实验方法

用ECM完全培养基将对数生长期的HPAEC细胞接种于96孔板中，100μL/孔，37℃、5％CO₂培养。待细胞长至50％左右，同步化12h后，给予不同浓度(25μM、50μM、100μM、200μM、400μM)虫草酸处理肺动脉内皮细胞，分别放入低氧培养箱，1％O₂缺氧48小时后，吸去培养皿内的培养液，吸去96孔培养板内的培养液，每孔避光加入100μL含体积分数为0.1CCK-8溶液的低糖DMEM培养液，37℃孵育2h后终止培养。使用空白对照孔调零，在酶标仪上测定450nm处吸光值。

3.实验结果

实验结果如图1所示，其中，纵坐标为细胞活性，N为常氧组，H为低氧组，##表示低氧组与常氧组比较，P<0.01；***表示给药组与低氧组比较，P<0.001；**表示给药组与低氧组比较，P<0.01。由图1可知，与低氧组比较，50～400μM的虫草酸能促进肺动脉内皮细胞的增值，50μM与100μM组细胞生存率没有统计学差异(P>0.05)，200μM组与100μM组和400μM组有统计学差异(P<0.05)，故选取200μM为实验最佳处理浓度。

4.实验结论

虫草酸对人肺动脉内皮细胞活性具有显著干预作用，表明虫草酸对人肺动脉高压的防治具有潜在的药理功效。

实施例2采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡

1.实验材料

主要试剂：虫草酸、胎牛血清、PBS、胰酶、DMEM低糖培养基、ECM完全培养基、Annexin V试剂盒。

2.实验方法

用ECM完全培养基将对数生长期的HPAEC细胞接种于6公分培养皿，4mL/皿，37℃、5％CO₂培养。待细胞长至40％左右，同步化12h后，进行分组：N、D、H、HD分别为常氧组、常氧加虫草酸组、低氧组和低氧加虫草酸组。给予虫草酸处理HPAEC细胞，分别放入常氧和低氧(1％O₂)培养箱，处理48小时后，参考Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒说明书处理样品，细胞被用EDTA胰蛋白酶消化成单细胞悬液，染色后用流式细胞仪(FCM)在一个小时内检测。

3.实验结果

在1％低氧损伤模型下，用虫草酸处理，经流式细胞术检测，结果如图2所示，其中，纵坐标为细胞凋亡率，##表示与常氧组比较，P<0.01；***表示低氧加虫草酸组与低氧组比较，P<0.001。由图2可知，低氧组的细胞凋亡率明显增加，而低氧加虫草酸组与低氧组比较，细胞凋亡率明显减少，表明虫草酸可减轻HPAECs细胞在低氧下的凋亡。

实施例3TUNEL法检测虫草酸对细胞损伤的作用

1.实验材料

主要试剂：虫草酸、胎牛血清、PBS、胰酶、DMEM低糖培养基、ECM完全培养基、原位细胞凋亡检测试剂盒(罗氏、Switzerland)。

2.实验方法

用ECM完全培养基将对数生长期的HPAEC细胞接种于6公分培养皿，4mL/皿，37℃、5％CO₂培养。待细胞长至40％左右，同步化12h后，进行分组：N、D、H、HD分别为常氧组、常氧加虫草酸组、低氧组和低氧加虫草酸组。给予虫草酸处理HPAEC细胞，分别放入常氧和低氧(1％O₂)培养箱，处理后，细胞用4％多聚甲醛在室温下固定30分钟，原位细胞凋亡检测试剂盒进行TUNEL染色。简而言之，细胞用0.1％Triton-100溶液，TUNEL反应混合物孵育。最后，细胞核用1μg/mL DAPI染色。

3.实验结果

细胞在发生凋亡时，基因组DNA在核酸内切酶作用下发生断裂，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP，从而可以通过荧光显微镜检测。检测的绿色荧光越多表示凋亡的细胞越多。实验结果如图3所示。

由图3可知，通过TUNEL检测，低氧组绿色荧光细胞比例明显增加，表示低氧作用下肺动脉内皮细胞凋亡增加；相比低氧组，低氧加虫草酸组的绿色荧光的比例明显减少，表示虫草酸可减轻肺动脉内皮细胞在低氧下的凋亡。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims

1.虫草酸在制备预防或治疗肺动脉高压的药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物为促进肺动脉内皮细胞增殖、减轻肺动脉内皮细胞在低氧下的凋亡的药物。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肺动脉高压为动脉性肺动脉高压、左心疾病所致肺动脉高压、缺氧和/或肺部疾病引起的肺动脉高压、慢性血栓栓塞性肺动脉高压、多种机制和/或不明机制引起的肺动脉高压中的至少一种。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物为预防或治疗肺动脉高压所致的右心室肥厚、肺源性心脏病或肺血管重构的药物。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述虫草酸为植物提取物的天然产物或人工化学合成的化合物。

6.一种预防或治疗肺动脉高压的药物，其特征在于，所述药物含有虫草酸。

7.如权利要求6所述的预防或治疗肺动脉高压的药物，其特征在于，所述药物还含有药学上可接受的载体。

8.如权利要求6所述的预防或治疗肺动脉高压的药物，其特征在于，所述药物的剂型为口服制剂或注射制剂。

9.如权利要求6所述的预防或治疗肺动脉高压的药物，其特征在于，所述药物为虫草酸与其他预防或治疗肺动脉高压的药物联合使用。