CN109517180A - 一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法 - Google Patents
一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109517180A CN109517180A CN201811265851.3A CN201811265851A CN109517180A CN 109517180 A CN109517180 A CN 109517180A CN 201811265851 A CN201811265851 A CN 201811265851A CN 109517180 A CN109517180 A CN 109517180A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mushroom
- bone
- lentinan
- chicken bone
- protein polymer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G81/00—Macromolecular compounds obtained by interreacting polymers in the absence of monomers, e.g. block polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G69/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
- C08G69/02—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids
- C08G69/08—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids derived from amino-carboxylic acids
- C08G69/10—Alpha-amino-carboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的的方法，包括如下步骤：（1）高压浸提，（2）加压过滤，（3）离心分离，（4）真空浓缩，（5）酶解，（6）柱层析，（7）合成反应。本发明提高了生产加工过程中副产品的利用率，增加了产品的科技含量和经济价值；其次，最大程度保留了胶原蛋白肽和香菇多糖的活性官能团，避免两种成分的活性流失；最后，胶原蛋白肽和香菇多糖的结合，使两者的功能性质相得益彰，在医疗保健、生理活性方面具有更大的应用潜力。
Description
技术领域
本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法。
背景技术
香菇多糖是从香菇中提取的有效活性成分，是一种以β-D(1→3)葡聚糖残基为主链，侧链为(1→6)葡聚糖残基的葡聚糖。香菇多糖可以激活细胞免疫、诱导免疫因子，调节机体免疫应答，增强白细胞对肿瘤的侵蚀，防止病毒与宿主细胞的结合，提高超氧化物歧化酶（SOD）活性，抑制丙二醛（MDA）生成，减轻脂质氧化，减少胆固醇，调节糖代谢。开发利用小分子胶原蛋白肽作为新的辅助治疗营养前景是非常远大的，生物活性肽是一种以失恬状态存在的具有氨基酸顺序的多肽，通过体内消化释放。低分子肽较蛋白质相比，具有良好的溶解性、低黏度、抗胶凝性、不会产生过敏反应等优点。除此之外，还具有众多的生理功能，可以抑制血管紧张素转化酶活性，预防血小板凝集，具有抗氧化、抗肿瘤的作用，对骨关节炎和骨质疏松症有潜在的治疗效果。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，本发明制作的多糖蛋白聚合物是一种以香菇多糖为骨架的胶原多肽聚集体，该物质实现了香菇多糖和胶原蛋白肽两种活性成分的有机结合，在医药保健、生物活性方面具有大的潜力。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
（1）高压浸提：分别将鸡骨与水按质量比为1:(1.2~1.5)混合，升高温度到40℃，恒温30分钟，进行脱血，之后升温至110-115℃，恒温4小时，另将香菇冲洗干净后与水按质量比为1:(6~7)混合，升温至120-125℃，恒温3小时；
（2）加压过滤：在压力0.2MPa条件下，使用200目滤网分别对鸡骨提取液和香菇提取液进行过滤；
（3）离心分离：鸡骨提取液通过管式离心机，将鸡油分离出来；
（4）真空浓缩：分别对鸡骨提取液和香菇提取液进过浓缩，浓缩至原来体积的1/10，得骨胶原蛋白浓缩液和香菇浓缩液：
（5）酶解：复合蛋白酶与骨胶原蛋白浓缩液按质量比2:1000混合，酶解条件为：先用氢氧化钙调节pH至8.0，升温至55-58℃，恒温1小时后升温至100℃，维持温度10分钟，得骨胶原多肽液；天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶与香菇浓缩液按质量比1:2000混合，酶解条件为：升温至36-40℃，恒温1小时后升温至100℃，维持温度10分钟，得香菇多糖溶液；
（6）柱层析：利用葡聚糖凝胶分子筛作用，分别对骨胶原多肽和香菇多糖进行层析，使用部分收集器收集层析液，以管数为横坐标，以吸光度为纵坐标，分别得到骨胶原多肽液和香菇多糖溶液的洗脱曲线，并分别收集不同洗脱峰对应管的洗脱液。使用液相色谱检测不同洗脱峰对应洗脱液的分子量，找到所需蛋白（2KDa-10KDa）或多糖（40KDa-100KDa）对应的洗脱峰收集液，将收集液进行透析，得到相应的纯化液。
（7）合成反应：取2kg香菇多糖纯化液与20g溴化氢在pH10-11条件下反应15分钟后加入0.4kg骨胶原多肽纯化液，于40℃条件下反应4小时，之后加入20g甘氨酸，在超纯水中透析8小时，加入4mol/L NaCl盐析，最后高速离心（6000r/min）并收集沉淀，得多糖蛋白聚合物。
优选的，步骤（1）中鸡骨提取温度110-112℃，香菇提取温度120-122℃。
优选的，步骤（6）中收集的蛋白纯化液和香菇多糖纯化液分子量范围为2KDa-4KDa,40KDa-60KDa。
优选的，步骤（7）中用0.1mol/L的氢氧化钠调PH至10.6-11.0。
本发明的有益效果：本发明提高了生产加工过程中副产品的利用率，增加了产品的科技含量和经济价值；其次，最大程度保留了胶原蛋白肽和香菇多糖的活性官能团，避免两种成分的活性流失；最后，胶原蛋白肽和香菇多糖的结合，使两者的功能性质相得益彰，在医疗保健、生理活性方面具有更大的应用潜力。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限制本发明的范围，该领域的技术熟练人员可以根据上述发明的内容作出一些非本质的改进和调整。
实施例1
一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，具体包括以下步骤：
（1）高压浸提：分别将鸡骨与水按质量比为1:1.2混合，升高温度到40℃，恒温30分钟，进行脱血，之后升温至110℃，恒温4小时，另将香菇冲洗干净后与水按质量比为1:6混合，升温至120℃，恒温3小时；
（2）加压过滤：在压力0.2MPa条件下，使用200目滤网分别对鸡骨提取液和香菇提取液进行过滤；
（3）离心分离：鸡骨提取液通过管式离心机，将鸡油分离出来；
（4）真空浓缩：分别对鸡骨提取液和香菇提取液进过浓缩，浓缩至原来体积的1/10，得骨胶原蛋白浓缩液和香菇浓缩液：
（5）酶解：复合蛋白酶与骨胶原蛋白浓缩液按质量比2:1000混合，酶解条件为：先用氢氧化钙调节pH至8.0，升温至55-58℃，恒温1小时后升温至100℃，维持温度10分钟，得骨胶原多肽液；天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶与香菇浓缩液按质量比1:2000混合，酶解条件为：升温至36-40℃，恒温1小时后升温至100℃，维持温度10分钟，得香菇多糖溶液；
（6）柱层析：利用葡聚糖凝胶分子筛作用，分别对骨胶原多肽和香菇多糖进行层析，使用部分收集器收集层析液，以管数为横坐标，以吸光度为纵坐标，分别得到骨胶原多肽液和香菇多糖溶液的洗脱曲线，并分别收集不同洗脱峰各管洗脱液。使用液相色谱检测不同洗脱峰对应洗脱液的分子量，找到所需蛋白（2KDa-4KDa）或多糖（40KDa-60KDa）对应的洗脱峰收集液，将收集液进行透析，得到相应的纯化液。
（7）合成反应：取2kg香菇多糖纯化液与20g溴化氢在pH10.6条件下反应15分钟后加入0.4kg骨胶原多肽纯化液，于40℃条件下反应4小时，之后加入20g甘氨酸，在超纯水中透析8小时，加入4mol/L NaCl盐析，最后高速离心（6000r/min）并收集沉淀，得多糖蛋白聚合物。
实施例2
一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物方法，具体包括以下步骤：
（1）高压浸提：分别将鸡骨与水按质量比为1:1.5混合，升高温度到40℃，恒温30分钟，进行脱血，之后升温至113℃，恒温4小时，另将香菇冲洗干净后与水香菇与水按按质量比为1:7混合，升温至123℃，恒温3小时；
（2）加压过滤：在压力0.2MPa条件下，使用200目滤网分别对鸡骨提取液和香菇提取液进行过滤；
（3）离心分离：鸡骨提取液通过管式离心机，将鸡油分离出来；
（4）真空浓缩：分别对鸡骨提取液和香菇提取液进过浓缩，浓缩至原来体积的1/10，得骨胶原蛋白浓缩液和香菇浓缩液：
（5）酶解：复合蛋白酶与骨胶原蛋白浓缩液按质量比2:1000混合，酶解条件为：先用氢氧化钙调节pH至8.0，升温至55-58℃，恒温1小时后升温至100℃，维持温度10分钟，得骨胶原多肽液；天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶与香菇浓缩液按质量比1:2000混合，酶解条件为：升温至36-40℃，恒温1小时后升温至100℃，维持温度10分钟，得香菇多糖溶液；
（6）柱层析：利用葡聚糖凝胶分子筛作用，分别对骨胶原多肽和香菇多糖进行层析，使用部分收集器收集层析液，以管数为横坐标，以吸光度为纵坐标，分别得到骨胶原多肽液和香菇多糖溶液的洗脱曲线，并分别收集不同洗脱峰各管洗脱液。使用液相色谱检测不同洗脱峰对应洗脱液的分子量，找到所需蛋白（2KDa-4KDa）或多糖（40KDa-60KDa）对应的洗脱峰收集液，将收集液进行透析，得到相应的纯化液。
（7）合成反应：取2kg香菇多糖纯化液与20g溴化氢在pH10.8条件下反应15分钟后加入0.4kg骨胶原多肽纯化液，于40℃条件下反应4小时，之后加入20g甘氨酸，在超纯水中透析8小时，加入4mol/L NaCl盐析，最后高速离心（6000r/min）并收集沉淀，得多糖蛋白聚合物。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征以及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (9)
1.一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的的方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）高压浸提：将鸡骨与水混合，脱血后升温至110-115℃，恒温4小时，另将香菇冲洗干净后与水混合，升温至120-125℃，恒温3小时；
（2）加压过滤：在压力0.2MPa条件下，使用200目滤网分别对鸡骨提取液和香菇提取液进行过滤；
（3）离心分离：鸡骨提取液通过管式离心机，将鸡油分离出来；
（4）真空浓缩：对步骤（2）过滤后的香菇提取液进行浓缩，得香菇浓缩液，对步骤（3）离心分离后的鸡骨提取液进行浓缩，得骨胶原蛋白浓缩液：
（5）酶解：用复合蛋白酶对骨胶原蛋白浓缩液进行酶解，得骨胶原多肽液；用天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶对香菇浓缩液进行酶解，得香菇多糖溶液；
（6）柱层析：利用葡聚糖凝胶分子筛作用，分别对骨胶原多肽和香菇多糖进行纯化、透析和收集得到香菇多糖纯化液和骨胶原多肽纯化液；
（7）合成反应：香菇多糖纯化液和骨胶原多肽纯化液反应得多糖蛋白聚合物。
2.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（1）中鸡骨与水的质量比为1:(1.2~1.5)，香菇与水的质量比为1:(6~7)，脱血条件为40℃，恒温30分钟。
3.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（4）中鸡骨提取液和香菇提取液都分别浓缩至原来体积的1/10。
4.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（5）中复合蛋白酶与骨胶原蛋白浓缩液的质量比为2:1000，酶解条件为：先用氢氧化钙调节pH至8.0，升温至55-58℃，恒温1小时后升温至100℃，保温10分钟。
5.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（5）中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶与香菇浓缩液的质量比为1:2000，酶解条件为：升温至36-40℃，恒温1小时后升温至100℃，保温10分钟。
6.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（6）中骨胶原多肽的分子量为2KDa-10KDa，香菇多糖的分子量为40KDa-100KDa。
7.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（6）中使用部分收集器收集层析液，以管数为横坐标，以吸光度为纵坐标，分别得到骨胶原多肽液和香菇多糖溶液的洗脱曲线，并分别收集不同洗脱峰对应管的洗脱液，使用液相色谱检测不同洗脱峰对应洗脱液的分子量，找到所需蛋白或多糖对应的洗脱峰收集液。
8.根据权利要求7所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：使用紫外光谱仪检测吸光度时，香菇多糖选择200nm处波长，骨胶原多肽选择280nm处波长。
9.根据权利要求1所述的利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法，其特征在于：所述步骤（7）中合成反应条件为：取2000g香菇多糖纯化液与20g溴化氢在pH=10.6条件下反应15分钟后加入400g骨胶原多肽纯化液，于40℃条件下反应4小时，之后加入20g甘氨酸，在超纯水中透析8小时，加入4mol/L NaCl盐析，最后在6000r/min的转速条件下离心并收集沉淀，得多糖蛋白聚合物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811265851.3A CN109517180A (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811265851.3A CN109517180A (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109517180A true CN109517180A (zh) | 2019-03-26 |
Family
ID=65772496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811265851.3A Pending CN109517180A (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109517180A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111567718A (zh) * | 2020-06-17 | 2020-08-25 | 江苏特味浓生物技术开发有限公司 | 骨胶原多肽-茶多酚络合物的制备方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1240137A (zh) * | 1998-11-06 | 2000-01-05 | 陈哲超 | 香菇多糖蛋白的加工方法 |
| WO2006106521A2 (en) * | 2005-04-07 | 2006-10-12 | Solubest Ltd. | Hydrophilic dispersions of nanoparticles of inclusion complexes of macromolecules |
| CN101906172A (zh) * | 2010-07-22 | 2010-12-08 | 吴茂玉 | 一种利用酶法提取香菇水不溶性多糖的方法 |
| CN106135580A (zh) * | 2016-07-08 | 2016-11-23 | 肇庆医学高等专科学校 | 一种养胃保健膏状凉茶及其制备方法 |
| CN108634296A (zh) * | 2018-05-11 | 2018-10-12 | 华南农业大学 | 一种雪峰乌鸡肽营养粉及其制备方法 |
-
2018
- 2018-10-29 CN CN201811265851.3A patent/CN109517180A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1240137A (zh) * | 1998-11-06 | 2000-01-05 | 陈哲超 | 香菇多糖蛋白的加工方法 |
| WO2006106521A2 (en) * | 2005-04-07 | 2006-10-12 | Solubest Ltd. | Hydrophilic dispersions of nanoparticles of inclusion complexes of macromolecules |
| CN101906172A (zh) * | 2010-07-22 | 2010-12-08 | 吴茂玉 | 一种利用酶法提取香菇水不溶性多糖的方法 |
| CN106135580A (zh) * | 2016-07-08 | 2016-11-23 | 肇庆医学高等专科学校 | 一种养胃保健膏状凉茶及其制备方法 |
| CN108634296A (zh) * | 2018-05-11 | 2018-10-12 | 华南农业大学 | 一种雪峰乌鸡肽营养粉及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 卢进峰: ""鸡骨深加工及综合利用"", 《南方工业》 * |
| 杨云等: "《中药化学成分提取分离手册》", 31 August 1998, 中国中医药出版社 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111567718A (zh) * | 2020-06-17 | 2020-08-25 | 江苏特味浓生物技术开发有限公司 | 骨胶原多肽-茶多酚络合物的制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107011460B (zh) | 一种以黑青稞麸皮为原料提取β-葡聚糖的方法 | |
| CN104513307B (zh) | 一种从大豆乳清中回收Kunitz及Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂的方法 | |
| CN104232718B (zh) | 铁皮石斛抗肿瘤多肽的制备方法及应用 | |
| CN102429089B (zh) | 一种耐钙大豆蛋白及其制备方法 | |
| CN109021096A (zh) | 一种螺旋藻多糖和藻蓝蛋白的分离提取纯化工艺 | |
| CN103044560A (zh) | 一种白芨多糖的制备方法 | |
| CN110272934A (zh) | 鸡内金小分子肽的提取方法及其应用 | |
| CN108265092B (zh) | 一种具有优良抗氧化活性的香菇寡糖及制备方法 | |
| CN107778376B (zh) | 一种三叶青多糖的制备方法及其应用 | |
| CN109517180A (zh) | 一种利用鸡骨和香菇制备新型多糖蛋白聚合物的方法 | |
| CN113337566A (zh) | 一种石斛多肽的制备方法 | |
| CN103740797B (zh) | 一种利用高温花生粕制备高水解度功能性短肽的方法 | |
| CN113956338B (zh) | 一种从刀豆中同时提取脲酶和刀豆凝集素的方法 | |
| CN105192244A (zh) | 一种瓜蒌籽多肽的制备方法 | |
| CN110343156B (zh) | 黑豆糖蛋白的提取纯化方法 | |
| CN105349607B (zh) | 一种提取甘露聚糖肽的方法 | |
| CN114107415A (zh) | 一种含小分子活性肽羊栖菜提取物的制备方法 | |
| CN102746413A (zh) | 蜂花粉多糖酶解破壁结合热水超声浸提方法 | |
| CN112159484A (zh) | 一种抗凝血流苏子多糖及其提取分离方法和应用 | |
| CN106699842A (zh) | 一种新的抗炎小分子多肽及其应用 | |
| CN110964767A (zh) | 一种紫菀多糖和紫菀多肽的提取方法 | |
| CN110818813A (zh) | 新型绞股蓝多糖的提取工艺优化及分离纯化 | |
| CN108359021A (zh) | 一种快速制备具有抗病毒和免疫调节活性的亚麻籽多糖的方法 | |
| CN117512043B (zh) | 一种降血糖抗氧化菊芋肽的制备方法 | |
| CN112176015B (zh) | 一种海参活性肽高效仿生制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190326 |