CN109504637B - 一株戊糖片球菌及其应用 - Google Patents

一株戊糖片球菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109504637B
CN109504637B CN201811633701.3A CN201811633701A CN109504637B CN 109504637 B CN109504637 B CN 109504637B CN 201811633701 A CN201811633701 A CN 201811633701A CN 109504637 B CN109504637 B CN 109504637B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pediococcus pentosaceus
strain
food
cfu
medicament
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811633701.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109504637A (zh
Inventor
黄菊青
林斌
徐庆贤
王�琦
郑怡
林晨韬
官雪芳
钱蕾
张臣心
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujian Academy Of Agricultural Sciences Agricultural Product Processing Research Institute
Original Assignee
Institute of Agricultural Engineering Technology of Fujian Academy of Agricultural Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Agricultural Engineering Technology of Fujian Academy of Agricultural Sciences filed Critical Institute of Agricultural Engineering Technology of Fujian Academy of Agricultural Sciences
Priority to CN201811633701.3A priority Critical patent/CN109504637B/zh
Publication of CN109504637A publication Critical patent/CN109504637A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109504637B publication Critical patent/CN109504637B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/10—Laxatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/41—Pediococcus
    • A23V2400/427—Pentosaceus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
    • A61K2035/115—Probiotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一株戊糖片球菌，所述菌株保藏名称为戊糖片球菌B49，于2018年6月19日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.15957。还公开了该戊糖片球菌在制备润肠通便药物、保健食品或普通食品中的应用；在制备抑制金黄色葡萄球菌药物、保健食品或普通食品中的应用；在制备抑制创伤弧菌药物、保健食品或普通食品中的应用。本发明提供的戊糖片球菌B49安全性高，该菌株以及利用该菌株制备的发酵酸奶能够显著缓解便秘，与现有同类型的商业菌株相比，具有显著的润肠通便效果，且在深入研究中，惊奇地发现该菌株对致病菌金黄色葡萄球菌的生长具有非常显著的抑制作用，并能够显著提高斑马鱼被创伤弧菌攻毒后的存活率。

Description

一株戊糖片球菌及其应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株戊糖片球菌及其应用。
背景技术
随着饮食习惯的改变和生活节奏的不断加快，便秘已成为中老年人群及上班族的常见病，而且呈年轻化的趋势。据统计，我国便秘的发病率从3.4％到27.2％不等。长期的便秘可使肠道细菌发酵而产生的致癌物质诱发肠道癌变。部分便秘严重者已经影响到生活质量。然而便秘患者多为便秘而苦恼，很少会去医院就诊，重视度较低。有的患者为了解决排便困难，服用泻药或者采用中药灌肠，但是这样会产生较大副作用和依赖性，而且不能解决根本问题。因此，开发润肠通便的药物、保健品或普通食品具有重要意义。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)隶属于葡萄球菌属(Staphylococcus)，有“嗜肉菌”的别称，是革兰氏阳性菌的代表，是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。创伤弧菌（ vibrio vulnificus），或称为海洋弧菌，是一种栖息于海洋中的细菌。创伤弧菌广泛分布在海水中，创伤弧菌可从牡蛎等海产品中分离得到。该菌主要通过伤口接触海水造成感染，也可经口感染。经伤口感染时可导致蜂窝织炎及骨髓炎等多种炎症，经口感染时常迅速导致菌血症或败血症。感染本菌后如不及时治疗，病死率很高。目前，对于这些致病菌主要还是采用抗生素进行抑菌治疗，但是抗生素存在耐药性的问题，因此，开发能够有效抑制金黄色葡萄球菌以及创伤弧菌生长的非抗生素类产品具有重要意义。
戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）是我国批准的可用于普通食品的菌种之一，于中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会2014 年第6 号公告。目前，戊糖片球菌的益生功能及其在发酵食品中的应用已受到食品科学领域学者的高度重视。大量研究显示，戊糖片球菌具在抑制食源性致病、调节肠道免疫、降低胆固醇、抗肿瘤等方面具有一定的功能，但由于普通戊糖片球菌的功效有限，所以到目前为止，行业内未见将戊糖片球菌开发用于缓解便秘、抑制特定致病菌（如金黄色葡萄球菌和创伤弧菌）的药物、保健食品或普通食品的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一株戊糖片球菌及其应用，开发了一株润肠通便功效强、对金黄色葡萄球菌和创伤弧菌抑制能力较强的菌株，以解决哺乳动物便秘的问题，为开发针对金黄色葡萄球菌和创伤弧菌的抑菌药物、保健食品或普通食品提供更多的原料选择。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一株戊糖片球菌，所述菌株保藏名称为戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）B49，于2018年6月19日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.15957。保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
本发明提供的戊糖片球菌B49分离自从一位健康妇女的初乳，菌落特征为：在MRS平板培养基上培养48 h后，菌落呈圆形，乳白色，凸起，边缘整齐，不透明，细胞形态呈球状，直径0.8~1.0 μm；适合生长的pH值为5.0~7.0，适合生长的温度为30~40℃；能够利用的糖类包括：L-阿拉伯糖、D-木糖、核糖、D-葡萄糖、D-甘露糖、D-果糖、D-半乳糖、D-乳糖、D-纤维二糖、麦芽糖、海藻糖、D-龙胆二糖；能够分泌亮氨酸芳香基酰胺酶、缬氨酸芳香基酰胺酶、酸性磷酸酶、萘酚-As-二磷酸水解酶、β-葡萄糖苷酶、N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶、胱氨酸芳香基酰胺酶；对致病菌金黄色葡萄球菌的生长具有非常显著的抑制作用；能够明显提高斑马鱼被创伤弧菌攻毒后的存活率。
本发明所述的戊糖片球菌在制备润肠通便药物、保健食品或普通食品中的应用；该药物、保健食品或普通食品中所含戊糖片球菌B49的活菌数为5.0×107-5.0×1011 cfu/mL或5.0×107-5.0×1011 cfu/g；优选活菌数为2.5×1010 cfu/mL。
具体是以所述戊糖片球菌B49为发酵菌株，将所述发酵菌株接种于液体乳培养基中，发酵至活菌数为5.0×107-2.0×108 cfu/mL的酸乳制品。
更具体地，将活菌数为1.5×106-2.5×106 cfu/mL的戊糖片球菌B49种子液按体积百分比为1.0%-5.0%的接种量接种于灭菌过的所述液体乳培养基中，充分混匀，经30-40℃发酵8-14h，至活菌数为5.0×107-2.0×108 cfu/mL即得。
本发明中所述液体乳培养基的配方为：每100 mL蒸馏水中添加奶粉12 g、白砂糖8g。
本发明所述的戊糖片球菌在制备抑制金黄色葡萄球菌药物、保健食品或普通食品中的应用；该药物、保健食品或普通食品中所含戊糖片球菌B49的活菌数为5.0×107-5.0×1011 cfu/mL或5.0×107-5.0×1011 cfu/g；优选活菌数为7.0×108 cfu/mL。
本发明所述的戊糖片球菌在制备抑制创伤弧菌药物、保健食品或普通食品中的应用；该药物、保健食品或普通食品中所含戊糖片球菌B49的活菌数为5.0×107-5.0×1011cfu/mL或5.0×107-5.0×1011 cfu/g；优选活菌数为2.0×107 cfu/mL。
本发明提供的戊糖片球菌B49分离自人类母乳，安全性高，该菌株以及利用该菌株制备的发酵乳制品能够显著缓解便秘，与现有同类型的商业菌株相比，具有更为显著的润肠通便效果，且在深入研究中惊奇地发现，该菌株对致病菌金黄色葡萄球菌的生长具有非常显著的抑制作用，并能够显著提高斑马鱼被创伤弧菌攻毒后的存活率，其作用明显优于现有同类型的商业菌株。因此，本发明提供的戊糖片球菌B49具有较高的工业应用价值。
附图说明
图1为戊糖片球菌B49的菌落形态。
图2为戊糖片球菌B49的扫描电镜图。
图3为戊糖片球菌B49的最适生长温度曲线。
图4为戊糖片球菌B49的最适生长pH曲线。
图5为戊糖片球菌B49及其发酵酸奶和对比组样品对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，若未特别指明，实施例中的培养基及实验条件均为常规培养基和实验条件。实施例中所用的试验材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1 戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）B49的分离与鉴定
1、菌株分离
从分娩婴儿不超过14天的中国福建健康妇女获取初乳，将获取的新鲜初乳置于超净工作台中用无菌的PBS溶液稀释，将未稀释的乳汁和稀释的乳汁分别分配到MRS培养基中。在37℃下恒温培养，直至菌落出现，用接种针挑取边缘生长良好的细菌，接种于新的MRS平板培养基上，待新接种的菌长成菌落后，再挑取其边缘的内生菌划线培养，如此反复得到纯化，直到得到单菌落，命名其为菌株B49。
其中MRS液体培养基配方为：胰蛋白胨10.0 g/L、牛肉粉5.0 g/L、酵母粉4.0 g/L、葡萄糖20.0 g/L、吐温80 1.0 mL/L、K2HPO4•3H2O 1.5 g/L、无水乙酸钠3.0 g/L、柠檬酸铵2.0 g/L、MgSO4•7H2O 0.2 g/L、MnSO4•H2O 0.04 g/L。pH值为6.0，在121℃灭菌20 min。
2、菌株鉴定
（1）菌落及菌体的形态观察：将菌株B49在MRS平板培养基上进行划线培养，在37℃恒温培养48 h后，在MRS平板培养基上培养48 h后，菌落呈圆形，乳白色，凸起，边缘整齐，不透明，菌落形态见图1。在扫描电子显微镜下观察，菌体呈球状，直径0.8~1.0 μm，其扫描电镜图为图2。
（2）菌株B49的生长特征观察：将菌株B49按体积比3.0%的接种量分别接种于MRS液体培养基中，置于不同温度下摇床培养24 h，发现菌株在10℃或50℃下基本不能生长，在20℃~40℃环境下生长良好，其最适生长温度为30℃，其最适生长温度曲线见图3；置于不同初始pH值环境下摇床培养24 h，发现菌株在pH值范围为4~10的环境中菌株能够生长，且在pH值为5.0~7.0的环境中生长最快，最适生长pH值为6.0，其最适生长pH曲线见图4。
（3）菌株B49的分子生物学鉴定：采用细菌全基因组快速抽提试剂盒，提取菌株B49的全基因组，通过选用细菌16S rDNA通用引物27F和1492R进行PCR，然后测序分析。测序结果经BLAST比对，鉴定该菌株为戊糖片球菌，基因序列如SEQ ID NO : 1所示，命名为：戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）B49，于2018年6月19日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.15957。保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
实施例2 戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）B49对糖类的利用性
应用API50CHL 试剂盒(Biomerieux，法国) 检测实施例1中分离的菌株B49对糖类的利用性，结果显示：本发明戊糖片球菌B49能够利用L-阿拉伯糖、D-木糖、核糖、D-葡萄糖、D-甘露糖、D-果糖、D-半乳糖、D-乳糖、D-纤维二糖、麦芽糖、海藻糖、D-龙胆二糖。
实施例3 戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）B49的酶活性
应用APIZYM 试剂盒(Biomerieux，法国) 检测实施例1 中分离的菌株B49的酶活性，结果显示：本发明戊糖片球菌B49能够分泌亮氨酸芳香基酰胺酶、缬氨酸芳香基酰胺酶、酸性磷酸酶、萘酚-As-二磷酸水解酶、β-葡萄糖苷酶、N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶、胱氨酸芳香基酰胺酶。
实施例4 戊糖片球菌B49发酵酸奶的制备
将实施例1中所述戊糖片球菌B49作为发酵菌株接种于液体乳培养基中，制备用于缓解便秘的发酵乳制品。所述液体乳培养基配方为：每100 mL蒸馏水中添加奶粉12 g、白砂糖8 g。经100 ℃水浴加热30 min后，冷却至室温，置于超净工作台，吸取戊糖片球菌B49种子液（浓度为2.0×106 cfu/mL），接种体积比3.0%的接种量接种于上述液体乳培养基中，充分混匀，经30 ℃发酵12 h，得到戊糖片球菌B49发酵酸奶，测其活菌数约为1.0×108 cfu/mL。
实施例5 戊糖片球菌B49及其发酵酸奶对小鼠便秘的干预效果
实验动物：SPF 级BALB/c雄性小鼠140只，7-9周龄，体重20±2克，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。
实验分组：试验共分为5组，分别为：正常对照组、便秘模型对照组、实验组1、实验组2和实验组3；实验组采用实施例1获得的戊糖片球菌B49；
实验组1为菌株B49低剂量组，其菌株浓度为2.5×109 cfu/mL；
实验组2为菌株B49高剂量组，其菌株浓度为2.5×1010 cfu/mL；
实验组3为菌株B49发酵酸奶组，其菌株浓度为1.0×108 cfu/mL，制备方法如实施例4所述。
对比例组：以现有技术中使用较为普遍的戊糖片球菌ATCC 33316为例与上述实验组进行对比。
设有对比组1和对比组2 两个对比例组；
对比组1为菌株ATCC 33316低剂量组，其菌株浓度为2.5×109 cfu/mL；
对比组2为菌株ATCC 33316高剂量组，其菌株浓度为2.5×1010 cfu/mL。
选取70只小鼠，随机分成7组，每组10只，进行小肠运动实验；另外70只，随机分成7组，每组10只，进行排便时间，粪便粒数、粪便重量及粪便含水量测定实验。具体实验方法按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中“通便功能检验方法”进行，所选择的便秘造模剂为10 mg/(kg·BW) 洛派丁胺（西安杨森制药有限公司）。受试药物B49菌液及其发酵酸奶由实施例1和实施例4获得，给药剂量为0.2 ml/只/天，连续给药14天。
统计结果见表1。
表1 本发明戊糖片球菌B49及其发酵酸奶对便秘小鼠的干预结果
Figure DEST_PATH_IMAGE002
备注：同一列数值上方不同字母代表差异具有显著性（p<0.05）（Ducan检验法）。
表1显示，与便秘模型对照组相比，实验组1，即菌株B49低剂量组（浓度：2.5×109cfu/mL），实验组2，即菌株B49高剂量组（浓度：2.5×1010 cfu/mL），实验组3，即菌株B49发酵酸奶组（终浓度：1.0×108 cfu/mL）的小肠墨汁推进率均明显更高（p<0.05），首粒排黑便时间均明显更短（p<0.05）、6h排黑便粒数明显更多（p<0.05），6h排黑便质量和粪便水分含量明显更高（p<0.05）。以上结果表明本发明戊糖片球菌B49及其发酵乳制品能够显著改善便秘小鼠的症状，具有明显的润肠通便功能。
而与便秘模型对照组相比，对比组1（菌株ATCC 33316低剂量组，其菌液浓度2.5×109 cfu/mL）对便秘小鼠的各项指标均无明显改善；对比组2（菌株ATCC 33316高剂量组，其菌液浓度2.5×1010 cfu/mL）对便秘小鼠的各项指标有所改善，体现为小肠墨汁推进率均明显更高（p<0.05），首粒排黑便时间均明显更短（p<0.05）、粪便水分含量明显更高（p<0.05），说明高剂量（浓度：2.5×1010 cfu/mL）的戊糖片球菌ATCC 33316能够在一定程度上改善便秘小鼠的症状。整体对比来看，在同等剂量下本发明戊糖片球菌B49对便秘小鼠的干预效果显著优于戊糖片球菌ATCC 33316。
实施例6 戊糖片球菌B49及其发酵酸奶对金黄色葡萄球菌生长的抑制试验
实验方法：以金黄色葡萄球菌为指示菌，将指示菌株（浓度约为：3.0×107 cfu/mL）分别涂布于LB琼脂平板上，用无菌打孔器在平板上打3个直径为6 mm的加样孔；在孔中加入100 μL的实验组菌液及其对比组菌液或抗生素药片，于37℃生化培养箱中培养24 h。观察并记录抑菌圈大小。
实验组和对比组设计：
实验组4为浓度为7.0×108 cfu/mL的戊糖片球菌B49菌液；
实验组3为菌株B49发酵酸奶组，即实施例4制备的酸奶，其菌株浓度为1.0×108cfu/mL；
对比组3为浓度为7.0×108 cfu/mL的戊糖片球菌ATCC 33316菌液；
对比组4为戊糖片球菌ATCC 33316发酵酸奶组，制备方法同实施例4所述，仅将B49替换为戊糖片球菌ATCC 33316，其菌株浓度为1.0×108 cfu/mL；
对比组5为萘啶酮酸组，30 μg/片，杭州微生物试剂有限公司生产；
对比组6为多粘菌素组，300 IU/片，杭州微生物试剂有限公司生产；
对比组7为万古霉素组，30 μg/片，杭州微生物试剂有限公司生产；
对比组8为链霉素组，10 μg/片，杭州微生物试剂有限公司生产。
对比组均是在加样孔中添加一片抗生素，进行试验。
统计结果见表2。
表2 本发明戊糖片球菌B49和对比菌株对金黄色葡萄球菌的抗菌活性
Figure DEST_PATH_IMAGE004
表2显示本发明戊糖片球菌B49及其发酵酸奶对金黄色葡萄球菌的生长具有很强的抑制作用，而对比菌株戊糖片球菌ATCC 33316（对比组3）及其发酵酸奶（对比组4）对金黄色葡萄球菌的生长抑制作用较弱，详见图5。在同等条件下，与对比菌株戊糖片球菌ATCC33316及其发酵酸奶相比，本发明的戊糖片球菌B49及其发酵酸奶对金黄色葡萄球菌具有更为显著的抑制效果。
抗生素萘啶酮酸（对比组5）、多粘菌素（对比组6）、万古霉素（对比组7）、链霉素（对比组8）对致病菌金黄色葡萄球菌的生长具有明显的抑制作用，见图5，抑菌圈直径大小分别为15 mm、13 mm、18 mm和14 mm。然而，对比本发明戊糖片球菌B49及其发酵酸奶，可以发现，本发明戊糖片球菌B49对致病菌金黄色葡萄球菌的抑菌效果优于上述4种抗生素（萘啶酮酸、多粘菌素、万古霉素、链霉素），而本发明戊糖片球菌B49的发酵酸奶对致病菌金黄色葡萄球菌的抑菌效果与萘啶酮酸接近，优于多粘菌素和链霉素。可以说，本发明戊糖片球菌B49及其发酵酸奶对致病菌金黄色葡萄球菌的这么优异的抑菌效果是完全没有预料到的。
实施例7 戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）B49对斑马鱼被创伤弧菌攻毒后存活率的影响
实验方法：98只斑马鱼随机分为7组，每组14只，每组单独饲养于1缸，将10 μL不同实验组和对比组的戊糖片球菌液添加于饲料中饲养斑马鱼，每天2次，连续饲养14天后，取10 μL创伤弧菌液（OD值为0.68的菌液稀释400倍）对每只斑马鱼进行注射攻毒，1天后，统计斑马鱼的存活情况，计算斑马鱼被创伤弧菌攻毒后的存活率，结果见表3。
实验组：
实验组6为浓度为2.0×106 cfu/mL的戊糖片球菌B49菌液；
实验组7为浓度为2.0×107cfu/mL的戊糖片球菌B49菌液；
实验组8为浓度为2.0×108cfu/mL的戊糖片球菌B49菌液；
对比组9为浓度为2.0×106cfu/mL的戊糖片球菌ATCC 33316菌液；
对比组10为浓度为2.0×107cfu/mL的戊糖片球菌ATCC 33316菌液；
对比组11为浓度为2.0×108cfu/mL的戊糖片球菌ATCC 33316菌液。
表3 本发明戊糖片球菌B49对创伤弧菌攻毒的斑马鱼的存活率的影响
Figure DEST_PATH_IMAGE005
表3显示，斑马鱼被创伤弧菌攻毒后发生明显中毒现象，表现为鱼体死亡（空白对照组的斑马鱼被创伤弧菌攻毒后的存活率仅为7.14%），而本发明戊糖片球菌B49低、中、高浓度处理组（实验组6、7、8）的斑马鱼被创伤弧菌攻毒后的存活率分别为21.42%、57.14%和21.42%，均较空白对照组明显提高。尤其是经中浓度（2.0×107 cfu/mL）B49菌液饲养后的斑马鱼，其被创伤弧菌攻毒后的存活率比空白对照组高出50%。以上结果表明本发明戊糖片球菌B49能够显著降低创伤弧菌对斑马鱼的毒性，提高斑马鱼被创伤弧菌攻毒后的存活率。
对比菌株（戊糖片球菌ATCC 33316）低、中、高浓度处理组（对比组9、10、11）的斑马鱼被创伤弧菌攻毒后的存活率均为14.28%、21.42%和21.42%，均较空白对照组有所提高。但与同浓度的本发明戊糖片球菌B49相比，对比菌株（戊糖片球菌ATCC 33316）对提高斑马鱼被创伤弧菌攻毒后的存活率效果明显更弱。
本发明中对比组中所用的戊糖片球菌ATCC 33316为模式菌株，购自美国模式菌种收集中心。
综上所述，本发明提供的戊糖片球菌B49对便秘小鼠具有显著的润肠通便效果，对致病菌金黄色葡萄球菌的生长具有明显的抑制作用，并能够显著降低创伤弧菌对斑马鱼的毒性，提高斑马鱼被创伤弧菌攻毒后的存活率。同时，与现有同类型的模式菌株相比，本发明提供的戊糖片球菌B49对便秘小鼠的润肠通便作用明显更优，对提高斑马鱼被创伤弧菌攻毒后的存活率效果明显更强。与现有同类型的模式菌株和抗生素相比，本发明提供的戊糖片球菌B49对金黄色葡萄球菌生长的抑制活性明显更强。因此，本发明提供的戊糖片球菌B49具有较高的工业应用价值。
以上仅是本发明的若干个具体实施例。本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 福建省农业科学院农业工程技术研究所
<120> 一株戊糖片球菌及其应用
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1447
<212> DNA
<213> 戊糖片球菌B49
<400> 1
tgcagtcgaa cgaacttccg ttaattgatt atgacgtact tgtactgatt gagattttaa 60
cacgaagtga gtggcgaacg ggtgagtaac acgtgggtaa cctgcccaga agtaggggat 120
aacacctgga aacagatgct aataccgtat aacagagaaa accgcatggt tttcttttaa 180
aagatggctc tgctatcact tctggatgga cccgcggcgt attagctagt tggtgaggta 240
aaggctcacc aaggcagtga tacgtagccg acctgagagg gtaatcggcc acattgggac 300
tgagacacgg cccagactcc tacgggaggc agcagtaggg aatcttccac aatggacgca 360
agtctgatgg agcaacgccg cgtgagtgaa gaagggtttc ggctcgtaaa gctctgttgt 420
taaagaagaa cgtgggtaag agtaactgtt tacccagtga cggtatttaa ccagaaagcc 480
acggctaact acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt atccggattt 540
attgggcgta aagcgagcgc aggcggtctt ttaagtctaa tgtgaaagcc ttcggctcaa 600
ccgaagaagt gcattggaaa ctgggagact tgagtgcaga agaggacagt ggaactccat 660
gtgtagcggt gaaatgcgta gatatatgga agaacaccag tggcgaaggc ggctgtctgg 720
tctgcaactg acgctgaggc tcgaaagcat gggtagcgaa caggattaga taccctggta 780
gtccatgccg taaacgatga ttactaagtg ttggagggtt tccgcccttc agtgctgcag 840
ctaacgcatt aagtaatccg cctggggagt acgaccgcaa ggttgaaact caaaagaatt 900
gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagctacg cgaagaacct 960
taccaggtct tgacatcttc tgacagtcta agagattaga ggttcccttc ggggacagaa 1020
tgacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca 1080
acgagcgcaa cccttattac tagttgccag cattaagttg ggcactctag tgagactgcc 1140
ggtgacaaac cggaggaagg tggggacgac gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg 1200
ctacacacgt gctacaatgg atggtacaac gagtcgcgag accgcgaggt taagctaatc 1260
tcttaaaacc attctcagtt cggactgtag gctgcaactc gcctacacga agtcggaatc 1320
gctagtaatc gcggatcagc atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc 1380
ccgtcacacc atgagagttt gtaacaccca aagccggtgg ggtaaccttt aggagctagc 1440
cgtctaa 1447

Claims (9)

1.一株戊糖片球菌，其特征在于，所述菌株保藏名称为戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）B49，于2018年6月19日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.15957。
2.一种如权利要求1所述的戊糖片球菌在制备润肠通便药物、保健食品或普通食品中的应用。
3.根据权利要求2所述的戊糖片球菌在制备润肠通便药物、保健食品或普通食品中的应用，其特征在于，该药物、保健食品或普通食品中所含戊糖片球菌B49的活菌数为5.0×107-5.0×1011cfu/mL或5.0×107-5.0×1011cfu/g。
4.根据权利要求2或3所述的戊糖片球菌在制备润肠通便药物、保健食品或普通食品中的应用，其特征在于，以所述戊糖片球菌B49为发酵菌株，将所述发酵菌株接种于液体乳培养基中，发酵至活菌数为5.0×107-2.0×108cfu/mL的酸乳制品。
5.根据权利要求4所述的戊糖片球菌在制备润肠通便药物、保健食品或普通食品中的应用，其特征在于，将活菌数为1.5×106-2.5×106cfu/mL的戊糖片球菌B49种子液按体积百分比为1.0%-5.0%的接种量接种于灭菌过的液体乳培养基中，充分混匀，经30-40℃发酵8-14h，至活菌数为5.0×107-2.0×108cfu/mL即得；所述液体乳培养基的配方为：每100 mL蒸馏水中添加奶粉12 g、白砂糖8 g。
6.一种如权利要求1所述的戊糖片球菌在制备抑制金黄色葡萄球菌药物、保健食品或普通食品中的应用。
7.根据权利要求6所述的戊糖片球菌在制备抑制金黄色葡萄球菌药物、保健食品或普通食品中的应用，其特征在于，该药物、保健食品或普通食品中所含戊糖片球菌B49的活菌数为5.0×107-5.0×1011cfu/mL或5.0×107-5.0×1011cfu/g。
8.一种如权利要求1所述的戊糖片球菌在制备抑制创伤弧菌药物、保健食品或普通食品中的应用。
9.根据权利要求8所述的戊糖片球菌在制备抑制创伤弧菌药物、保健食品或普通食品中的应用，其特征在于，该药物、保健食品或普通食品中所含戊糖片球菌B49的活菌数为1.0×106-5.0×1011cfu/mL或1.0×106-5.0×1011cfu/g。
CN201811633701.3A 2018-12-29 2018-12-29 一株戊糖片球菌及其应用 Active CN109504637B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811633701.3A CN109504637B (zh) 2018-12-29 2018-12-29 一株戊糖片球菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811633701.3A CN109504637B (zh) 2018-12-29 2018-12-29 一株戊糖片球菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109504637A CN109504637A (zh) 2019-03-22
CN109504637B true CN109504637B (zh) 2021-10-08

Family

ID=65756825

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811633701.3A Active CN109504637B (zh) 2018-12-29 2018-12-29 一株戊糖片球菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109504637B (zh)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110172420B (zh) * 2019-05-15 2022-03-01 福建省农业科学院农业工程技术研究所 一株鼠李糖乳杆菌及其应用
CN110734874A (zh) * 2019-10-17 2020-01-31 广东海洋大学 一种具有食品防腐保鲜作用的乳酸菌zy-B及其应用
CN110964673B (zh) * 2019-12-30 2022-03-04 上海应用技术大学 一种具有高抗氧化性及美白效果的戊糖片球菌及其应用
CN111117918B (zh) * 2020-01-06 2022-03-25 江南大学 缓解pfos毒害作用的多功能戊糖片球菌ccfm1107、其发酵食品及应用
CN111961611A (zh) * 2020-07-21 2020-11-20 云南省畜牧兽医科学院 一种戊糖片球菌368及其应用
CN113412933A (zh) * 2021-05-19 2021-09-21 集美大学 一种复合菌种及其制备植物酵素的方法
CN113980848B (zh) * 2021-11-01 2023-10-31 河北科技大学 一种戊糖片球菌sbc5及其应用
CN114085789B (zh) * 2021-11-03 2023-08-15 中国农业大学 戊糖片球菌ma.wtpqj01及其应用
CN114437990B (zh) * 2022-03-07 2024-02-20 中粮麦芽（大连）有限公司 戊糖片球菌、菌剂及其应用以及制备低血糖生成指数食品的方法
CN117264850B (zh) * 2023-11-09 2024-05-14 潍坊君薇生物科技有限责任公司 一种具有辅助治疗阴道炎和增强免疫力功能的戊糖片球菌sw006及其应用

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008028210A3 (de) * 2006-09-07 2008-08-21 Oesterr Rotes Kreuz Bakteriennachweis
KR20100085352A (ko) * 2009-01-20 2010-07-29 대한민국 농촌진흥청 발효 마늘액을 포함하는 항생제 저항성 유해균의 생장 억제용 조성물
CN103517991A (zh) * 2010-10-27 2014-01-15 昆特拜克股份公司 通过包括嵌入物分子的探针捕获目标dna和rna
CN103540545A (zh) * 2013-09-28 2014-01-29 浙江大学 一种戊糖片球菌及其应用
CN104611255A (zh) * 2014-12-17 2015-05-13 扬州大学 一株高凝聚性戊糖片球菌及其在净化水体中副溶血性弧菌中的应用
CN104946558A (zh) * 2015-05-19 2015-09-30 孙军 一株戊糖片球菌p9-5及其筛选鉴定和应用
CN106047759A (zh) * 2016-07-12 2016-10-26 西北农林科技大学 一株戊糖片球菌及其应用
CN106190894A (zh) * 2016-07-12 2016-12-07 汕头大学 一株戊糖片球菌g11及其筛选与应用
CN107099482A (zh) * 2017-06-21 2017-08-29 浙江鸣食品股份有限公司 一种戊糖片球菌及其应用
CN108373983A (zh) * 2018-03-15 2018-08-07 江南大学 戊糖片球菌ccfm1012、其发酵食品及其在制备拮抗空肠弯曲杆菌感染药物中的应用
CN111035658A (zh) * 2018-10-15 2020-04-21 深圳华大生命科学研究院 戊糖片球菌的用途

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008028210A3 (de) * 2006-09-07 2008-08-21 Oesterr Rotes Kreuz Bakteriennachweis
KR20100085352A (ko) * 2009-01-20 2010-07-29 대한민국 농촌진흥청 발효 마늘액을 포함하는 항생제 저항성 유해균의 생장 억제용 조성물
CN103517991A (zh) * 2010-10-27 2014-01-15 昆特拜克股份公司 通过包括嵌入物分子的探针捕获目标dna和rna
CN103540545A (zh) * 2013-09-28 2014-01-29 浙江大学 一种戊糖片球菌及其应用
CN104611255A (zh) * 2014-12-17 2015-05-13 扬州大学 一株高凝聚性戊糖片球菌及其在净化水体中副溶血性弧菌中的应用
CN104946558A (zh) * 2015-05-19 2015-09-30 孙军 一株戊糖片球菌p9-5及其筛选鉴定和应用
CN106047759A (zh) * 2016-07-12 2016-10-26 西北农林科技大学 一株戊糖片球菌及其应用
CN106190894A (zh) * 2016-07-12 2016-12-07 汕头大学 一株戊糖片球菌g11及其筛选与应用
CN107099482A (zh) * 2017-06-21 2017-08-29 浙江鸣食品股份有限公司 一种戊糖片球菌及其应用
CN108373983A (zh) * 2018-03-15 2018-08-07 江南大学 戊糖片球菌ccfm1012、其发酵食品及其在制备拮抗空肠弯曲杆菌感染药物中的应用
CN111035658A (zh) * 2018-10-15 2020-04-21 深圳华大生命科学研究院 戊糖片球菌的用途

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Effect of extracted pectin from fruit wastes on growth of pediococcus pentosaceus RSU-Nh1 and Lactobacillus plantarum RSU-SO2";Showpanis,K.等;《Internantional Journal of Agricutural Technology》;20200131;第16卷(第2期);第403-420页 *
"Medium Optimization for Pediocin SA131 Production by Pediococcus pentosaceus SA131 against Bovine Mastitis Using Response Surface Methodology";Park, YL等;《KOREAN JOURNAL FOR FOOD SCIENCE OF ANIMAL RESOURCES》;20100228;第30卷(第1期);第66-72页 *
"戊糖片球菌C-2-1产细菌素的研究";王艳婷;《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）工程科技Ⅰ辑》;20170215(第2（2017）期);B024-546 *
"水产源乳酸菌的多样性及抑菌活性研究";刘君等;《水产科学》;20150615;第34卷(第6期);第351-357页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109504637A (zh) 2019-03-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109504637B (zh) 一株戊糖片球菌及其应用
KR101860553B1 (ko) 질 내 병원성 미생물에 대한 증식억제활성을 갖는 락토바실러스 속 균주
KR100808910B1 (ko) 항균 및 항바이러스 효과를 가진 신규한 유산균 및 이를포함하는 조성물
CN1888051A (zh) 一株植物乳杆菌及其应用
CN112458006A (zh) 用于预防和/或治疗生殖道菌群紊乱相关疾病的格氏乳杆菌
CN109749957B (zh) 一种具有水产病原菌拮抗特性的格氏乳杆菌制剂的制备及应用
CN110157645B (zh) 一种唾液乳杆菌y4及其应用
CN110878266B (zh) 一株约氏乳杆菌及其用途
CN113040390B (zh) 一株益生、耐盐约氏乳杆菌及其在畜禽水产养殖中防治病原菌的应用
CN110172420B (zh) 一株鼠李糖乳杆菌及其应用
CN111518714A (zh) 一株能够预防和/或治疗念珠菌阴道炎的卷曲乳杆菌
CN111893066B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌scau-070及其应用
CN116083325B (zh) 一种改善幽门螺杆菌相关性胃肠疾病的鼠李糖乳杆菌及其应用
CN109943510A (zh) 一株具有益生特性的乳酸芽孢杆菌du-106及其应用
CN113122466A (zh) 粪肠球菌及其应用
CN110878270B (zh) 一株副干酪乳杆菌副干酪亚种及其应用
CN114134083A (zh) 一种贝莱斯芽孢杆菌及应用
CN114107134B (zh) 一株侧孢短芽孢杆菌及其应用
CN103525719A (zh) 一种分离自肠道内的益生菌及其应用
CN109652334A (zh) 一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用
CN108410763B (zh) 长双歧杆菌tc01及其应用和应用其的产品
CN116179443A (zh) 一株缓解便秘的乳酸片球菌nss0302及其应用
CN103525721A (zh) 具有抑菌能力的益生菌及其应用
KR20050041808A (ko) 항암효과 및 항균활성이 뛰어난 신규 유산균 류코노스톡시트리움 km20
CN114395511A (zh) 一株地衣芽孢杆菌fy1及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CP03 Change of name, title or address
CP03 Change of name, title or address

Address after: 350003 No. 54, 247 North Road, Gulou District, Fujian, Fuzhou

Patentee after: Fujian Academy of Agricultural Sciences Agricultural Product Processing Research Institute

Address before: 350000 No. 54 North 247 Road, Fujian, Fuzhou

Patentee before: INSTITUTE OF AGRICULTURAL ENGINEERING TECHNOLOGY, FUJIAN ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES