CN109528886A - 一种防治绝经后骨质疏松症的中药组合物制剂及其制备与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗绝经后骨质疏松症的中药组合物制剂及其制备与应用，所述中药组合物由如下质量配比的原料药制得：飞天蜈蚣七5～200份，绞股蓝10～300份，珠子参10～300份，栀子5～200份。该中药组合物配伍的制剂治疗绝经后骨质疏松症效果显著。

Description

一种防治绝经后骨质疏松症的中药组合物制剂及其制备与 应用

(一)技术领域

本发明涉及一种中药组合物制剂，该中药组合物制剂具体由飞天蜈蚣七、绞股蓝、珠子参和栀子四味中药制成，该中药组合物制剂能有效治疗绝经后骨质疏松症，属于医药技术领域。

(二)背景技术

绝经后骨质疏松症是指绝经后妇女由于卵巢功能衰退，雌激素水平下降，并伴随卵泡刺激素水平上升，从而在骨代谢过程中，骨吸收大于骨形成，出现以骨量减少和骨微观结构的退化为特征，致使骨脆性增加而易发生骨折的一种全身性代谢性疾病。由于绝经的出现，女性骨密度迅速降低，而随着年龄的增加因骨质疏松所引起的骨折发生率也随之增高。虽然目前西医临床上有降钙素、双膦酸盐类、甲状旁腺激素、雌激素、选择性雌激素受体调节剂等多种治疗骨质疏松症的药物，但这些药物作用靶点单一，长期使用效果差。而处于临床研究的新兴蛋白类药物则价格昂贵，长期使用的生物安全性仍待于评估。中医药具有整体防治和副作用小的特点，在治疗骨质疏松症这一慢性疾病上具有独特的优势。

骨质疏松症，中医属于“骨痿”范畴。其发病与肾、肝、脾、血瘀关系最为密切，肾精亏虚是骨质疏松发病的主要因素，肝脾失调是骨质疏松的重要病因，血瘀则是其促进因素。故中医认为补肝肾，健脾，活血为治疗骨质疏松症的根本法则。另外，《骨痿论篇》中描述为：肾者水藏也，今水不胜火，则骨枯而髓减，故足不任身，发为骨痿；肾气热，则腰脊不举，骨枯而髓减，发为骨痿。因此，针对骨质疏松症的发病主因肾虚，除了补肾之外，还辅以祛火，效果更佳。

本发明在中医理论指导下组方，结合实验验证，运用中药飞天蜈蚣七、珠子参、绞股蓝和栀子组合治疗骨质疏松症，不仅减少药材用量，提高疗效，同时无毒副作用。本发明尚未见有飞天蜈蚣七、珠子参、绞股蓝和栀子的组合物报道。

飞天蜈蚣七(Aralia chinensis)又名蜈蚣草，飞天蜈蚣等，为五加科植物楤木的根、根皮及茎皮等。飞天娱蛤七，其味微甘、苦、辛，归肝、脾、肾经，具有补益肝肾、祛风解毒、活血止痛之功效。内服煎汤常用于急慢性肝炎、糖尿病等，外用捣敷可用于治疗风湿腰腿痛、跌打损伤、无名肿毒、蛇虫咬伤等症。

绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino)为葫芦科绞股蓝属的一种多年生草质攀援植物。绞股蓝苦、微甘、凉，归肺、脾、肾经，具有益气健脾、化痰止咳、清热解毒的功效。现代药理学研究发现绞股蓝具有降血糖、降血脂、保肝、抗氧化、抗衰老、保护心脑血管、调节人体生理机能、增强人体免疫力等作用。

珠子参(Panacis majoris Rhizoma)又名“扣子七”或“纽子七”等，为五加科人参属植物珠子参或羽叶三七的干燥根茎。珠子参性苦、甘，微寒。归肝、肺、胃经。祛风除湿，活血消肿，清热解毒。主治风湿骨痛、风湿麻木、外伤出血、产后瘀血、跌打损伤、烧伤、烫伤。

栀子(Gardenia jasminoides Ellis)又名黄栀子、山栀、白蟾等，为茜草科植物栀子的干燥成熟果实。栀子气微，性寒，味苦，归心、肺、三焦经，具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒等功效。现代药理学研究表明，栀子具有保肝利胆、抗动脉粥样硬化、抗炎、抗脑缺血损伤、降血糖等多方面的药理作用。

本发明通过动物实验，对去卵巢大鼠(OVX)模型模拟绝经后骨质疏松症的研究，考察了飞天蜈蚣七、、绞股蓝、珠子参、栀子配伍后对骨密度，骨生物力学及骨微结构的作用，发现其抗绝经后骨质疏松疗效良好。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种用于治疗绝经后骨质疏松症的中药组合物制剂，所述制剂由飞天蜈蚣七、绞股蓝、珠子参和栀子四味中药制成的，对治疗绝经后骨质疏松症具有确切的疗效。

本发明采用的技术方案是：

一种用于治疗绝经后骨质疏松症的中药组合物制剂，所述中药组合物制剂由如下质量配比的原料药制得：飞天蜈蚣七5～200份、绞股蓝10～300份、珠子参10～300份和栀子5～200份。进一步，优选所述中药组合物制剂由如下质量配比的原料制成：飞天蜈蚣七8～20份、绞股蓝10～30份、珠子参10～30份和栀子8～20份。更进一步，特别优选所述中药组合物中各原料药的质量配比为：飞天蜈蚣七15份、绞股蓝20份、珠子参20份和栀子15份。

本发明所述中药组合物制剂为配方量原料的乙醇提取物，更优选各原料以2～100目粉末的形式混合后进行乙醇提取。

本发明还提供一种所述中药组合物制剂的制备方法，所述方法为：取配方量的原料混合粉碎后用体积浓度30～90％乙醇水溶液浸泡2～10h，然后超声辅助提取0.5～2小时，再加热回流提取0.5～3小时，过滤，滤液浓缩后采用AB-8大孔树脂吸附，依次用水、体积浓度30％乙醇水溶液、体积浓度60％乙醇水溶液梯度洗脱，收集60％乙醇水溶液的洗脱液，浓缩至相对50～100mg/mL，得中药组合物制剂。浸泡用体积浓度30-90％乙醇水溶液体积用量以原料总重量计为8～20mL/g，超声辅助提取条件为20～40千赫兹。

进一步，本发明所述中药组合物制剂由如下方法制备：取配方量的原料，用体积浓度30～90％乙醇水溶液浸泡2-10小时(优选体积用量以原料总重量计为8～20mL/g)，然后用20～40千赫兹超声波提取0.5～2小时，再加热回流提取0.5～3小时，过滤，得一次滤液和一次滤渣，一次滤渣再加体积浓度30～90％乙醇水溶液(优选体积用量以原料总重量计为8～20mL/g)，然后用20～40千赫兹超声波提取0.5～2小时，再加热回流提取0.5～3小时，过滤，得二次滤液和二次滤渣，合并一次滤液和和二次滤液，浓缩至相对密度5～30mg/mL，用AB-8大孔树脂吸附后，依次用水、体积浓度30％乙醇水溶液和体积浓度60％乙醇水溶液梯度洗脱，收集60％乙醇水溶液洗脱液，浓缩至相对密度50～100mg/mL，得所述中药组合物制剂。

进一步，洗脱用水、30％乙醇水溶液、60％乙醇水溶液的体积为大孔树脂体积的2～5倍。

本发明还提供一种所述的中药组合物制剂在制备调节骨代谢药物或防治骨质疏松症药物中的应用，优选所述骨质疏松症药物为预防或治疗老年性骨质疏松症或妇女绝经后骨质疏松症的药物。所述调节骨代谢药物为提高骨密度或骨矿含量的药物。所述药物剂型包括片剂、丸剂、冲剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、滴丸或皮肤外用制剂等中的任何一种。

飞天蜈蚣七具有补益肝肾的功效，绞股蓝具有健脾的功效，珠子参具有活血的功效，栀子具有祛火的功效。补肝肾，健脾，活血和祛火并用具有良好的强筋骨之功效，对骨质疏松，腰膝酸痛无力有良好的疗效。

本发明的有益效果主要体现在：本发明中药组合物制剂可显著提高大鼠骨密度和骨矿含量43％和40％，但飞天蜈蚣七制剂组和珠子参制剂组提高大鼠骨密度和骨矿含量无效；另外，在改善生物力学性能和保护松质骨微结构各项指标上，中药组合物制剂组比飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组均高≥17％，提示中药组合物制剂组较飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组疗效显著提高。故本发明中药组合物制剂在防治绝经后骨质疏松症中药效显著。

(四)附图说明

图1是实施例5假手术组大鼠股骨远端松质骨微结构代表图；

图2是实施例5模型组大鼠股骨远端松质骨微结构代表图；

图3是实施例5中药组合物制剂组大鼠股骨远端松质骨微结构代表图；

图4是实施例5飞天蜈蚣七制剂组大鼠股骨远端松质骨微结构代表图；

图5是实施例5珠子参制剂组大鼠股骨远端松质骨微结构代表图；

图6是实施例5中药组合物水提取液组大鼠股骨远端松质骨微结构代表图。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

本发明所用珠子参和栀子原料均按照《中国药典2015版》采集制备，所用飞天蜈蚣七和绞股蓝原料按照《全国中草药汇编第三版》采集制备。本发明所述百分浓度除特别说明外，均为体积浓度。本发明所述室温是指20-30℃。

实施例1

组方：飞天蜈蚣七15份、绞股蓝20份、珠子参20份和栀子15份。

制备方法：取飞天蜈蚣七药材15g，绞股蓝药材20g，珠子参药材20g、栀子药材15g，粉碎过20目筛，加入700mL的体积浓度50％乙醇水溶液，室温(20-30℃)浸泡4h，然后用20千赫兹超声波提取1小时，再加热回流提取1小时，过滤，得一次滤液和一次滤渣，一次滤渣再加700mL的50％乙醇水溶液，然后用20千赫兹超声波提取1小时，再加热回流提取1小时，过滤，得二次滤液和二次滤渣，合并一次滤液和二次滤液，浓缩至相对密度10mg/mL，用AB-8大孔树脂吸附后，依次用3倍大孔树脂体积的水、体积浓度30％乙醇水溶液和体积浓度60％乙醇水溶液梯度洗脱，收集60％乙醇水溶液洗脱液，浓缩至相对密度60mg/mL，得中药组合物制剂100mL，该中药组合物制剂含生药量为70g生药量/100mL。

实施例2

组方：飞天蜈蚣七20份、绞股蓝15份、珠子参15份和栀子20份。

制备方法：取飞天蜈蚣七药材20g，绞股蓝药材15g，珠子参药材15g、栀子药材20g，粉碎过30目筛，加入1050mL的体积浓度40％乙醇水溶液，室温(20-30℃)浸泡6h，然后用30千赫兹超声波提取0.5小时，再加热回流提取2小时，过滤，得一次滤液和一次滤渣，一次滤渣再加1050mL的40％乙醇水溶液，然后用30千赫兹超声波提取0.5小时，再加热回流提取2小时，过滤，得二次滤液和二次滤渣，合并一次滤液和二次滤液，浓缩至相对密度15mg/mL，用AB-8大孔树脂吸附后，依次用4倍大孔树脂体积的水、体积浓度30％乙醇水溶液和体积浓度60％乙醇水溶液梯度洗脱，收集60％乙醇水溶液洗脱液，浓缩至相对密度80mg/mL，得中药组合物制剂80mL，该中药组合物制剂含生药量为70g生药量/80mL。

实施例3

组方：飞天蜈蚣七20份、绞股蓝20份、珠子参20份和栀子20份。

制备方法：取飞天蜈蚣七药材20g，绞股蓝药材20g，珠子参药材20g、栀子药材20g，粉碎过40目筛，加入1200mL的体积浓度60％乙醇水溶液，室温(20-30℃)浸泡8h，然后用40千赫兹超声波提取1小时，再加热回流提取1小时，过滤，得一次滤液和一次滤渣，一次滤渣再加1200mL的60％乙醇水溶液，然后用40千赫兹超声波提取1小时，再加热回流提取1小时，过滤，得二次滤液和二次滤渣，合并一次滤液和二次滤液，浓缩至相对密度20mg/mL，用AB-8大孔树脂吸附后，依次用5倍大孔树脂体积的水、体积浓度30％乙醇水溶液和体积浓度60％乙醇水溶液梯度洗脱，收集60％乙醇水溶液洗脱液，浓缩至相对密度100mg/mL，得中药组合物制剂70mL，该中药组合物制剂含生药量为70g生药量/70mL。

实施例4

为了证实本发明中药组合物制剂具有显著的防治骨质疏松作用，按照实施例1工艺制备等药材质量的飞天蜈蚣七单一药材的制剂，按照实施例1工艺制备等药材质量的珠子参单一药材的制剂，同时制备实施例1组方药材的水提取液，作为对照，进行动物试验研究。

具体如下：

飞天蜈蚣七药材制剂：取飞天蜈蚣七药材70g，粉碎过20目筛，加入700mL的体积浓度50％乙醇水溶液，室温(20-30℃)浸泡4h，然后用20千赫兹超声波提取1小时，再加热回流提取1小时，过滤，得一次滤液和一次滤渣，一次滤渣再加700mL的50％乙醇水溶液，然后用20千赫兹超声波提取1小时，再加热回流提取1小时，过滤，得二次滤液和二次滤渣，合并一次滤液和二次滤液，浓缩至相对密度10mg/mL，用AB-8大孔树脂吸附后，依次用3倍大孔树脂体积的水、体积浓度30％乙醇水溶液和体积浓度60％乙醇水溶液梯度洗脱，收集60％乙醇水溶液洗脱液，浓缩至相对密度52mg/mL，得飞天蜈蚣七制剂100mL，该飞天蜈蚣七制剂含生药量为70g生药量/100mL。

珠子参药材制剂：取飞天蜈蚣七药材70g，粉碎过20目筛，加入700mL的体积浓度50％乙醇水溶液，室温(20-30℃)浸泡4h，然后用20千赫兹超声波提取1小时，再加热回流提取1小时，过滤，得一次滤液和一次滤渣，一次滤渣再加700mL的50％乙醇水溶液，然后用20千赫兹超声波提取1小时，再加热回流提取1小时，过滤，得二次滤液和二次滤渣，合并一次滤液和二次滤液，浓缩至相对密度10mg/mL，用AB-8大孔树脂吸附后，依次用3倍大孔树脂体积的水、体积浓度30％乙醇水溶液和体积浓度60％乙醇水溶液梯度洗脱，收集60％乙醇水溶液洗脱液，浓缩至相对密度55mg/mL，得珠子参制剂100mL，该珠子参制剂含生药量为70g生药量/100mL。

中药组合物水提取液：取飞天蜈蚣七药材15g，绞股蓝药材20g，珠子参药材20g、栀子药材15g，粉碎过20目筛，加入700mL的水，室温浸泡2h，然后加热回流提取1小时，过滤，得一次滤液和一次滤渣，一次滤渣再加700mL的水，然后再加热回流提取1小时，过滤，得二次滤液和二次滤渣，合并一次滤液和二次滤液，浓缩至相对密度100mg/mL，得中药组合物水提取液100mL，该中药组合物水提取液制剂含生药量为70g生药量/100mL。

实施例5

为了证实本发明中药组合物制剂具有显著的治疗绝经后骨质疏松症的功效，按实施例1方法制得的中药组合物制剂，按实施例4方法制得飞天蜈蚣七制剂、珠子参制剂和中药组合物水提取液，进行了动物实验研究：

1实验材料

1.1实验动物：3月龄未经产SPF级SD雌性大鼠60只，体重(250±10)g，购自西安交通大学医学院实验动物中心[许可证号SCXK(陕)2012-003]；

1.2实验药品：取实施例1、实施例4方法制备的中药组合物制剂、飞天蜈蚣七制剂、珠子参制剂、中药组合物水提取液分别用蒸馏水定容到100mL，制成70g生药量/100mL水的制剂溶液。青霉素(80万U/支，华北制药股份有限公司)，10％水合氯醛溶液。

2实验方法

2.1动物分组：实验前所有动物适应性喂养7天，将60只大鼠按照随机数字表法分为6组：组1为假手术对照组10只，组2为模型对照组10只，组3为中药组合物制剂组10只，组4为飞天蜈蚣七制剂组10只，组5为珠子参制剂组10只，组6中药组合物水提取液组10只。

2.2动物造模：60只大鼠均以10％水合氯醛溶液3mL/kg腹腔注射麻醉后，俯卧位固定在实验手术台上，在背部手术切口处脱毛，用碘伏局部消毒皮肤后，组1的10只大鼠经背部正中切口在双侧卵巢旁边切除少量脂肪，组2、组3、组4、组5和组6共50只大鼠经背部正中切口入路切除双侧卵巢后，逐层关闭，缝合切口。碘伏消毒后，术后连用3天臀肌注射青霉素预防感染，术后继续常规喂养3个月。术后第2天连续3天做阴道细胞涂片，经证实卵巢切除完全，去卵巢大鼠骨质疏松模型成功建立。

2.3动物给药：造模成功后第7天开始灌胃给药，给药量用成人常规剂量(中药组合物成人(60Kg)剂量为飞天蜈蚣七15g/天，绞股蓝20g/天，珠子参20g/天，栀子15g/天)按人鼠体型系数(6.3)换算成等效剂量，再根据大鼠体重计算给药体积。

经计算

组3中药组合物制剂组给大鼠的量为：给予实施例1制备的70g生药量/100mL的制剂溶液10.5mL/Kg/天，即相当于生药量为飞天蜈蚣七1.575g/Kg/天，绞股蓝2.1g/Kg/天，珠子参2.1g/Kg/天，栀子1.575g/Kg/天；

组4飞天蜈蚣七制剂组给大鼠的量为：给予实施例4制备的70g飞天蜈蚣七/100mL的制剂溶液10.5mL/Kg/天，即相当于生药量为飞天蜈蚣七7.35g/Kg/天；

组5珠子参制剂组给大鼠的量为：给予实施例4制备的70g珠子参/100mL水的制剂溶液10.5mL/Kg/天，即相当于生药量为珠子参7.35g/Kg/天；

组6中药组合物水提取液组给大鼠的量为：给予实施例4制备的70g生药量/100mL水的水提取液10.5mL/Kg/天，即相当于生药量为飞天蜈蚣七1.575g/Kg/天，绞股蓝2.1g/Kg/天，珠子参2.1g/Kg/天，栀子1.575g/Kg/天；

组1假手术对照组和组2模型对照组以10.5mL/Kg/天的蒸馏水灌胃。

3指标检测

3.1骨密度测定：动物处死前3天，将大鼠用10％水合氯醛麻醉，以俯卧位置于测试台上，用Lunar Prodigy Advance DEXA骨密度测定仪，对大鼠进行全身扫描，获得图像后手动圈出左股骨区域用GE公司配套软件计算骨密度。

3.2骨矿盐含量测定：将大鼠左胫骨放入烘箱，105℃烘干至恒重后称量为干重；烘干后的样品放入灰化炉，650℃灰化36h，取出称量再灰化直至恒重，此为灰分重量。骨矿盐含量为灰分重量与干重之比。

3.3大鼠股骨生物力学性能分析：应用三点弯曲实验测定大鼠左侧股骨的生物力学性能，将样本放置在万能材料力学测试机两个支撑的横杆上，调整两个支点的距离为20mm，标本的生理弯曲向上。加载棒以2mm/min的速率匀速加载下压标本中部直至断裂，获得记录载荷-变形曲线后分析数据。测定的生物力学参数包括最大载荷、骨结构硬度和骨应力。

3.4microCT分析大鼠右股骨松质骨形态结构特性：将75％乙醇固定过的大鼠右股骨从中间截断，取远端部分固定于样品杯中，该部分骨小梁较中端和近端丰富，采用eXplore Locus SP型microCT扫描仪沿标本的长轴方向扫描股骨远端，获取连续的microCT图像，平面图像分辨率为1024×1024，像素点尺寸20×20μm，层间距20μm。扫描完成后采用GE公司的配套软件分析骨小梁三维微观结构，手动圈出感兴趣区域，骨小梁的感兴趣区域始于生长板下端1.5mm处并向下延伸100个连续片段区域的骨小梁部分。对感兴趣区域进行三维重建，获取骨小梁三维结构图像并分析骨小梁的空间结构参数。测定如下参数：骨组织比例、骨小梁数量及骨小梁连接密度。

3.5统计学方法：实验数据以平均数±标准差(mean±SD)表示，采用协方差分析药物对BMD和生物力学性能测定指标的影响，消除体重对这些参数的影响。其余指标的各组之间的方差分析采用单因素方差分析(one-way analysis of variance,ANOVA)进行检验，当方差齐性时采用最小显著性差异(least significant difference,LSD)法检验，当方差非齐性时采用Tamhane's T2法检验，分析均应用SPSS16.0统计软件，P<0.05表示差异有统计学意义。

实验结果

4.1各组大鼠左侧股骨骨密度值和骨矿盐含量比较见表1。与假手术对照组相比，模型对照组股骨骨密度值及骨矿盐含量明显下降，差异有统计学意义(p<0.01)。

在提高骨密度值上，与模型对照组相比，中药组合物制剂组可提高大鼠股骨骨密度含量43％，差异具有显著性(p<0.01)；中药组合物制剂组比飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组高>18％，差异具有显著性(p<0.01)。

在提高骨矿盐含量上，与模型对照组相比，中药组合物制剂组可提高大鼠股骨骨矿盐含量40％，差异具有显著性(p<0.01)。与模型对照组相比，飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组对改善大鼠股骨骨矿盐含量无显著性差异(p>0.01)。中药组合物制剂组比飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组高>27％，差异具有显著性(p<0.01)。

表1.大鼠左侧股骨骨密度和胫骨骨矿含量比较

注：平均值±标准差,n＝10,^#p<0.05,^##p<0.01vs.假手术组；*p<0.05,**p<0.01vs.模型组；^&p<0.05,^&&p<0.01vs.中药组合物制剂组。

4.2各组大鼠左侧股骨生物力学性能比较见表2。与假手术对照组相比，模型对照组股骨最大载荷、骨结构硬度和骨应力明显下降，差异有统计学意义(p<0.01)。与模型对照组相比，中药组合物制剂组、飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组可分别提高大鼠股骨最大载荷63％、23％、22％和37％，差异具有显著性(p<0.01)，但中药组合物制剂组较飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组高32％、33％和18％，差异具有显著性(p<0.01)。与模型对照组相比，中药组合物制剂组、飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组可分别提高大鼠股骨结构硬度89％、26％、36％和54％，差异具有显著性(p<0.01)，但中药组合物制剂组较飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组高50％、39％和23％，差异具有显著性(p<0.01)。与模型对照组相比，中药组合物制剂组、飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组可分别提高大鼠股骨骨应力72％、31％、34％和47％，差异具有显著性(p<0.01)，但中药组合物制剂组较飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组高31％、29％和17％，差异具有显著性(p<0.01或p<0.05)。

表2.大鼠左侧股骨生物力学性能比较

注：平均值±标准差,n＝10,^#p<0.05,^##p<0.01vs.假手术组；*p<0.05,**p<0.01vs.模型组；^&p<0.05,^&&p<0.01vs.中药组合物制剂组。

4.3与假手术组相比，大鼠经过去卵巢后松质骨明显减少，中药组合物制剂组可显著减少松质骨的减少，效果优于飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组，详见图1～图6.

4.4各组大鼠股骨远端松质骨微结构参数比较见表3。与假手术对照组相比，模型对照组大鼠右侧股骨骨组织比例、骨小梁数量及骨小梁连接密度显著下降(p<0.01)。与模型对照组相比，中药组合物制剂组、飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组分别提高股骨骨组织比例142％、77％、66％、93％，差异具有显著性(p<0.01)，但中药组合物制剂组较飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组高36％、45％和25％，差异具有显著性(p<0.01或p<0.05)。与模型对照组相比，中药组合物制剂组和飞天蜈蚣七制剂组分别提高股骨骨小梁数量80％、37％，差异具有显著性(p<0.01)；珠子参制剂组和中药组合物水提取液组虽然分别提高股骨骨小梁数量27％、22％，但差异没有显著性(p>0.05)；中药组合物制剂组较飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组高32％、42％和47％，差异具有显著性(p<0.01)。与模型对照组相比，中药组合物制剂组、飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组分别提高股骨骨小梁连接密度159％、90％、77％、86％，差异具有显著性(p<0.01或p<0.05)；中药组合物制剂组较飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组高36％、47％和39％，差异具有显著性(p<0.01)。

表3.大鼠股骨远端松质骨微结构比较

注：平均值±标准差,n＝10,^#p<0.05,^##p<0.01vs.假手术组；*p<0.05,**p<0.01vs.模型组；^&p<0.05,^&&p<0.01vs.中药组合物制剂组。

5实验结论

实验结果表明，大鼠去卵巢后骨密度、骨矿盐含量、最大载荷、骨结构硬度、骨应力、骨组织比例、骨小梁数量及骨小梁连接密度均有显著下降，显示骨质疏松模型造模成功。灌胃给予中药组合物制剂组、飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组均可提高大鼠股骨骨密度，但中药组合物制剂组在提高骨密度上比飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组均高≥18％。灌胃给予中药组合物制剂组可显著提高大鼠骨矿含量40％，飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组对大鼠骨矿含量无效。提示在提高大鼠骨密度和骨矿含量上，中药组合物制剂组优于飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组。

灌胃给予中药组合物制剂组、飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组均可改善大鼠股骨生物力学性能，但中药组合物制剂组在改善生物力学性能和保护松质骨微结构各项指标上比飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组均高≥17％。除珠子参制剂组和中药组合物水提取液组未提高骨小梁数量外，灌胃给予中药组合物制剂组、飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组均可保护松质骨微结构指标，但中药组合物制剂组在保护松质骨微结构各项指标上比飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组均高≥22％，提示中药组合物制剂组较飞天蜈蚣七制剂组、珠子参制剂组和中药组合物水提取液组疗效显著提高。

综上所述按照本工艺制备的中药组合物制剂在防治绝经后骨质疏松症上疗效显著优于组合物中的单味药，同时显著优于水提取工艺，表明该组方及和该工艺具有显著优越性。

实施例6

为了证实本发明中药组合物制剂具有治疗绝经后骨质疏松症的功效，按实施例1方法制得的中药组合物制剂，进行了临床药效观察：

患者，李某，女，60岁。主诉：绝经，间断性腰背部及双腿疼痛，下肢酸软，精神不振，易疲劳，近期骨折两次。经骨密度仪检测，T值测定为-2.8，查血后，血钙含量为1.29mmol/L。以上结果提示，该患者缺钙，严重绝经后骨质疏松患者。经给予本发明中药组合物制剂治疗，3个月后，疼痛消失，X光透视显示，骨密度提高，原骨折创面明显修复。

患者，张某，女，58岁。主诉：长期间断性双膝关节疼痛，早晨疼痛最重，且伴僵硬。胫骨骨折后医院就诊，X光检查显示骨质疏松，经骨密度检查T值测定为-3.0，提示严重绝经后骨质疏松,，经给予本发明中药组合物制剂治疗，三月后，骨密度提高，骨折断面愈合，且再无双膝关节疼痛等症状出现。

张某，女，55岁。主诉：患者腰膝酸软伴有疼痛，精神差，易疲劳，2个多月，伴有腿部抽筋现象。至医院查体：骨密度T值测定为-2.5，静脉血中钙离子含量为1.26mmol/L。以上结果提示该患者缺钙，钙离子浓度低性抽筋，骨质疏松。给予本发明中药组合物制剂治疗，一月后，患者疼痛消失，再无出现抽筋现象。血钙含量1.85mmol/L，恢复正常。

综上，本发明中药组合物制剂对增加骨密度、治疗骨质疏松疗效好，为临床提供了一种新的药物选择。

Claims (10)

1.一种治疗绝经后骨质疏松症的中药组合物制剂，其特征在于所述中药组合物制剂由如下质量配比的原料制得：飞天蜈蚣七5～200份、绞股蓝10～300份、珠子参10～300份和栀子5～200份。

2.如权利要求1所述的中药组合物制剂，其特征在于所述中药组合物制剂由如下质量配比的原料制得：飞天蜈蚣七8～20份、绞股蓝10～30份、珠子参10～30份和栀子8～20份。

3.如权利要求1所述的中药组合物制剂，其特征在于所述中药组合物制剂由如下质量配比的原料制得：飞天蜈蚣七15份、绞股蓝20份、珠子参20份和栀子15份。

4.如权利要求1所述的中药组合物制剂，其特征在于所述中药组合物制剂为配方量原料的乙醇提取物。

5.一种权利要求1所述中药组合物制剂的制备方法，其特征在于所述方法为：取配方量的原料混合粉碎后用体积浓度30～90％乙醇水溶液浸泡2～10h，然后超声辅助提取0.5～2小时，再加热回流提取0.5～3小时，过滤，滤液浓缩后采用AB-8大孔树脂吸附，依次用水、体积浓度30％乙醇水溶液、体积浓度60％乙醇水溶液梯度洗脱，收集60％乙醇水溶液的洗脱液，浓缩至相对50～100mg/ml，得中药组合物制剂。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于浸泡用体积浓度30-90％乙醇水溶液体积用量以原料总重量计为8～20ml/g，超声辅助提取条件为20～40千赫兹。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于方法按如下步骤进行：

取配方量的原料混合粉碎后用体积浓度30～90％乙醇水溶液浸泡2～10h，然后用20～40千赫兹超声波提取0.5～2小时，再加热回流提取0.5～3小时，过滤，得一次滤液和一次滤渣，一次滤渣再加体积浓度30～90％乙醇水溶液，然后用20～40千赫兹超声波提取0.5～2小时，再加热回流提取0.5～3小时，过滤，得二次滤液和二次滤渣，合并一次滤液和二次滤液，浓缩至相对密度5～30mg/ml，用AB-8大孔树脂吸附后，依次用水、体积浓度30％乙醇水溶液、体积浓度60％乙醇水溶液梯度洗脱，收集60％乙醇水溶液的洗脱液，浓缩至相对50～100mg/ml，得中药组合物制剂。

8.一种权利要求1所述的中药组合物制剂在制备调节骨代谢药物或防治骨质疏松症药物中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于所述骨质疏松症药物为预防或治疗妇女绝经后骨质疏松症或老年性骨质疏松症的药物。

10.如权利要求8所述的应用，其特征在于所述调节骨代谢药物为提高骨密度或骨矿含量的药物。