CN109517740B - 一株紫色红曲霉诱变株和一种水溶性功能红曲及其制备方法和应用 - Google Patents
一株紫色红曲霉诱变株和一种水溶性功能红曲及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一株紫色红曲霉诱变株和一种水溶性功能红曲及其制备方法和应用,所述紫色红曲霉诱变株于2018年09月03日保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏编号:CCTCC NO:M2018586。该紫色红曲霉诱变株能够用于生产高开环功能红曲,且几乎不产桔霉素。另外,本发明将该紫色红曲菌诱变株置于特制的发酵培养基中进行液态深层发酵,高效合成高开环结构的莫纳可林K,再经后处理工艺得到水溶性功能红曲,其具有以高开环的酸式结构为主体、水溶性好、风味佳、不含桔霉素或含量极低的特点。而且,发酵原料为非甘油原料,无甘油残留的安全隐患。本发明提供的制备方法工艺简单,易于规模化生产,绿色环保,制得的产品符合食品、保健品、药品的安全质量要求。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,更具体地,涉及一株紫色红曲霉诱变株和一种水溶性功能红曲及其制备方法和应用。
背景技术
红曲具有健脾和胃消食,活血化瘀止痛之效,在我国有悠久的食用和药用的历史。1979年,Endo等发现某种特殊红曲霉的红曲中含有莫纳可林(Monacolin)系列物质,有抑制人体胆固醇生物合成过程中羟甲戊二酰辅酶A还原酶(HMG-CoA还原酶)的作用,这种红曲被称为降脂红曲,也称为功能红曲。
随着人民生活水平的逐渐提高和社会人口老龄化问题日趋明显,高血脂症的发病率逐年上升,因脂质代谢紊乱引起的高血脂症,已成为脂肪肝、冠心病和动脉粥样硬化等常见病的重要发病因素。据报道,截止到2017年底,我国的高血脂、高血压、高血糖患者已达2.9亿。因此,无论对广大人民的保健,还是高血脂症的治疗,功能红曲的开发研究和生产,均具广阔的前景和重大的经济效益。
MonacolinK抑制胆固醇合成的作用效果最强,目前发现约有十余种MonacolinK结构类似物,开环结构是Monacolin类调脂药物的活性形式,它能与HMG-CoA还原酶直接结合而抑制胆固醇在体内的合成,而不需要体内羟基酸脂酶参与水解,不增加肝脏负担,即能发生降脂作用,是功能红曲主要的有效成分之一。人体产生羟基酸脂酶的能力存在较大的个体差异,有的人甚至完全没有,因此闭环结构的降脂作用在不同人身上差异悬殊。现有的红曲霉生产功能红曲时,产品中开环结构的莫纳可林K占莫纳可林K总含量的比例偏低,有的甚至只能产生极少量开环结构的莫纳可林K。
另外,现阶段,功能红曲的开发主要为三角瓶的固态发酵和采用甘油为主要原料的液态发酵。三角瓶的固态发酵,因受固态发酵条件的限制,难于调控其胞内外代谢物的分泌,高开环的功能红曲的生产尚未见报道,且固态发酵产品苦味严重,产品难溶于水。甘油的液态发酵,因甘油为化工原料,GB2760-2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》对甘油作为食品添加剂原料使用时的用量进行了严格限制,使用甘油作发酵原料大规模发酵生产功能红曲尚未见报道。保健品的要求更为严格,用作保健品的功能红曲不能采用甘油作发酵原料制备。
因此,需要选育出一株能够生产高开环功能红曲的红曲霉属菌株。还需要开发出一种新的制备水溶性功能红曲的方法。
发明内容
本发明为克服上述现有技术所述的缺陷,提供一株紫色红曲霉诱变株,提供的紫色红曲霉诱变株能够生产高开环功能红曲,而且莫纳可林K的产量较高,几乎不产桔霉素,经鉴定能够用于食品、保健品、药品生产。
本发明的另一目的在于提供上述紫色红曲霉诱变株在制备功能红曲中的应用。
本发明的另一目的在于提供一种利用上述紫色红曲霉诱变株制备水溶性功能红曲的方法,该方法不使用甘油作为发酵原料,无甘油残留的安全隐患,而且工艺简单、易于规模化生产、绿色环保,制得的水溶性功能红曲中莫纳可林K的开环比例能够达到85%~95%,为高开环水溶性功能红曲。该功能红曲无苦味、具有功能红曲的特有香味,水溶性好,无桔霉素或含量极低,可用于食品、保健品、药品生产,市场潜力极大。
本发明的还一目的在于提供上述制备方法制得的水溶性功能红曲。
本发明的还一目的在于提供上述水溶性功能红曲在制备降血脂制剂中的应用。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:
一株紫色红曲霉诱变株,所述紫色红曲霉诱变株于2018年09月03日保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏编号:CCTCC NO:M2018586。
所述紫色红曲霉诱变株的保藏地址:中国武汉,中国典型培养物保藏中心。所述紫色红曲霉诱变株保藏时的名称为紫红曲菌TY02,英文为Monascus purpureus TY02。
上述紫色红曲霉诱变株是由发明人筛选、诱变得到,该紫色红曲霉诱变株能够生产高开环功能红曲,而且莫纳可林K的产量较高,几乎不产桔霉素,经鉴定能够用于食品、保健品、药品生产,明显优于现有的红曲属诱变株。
并且,该紫色红曲霉诱变株能够采用本发明提供的水溶性功能红曲的制备方法进行发酵,发酵时不使用甘油,无甘油残留的安全隐患,制得的水溶性功能红曲中莫纳可林K的开环比例能够达到85%~95%,为高开环水溶性功能红曲。该功能红曲无苦味、具有功能红曲的特有香味,水溶性好,无桔霉素或含量极低,可用于食品、保健品、药品生产,市场潜力极大。
另外,所述紫色红曲霉诱变株的rRNA基因ITS1-5.8S- ITS2区序列如SEQ ID NO:1所示。
培养发现,所述紫色红曲霉诱变株具有下述性质:
所述紫色红曲霉诱变株在PDA琼脂培养基上,25℃黑暗条件下培养7天,菌落直径40mm,橙色至紫红色,绒毛状(图1)。菌丝具隔膜,多分枝,直径3~6 μm。闭囊壳球形,直径25~45μm(图2),橙红色至紫红色。子囊孢子椭圆形,5~6.5×4~5 μm,无色透明或浅红色(图3)。分生孢子着生于菌丝顶端,单个或成串,近球形或倒梨形,无色透明或浅红色,8~11×6~8 μm(图3)。
本发明还保护上述紫色红曲霉诱变株在制备功能红曲中的应用。
本发明还保护上述紫色红曲霉诱变株在制备降血脂制剂中的应用。
本发明还保护上述紫色红曲霉诱变株的培养物,所述培养物为发酵液和/或菌丝体。
本发明同时保护一种水溶性功能红曲的制备方法,所述制备方法为,将上述紫色红曲霉诱变株在发酵培养基中进行液态深层发酵,得到所述水溶性功能红曲。
优选地,所述发酵培养基包括碳源、糖醇、氮源和无机盐,所述糖醇按重量体积比计的含量为1%~10% kg/m3。
所述发酵培养基不包括甘油。
现有技术的制备方法一般使用含有甘油的培养基,甘油在红曲霉发酵过程中具有重要作用,是现有技术制备功能红曲的液态发酵培养基中不可缺少的成分。
为了实现发酵培养基不使用甘油,发明人付出了巨大的努力对发酵培养基的配方进行调整,在实验过程中,偶然发现通过添加糖醇并控制糖醇的添加量,得到一种全新的发酵培养基,再搭配本发明提供的特殊的紫色红曲霉诱变株,通过液态深层发酵能够制备得到高开环水溶性功能红曲,而且莫纳可林K的产量较高,无桔霉素或含量极低。
其中,糖醇在发酵培养基中具有重要作用,能够促进本发明提供的紫色红曲霉诱变株在液态深层发酵产生开环结构的莫纳可林K。
由于发酵培养基不使用甘油,无甘油残留的安全隐患,产品的应用范围大大增加,可广泛用于食品、保健品、药品的生产。而且,上述制备方法工艺简单、易于规模化生产、绿色环保。
发酵结束后,进行固液分离,得到发酵滤液和滤渣。发酵滤液通过真空低温浓缩制成液态产品;滤渣经洗涤得菌丝体,后经真空低温干燥粉碎制成固态产品。液态产品中开环结构的莫纳可林K含量占莫纳可林K总含量的比例能够达到90%~95%,固态产品中开环结构的莫纳可林K含量占莫纳可林K总含量的比例能够达到85%~90%,两产品中开环、闭环结构的莫纳可林K的质量含量能够达到0.4%~0.8%,两产品均无异味、苦味,具功能红曲特有的香味,水溶性好,不含桔霉素或含量极低。
液态产品中的莫纳可林K为胞外莫纳可林K,本发明提供的方法制得产品中胞外莫纳可林K占总莫纳可林K含量的75%以上。
尤其突出的是,本发明提供的方法制得的产品在后续浓缩或干燥的后处理过程中,莫纳可林K中开环与闭环的比例不会减小,所以,本发明制得的功能红曲产品中可能存在有利于稳定开环莫纳可林K的成分。而现有技术在制备莫纳可林K时,经过同样的后处理,莫纳可林K中开环与闭环的比例会大幅减小。
优选地,所述糖醇为山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇或乳糖醇中的一种或几种。
优选地,所述糖醇按重量体积比计的含量为6%~8% kg/m3。
优选地,所述碳源为苦荞、山楂、决明子、青稞、淮山、石斛、大蒜或泽泻中的一种或几种。
优选地,所述氮源为大豆水解物和/或玉米浆。所述大豆水解物和玉米浆为本领域常用的氮源。
优选地,所述无机盐包括MgSO4·7H2O、MnSO4·7H2O、(NH4)2SO4、NaNO3、ZnSO4·7H2O和K2HPO4·3H2O。
优选地,所述发酵培养基包括如下按重量体积比计算的组分:碳源6%~18%,糖醇1%~10%,大豆水解物5%~10%,玉米浆0.5%~2%,MgSO4·7H2O 0.05%~0.15%,MnSO4·7H2O 0.05%~0.15%,(NH4)2SO4 0.05%~0.15%,NaNO3 0.1%~0.4%,ZnSO4·7H2O 0.1%~0.3%,K2HPO4·3H2O0.05%~0.2%;所述重量体积比的单位为kg/m3。
优选地,所述发酵培养基的pH值为3.0~5.0。所述发酵培养基一般需要在121℃温度下灭菌处理30 min。
发酵过程中,可以采用本领域中常用的接种量。优选地,接种量按体积比为8%~15%。
优选地,所述液态深层发酵条件为,前3天温度为30~35℃,3天后的温度为23~26℃;转速120~200 rpm;罐压0.03~0.08 Mpa;通风比1:0.8~2.2。发酵培养15~20天即可。
优选地,所述液态产品的浓缩温度为40~70℃。
优选地,所述固态产品的干燥温度为40~80℃。
上述方法中,发酵时接种用的种子液可以采用本领域常用的方法培养得到。
优选地,所述水溶性功能红曲的制备方法在发酵前进行种子液的制备,所述种子液由上述紫色红曲霉诱变株在种子培养基中培养得到。
优选地,所述种子培养基包括如下按重量体积比计算的组分:葡萄糖 5%~10%,蛋白胨2.0%~4.0%,玉米浆 0.5%~1.5%,NaNO3 0.1%~0.4 %,MgSO4•7H2O 0.05%~0.15%,K2HPO4•3H2O 0.05%~0.2%;所述重量体积比的单位为kg/m3。所述种子培养基的pH值为自然。
优选地,所述种子液的培养条件为,30~40℃,150~250 rpm,通风比1:1.5~2.5,罐压0.04~0.06 Mpa,在种子培养基中培养10~48 h。
优选地,所述种子液的培养是先培养一级种子,再将一级种子培养成二级种子。培养一级种子时,接种量为5%~12%,可以在80L的种子罐中进行。培养二级种子时,接种量为6%~15%,可以在240L的种子罐中进行。
上述制备方法制得的水溶性功能红曲也在本发明的保护范围之内。
所述水溶性功能红曲包括液态产品和固态产品,所述液态产品中开环结构的莫纳可林K含量占莫纳可林K总含量的90%~95%;所述固态产品中开环结构的莫纳可林K含量占莫纳可林K总含量的85%~90%。
所述水溶性功能红曲中莫纳可林K的质量含量为0.4%~0.8%。
所述水溶性功能红曲中不含桔霉素或含量极低。
本发明还保护上述水溶性功能红曲在制备降血脂制剂中的应用。
本发明还保护一种降血脂制剂,所述降血脂制剂含有上述水溶性功能红曲。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
本发明提供的一株筛选的红曲霉属紫色红曲菌诱变株,该菌株能够生产高开环功能红曲,而且莫纳可林K的产量较高,几乎不产桔霉素,经鉴定能够用于食品、保健品、药品生产,明显优于现有的红曲属诱变株。
另外,本发明将该紫色红曲菌诱变株置于本发明特制的发酵培养基中进行液态深层发酵,高效合成高开环结构的莫纳可林类物质,其中绝大部分以胞外的莫纳可林类物质为主;再经不破坏开、闭环比例的后处理工艺,使制备的产品具有高开环的酸式结构为主体,水溶性好,风味佳,不含桔霉素或含量极低的特点,最大限度地克服功能红曲因闭环结构而需人体自身分泌羟基酸酯酶参与水解才能利用而造成肝脏的损害,也就是常言的功能红曲有毒的问题。
同时,本发明采用非甘油原料进行液态深层发酵,无甘油残留的安全隐患。本发明的产品符合食品、保健品、药品的安全质量要求,其中液态产品可作为生产食品、保健品、药品口服液的原料,固态产品亦可作为生产食品、保健品、药品的原料,应用前景广阔。
附图说明
图1~3为本发明的紫色红曲霉诱变株的形态及显微特征。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。
实施例中的原料均可通过市售得到;
本发明中的紫色红曲霉诱变株于2018年09月03日保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏编号:CCTCC NO:M2018586;保藏地址:中国武汉,中国典型培养物保藏中心。实施例中使用的紫色红曲霉诱变株即为该诱变株。
除非特别说明,本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
实施例1
(1)种子液的制备
一级种子液的制备:
采用紫色红曲霉(Monascus purpureus Went )诱变株作为生产种子。以摇瓶种液按5%接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖 5 %, 蛋白胨2.0 %, 玉米浆0.5%, NaNO3 0.1 %, MgSO4•7H2O 0.05%, K2HPO4•3H2O 0.05%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值 自然)中进行培养增殖,30℃,150 rpm,通风比1:1.5,罐压0.04Mpa,培养36h,使菌体处于对数生长期。
二级种子液的制备:
以处于对数生长期的一级种子液按6%接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖 6 %, 蛋白胨2.5 %, 玉米浆 0.8%, NaNO3 0.12 %, MgSO4•7H2O 0.05%, K2HPO4•3H2O 0.05%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值 自然)中进行培养增殖,30℃,120rpm,通风比1:1.6,罐压0.04Mpa,培养28h,使菌体处于对数生长期。
(2)发酵:采用液态深层发酵
以处于对数生长期的二级种子液按8%接种量(V/V)接种于灭菌降温的发酵培养基( 碳源 6% ,糖醇1%,大豆水解物 5%,玉米浆 0.5%,MgSO4•7H2O 0.05%, MnSO4•7H2O0.05%, (NH4)2SO4 0.05%, NaNO3 0.1%, ZnSO4•7H2O 0.1%, K2HPO4•3H2O 0.05%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值3.0,其中碳源为按质量比40∶50∶10混合的决明子、青稞和大蒜;糖醇为等质量混合的甘露糖醇、赤藓糖醇和乳糖醇),发酵在1.5T发酵罐中进行,发酵培养基于0~3天,30℃;4~20天,23℃;120rpm; 罐压:0.03Mpa,通风比:1:0.8,培养20天。
后处理:发酵结束,进行固液分离,发酵滤液经真空低温浓缩得液态产品;滤渣经洗涤得菌丝体,后经真空低温干燥粉碎而成固态产品。其中:发酵滤液浓缩温度为50℃,菌丝体干燥温度为50℃。
实施例2
(1)种子液的制备
一级种子液的制备:
采用紫色红曲霉(Monascus purpureus Went )诱变株作为生产种子。以摇瓶种液按6%接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖 6%, 蛋白胨2.5 %, 玉米浆0.8%, NaNO3 0.15 %, MgSO4•7H2O 0.08%, K2HPO4•3H2O 0.08%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值 自然)中进行培养增殖,31℃,180 rpm,通风比1:1.6,罐压0.04Mpa,培养32h,使菌体处于对数生长期。
二级种子液的制备:
以处于对数生长期的一级种子液按8%接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖 6.5 %, 蛋白胨2.8 %, 玉米浆 1.0%, NaNO3 0.2 %, MgSO4•7H2O 0.08%, K2HPO4•3H2O 0.08%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值 自然)中进行培养增殖,31℃,150rpm,通风比1:1.8,罐压0.04Mpa,培养22h,使菌体处于对数生长期。
(2)发酵:采用液态深层发酵
以处于对数生长期的二级种子液按9%接种量(V/V)接种于灭菌降温的发酵培养基( 碳源 8% ,糖醇4%,大豆水解物 6%,玉米浆 0.8%,MgSO4•7H2O 0.08%, MnSO4•7H2O0.08%, (NH4)2SO4 0.08%, NaNO3 0.15%, ZnSO4•7H2O 0.15%, K2HPO4•3H2O 0.08%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值3.5,其中碳源为按质量比50∶40∶10混合的苦荞、泽泻和石斛;糖醇为等质量混合的山梨糖醇、木糖醇和乳糖醇),发酵在1.5T发酵罐中进行,发酵培养基于0~3天,31℃;4~20天,24℃;130rpm; 罐压:0.04Mpa,通风比:1:1.0,培养20天。
后处理:发酵结束,进行固液分离,发酵滤液经真空低温浓缩得液态产品;滤渣经洗涤得菌丝体,后经真空低温干燥粉碎而成固态产品。其中:发酵滤液浓缩温度为55℃,菌丝体干燥温度为55℃。
实施例3
(1)种子液的制备
一级种子液的制备:
采用紫色红曲霉(Monascus purpureus Went )诱变株作为生产种子。以摇瓶种液按8%接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖 8%, 蛋白胨2.8 %, 玉米浆1.0%, NaNO3 0.2 %, MgSO4•7H2O 0.1%, K2HPO4•3H2O 0.1%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值 自然)中进行培养增殖,32℃,200 rpm,通风比1:1.8,罐压0.05Mpa,培养24h,使菌体处于对数生长期。
二级种子液的制备:
以处于对数生长期的一级种子液按10%接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖 8.5 %, 蛋白胨3.0%, 玉米浆 1.2%, NaNO3 0.25 %, MgSO4•7H2O 0.12%,K2HPO4•3H2O 0.12%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值 自然)中进行培养增殖,32℃,180 rpm,通风比1:2.0,罐压0.05Mpa,培养18h,使菌体处于对数生长期。
(2)发酵:采用液态深层发酵
以处于对数生长期的二级种子液按10%接种量(V/V)接种于灭菌降温的发酵培养基( 碳源 10% ,糖醇6%,大豆水解物 8%,玉米浆 1.0%,MgSO4•7H2O 0.1%, MnSO4•7H2O0.1%, (NH4)2SO4 0.1%, NaNO3 0.2%, ZnSO4•7H2O 0.2%, K2HPO4•3H2O 0.1%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值4.0,其中碳源为按质量比60∶30∶10混合的淮山、山楂和石斛;糖醇为等质量混合的山梨糖醇、麦芽糖醇和赤藓糖醇),发酵在1.5T发酵罐中进行,发酵培养基于0~3天,32℃;4~20天,24.5℃;150rpm; 罐压:0.05Mpa,通风比:1:1.5,培养20天。
后处理:发酵结束,进行固液分离,发酵滤液经真空低温浓缩得液态产品;滤渣经洗涤得菌丝体,后经真空低温干燥粉碎而成固态产品。其中:发酵滤液浓缩温度为58℃,菌丝体干燥温度为60℃。
实施例4
(1)种子液的制备
一级种子液的制备:
采用紫色红曲霉(Monascus purpureus Went )诱变株作为生产种子。以摇瓶种液按12%接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖 10%, 蛋白胨4 %, 玉米浆1.5%, NaNO3 0.4 %, MgSO4•7H2O 0.15%, K2HPO4•3H2O 0.2%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值 自然)中进行培养增殖,35℃,250 rpm,通风比1:2.5,罐压0.06Mpa,培养16h,使菌体处于对数生长期。
二级种子液的制备:
以处于对数生长期的一级种子液按15%接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖 10%, 蛋白胨4.0 %, 玉米浆 1.5%, NaNO3 0.4 %, MgSO4•7H2O 0.15%, K2HPO4•3H2O 0.2%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值 自然)中进行培养增殖,35℃,200rpm,通风比1:2.5,罐压0.06Mpa,培养10h,使菌体处于对数生长期。
(2)发酵:采用液态深层发酵
以处于对数生长期的二级种子液按15%接种量(V/V)接种于灭菌降温的发酵培养基( 碳源 18% ,糖醇10%,大豆水解物 10%,玉米浆 2.0%,MgSO4•7H2O 0.15%, MnSO4•7H2O0.15%, (NH4)2SO4 0.15%, NaNO3 0.4%, ZnSO4•7H2O 0.3%, K2HPO4•3H2O 0.2%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值5.0,其中碳源为按质量比40∶50∶10混合的淮山、决明子和泽泻;糖醇为等质量混合的甘露糖醇、赤藓糖醇和木糖醇),发酵在1.5T发酵罐中进行,发酵培养基于0~3天,35℃;4~20天,26℃;200rpm; 罐压:0.06Mpa,通风比:1:2.2,培养20天。
后处理:发酵结束,进行固液分离,发酵滤液经真空低温浓缩得液态产品;滤渣经洗涤得菌丝体,后经真空低温干燥粉碎而成固态产品。其中:发酵滤液浓缩温度为60℃,菌丝体干燥温度为62℃。
实施例5
(1)种子液的制备
一级种子液的制备:
采用紫色红曲霉(Monascus purpureus Went )诱变株作为生产种子。以摇瓶种液按10%接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖 6.5%, 蛋白胨3.0%, 玉米浆1.2%, NaNO3 0.3%, MgSO4•7H2O 0.12%, K2HPO4•3H2O 0.15%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值 自然)中进行培养增殖,33℃,220 rpm,通风比1:2.0,罐压0.05Mpa,培养20h,使菌体处于对数生长期。
二级种子液的制备:
以处于对数生长期的一级种子液按12%接种量(V/V)接种于灭菌降温的种子培养基(葡萄糖 7.5 %, 蛋白胨3.2%, 玉米浆 1.2%, NaNO3 0.3%, MgSO4•7H2O 0.12%, K2HPO4•3H2O 0.15%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值 自然)中进行培养增殖,33℃,140rpm,通风比1:2.2,罐压0.05Mpa,培养16h,使菌体处于对数生长期。
(2)发酵:采用液态深层发酵
以处于对数生长期的二级种子液按12%接种量(V/V)接种于灭菌降温的发酵培养基( 碳源 12% ,糖醇8%,大豆水解物 9%,玉米浆 1.5%,MgSO4•7H2O 0.12%, MnSO4•7H2O0.12%, (NH4)2SO4 0.12%, NaNO3 0.3%, ZnSO4•7H2O 0.25%, K2HPO4•3H2O 0.15%,组分按重量体积比计,单位为kg/m3;pH值4.5,其中碳源为按质量比45∶50∶5混合的苦荞、决明子和大蒜;糖醇为等质量混合的甘露糖醇、乳糖醇和木糖醇),发酵在1.5T发酵罐中进行,发酵培养基于0~3天,33℃;4~20天,25℃;180rpm; 罐压:0.05Mpa,通风比:1:2.0,培养20天。
后处理:发酵结束,进行固液分离,发酵滤液经真空低温浓缩得液态产品;滤渣经洗涤得菌丝体,后经真空低温干燥粉碎而成固态产品。其中:发酵滤液浓缩温度为62℃,菌丝体干燥温度为65℃。
对比例1
本对比例与实施例1的区别在于,不加入糖醇;
其他原料及操作步骤与实施例1相同。
对比例2
本对比例与实施例1的区别在于,糖醇的含量为0.5%;
其他原料及操作步骤与实施例1相同。
对比例3
本对比例与实施例1的区别在于,糖醇的含量为12%;
其他原料及操作步骤与实施例1相同。
测试方法
(1)产品中莫纳可林K的开环比例测试方法:依据QB/T 2847-2007测试。
(2)产品中莫纳可林K的含量测试方法:依据QB/T 2847-2007测试。
(3)桔霉素含量的测试方法:依据QB/T 2847-2007测试。
测试结果
表1 实施例1~5及对比例1~3制得的功能红曲的测试结果
实施例1~5制得的功能红曲的测试结果如表1所示,本发明采用特定的菌株,通过特定的液态深层发酵方法,获得高开环水溶性功能红曲。具体是,该功能红曲中莫纳可林K的开环比例达到85%~95%,能最大限度地减少人体分泌羟基酸脂酶而造成肝脏的负担,也就是常言的功能红曲的毒性,即能产生降脂作用。同时,制成的功能红曲产品,无苦味,具有功能红曲的特有香味,水溶性好,无桔霉素或含量极低。高开环水溶性功能红曲在食品、保健品、药品上的应用十分广泛,市场潜力极大。
显然,本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例,而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
序列表
<110> 广东天益生物科技有限公司
<120> 一株紫色红曲霉诱变株和一种水溶性功能红曲及其制备方法和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 560
<212> DNA/RNA
<213> 紫红曲菌(Monascus purpureus)
<400> 1
ggcatccgag gtcacctaag gaaaaaaagg ttggagaggg caaaggcccc ggcccgacct 60
actgagcggg tgacaaagcc ccatacgctc gaggaccgga cgcggcgccg ccactgcctt 120
tcgggcccgt cccccttgcc cggaggcgca ggggacggcg gcccaacaca caagccgcgc 180
ttgaggggca gtaatgacgc tcggacaggc atgccccccg gaataccagg gggcgcaatg 240
tgcgttcaaa gattcgatga ttcactgaat tctgcaattc acattactta tcgcatttcg 300
ctgcgttctt catcgatgcc ggaaccaaga gatccgttgt tgaaagtttt aaccgatttg 360
gtatgtttac tcagacagca atccttttca aagacagcgt tcgagaagat gtctccggcg 420
ggccccgggg ggccgcgccg aagcaacagg aggtacaata atcacgggtg ggaggttggg 480
tcccacgaag gggacccgca ctcggtaatg atccttccgc aggttcacct acggaaacct 540
tgttacgact tttacttcca 560
Claims (3)
1.一种水溶性功能红曲的制备方法,其特征在于,将紫色红曲霉诱变株在发酵培养基中进行液态深层发酵,得到所述水溶性功能红曲;
所述紫色红曲霉诱变株于2018年09月03日保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏编号:CCTCC NO:M2018586;
所述紫色红曲霉诱变株的rRNA基因ITS1-5.8S-ITS2区序列如SEQ ID NO:1所示;
所述发酵培养基包括碳源、糖醇、氮源和无机盐,所述糖醇按重量体积比计的含量为1%~10%kg/m3;
所述糖醇为山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇或乳糖醇中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述糖醇按重量体积比计的含量为6%~8%kg/m3。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述碳源为苦荞、山楂、决明子、青稞、淮山、石斛、大蒜或泽泻中的一种或几种。
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