CN109490432B - 一种鉴别蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种鉴别蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法，属于食品检测技术领域，所述方法包括检测待鉴蜂蜜中丁香酸甲酯的含量，若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量大于10μg/100g，则表明待鉴单花蜂蜜中掺入了油菜蜜；若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量小于10μg/100g，则表明待鉴单花蜂蜜中没有掺入油菜蜜。本发明所述方法检测结果可靠稳定、判断度高、方便操作、成本低廉。
Description
技术领域
本发明属于食品检验技术领域，尤其涉及一种鉴别蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法。
背景技术
蜂蜜作为一种天然甜味物质，深受消费者的喜爱。根据蜂蜜是否来自单一蜜源植物，可将蜂蜜分为单花蜂蜜和混合花蜜，单花蜂蜜通常以花名命名，如洋槐花蜜命名为洋槐蜜。我国具有丰富的单花蜂蜜源植物，单花蜂蜜种类很多，如洋槐蜜、椴树蜜、枣花蜜、荔枝蜜、龙眼蜜、油菜蜜等。因每种单花蜂蜜的市场价格不同，常常出现蜂蜜掺假情况。即以价格低的单花蜂蜜掺到价格高的蜂蜜中，以低价充高价。油菜蜜作为我国产量较大的单花蜂蜜之一，其价格一直较低。因此市场上常见以油菜蜜掺入其他单花蜂蜜中的现象。
目前鉴别单花蜂蜜掺入油菜蜜方法主要有：感官鉴别和花粉分析等，感官鉴别即通过观察蜂蜜的颜色、形态、气味、味道等来确定蜂蜜中是否掺入油菜蜜；花粉分析将蜂蜜充分溶解后离心收集蜂蜜中的花粉，通过观察花粉的形态结构来确定蜂蜜中是否掺入油菜蜜。但是这些方法的稳定性差、判断度低。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了更加可靠稳定、判断度高、方便操作、简单易行、成本低廉的鉴别单花蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法。
基于上述目的，本发明提供了一种鉴别单花蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法，检测待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量，若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量大于10μg/100g，则表明待鉴单花蜂蜜中掺入了油菜蜜；若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量小于10μg/100g，则表明待鉴单花蜂蜜中没有掺入油菜蜜。
本发明还提供了另外一种鉴别单花蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法，检测待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯与待鉴单花蜂蜜中固有特征成分含量之比，若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量与待鉴单花蜂蜜中固有特征成分含量的比值小于0.05，则所述待鉴单花蜂蜜中没有掺入油菜蜜；若比值大于等于0.05，则所述单花蜂蜜中掺入油菜蜜。
优选的，当所述待鉴单花蜂蜜为洋槐蜜时，所述固有特征成分为红花菜豆酸、反,反式脱落酸和顺,反式脱落酸。
优选的，当所述待鉴单花蜂蜜为椴树蜜时，所述固有特征成分为椴树素、反,反式脱落酸和顺,反式脱落酸。
本发明还提供了一种鉴别单花蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法，检测待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量以及丁香酸甲酯与待鉴单花蜂蜜中固有特征成分含量之比，若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量大于10μg/100g，且丁香酸甲酯与待鉴单花蜂蜜中固有特征成分含量之比大于等于0.05，则所述单花蜂蜜中掺入油菜蜜；若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量小于等于10μg/100g，且丁香酸甲酯与待鉴单花蜂蜜中固有特征成分含量之比小于0.05，则所述单花蜂蜜中没有掺入油菜蜜。
优选的，所述待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯和/或固有特征成分的含量检测包括以下步骤：
1)将待鉴单花蜂蜜与水混合溶解，调节pH值为6～7，获得样品溶液；
2)将所述样品溶液过反相-阴离子交换固相萃取柱，用含10wt％甲酸的甲醇溶液洗脱萃取柱，收集洗脱液；
3)用高效液相色谱检测所述洗脱液中丁香酸甲酯和/或固有特征成分的含量。
优选的，步骤3)中高效液相色谱检测所述洗脱液中丁香酸甲酯的含量的方法为外标法，所述外标法的标准曲线为y＝3016x+92829，其中x为检测物质的峰面积，y检测物质的含量，y但单位为纳克。
优选的，步骤3)中所述的高效液相色谱的流速为0.7ml/min；紫外检测波长为280nm；分离柱为C18柱，所述C18柱的规格为150×4.6mm,5μm；上样体积为20μl；
所述的高效液相色谱的流动相A为含质量分数0.2％乙酸的水；流动相B为含质量分数0.2％乙酸的甲醇；
洗脱梯度程序为：[0～11)min，[9％～14％)流动相B；[11～14)min，[14％～15％)流动相B；[14～17)min，15％流动相B；[17～24)min，(15％～16％]流动相B；[24～28)min，(16％～17％]流动相B；[28～30)min，(17％～22％]流动相B；[30～38)min，(22％～25％]流动相B；[38～41)min，(25％～30％]流动相B；[41～46)min，(30％～33％]流动相B；[46～55)min，33％流动相B；[55～60)min，(33％～34％]流动相B；[60～70)min，(34％～36％]流动相B；[70～80)min，(36％～40％]流动相B；[80～90)min，(40％～45％]流动相B；[90～100)min，(45～52％]流动相B。
优选的，所述待鉴单花蜂蜜与水的质量比为1：(3.5～4.5)。
优选的，步骤2)高效液相色谱检测前还包括：将所述洗脱液过滤，所述过滤的孔径优选为0.2～0.3μm。
本发明的有益效果：本发明提供的鉴别单花蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法，检测待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量，能够灵敏、准确、高效、普适的鉴定单花蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法，完全解决了单花蜂蜜中是否掺入油菜蜜的问题，保证了单花蜂蜜产品的质量和食用安全，保护了消费者利益和保证单花蜂蜜产业健康发展。本发明所述的方法检测结果可靠稳定、判断度高、方便操作、成本低廉。
具体实施方式
本发明提供了一种鉴别单花蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法，检测待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量，若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量大于10μg/100g，则表明待鉴单花蜂蜜中掺入了油菜蜜；若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量小于10μg/100g，则表明待鉴单花蜂蜜中没有掺入油菜蜜。
本发明还提供了另外一种鉴别单花蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法，检测待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯与待鉴单花蜂蜜中固有特征成分含量之比，若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量与待鉴单花蜂蜜中固有特征成分含量的比值小于0.05，则所述待鉴单花蜂蜜中没有掺入油菜蜜；若比值大于等于0.05，则所述单花蜂蜜中掺入油菜蜜。在本发明中，当所述待鉴单花蜂蜜为洋槐蜜时，所述固有特征成分为红花菜豆酸、反，反式脱落酸和顺，反式脱落酸；当所述待鉴单花蜂蜜为椴树蜜时，所述固有特征成分为椴树素、反，反式脱落酸和顺，反式脱落酸。
本发明还提供了一种鉴别单花蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法，检测待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量以及丁香酸甲酯与待鉴单花蜂蜜中固有特征成分含量之比，若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量大于10μg/100g，丁香酸甲酯与待鉴单花蜂蜜中固有特征成分含量之比大于等于0.05，则所述单花蜂蜜中掺入油菜蜜；若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量小于等于10μg/100g，丁香酸甲酯与待鉴单花蜂蜜中固有特征成分含量之比小于0.05，则所述单花蜂蜜中没有掺入油菜蜜。
在本发明中，所述待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯或固有特征成分的含量检测优选的包括以下步骤：1)将待鉴单花蜂蜜与水混合溶解，调节pH值为6～7，获得样品溶液；2)将所述样品溶液过反相-阴离子交换固相萃取柱，用含10wt％甲酸的甲醇溶液洗脱萃取柱，收集洗脱液；3)用高效液相色谱检测所述洗脱液中丁香酸甲酯或固有特征成分的含量。
在本发明中，将待鉴单花蜂蜜与水混合溶解，调节pH值为6～7，获得样品溶液。在本发明中，所述待鉴单花蜂蜜与水的质量比优选为1：(3.5～4.5)，更优选为1：(3.8～4.2)，最优选的为1:4；所述在本发明中，所述待鉴单花蜂蜜为任何形式的蜂蜜，包括但不限于原料蜜和商品蜜；所述水优选为超纯水。在本发明中优选的采用碱类物质调节溶液的pH值，更优选的采用氨水调节溶液的pH值；所述氨水的质量浓度优选为4～6％，更优选为5％。
本发明在获得样品溶液后，将所述样品溶液过反相-阴离子交换固相萃取柱，收集获得洗脱液。本发明中所述样品溶液在过反相-阴离子交换固相萃取柱之前，优选的进行固液分离；所述固液分离的方式优选为离心，所述离心的离心力优选为9000～11000×g，更优选为10000×g，所述离心的时间优选为8～12min，更优选为10min。本发明中，所述反相-阴离子交换固相萃取柱的规格型号Strata-X-A。本发明所述的反相-阴离子交换固相萃取柱在使用前优选的经甲醇活化后用超纯水平衡。在本发明中所述甲醇的用量优选为0.8～1.2ml，更优选为1.0ml；所述超纯水的用量优选为0.8～1.2ml，更优选为1.0ml。在本发明中，将所述样品溶液上柱后，优选的用超纯水清洗萃取柱，然后用含10wt％甲酸的甲醇溶液洗脱萃取柱，收集洗脱液。在本发明中，所述清洗萃取柱用的超纯水的用量优选为0.8～1.2ml，更优选为1.0ml；所述含10wt％甲酸的甲醇溶液的用量为1.5～2.5ml，更优选为2.0ml。本发明在获得洗脱液后，优选的还包括将所述洗脱液干燥后复溶。在本发明中，所述干燥优选的采用氮气吹干；本发明对所述氮气的流速和氮气吹干的时间没有特殊限定，能够实现干燥即可。本发明在所述干燥后，优选的采用色谱级乙酸甲醇溶液(2:98V/V)进行复溶，所述色谱级乙酸甲醇溶液的用量优选为1.5～2.5ml，更优选为2ml。本发明在获得复溶的洗脱液后，在进行高效液相色谱检测前，将所述洗脱液过滤。所述过滤优选为滤膜过滤，所述滤膜优选为0.22μm滤膜，过滤后得到高效液相色谱上样液。
本发明在获得高效液相色谱上样液后，用高效液相色谱检测所述上样液液中丁香酸甲酯和固有特征成分的含量。在本发明中所述高效液相色谱的流动相A为含质量分数0.2％乙酸的水；流动相B为含质量分数0.2％乙酸的甲醇；所述的高效液相色谱的流速为0.7ml/min；紫外检测波长为280nm；分离柱为C18柱，所述C18柱的规格为150×4.6mm,5μm；上样体积为20μl；洗脱梯度为[0～11)min，[9％～14％)流动相B；[11～14)min，[14％～15％)流动相B；[14～17)min，15％流动相B；[17～24)min，(15％～16％]流动相B；[24～28)min，(16％～17％]流动相B；[28～30)min，(17％～22％]流动相B；[30～38)min，(22％～25％]流动相B；[38～41)min，(25％～30％]流动相B；[41～46)min，(30％～33％]流动相B；[46～55)min，33％流动相B；[55～60)min，(33％～34％]流动相B；[60～70)min，(34％～36％]流动相B；[70～80)min，(36％～40％]流动相B；[80～90)min，(40％～45％]流动相B；[90～100)min，(45～52％]流动相B。
本发明使用外标法计算丁香酸甲酯和固有特征成分含量；在本发明中，外标法计算丁香酸甲酯的标准曲线为y＝3016x+92829，其中x为检测物质的峰面积，y检测物质的含量，y的单位为纳克(ng)。本发明所述固有特征成分反，反式脱落酸和顺，反式脱落酸的标准曲线为y＝4513x+135049，其中x为检测物质的峰面积，y检测物质的含量；本发明中，y的单位为纳克(ng)。本发明中所述红花菜豆酸以脱落酸的标准曲线来计算，由于红花菜豆酸无标准物质，且所述红花菜豆酸是脱落酸的衍生物，结构相似，因此用脱落酸计。本发明中椴树素的标准曲线为y＝7134x-6569，其中x为检测物质的峰面积，y检测物质的含量；y的单位为纳克(ng)。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
某中间商对收集的原料单花蜂蜜进行质量评估。
操作方法：
①准确称取20g单花蜂蜜样品，置于干燥的瓶中，加入80ml超纯水溶解；
②用5％的氨水调节pH至6～7；
③10000×g离心10min，取上清备用；
④反相-阴离子交换固相萃取柱(RP-AE SPE)经1mL甲醇活化后用1mL超纯水(pH：6-7)平衡，上清液过柱；
⑤1ml超纯水清洗萃取柱，2ml甲醇(含10％甲酸)洗脱萃取柱，收集洗脱液；
⑥洗脱液在室温条件下用氮气吹至干燥，用2mL色谱级乙酸甲醇溶液(2:98V/V)复溶混匀，过0.22μm滤膜，得到HPLC上样液。
⑦使用HPLC方法检测所述HPLC上样液的；高效液相色谱法(HPLC)的检测方法为：流动相A为水(含0.2％乙酸)；流动相B为甲醇(含0.2％乙酸)；总流速为0.7ml/min；紫外检测波长为280nm；分离柱为C18柱，(150×4.6mm,5μm)；上样体积为20μl；洗脱梯度为0-11min，9％-14％B；11-14min，14-15％B；14-17min，15％B；17-24min，15-16％B；24-28min，16-17％B；28-30min，17-22％B；30-38min，22-25％B；38-41min，25-30％B；41-46min，30-33％B；46-55min，33％B；55-60min，33-34％B；60-70min，34-36％B；70-80min，36-40％B；80-90min，40-45％B；90-100min，45-52％B。
⑧使用外标法计算含量：
丁香酸甲酯的标准曲线为y＝3016x+92829；
按照HPLC方法对上样液进行定性定量分析：
按照标曲进行定量分析，得到丁香酸甲酯含量为5μg/100g；则该单花蜂蜜中没有掺入油菜蜜。
实施例2
某企业对采购的原料洋槐蜜进行质量评估。
操作方法：
①准确称取20g洋槐蜜单花蜂蜜样品，置于干燥的瓶中，加入80ml超纯水溶解；
②用5％的氨水调节pH至6—7；
③10000×g离心10min，取上清备用；
④反相-阴离子交换固相萃取柱(RP-AE SPE)经1mL甲醇活化后用1mL超纯水(pH：6-7)平衡，上清液过柱；
⑤1ml超纯水清洗萃取柱，2ml甲醇(含10％甲酸)洗脱萃取柱，收集洗脱液；
⑥洗脱液在室温条件下用氮气吹至干燥，用2mL色谱级乙酸甲醇溶液(2:98V/V)复溶混匀，过0.22μm滤膜，得到HPLC上样液。
⑦使用HPLC方法检测所述HPLC上样液的；高效液相色谱法(HPLC)的检测方法为：流动相A为水(含0.2％乙酸)；流动相B为甲醇(含0.2％乙酸)；总流速为0.7ml/min；紫外检测波长为280nm；分离柱为C18柱，(150×4.6mm,5μm)；上样体积为20μl；洗脱梯度为0-11min，9％-14％B；11-14min，14-15％B；14-17min，15％B；17-24min，15-16％B；24-28min，16-17％B；28-30min，17-22％B；30-38min，22-25％B；38-41min，25-30％B；41-46min，30-33％B；46-55min，33％B；55-60min，33-34％B；60-70min，34-36％B；70-80min，36-40％B；80-90min，40-45％B；90-100min，45-52％B。
⑧使用外标法计算含量：
丁香酸甲酯的标准曲线为y＝3016x+92829。
红花菜豆酸和反，反式脱落酸以及顺，反式脱落酸的标准曲线为：y＝4513x+135049。
按照HPLC方法对上样液进行定性定量分析：
按照标曲进行定量分析，得到丁香酸甲酯含量为6μg/100g；红花菜豆酸、反，反式脱落酸或顺，反式脱落酸的含量总和为300μg/100g丁香酸甲酯含量与该洋槐蜜样品中红花菜豆酸、反，反式脱落酸或顺，反式脱落酸的含量总和比小于0.05。表明该洋槐蜜样品中没有掺入油菜蜜。
实施例3
某第三方检测机构对委托检测的商品油菜蜜进行质量检测。
操作方法：
①准确称取20g椴树蜜样品，置于干燥的瓶中，加入80ml超纯水溶解；
②用5％的氨水调节pH至6—7；
③10000×g离心10min，取上清备用；
④反相-阴离子交换固相萃取柱(RP-AE SPE)经1mL甲醇活化后用1mL超纯水(pH：6-7)平衡，上清液过柱；
⑤1ml超纯水清洗萃取柱，2ml甲醇(含10％甲酸)洗脱萃取柱，收集洗脱液；
⑥洗脱液在室温条件下用氮气吹至干燥，用2mL色谱级乙酸甲醇溶液(2:98V/V)复溶混匀，过0.22μm滤膜，得到HPLC上样液。
⑦使用HPLC方法检测所述HPLC上样液的；高效液相色谱法(HPLC)的检测方法为：流动相A为水(含0.2％乙酸)；流动相B为甲醇(含0.2％乙酸)；总流速为0.7ml/min；紫外检测波长为280nm；分离柱为C18柱，(150×4.6mm,5μm)；上样体积为20μl；洗脱梯度为0-11min，9％-14％B；11-14min，14-15％B；14-17min，15％B；17-24min，15-16％B；24-28min，16-17％B；28-30min，17-22％B；30-38min，22-25％B；38-41min，25-30％B；41-46min，30-33％B；46-55min，33％B；55-60min，33-34％B；60-70min，34-36％B；70-80min，36-40％B；80-90min，40-45％B；90-100min，45-52％B。
⑧使用外标法计算含量：
丁香酸甲酯的标准曲线为y＝3016x+92829。
按照HPLC方法对上样液进行定性定量分析：
按照标曲进行定量分析，得到丁香酸甲酯含量为20μg/100g。表明该椴树蜜样品中掺入了油菜蜜。
由上述实施例可知，本发明提供的鉴别单花蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法，检测结果可靠稳定、判断度高、方便操作、成本低廉。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种鉴别单花蜂蜜中是否掺入油菜蜜的方法，其特征在于，检测待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量以及丁香酸甲酯与待鉴单花蜂蜜中固有特征成分含量之比，若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量大于10μg/100g且丁香酸甲酯与待鉴单花蜂蜜中固有特征成分含量之比大于等于0.05，则所述单花蜂蜜中掺入油菜蜜；若待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯的含量小于等于10μg/100g且丁香酸甲酯与待鉴单花蜂蜜中固有特征成分含量之比小于0.05，则所述单花蜂蜜中没有掺入油菜蜜；当所述待鉴单花蜂蜜为洋槐蜜时，所述固有特征成分为红花菜豆酸、反,反式脱落酸和顺,反式脱落酸；当所述待鉴单花蜂蜜为椴树蜜时，所述固有特征成分为椴树素、反,反式脱落酸和顺,反式脱落酸。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待鉴单花蜂蜜中丁香酸甲酯和/或固有特征成分的含量检测包括以下步骤：
1)将待鉴单花蜂蜜与水混合溶解，调节pH值为6～7，获得样品溶液；
2)将所述样品溶液过反相-阴离子交换固相萃取柱，用含10wt％甲酸的甲醇溶液洗脱萃取柱，收集洗脱液；
3)用高效液相色谱检测所述洗脱液中丁香酸甲酯和/或固有特征成分的含量。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中高效液相色谱检测所述洗脱液中丁香酸甲酯的含量的方法为标准曲线法，所述标准曲线为y＝3016x+92829，其中x为检测物质的峰面积，y为检测物质的含量，y的单位为纳克。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述的高效液相色谱检测的条件包括：流速为0.7ml/min；检测器为紫外检测器、紫外检测波长为280nm；分离柱为C18柱，所述C18柱的规格为150×4.6mm,5μm；上样体积为20μl；
流动相A为含质量分数0.2％乙酸的水；流动相B为含质量分数0.2％乙酸的甲醇；
洗脱梯度程序为：0～11min，9％～14％流动相B；11～14min，14％～15％流动相B；14～17min，15％流动相B；17～24min，15％～16％流动相B；24～28min，16％～17％流动相B；28～30min，17％～22％流动相B；30～38min，22％～25％流动相B；38～41min，25％～30％流动相B；41～46min，30％～33％流动相B；46～55min，33％流动相B；55～60min，33％～34％流动相B；60～70min，34％～36％流动相B；70～80min，36％～40％流动相B；80～90min，40％～45％流动相B；90～100min，45～52％流动相B。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中待鉴单花蜂蜜与水的质量比为1：3.5～4.5。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)高效液相色谱检测前还包括：将所述洗脱液过滤，所述过滤的孔径优选为0.2～0.3μm。
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