CN109517855A - 一种芦荟大黄素的精制纯化方法 - Google Patents

Abstract

一种芦荟大黄素的精制纯化方法，包括以下步骤：步骤1、采用芦荟提取浸膏为原料经分步酶解得到芦荟大黄素粗品；步骤2、在对芦荟大黄素粗品进行纯化处理，得到芦荟大黄素精品；收率为85%左右，HPLC检测得96%以上，该工艺简单，产率高，废水BOD在100以下，各种溶剂回收率高，适合工业化生产。

Description

一种芦荟大黄素的精制纯化方法

技术领域

本发明涉及芦荟大黄素的生物酶转化法，以及纯化工艺，具体涉及从芦荟浸膏中酶解分离芦荟大黄素和纯化的芦荟大黄素的精制纯化方法。

背景技术

近年来国内外学者对芦荟大黄素的抗肿瘤作用颇感兴趣，主要的抗肿瘤活性集中在对神经外胚叶肿瘤、肝癌、肺鳞状细胞癌、皮肤Merkel细胞癌、胃癌、白血病等肿瘤，抗癌范围广泛，芦荟大黄素对P388白血病细胞有抑制作用，延长生存期。其作用机制之一是抑制癌细胞的DNA、RNA和蛋白质的生物合成。

同时，芦荟大黄素具有降脂减肥作用。而且使头发柔软而有光泽，轻松舒爽，去头屑的作用。据文献报道，高纯度的芦荟大黄素纯化方法有很多，目前应用比较多的当属水解法等。但是都存在水解条件复杂，稳定性有待提高，以及成本和后续溶剂残留问题。由于国内外厂家对二氢杨梅素的提取优化工艺路线的严格保密性，所以已经申请的专利并不多。

由罗田县永飞化工有限公司于2015年5月26日申请的中国专利（CN201510273173.5）公开了“一种芦荟大黄素的制备工艺”。该方法的权利要求保护的范围如下步骤：步骤a)采用芦荟浸膏为原料经水解氧化得到芦荟大黄素粗品；步骤b)在对芦荟大黄素粗品进行提纯得到。因此，本发明的一种芦荟大黄素的制备工艺得到的产品率高，产品精度高。

由黄再新于2009年9月23日申请的专利（CN200910035514.X）公开了一种精制芦荟大黄素的方法。该方法的权利要求保护的范围如下步骤：将粗品芦荟大黄素溶解于试剂级N,N-二甲基乙酰胺,所述试剂级N,N-二甲基乙酰胺加入有1％体积比的试剂级醋酸,在100～105℃高温下形成饱和溶液,加入活性炭脱色0.5～1.0小时,过滤后降温至0～3℃,即析出芦荟大黄素晶体,烘干后即得到芦荟大黄素精品。

上述方法虽然都能得到高含量芦荟大黄素精品，但存在水解条件不容易控制，以及试剂级N,N-二甲基乙酰胺成本较高。水解问题：水解往往需要严格的温度和ph值控制，以及水解时间，水解的半成品比较难分理，增加了后续除杂的成本。溶剂选用问题：试剂级N,N-二甲基乙酰胺虽然溶解度比较好，但是在工业生产中很难量化，况且在加入醋酸后很难进行回收，浪费比较大。由此可见，上述方法在工业化生产上存在一定的困难，生产成本高。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种芦荟大黄素的精制纯化方法，具有操作简单，产率高，生产时间短，成本低的特点。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种芦荟大黄素的精制纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、采用芦荟提取浸膏为原料经分步酶解得到芦荟大黄素粗品；

1）将芦荟提取浸膏在玻璃反应釜中，加入60%乙醇加热搅拌进行溶解，静置溶解液，过滤去除滤渣，取其上清液；

2）将上清液置于反应釜中，重组葡萄糖苷酶添加量为浓度60U/mL，酶解温度在65℃左右，酶解PH约为5.0，酶解时间3小时左右；

3）然后将酶解后溶液进行冷却，放置结晶24h，即得到芦荟大黄素粗品，并对母液进行浓缩，冷却结晶取沉淀，重复两次，所述的母液为酶解后溶液；

步骤2、在对芦荟大黄素粗品进行纯化处理，得到芦荟大黄素精品；

1）用相对于芦荟大黄素粗品质量的10倍量甲苯在40-50℃下，对芦荟大黄素粗品进行重结晶，待全部溶解后加入10%活性炭，重复结晶两次；

2）对结晶沉淀干燥后，用2-3倍量甲醇进行洗涤，离心干燥，即得芦荟大黄素精品，洗涤液进行合并浓缩、结晶，回收甲醇。

所述的酶采用重组葡萄糖苷酶。

本发明的有益效果是：

1）通过对芦荟大黄素反复重结晶，得到的芦荟大黄素产品含量较高；

2）对中间过程涉及的溶液都进行充分回收，保证了环境污染少，产品得率高的特点；

3）酶解提取纯化工艺较简单，能够满足量化生产，操作比较简便；

4）产品生产周期时间较短能够有效降低生产成本。

附图说明

图1为本发明的工艺流程图。

具体实施方式

以下结合附图及实施例对发明进一步叙述，但本发明不局限于以下实施例。

如图1所示，一种芦荟大黄素的精制纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、采用芦荟提取浸膏为原料经分步酶解得到芦荟大黄素粗品；

1）将芦荟提取浸膏在玻璃反应釜中，加入60%乙醇加热搅拌进行溶解，静置溶解液，过滤去除滤渣，取其上清液；

2）将上清液置于反应釜中，重组葡萄糖苷酶添加量为浓度60U/mL，酶解温度在65℃左右，酶解PH约为5.0，酶解时间3小时左右；

3）然后将酶解后溶液进行冷却，放置结晶24h，即得到芦荟大黄素粗品，并对母液进行浓缩，冷却结晶取沉淀，重复两次，所述的母液为酶解后溶液；

步骤2、在对芦荟大黄素粗品进行纯化处理，得到芦荟大黄素精品；

1）用相对于芦荟大黄素粗品质量的10倍量甲苯在40-50℃下，对芦荟大黄素粗品进行重结晶，待全部溶解后加入10%活性炭，重复结晶两次；

2）对结晶沉淀干燥后，用2-3倍量甲醇进行洗涤，离心干燥，即得芦荟大黄素精品，洗涤液进行合并浓缩、结晶，回收甲醇。

所述的酶采用重组葡萄糖苷酶。

实施例一：

1）称取芦荟浸膏200克，用8倍量60%乙醇加热搅拌溶解45分钟，充分溶解后，静置室温，过滤除去滤渣，将上清液置于反应釜中，重组葡萄糖苷酶添加量为浓度60U/mL，酶解温度在65℃，酶解PH=5.0，酶解时间3.5小时。

2）然后将酶解后溶解进行冷却，放置结晶24h，滤出沉淀，并对母液进行浓缩，冷却结晶取沉淀，重复两次，即得到芦荟大黄素粗品。测其含量为75%，收率为93%。

3）用10倍量甲苯在50℃下，对芦荟大黄素进行重结晶，待全部溶解后加入10%活性炭，重复结晶两次。对结晶沉淀干燥后，用3倍量甲醇进行洗涤，离心干燥，即得芦荟大黄素精品。测得含量为96.1%，收率为86%。洗涤液进行合并浓缩、结晶，回收。

实施例二：

1）称取芦荟浸膏5kg，用8倍量60%乙醇加热搅拌溶解45分钟，充分溶解后，静置室温，过滤除去滤渣，将上清液置于反应釜中，重组葡萄糖苷酶添加量为浓度60U/mL，酶解温度在65℃，酶解PH=5.0，酶解时间3.5小时。

2）然后将酶解后溶解进行冷却，放置结晶24h，滤出沉淀，并对母液进行浓缩，冷却结晶取沉淀，重复两次，即得到芦荟大黄素粗品。测其含量为76%，收率为91%。

3）用10倍量甲苯在50℃下，对芦荟大黄素进行重结晶，待全部溶解后加入10%活性炭，重复结晶两次。对结晶沉淀干燥后，用3倍量甲醇进行洗涤，离心干燥，即得芦荟大黄素精品。测得含量为95.8%，收率为86.5%。洗涤液进行合并浓缩、结晶，回收。

实施例三：

1）称取芦荟浸膏20kg，用8倍量60%乙醇加热搅拌溶解45分钟，充分溶解后，静置室温，过滤除去滤渣，将上清液置于反应釜中，重组葡萄糖苷酶添加量为浓度60U/mL，酶解温度在65℃，酶解PH=5.0，酶解时间3.5小时。

2）然后将酶解后溶解进行冷却，放置结晶24h，滤出沉淀，并对母液进行浓缩，冷却结晶取沉淀，重复两次，即得到芦荟大黄素粗品。测其含量为75.88%，收率为92.3%。

3）用10倍量甲苯在50℃下，对芦荟大黄素进行重结晶，待全部溶解后加入10%活性炭，重复结晶两次。对结晶沉淀干燥后，用3倍量甲醇进行洗涤，离心干燥，即得芦荟大黄素精品。测得含量为96.2%，收率为85.8%。洗涤液进行合并浓缩、结晶，回收。

Claims (2)

1.一种芦荟大黄素的精制纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、采用芦荟提取浸膏为原料经分步酶解得到芦荟大黄素粗品；

1）将芦荟提取浸膏在玻璃反应釜中，加入60%乙醇加热搅拌进行溶解，静置溶解液，过滤去除滤渣，取其上清液；

2）将上清液置于反应釜中，重组葡萄糖苷酶添加量为浓度60U/mL，酶解温度在65℃左右，酶解PH约为5.0，酶解时间3小时左右；

3）然后将酶解后溶液进行冷却，放置结晶24h，即得到芦荟大黄素粗品，并对母液进行浓缩，冷却结晶取沉淀，重复两次，所述的母液为酶解后溶液；

步骤2、在对芦荟大黄素粗品进行纯化处理，得到芦荟大黄素精品；

1）用相对于芦荟大黄素粗品质量的10倍量甲苯在40-50℃下，对芦荟大黄素粗品进行重结晶，待全部溶解后加入10%活性炭，重复结晶两次；

2）对结晶沉淀干燥后，用2-3倍量甲醇进行洗涤，离心干燥，即得芦荟大黄素精品，洗涤液进行合并浓缩、结晶，回收甲醇。

2.根据权利要求1所述的一种芦荟大黄素的精制纯化方法，其特征在于，所述的酶采用重组葡萄糖苷酶。