CN109540632A - 一种免疫组织化学染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种免疫组织化学染色方法，涉及生物技术领域。本发明的染色方法中使用的洗涤液是体积浓度为0.015％的TritonX‑100磷酸盐缓冲液；所述染色方法中不包括羊血清封闭步骤。本发明经过多次实验摸索后，对免疫组化染色实验过程进行了改进，发现在洗涤液PBS中加入一定比例的TritonX‑100，去掉了羊血清封闭的传统步骤；所得的染色标本背景浅，和有羊血清封闭步骤的染色结果基本无差异，甚至优于传统方法。本发明上述方法的改进不仅比传统方法节省了羊血清，也节省了时间。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种免疫组织化学染色方法。
背景技术
免疫组织(细胞)化学技术，是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体的免疫反应和组织化学的呈色反应，对相应的抗原进行定性、定位、定量测定的一项组织学检测方法。根据标记物的不同，免疫组织化学技术可分为酶免疫组织化学技术，荧光免疫组织化学技术，免疫金/银组织化学技术，亲和组织化学技术，免疫标记电镜组织化学技术。免疫组织化学的基本过程包括：抗原的提取与纯化，免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化，将标记物与抗体结合形成标记抗体，标本的处理与制备，抗原抗体免疫学反应以及标记物呈色反应，观察结果。其中在进行免疫组化染色时步骤繁多，耗时耗力。
发明内容
有鉴于此，本发明实施例提供了一种免疫组织化学染色方法，主要目的是解决免疫组化染色步骤操作繁琐的问题。
为达到上述目的，本发明主要提供了如下技术方案：
一方面，本发明实施例提供了一种免疫组织化学染色方法，所述染色方法中使用的洗涤液是体积浓度为0.015％的TritonX-100磷酸盐缓冲液；所述染色方法中不包括羊血清封闭步骤。
作为优选，所述染色方法包括：
(1)石蜡切片脱蜡至水；
(2)3％过氧化氢溶液孵育30分钟；
(3)抗原修复处理；
(4)权利要求1所述的磷酸盐缓冲液冲洗，5min×3次；
(5)孵育一抗，37℃孵育大于等于30分钟或4℃过夜；
(6)权利要求1所述的磷酸盐缓冲液冲洗，5分钟×3次；
(7)孵育二抗，37℃孵育30分钟；
(8)权利要求1所述的磷酸盐缓冲液冲洗，5分钟×3次；
(9)孵育三抗，37℃孵育30分钟；
(10)权利要求1所述的磷酸盐缓冲液冲洗，5分钟×3次；
(11)显色剂显色，适时镜下终止，自来水冲洗；
(12)复染，苏木精染色；
(13)脱水透明，封片。
作为优选，所述0.015％TritonX-100的磷酸盐缓冲液配制方法：将体积浓度为30％的TritonX原液1mL加入到2000mL的磷酸盐缓冲液中混合，形成体积浓度为0.015％的TritonX-100磷酸盐缓冲液。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明经过多次实验摸索后，对免疫组化染色实验过程进行了改进，发现在洗涤液PBS中加入一定比例的TritonX-100，去掉了羊血清封闭的传统步骤；所得的染色标本背景浅，和有羊血清封闭步骤的染色结果基本无差异，甚至优于传统方法。该方法的改进不仅比传统方法节省了羊血清，也节省了时间。
附图说明
图1是本发明实施例提供的免疫组化染色步骤(未含羊血清封闭步骤)获得的染色标本图；(大鼠脑黑质酪氨酸酶免疫组化染色，×100，细箭头为阳性神经元，粗箭头为阳性神经纤维)
图2是本发明实施例提供的免疫组化染色步骤(含羊血清封闭步骤)获得的染色标本图；(大鼠脑黑质酪氨酸酶免疫组化染色，×100，细箭头为阳性神经元，粗箭头为阳性神经纤维)。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段及功效,以下以较佳实施例，对依据本发明申请的具体实施方式、技术方案、特征及其功效，详细说明如后。下述说明中的多个实施例中的特定特征、结构、或特点可由任何合适形式组合。
实施例1(未含羊血清封闭步骤)
大鼠脑切片免疫组化染色方法包括以下步骤：
(1)石蜡切片脱蜡至水；
(2)3％过氧化氢溶液孵育30分钟；
(3)抗原修复处理；
(4)PBS(含0.015％TritonX-100，体积浓度)冲洗，5min×3次；
(5)孵育一抗，37℃孵育大于等于30分钟或4℃过夜；
(6)PBS(含0.015％TritonX-100)冲洗，5分钟×3次；
(7)孵育二抗，37℃孵育30分钟；
(8)PBS(含0.015％TritonX-100)冲洗，5分钟×3次；
(9)孵育三抗，37℃孵育30分钟；
(10)PBS(含0.015％TritonX-100)冲洗，5分钟×3次；
(11)显色剂显色，适时镜下终止，自来水冲洗；
(12)复染，苏木精染色；
(13)脱水透明，封片；染色标本如图1所示。
对比例1(含羊血清封闭步骤)
相同染色对象的免疫组化染色方法包括以下步骤：
(1)石蜡切片脱蜡至水；
(2)3％过氧化氢溶液孵育30分钟；
(3)抗原修复处理；
(4)PBS冲洗，5min×3次；
(5)5％-10％正常山羊血清封闭，37℃孵育30分钟；
(6)孵育一抗，37℃孵育大于等于30分钟或4℃过夜；
(7)PBS冲洗，5分钟×3次；
(8)孵育二抗，37℃孵育30分钟；
(9)PBS冲洗，5分钟×3次；
(10)孵育三抗，37℃孵育30分钟；
(11)PBS冲洗，5分钟×3次；
(12)显色剂显色，适时镜下终止，自来水冲洗；
(13)复染，苏木精染色；
(14)脱水透明，封片；染色标本如图2所示。
图1为采用本发明方法(无羊血清封闭步骤+新型PBS冲洗液)获得的大鼠脑的染色标本；图2为采用传统方法(有羊血清封闭步骤+PBS冲洗液))获得的相同大鼠脑的染色标本。通过仔细观察两幅实验图和实验现象，采用本发明方法获得的染色标本背景浅，染色结果基本与采用传统方法获得的染色结果无明显差异，由此可确定在采用发明改进的PBS冲洗液后可以省去羊血清封闭步骤，如此可减少实验步骤和成本，缩短实验时间。
本发明实施例中未尽之处，本领域技术人员均可从现有技术中选用。
以上公开的仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以上述权利要求的保护范围为准。
Claims (3)
1.一种免疫组织化学染色方法，其特征在于，所述染色方法中使用的洗涤液是体积浓度为0.015％的TritonX-100磷酸盐缓冲液；所述染色方法中不包括羊血清封闭步骤。
2.如权利要求1所述的一种免疫组织化学染色方法，其特征在于，所述染色方法包括：
(1)石蜡切片脱蜡至水；
(2)3％过氧化氢溶液孵育30分钟；
(3)抗原修复处理；
(4)权利要求1所述的磷酸盐缓冲液冲洗，5min×3次；
(5)孵育一抗，37℃孵育大于等于30分钟或4℃过夜；
(6)权利要求1所述的磷酸盐缓冲液冲洗，5分钟×3次；
(7)孵育二抗，37℃孵育30分钟；
(8)权利要求1所述的磷酸盐缓冲液冲洗，5分钟×3次；
(9)孵育三抗，37℃孵育30分钟；
(10)权利要求1所述的磷酸盐缓冲液冲洗，5分钟×3次；
(11)显色剂显色，适时镜下终止，自来水冲洗；
(12)复染，苏木精染色；
(13)脱水透明，封片。
3.如权利要求1所述的一种免疫组织化学染色方法，其特征在于，所述0.015％TritonX-100的磷酸盐缓冲液配制方法：将体积浓度为30％的TritonX原液1mL加入到2000mL的磷酸盐缓冲液中混合，形成体积浓度为0.015％的TritonX-100磷酸盐缓冲液。
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