CN109511587B - 用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂，属于水产养殖技术领域，其制备方法为：将香樟内生菌接入含有蔗糖八乙酸酯和蔗糖硬脂酸酯的PDA液体培养基中培养，发酵完成后灭菌，获得的发酵液萃取，浓缩得香樟内生菌代谢产物；将次氯酸钠溶液和氰尿酸加入到反应釜中，同时通入氯气，反应后降温、过滤、得到二氯异氰尿酸钠；将香樟内生菌代谢产物和二氯异氰尿酸钠中加入柠檬酸盐缓冲剂、梓醇和酪蛋白，混合均匀，即得消毒剂。本发明消毒剂对病毒、真菌和细菌的杀灭率达99％以上，其稳定性更好、溶解度高、药效持续时间更长，对养殖水体不会造成二度污染，提高鱼卵的孵化率，且对麦穗鱼后期鱼苗的生长发育及肉质几乎没有影响。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂。
背景技术
麦穗鱼(Pseudorasbora parva)，俗称罗汉鱼、麻嫩子和偷嘴鱼等，在分类学上隶属于鲤形目(Cypriniformes)、鲤科(Cyprinidae)、鮈亚科(Gobioninae)、麦穗鱼属(Pseudorasbora)，是一种小型鱼类，广泛分布于东亚各淡水水域，具有食性广、繁殖力强和适应性强等特点，几乎入侵到了中国所有淡水江河湖泊及池塘中，以小型轮虫类、枝角类和桡足类浮游动物、水生昆虫及水生植物等为食。过去，人们长将其视为野杂鱼进行清除。随着养殖理念的变化，现如今人们逐渐意识到麦穗鱼具有个体小、含肉率高等优点，麦穗鱼鱼苗经过短期培育，正好可作为肉食性河川沙塘鳢和鳜鱼的适口活饵料鱼。目前关于麦穗鱼的人工繁殖中孵化相关报道较少，网箱孵化相对于孵化池孵化来说，成本低很多。其一网箱孵化利用越冬池，不必单独建设孵化池。其二饲料消耗少，网箱底部的纱网可以托住饲料，减少饲料在孵化池中时沉没在淤泥中的现象。其三网箱中的蝌蚪孵化时间大至相等，避免了孵化池中“大吃小”情况，而且孵化和变态率均比普通方法高。但麦穗鱼对环境毒性比较敏感，网箱孵化易受外界因素影响，造成孵化率较低，因此，在网箱孵化麦穗鱼时需要选择合适的消毒剂。不论是何种水产用消毒剂，其作用基本相同：即通过消毒剂的氧化或其它化学反应破坏或结合病原体生化结构、成分，使微生物失去活性，从而起到杀菌、抗菌或抑菌作用。水产用消毒剂的作用特点概括起来有以下三种情形：一是无选择性杀灭，即无论是细菌、病毒、寄生虫在足够的浓度或剂量下都被杀灭；二是只能作用于水生生物的表面，而不能深入其体内，对动物体内的病原体无法杀灭，所以很难治愈疾病；三是当消毒剂浓度较高或剂量较大时，对水生生物也会产生副作用，主要是对动物体表及鱼鳃部位造成损伤，极易诱发幼芽感染或寄生虫病，所以，消毒剂的使用浓度一定要在安全范围内。消毒剂虽然名称繁多，如杀菌剂、肠炎灵、菌毒杀等等，但其主要成分为消毒剂，且其中以卤素类消毒剂居多，作用原理相近。目前用消毒剂无法选择性地杀灭病原微生物，作用时间短，不能深入动物体内，所以很难杀灭动物体内的病原微生物，且副作用较大，且易导致天然有机质的卤化，生成具有生物毒性和遗传毒性的卤代消毒副产物，如三卤甲烷、卤乙酸、卤乙腈及其他新型消毒副产物。因此，亟需寻找一种新型的消毒剂。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种对病毒、真菌和细菌的杀灭率达99％以上，其稳定性更好、溶解度高、药效持续时间更长，对养殖水体不会造成二度污染，提高鱼卵的孵化率，且对麦穗鱼后期鱼苗的生长发育及肉质几乎没有影响的用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的制备方法，包括如下步骤：
a)将香樟内生菌接入含有蔗糖八乙酸酯和蔗糖硬脂酸酯的PDA液体培养基中，振荡培养，发酵完成后灭菌，然后将发酵液与菌体分离，获得的发酵液萃取，浓缩得香樟内生菌代谢产物，香樟内生菌在与宿主植物共生的过程中，能够与宿主植物协同进化，获得植物部分功能基因，从而具有产生与宿主植物相同或相似代谢产物的能力，如灭杀病毒、真菌和细菌的能力，同时利用香樟内生菌微生物发酵生产大量活性成分能够减少香樟资源的消耗，进一步提高生产效益；上述PDA液体培养基中蔗糖八乙酸酯和蔗糖硬脂酸酯的特殊存在能够激活香樟内生菌体内的沉默基因，提高香樟内生菌代谢产物中β-葡萄糖苷酶的含量，进而协同消毒剂中的其他有效成分发挥作用；
b)将次氯酸钠溶液和氰尿酸加入到反应釜中，同时通入氯气，得到二氯异氰尿酸钠悬浮液，而后降温、过滤、得到二氯异氰尿酸钠；
c)将所得香樟内生菌代谢产物和二氯异氰尿酸钠中加入柠檬酸盐缓冲剂、梓醇和酪蛋白，混合均匀，即得消毒剂。上述梓醇和酪蛋白的特殊存在能够改变麦穗鱼鱼卵与细菌之间的静电作用，减弱细菌细胞和麦穗鱼鱼卵的静电作用，使得细菌细胞能够在分散开来，提高消毒剂和细菌细胞的接触机会，从而提高消毒剂的杀菌能力和效果；此外梓醇和酪蛋白能够与半乳糖和海藻糖结合形成具有高亲和力的多价配体，该配体可与麦穗鱼鱼卵表面或鱼卵之间附着的其他细菌生物膜中的蛋白结合，进而抑制其生物膜的形成，甚至能导致已形成的生物膜完全解体，达到灭杀细菌的目的，提高网箱孵化麦穗鱼的孵化率。本发明制备方法简单可行，制得的消毒剂对病毒、真菌和细菌的杀灭率达99％以上，其稳定性更好、溶解度高、药效持续时间更长，对养殖水体不会造成二度污染，提高鱼卵的孵化率，且对麦穗鱼后期鱼苗的生长发育及肉质几乎没有影响。
作为优选，步骤a)中，振荡培养的温度为25-30℃，转速为150-170r/min，时间为5-7天。
作为优选，步骤a)中，PDA液体培养基中含有0.04-0.1wt％蔗糖八乙酸酯和0.02-0.05wt％蔗糖硬脂酸酯。
作为优选，步骤a)中，制得的香樟内生菌代谢产物中含有β-葡萄糖苷酶。作为更优选的方案，香樟内生菌代谢产物中含有1.4-1.6％β-葡萄糖苷酶。香樟内生菌代谢产物中β-葡萄糖苷酶的存在能够分解病菌生物膜的多糖，在降低微生物细胞对外界环境的抵抗能力的同时减弱病菌和鱼卵之间附着力，使得聚集的病菌分散开来，便于消毒剂和细菌细胞的接触，从而提高消毒剂的杀菌能力和效果；同时中β-葡萄糖苷酶的水解产物还能协助提高香樟内生菌代谢产物和二氯异氰尿酸钠的灭菌效果，使得本发明消毒剂对病毒、真菌和细菌的杀灭率达99％以上，其稳定性更好、溶解度高、药效持续时间更长，对养殖水体不会造成二度污染，提高鱼卵的孵化率，且对麦穗鱼后期鱼苗的生长发育及肉质几乎没有影响。
作为优选，步骤b)中，次氯酸钠与氰尿酸的摩尔比为3.8-4.2:1。次氯酸钠与氰尿酸的合理摩尔比可提高二氯异氰尿酸钠品质和产率。
作为优选，步骤b)中，反应釜中的温度为8-12℃，反应时间为0.5-1.5h。
作为优选，步骤c)中，所得消毒剂的pH在5至8之间。
作为优选，步骤c)中，柠檬酸盐缓冲剂包含柠檬酸和磷酸氢钠。
用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂，消毒剂包括如下成分及重量份：香樟内生菌代谢产物32-55份、二氯异氰尿酸钠7-18份、梓醇0.05-0.08份、酪蛋白1.2-1.8份。
用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的用法，将消毒剂加入网箱孵化池中养殖水，其添加量为0.04-0.1mg/L。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
1)本发明消毒剂对病毒、真菌和细菌的杀灭率达99％以上，其稳定性更好、溶解度高、药效持续时间更长，对养殖水体不会造成二度污染，提高鱼卵的孵化率，且对麦穗鱼后期鱼苗的生长发育及肉质几乎没有影响；2)本发明消毒剂用香樟内生菌代谢产物的制备方法能够激活香樟内生菌体内的沉默基因，提高香樟内生菌代谢产物中β-葡萄糖苷酶的含量，进而协同消毒剂中的其他有效成分发挥作用。
本发明采用了上述技术方案提供用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。
具体实施方式
下面，结合具体实施例对本发明实施方式作进一步说明。
实施例1：
用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的制备方法，包括如下步骤：
a)将香樟内生菌接入含有蔗糖八乙酸酯和蔗糖硬脂酸酯的PDA液体培养基中，振荡培养，发酵完成后灭菌，然后将发酵液与菌体分离，获得的发酵液萃取，浓缩得香樟内生菌代谢产物，香樟内生菌在与宿主植物共生的过程中，能够与宿主植物协同进化，获得植物部分功能基因，从而具有产生与宿主植物相同或相似代谢产物的能力，如灭杀病毒、真菌和细菌的能力，同时利用香樟内生菌微生物发酵生产大量活性成分能够减少香樟资源的消耗，进一步提高生产效益；上述PDA液体培养基中蔗糖八乙酸酯和蔗糖硬脂酸酯的特殊存在能够激活香樟内生菌体内的沉默基因，提高香樟内生菌代谢产物中β-葡萄糖苷酶的含量，进而协同消毒剂中的其他有效成分发挥作用；
b)将次氯酸钠溶液和氰尿酸加入到反应釜中，同时通入氯气，得到二氯异氰尿酸钠悬浮液，而后降温、过滤、得到二氯异氰尿酸钠；
c)将所得香樟内生菌代谢产物和二氯异氰尿酸钠中加入柠檬酸盐缓冲剂、梓醇和酪蛋白，混合均匀，即得消毒剂。上述梓醇和酪蛋白的特殊存在能够改变麦穗鱼鱼卵与细菌之间的静电作用，减弱细菌细胞和麦穗鱼鱼卵的静电作用，使得细菌细胞能够在分散开来，提高消毒剂和细菌细胞的接触机会，从而提高消毒剂的杀菌能力和效果；此外梓醇和酪蛋白能够与半乳糖和海藻糖结合形成具有高亲和力的多价配体，该配体可与麦穗鱼鱼卵表面或鱼卵之间附着的其他细菌生物膜中的蛋白结合，进而抑制其生物膜的形成，甚至能导致已形成的生物膜完全解体，达到灭杀细菌的目的，提高网箱孵化麦穗鱼的孵化率。本发明制备方法简单可行，制得的消毒剂对病毒、真菌和细菌的杀灭率达99％以上，其稳定性更好、溶解度高、药效持续时间更长，对养殖水体不会造成二度污染，提高鱼卵的孵化率，且对麦穗鱼后期鱼苗的生长发育及肉质几乎没有影响。
步骤a)中，振荡培养的温度为30℃，转速为170r/min，时间为7天；PDA液体培养基中含有0.1wt％蔗糖八乙酸酯和0.05wt％蔗糖硬脂酸酯；制得的香樟内生菌代谢产物中含有1.6％β-葡萄糖苷酶。香樟内生菌代谢产物中β-葡萄糖苷酶的存在能够分解病菌生物膜的多糖，在降低微生物细胞对外界环境的抵抗能力的同时减弱病菌和鱼卵之间附着力，使得聚集的病菌分散开来，便于消毒剂和细菌细胞的接触，从而提高消毒剂的杀菌能力和效果；同时中β-葡萄糖苷酶的水解产物还能协助提高香樟内生菌代谢产物和二氯异氰尿酸钠的灭菌效果，使得本发明消毒剂对病毒、真菌和细菌的杀灭率达99％以上，其稳定性更好、溶解度高、药效持续时间更长，对养殖水体不会造成二度污染，提高鱼卵的孵化率，且对麦穗鱼后期鱼苗的生长发育及肉质几乎没有影响。
步骤b)中，次氯酸钠与氰尿酸的摩尔比为4.2:1。次氯酸钠与氰尿酸的合理摩尔比可提高二氯异氰尿酸钠品质和产率；反应釜中的温度为12℃，反应时间为1.5h。
步骤c)中，所得消毒剂的pH为8.0；所用柠檬酸盐缓冲剂包含柠檬酸和磷酸氢钠。
用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂，消毒剂包括如下成分及重量份：香樟内生菌代谢产物55份、二氯异氰尿酸钠18份、梓醇0.08份、酪蛋白1.8份。
用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的用法，将消毒剂加入网箱孵化池中养殖水，其添加量为0.1mg/L。
实施例2：
用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂，消毒剂包括如下成分及重量份：香樟内生菌代谢产物43份、二氯异氰尿酸钠12份、梓醇0.07份、酪蛋白1.5份。加入柠檬酸盐缓冲剂至消毒剂的pH为7。其中，香樟内生菌代谢产物中含有1.5％β-葡萄糖苷酶；柠檬酸盐缓冲剂包含柠檬酸和磷酸氢钠。
上述香樟内生菌代谢产物的制备方法为：将香樟内生菌接入含有蔗糖八乙酸酯和蔗糖硬脂酸酯的PDA液体培养基中，于28℃、160r/min条件下振荡培养6天，发酵完成后灭菌，然后将发酵液与菌体分离，获得的发酵液萃取，浓缩得香樟内生菌代谢产物。所用PDA液体培养基中含有0.07wt％蔗糖八乙酸酯和0.035wt％蔗糖硬脂酸酯。
上述用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的用法，将消毒剂加入网箱孵化池中养殖水，其添加量为0.07mg/L。
实施例3：
用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂，消毒剂包括如下成分及重量份：香樟内生菌代谢产物32份、二氯异氰尿酸钠7份、梓醇0.05份、酪蛋白1.2份。加入柠檬酸盐缓冲剂至消毒剂的pH为5。其中，香樟内生菌代谢产物中含有1.4％β-葡萄糖苷酶；柠檬酸盐缓冲剂包含柠檬酸和磷酸氢钠。
上述香樟内生菌代谢产物的制备方法为：将香樟内生菌接入含有蔗糖八乙酸酯和蔗糖硬脂酸酯的PDA液体培养基中，于25℃、150r/min条件下振荡培养5天，发酵完成后灭菌，然后将发酵液与菌体分离，获得的发酵液萃取，浓缩得香樟内生菌代谢产物。所用PDA液体培养基中含有0.04wt％蔗糖八乙酸酯和0.02wt％蔗糖硬脂酸酯。
上述用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的用法，将消毒剂加入网箱孵化池中养殖水，其添加量为0.04mg/L。
对比例1：
用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂，消毒剂包括如下成分及重量份：香樟内生菌代谢产物43份、二氯异氰尿酸钠12份、梓醇0.07份。加入柠檬酸盐缓冲剂至消毒剂的pH为7。其中，香樟内生菌代谢产物中含有1.5％β-葡萄糖苷酶；柠檬酸盐缓冲剂包含柠檬酸和磷酸氢钠。
上述香樟内生菌代谢产物的制备方法为：将香樟内生菌接入含有蔗糖八乙酸酯和蔗糖硬脂酸酯的PDA液体培养基中，于28℃、160r/min条件下振荡培养6天，发酵完成后灭菌，然后将发酵液与菌体分离，获得的发酵液萃取，浓缩得香樟内生菌代谢产物。所用PDA液体培养基中含有0.07wt％蔗糖八乙酸酯和0.035wt％蔗糖硬脂酸酯。
上述用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的用法，将消毒剂加入网箱孵化池中养殖水，其添加量为0.07mg/L。
对比例2：
用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂，消毒剂包括如下成分及重量份：香樟内生菌代谢产物43份、二氯异氰尿酸钠12份、酪蛋白1.5份。加入柠檬酸盐缓冲剂至消毒剂的pH为7。其中，香樟内生菌代谢产物中含有1.5％β-葡萄糖苷酶；柠檬酸盐缓冲剂包含柠檬酸和磷酸氢钠。
上述香樟内生菌代谢产物的制备方法为：将香樟内生菌接入含有蔗糖八乙酸酯和蔗糖硬脂酸酯的PDA液体培养基中，于28℃、160r/min条件下振荡培养6天，发酵完成后灭菌，然后将发酵液与菌体分离，获得的发酵液萃取，浓缩得香樟内生菌代谢产物。所用PDA液体培养基中含有0.07wt％蔗糖八乙酸酯和0.035wt％蔗糖硬脂酸酯。
上述用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的用法，将消毒剂加入网箱孵化池中养殖水，其添加量为0.07mg/L。
对比例3：
用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂，消毒剂包括如下成分及重量份：香樟内生菌代谢产物43份、二氯异氰尿酸钠12份。加入柠檬酸盐缓冲剂至消毒剂的pH为7。其中，香樟内生菌代谢产物中含有1.5％β-葡萄糖苷酶；柠檬酸盐缓冲剂包含柠檬酸和磷酸氢钠。
上述香樟内生菌代谢产物的制备方法为：将香樟内生菌接入含有蔗糖八乙酸酯和蔗糖硬脂酸酯的PDA液体培养基中，于28℃、160r/min条件下振荡培养6天，发酵完成后灭菌，然后将发酵液与菌体分离，获得的发酵液萃取，浓缩得香樟内生菌代谢产物。所用PDA液体培养基中含有0.07wt％蔗糖八乙酸酯和0.035wt％蔗糖硬脂酸酯。
上述用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的用法，将消毒剂加入网箱孵化池中养殖水，其添加量为0.07mg/L。
对比例4：
用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂，消毒剂包括如下成分及重量份：香樟内生菌代谢产物43份、二氯异氰尿酸钠12份、梓醇0.07份、酪蛋白1.5份。加入柠檬酸盐缓冲剂至消毒剂的pH为7。其中，香樟内生菌代谢产物中含有1.5％β-葡萄糖苷酶；柠檬酸盐缓冲剂包含柠檬酸和磷酸氢钠。
上述香樟内生菌代谢产物的制备方法为：将香樟内生菌接入含有蔗糖八乙酸酯和蔗糖硬脂酸酯的PDA液体培养基中，于28℃、160r/min条件下振荡培养6天，发酵完成后灭菌，然后将发酵液与菌体分离，获得的发酵液萃取，浓缩得香樟内生菌代谢产物，其中含有0.85％的β-葡萄糖苷酶。这说明该PDA液体培养基中蔗糖八乙酸酯和蔗糖硬脂酸酯的特殊存在能够激活香樟内生菌体内的沉默基因，提高香樟内生菌代谢产物中β-葡萄糖苷酶的含量。
上述用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的用法，将消毒剂加入网箱孵化池中养殖水，其添加量为0.07mg/L。
试验例1：
2018年3月25日，舟山市某养殖场有4个网箱孵化麦穗鱼。依次投入本发明实施例2、对比例1、对比例2、对比例3和对比例4提供的消毒剂。投入实施例2消毒剂的孵化率为96.8％，投入对比例1消毒剂的孵化率为76.4％，投入对比例2消毒剂的孵化率为79.5％，投入对比例3消毒剂的孵化率为78.1％，投入对比例4消毒剂的孵化率为82.7％；本发明实施例2消毒剂的消毒效果好于对比例1、对比例2和对比例3，这表明梓醇和酪蛋白共同存时，才能够提高消毒剂的杀菌能力和效果，提高网箱孵化麦穗鱼的孵化率；本发明实施例2消毒剂的消毒效果好于对比例4，这表明β-葡萄糖苷酶的使得本发明消毒剂对病毒、真菌和细菌的杀灭率高，提高鱼卵的孵化率，且对麦穗鱼后期鱼苗的生长发育及肉质几乎没有影响。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。
Claims (10)
1.用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
a）将香樟内生菌接入含有蔗糖八乙酸酯和蔗糖硬脂酸酯的PDA液体培养基中，振荡培养，发酵完成后灭菌，然后将发酵液与菌体分离，获得的发酵液萃取，浓缩得香樟内生菌代谢产物；
b）将次氯酸钠溶液和氰尿酸加入到反应釜中，同时通入氯气，得到二氯异氰尿酸钠悬浮液，而后降温、过滤、得到二氯异氰尿酸钠；
c）将所得香樟内生菌代谢产物和二氯异氰尿酸钠中加入柠檬酸盐缓冲剂、梓醇和酪蛋白，混合均匀，即得消毒剂。
2.根据权利要求1所述的用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的制备方法，其特征在于：所述步骤a）中，振荡培养的温度为25-30℃，转速为150-170r/min，时间为5-7天。
3.根据权利要求1所述的用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的制备方法，其特征在于：所述步骤a）中，PDA液体培养基中含有0.04-0.1wt%蔗糖八乙酸酯和0.02-0.05wt%蔗糖硬脂酸酯。
4.根据权利要求1所述的用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的制备方法，其特征在于：所述步骤a）中，制得的香樟内生菌代谢产物中含有β-葡萄糖苷酶。
5.根据权利要求1所述的用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的制备方法，其特征在于：所述步骤b）中，次氯酸钠与氰尿酸的摩尔比为3.8-4.2:1。
6.根据权利要求1所述的用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的制备方法，其特征在于：所述步骤b）中，反应釜中的温度为8-12℃，反应时间为0.5-1.5h。
7.根据权利要求1所述的用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的制备方法，其特征在于：所述步骤c）中，所得消毒剂的pH在5至8之间。
8.根据权利要求1所述的用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的制备方法，其特征在于：所述步骤c）中，柠檬酸盐缓冲剂包含柠檬酸和磷酸氢钠。
9.权利要求1-8任一项所述的用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的制备方法制得的消毒剂，其特征在于：所述消毒剂包括如下成分及重量份：香樟内生菌代谢产物32-55份、二氯异氰尿酸钠7-18份、梓醇0.05-0.08份、酪蛋白1.2-1.8份。
10.权利要求1-8任一项所述的用于网箱孵化麦穗鱼的消毒剂的用法，其特征在于：将消毒剂加入网箱孵化池中养殖水，其添加量为0.04-0.1mg/L。
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