CN109453139B - 一种包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体及制备方法 - Google Patents

一种包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体及制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种包含5‑氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体的制备方法，属于纳米材料制备技术领域。本发明以5‑氟尿嘧啶为模型药物，纳米CaO与具有营养功效且可降解的聚谷氨酸的反应产物聚谷氨酸钙为固体模板，并以聚谷氨酸和岩藻多糖连同5‑氟尿嘧啶层层吸附于固体模板表面，以HCl/EDTA溶液去除聚谷氨酸钙模板，制备出具有缓释抗肿瘤作用的层层自组装纳米粒子γ‑PGA‑5‑FU‑Fucoidan‑γ‑PGA‑5‑FU‑Fucoidan‑γ‑PGA‑Fucoidan。该方法利用模型药物参与自组装，制备方法简单，条件温和，易于操作和重复，便于工业化。

Description

一种包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体及制备方法
技术领域
本发明涉及一种包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体及制备方法，属于纳米材料制备技术领域。
背景技术
随着靶向给药技术的深入研究及发展，表面修饰的药物载体技术逐渐成为研究重点。将药物通过增溶或枝接包覆于载体之内，不但可以缓解药物进入体内迅速降解或代谢，提高生物利用度，而且可以减少药物的用量，降低药物的毒副作用，提高药效，减少施药次数，改善患者的依从性。
传统方法以磷脂为基质的脂质体作为药物载体，涉及到制备过程需要引入有机溶剂，且制备过程较为复杂；脂质体的渗透性也较差，从而具有药物缓释时间过长等缺点。而采用单碳链两亲物质所制备的囊泡药物载体虽然具有良好的药物渗透性，但其对环境的敏感性过高，pH值或离子强度的变化均会引起载体的变化或解体，所以此囊泡类载体目前仅具有潜在应用可能。
层层自组装技术是利用分子间各种相互作用力实现不同分子间自组装的超分子技术，组装技术简单，可选用的材料范围较广。目前层层自组装技术主要利用静电沉积技术，所用固体模板包括纳米SiO2或CaCO3，所用材料多为嵌段共聚物或高分子物质，作为载体的生物相容性相对较差，且仅利用核壳结构内核载药，载药量相对较小；此外SiO2或CaCO3相比于纳米CaO缺少抗菌特性，且CaO可先于水分子结合为Ca(OH)2而有利于后续与酸性基团的进一步反应，从而改性为其他固体模板。
利用固体模板事先吸附所包埋药物，可进一步减少传统技术载体成型后再包埋、包埋效率低以及仅包埋单层药物的劣势，提高包埋效率，简化工艺过程。因此发展具有生物活性物质为囊材的包含药物的层层自组装纳米载体，具有良好的实用性及广阔的应用前景。
发明内容
[要解决的技术问题]
为了解决现有层层自组装载药量低、药物缓释时间短及载药体系耐酸性差的问题。
[技术方案]
本发明的目的是提供一种包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体的制备方法，具体地说是同时包含药物进行的超分子自组装过程，所形成的纳米载体具有药物载体应用价值；并且该纳米载体的原料易得，制备方法简单，条件温和，易于操作和重复，便于工业化。
首先，本发明提供了一种包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体，所述自组装纳米载体最内层为聚谷氨酸，向外依次为5-氟尿嘧啶、岩藻多糖、聚谷氨酸、5-氟尿嘧啶、岩藻多糖、聚谷氨酸，其中，最内层的聚谷氨酸的制备方法是将纳米CaO和聚谷氨酸交联后得到聚谷氨酸钙再去除CaO得到聚谷氨酸。
在本发明的一种实施方式中，所述自组装纳米载体的粒径为50～100nm。
本发明还提供了一种包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体的制备方法，所述方法包含以下步骤：
(1)将纳米CaO在600～800℃干燥1～2h后，在干燥器中冷却；
(2)称取步骤(1)中干燥后的纳米CaO，按CaO:聚谷氨酸溶液＝(1～3):1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到0.5～1mg/mL的聚谷氨酸溶液中混匀并稳定0.5～1h，固液分离，水洗2～3次，得聚谷氨酸钙颗粒，再将聚谷氨酸钙颗粒按照与5-氟尿嘧啶溶液的质量比体积的比例为(1～3):1比例加入到0.5～1mg/mL的5-氟尿嘧啶溶液中混匀并稳定0.5～1h，得到吸附有5-氟尿嘧啶5-FU和聚谷氨酸γ-PGA的双层纳米颗粒，再将双层纳米颗粒的悬浮液加入到与5-FU溶液等体积的0.5～1mg/mL的岩藻多糖Fucoidan溶液中混匀并稳定0.5～1h，固液分离，水洗2～3次，得到以聚谷氨酸钙为核心从内到外依次吸附5-FU和岩藻多糖的纳米颗粒；
(3)按照步骤(2)中所述的方法，将步骤(2)得到的纳米颗粒加入到0.5～1mg/mL的聚谷氨酸溶液中混匀并稳定0.5～1h，固液分离，水洗2～3次，再将得到的颗粒按照与5-氟尿嘧啶溶液的质量比(mg/mL)体积比为(1～3):1的比例加入到0.5～1mg/mL的5-氟尿嘧啶溶液中混匀并稳定0.5～1h，再将得到的悬浮液加入到与5-FU溶液等体积的0.5～1mg/mL的岩藻多糖溶液中混匀并稳定0.5～1h，固液分离，水洗2～3次，再将纳米颗粒加入到0.5～1mg/mL的聚谷氨酸溶液中混匀并稳定0.5～1h，固液分离，水洗2～3次，再将纳米颗粒加入到0.5～1mg/mL的岩藻多糖溶液中混匀并稳定0.5～1h，固液分离，水洗2～3次，最终得到以聚谷氨酸钙为核心，表面依次吸附5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan的层层自组装纳米颗粒，将此颗粒加入到按与CaO的化学计量比配制的摩尔比为(2～4):1的HCl和EDTA二钠溶液中，去除聚谷氨酸钙模板，调节溶液pH值为7～8，得到包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体，表示为γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan。
在本发明的一种实施方式中，所述岩藻多糖的分子量8000～10000。
在本发明的一种实施方式中，所述聚谷氨酸的分子量为70～100万。
在本发明的一种实施方式中，所述的固液分离为离心分离。
在本发明的一种实施方式中，所述纳米氧化钙的粒径为20～30nm。
在本发明的一种实施方式中，所述HCl溶液的浓度为0.01～0.02mol/L，所述EDTA二钠溶液的浓度为0.0025～0.01mol/L。
在本发明的一种实施方式中，反应均在室温下进行。
[有益效果]
(1)本发明提供的包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体的制备方法，其原料廉价易得，制备方法采用层层自组装技术，药物包埋和载体自组装一体化，方法简单，不涉及较复杂设备，具有潜在的药物控释体系应用价值，解决了载体生物相容性差并有效防止所包含的药物突释。
(2)本发明制备得到的纳米载体的粒径为50～100nm，相较现有技术更小，但具有更好的渗透性，药物载药量为9.1～11.0％，包封率是70.2～75.0％，载药量比传统单层药物包埋技术提高了约30～50％，包封率提高了约16～25％。
(3)本发明制备得到的“夹心饼干”结构的纳米载体能够缩短药物初始释放时间，药物释放平衡之前达到相同浓度所需的释放时间短，但同时满足药物缓释要求；此外，制备得到的纳米载体能够延长送药时间、增大送药浓度，相比于传统单层药物包埋技术，药物释放平衡时间可延后近1小时，平衡时药物累计释放率可提高15％以上，从而减少送药次数；本发明在pH＝2.5的酸性溶液中在1.5h的累计释放率为89％，说明其有一定的耐酸性能。
附图说明
图1为本发明中一种包含5-FU的层层自组装纳米载体的动态光散射(DLS)图；
图2为本发明中纳米载体在pH为7.4缓冲液中的药物控释曲线(1-实施例7；2-对比例1)。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
实施例1：
将1g纳米CaO(平均粒径为20～30nm)于马弗炉中600℃干燥2h后干燥器中冷却，称取干燥后的纳米CaO 30mg，按照CaO:聚谷氨酸(γ-PGA)溶液＝2:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到15mL 0.5mg/mL的γ-PGA溶液中充分混匀并稳定0.5h，固液分离，水洗2-3次，得到纳米聚谷氨酸钙颗粒，再将此颗粒按照颗粒质量:5-氟尿嘧啶(5-FU)溶液＝2:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到0.5mg/mL的5-FU溶液中混匀并稳定0.5h，再向其中加入与5-FU溶液等体积的0.5mg/mL岩藻多糖溶液中混匀并稳定0.5h，固液分离，水洗2-3次，得到从内到外依次吸附有5-FU和Fucoidan的纳米聚谷氨酸钙颗粒。
按上述步骤将颗粒先在15mL 0.5mg/mL聚谷氨酸溶液中混匀并稳定0.5h，固液分离，水洗2-3次，再将此颗粒加入15mL 0.5mg/mL 5-氟尿嘧啶溶液混匀并稳定0.5h，再加入0.5mg/mL岩藻多糖溶液混匀并稳定0.5h，固液分离，水洗2-3次，最后将颗粒交替加入到0.5mg/mL聚谷氨酸溶液和0.5mg/mL岩藻多糖溶液中，固液分离，水洗2-3次，得到以聚谷氨酸钙为核心，表面依次吸附5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan的层层自组装纳米颗粒，将此颗粒加入到0.01mol/L的HCl和EDTA二钠溶液中(以HCl浓度计，HCl和EDTA二钠摩尔比为2:1)，去除聚谷氨酸钙的固体模板，调节溶液pH值为7.4，得到包含5-FU的层层自组装纳米载体，表示为γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan，将此混悬液取3mL经0.8μm混合纤维(MEC)水系滤膜过滤，经动态光散射(DLS)测试，结果如图1所示，其平均粒径为50nm(Rh＝25nm)。
载药量的测定：在不加入5-FU的情况下重复实施例的层层吸附实验，得到γ-PGA-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan，分别将有/无5-FU的2种纳米载体冷冻干燥，并称重，数值相差为5-FU质量，再除以载体质量，即可得载药量，实施例1中制备得到的层层自组装纳米载体的载药量为9.1％。
包封率的测定：将各次固液分离及水洗液收集，紫外光谱测定其256nm处的吸光度，并结合5-FU溶液标准曲线测定未包埋5-FU的浓度并计算质量，再根据包埋的5-FU的质量，按照包封率＝包埋的5-FU的质量/(未包埋5-FU的质量+包埋的5-FU的质量)×100％，计算得到包封率为70.2％。
实施例2：
将1g纳米CaO(平均粒径为20～30nm)于马弗炉中600℃干燥2h后干燥器中冷却，称取干燥后的纳米CaO 30mg，按照CaO:聚谷氨酸(γ-PGA)溶液＝3:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到10mL 0.5mg/mL的γ-PGA溶液中充分混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，得到纳米聚谷氨酸钙颗粒，再将此颗粒按照颗粒质量:5-氟尿嘧啶(5-FU)溶液＝3:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到0.5mg/mL的5-FU溶液中混匀并稳定1h，再向其中加入与5-FU溶液等体积的0.5mg/mL岩藻多糖溶液中混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，得到从内到外依次吸附有5-FU和Fucoidan的纳米聚谷氨酸钙颗粒。
按上述步骤将颗粒先在10mL 0.5mg/mL聚谷氨酸溶液中混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，再将此颗粒加入10mL 0.5mg/mL 5-氟尿嘧啶溶液混匀并稳定1h，再加入0.5mg/mL岩藻多糖溶液混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，最后将颗粒交替加入到0.5mg/mL聚谷氨酸溶液和0.5mg/mL岩藻多糖溶液中，固液分离，水洗2-3次，得到以聚谷氨酸钙为核心，表面依次吸附5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan的层层自组装纳米颗粒，将此颗粒加入到0.01mol/L的HCl和EDTA二钠溶液中(以HCl浓度计，HCl和EDTA二钠摩尔比为2:1)，去除聚谷氨酸钙的固体模板，调节溶液pH值为7.4，得到包含5-FU的层层自组装纳米载体，表示为γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan，将此混悬液取3mL经0.8μm混合纤维(MEC)水系滤膜过滤，经动态光散射(DLS)测试，结果如图1所示，其平均粒径为52nm(Rh＝26nm)。
载药量的测定：在不加入5-FU的情况下重复实施例的层层吸附实验，得到γ-PGA-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan，分别将有/无5-FU的2种纳米载体冷冻干燥，并称重，数值相差为5-FU质量，再除以载体质量，即可得载药量，实施例2中制备得到的层层自组装纳米载体的载药量为9.3％。
包封率的测定：将各次固液分离及水洗液收集，紫外光谱测定其256nm处的吸光度，并结合5-FU溶液标准曲线测定未包埋5-FU的浓度并计算质量，再根据包埋的5-FU的质量，按照包封率＝包埋的5-FU的质量/(未包埋5-FU的质量+包埋的5-FU的质量)×100％，计算得到包封率为70.9％。
实施例3
将1g纳米CaO(平均粒径为20～30nm)于马弗炉中600℃干燥2h后干燥器中冷却，称取干燥后的纳米CaO 30mg，按照CaO:聚谷氨酸(γ-PGA)溶液＝1:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到30mL 0.5mg/mL的γ-PGA溶液中充分混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，得到纳米聚谷氨酸钙颗粒，再将此颗粒按照颗粒质量:5-氟尿嘧啶(5-FU)溶液＝1:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到0.5mg/mL的5-FU溶液中混匀并稳定1h，再向其中加入与5-FU溶液等体积的0.5mg/mL岩藻多糖溶液中混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，得到从内到外依次吸附有5-FU和Fucoidan的纳米聚谷氨酸钙颗粒。
按上述步骤将颗粒先在30mL 0.5mg/mL聚谷氨酸溶液中混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，再将此颗粒加入30mL 0.5mg/mL 5-氟尿嘧啶溶液混匀并稳定1h，再加入0.5mg/mL岩藻多糖溶液混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，最后将颗粒交替加入到0.5mg/mL聚谷氨酸溶液和0.5mg/mL岩藻多糖溶液中，固液分离，水洗2-3次，得到以聚谷氨酸钙为核心，表面依次吸附5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan的层层自组装纳米颗粒，将此颗粒加入到0.01mol/L的HCl和EDTA二钠溶液中(以HCl浓度计，HCl和EDTA二钠摩尔比为2:1)，去除聚谷氨酸钙的固体模板，调节溶液pH值为7.4，得到包含5-FU的层层自组装纳米载体，表示为γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan，将此混悬液取3mL经0.8μm混合纤维(MEC)水系滤膜过滤，经动态光散射(DLS)测试，结果如图1所示，其平均粒径为50nm(Rh＝25nm)。
载药量的测定：在不加入5-FU的情况下重复实施例的层层吸附实验，得到γ-PGA-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan，分别将有/无5-FU的2种纳米载体冷冻干燥，并称重，数值相差为5-FU质量，再除以载体质量，即可得载药量，实施例3中制备得到的层层自组装纳米载体的载药量为9.6％。
包封率的测定：将各次固液分离及水洗液收集，紫外光谱测定其256nm处的吸光度，并结合5-FU溶液标准曲线测定未包埋5-FU的浓度并计算质量，再根据包埋的5-FU的质量，按照包封率＝包埋的5-FU的质量/(未包埋5-FU的质量+包埋的5-FU的质量)×100％，计算得到包封率为71.4％。
实施例4
将1g纳米CaO于马弗炉中600℃干燥2h后干燥器中冷却，称取干燥后的纳米CaO30mg，按照CaO:聚谷氨酸(γ-PGA)溶液＝2:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到15mL1mg/mL的γ-PGA溶液中充分混匀并稳定0.5h，固液分离，水洗2-3次，得到纳米聚谷氨酸钙颗粒，再将此颗粒按照颗粒质量:5-氟尿嘧啶(5-FU)溶液＝2:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到1mg/mL的5-FU溶液中混匀并稳定0.5h，再向其中加入与5-FU溶液等体积的1mg/mL的岩藻多糖溶液中混匀并稳定0.5h，固液分离，水洗2-3次，得到从内到外依次吸附有5-FU和Fucoidan的纳米聚谷氨酸钙颗粒；
按上述步骤将颗粒先在15mL 1mg/mL聚谷氨酸溶液中混匀并稳定0.5h，固液分离，水洗2-3次，再将此颗粒加入15mL 1mg/mL 5-氟尿嘧啶溶液混匀并稳定0.5h，再加入1mg/mL岩藻多糖溶液混匀并稳定0.5h，固液分离，水洗2-3次，最后将颗粒交替加入到1mg/mL聚谷氨酸溶液和1mg/mL岩藻多糖溶液中，固液分离，水洗2-3次，得到以聚谷氨酸钙为核心，表面依次吸附5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan的层层自组装纳米颗粒，将此颗粒加入到0.01mol/L的HCl和EDTA二钠溶液(以HCl浓度计，HCl和EDTA二钠摩尔比为2:1)中，去除聚谷氨酸钙的固体模板，调节溶液pH值为7.4，得到包含5-FU的层层自组装纳米载体，表示为γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan，将此混悬液取3mL经0.8μm混合纤维(MEC)水系滤膜过滤，经动态光散射(DLS)测试，其平均粒径为64nm(Rh＝32nm)。
按照实施例1中载药量和包封率的测定方法，测定可知实施例4中的纳米载体的载药量为9.8％，包封率为72.3％。
实施例5
将1g纳米CaO(平均粒径为20～30nm)于马弗炉中600℃干燥2h后干燥器中冷却，称取干燥后的纳米CaO 30mg，按照CaO:聚谷氨酸(γ-PGA)溶液＝2:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到15mL 1mg/mL的γ-PGA溶液中充分混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，得到纳米聚谷氨酸钙颗粒，再将此颗粒按照颗粒质量:5-氟尿嘧啶(5-FU)溶液＝2:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到1mg/mL的5-FU溶液中混匀并稳定1h，再向其中加入与5-FU溶液等体积的1mg/mL的岩藻多糖溶液中混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，得到从内到外依次吸附有5-FU和Fucoidan的纳米聚谷氨酸钙颗粒；
按上述步骤将颗粒先在15mL 1mg/mL聚谷氨酸溶液中混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，再将此颗粒加入15mL 1mg/mL 5-氟尿嘧啶溶液混匀并稳定1h，再加入1mg/mL岩藻多糖溶液混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，最后将颗粒交替加入到1mg/mL聚谷氨酸溶液和1mg/mL岩藻多糖溶液中，固液分离，水洗2-3次，得到以聚谷氨酸钙为核心，表面依次吸附5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan的层层自组装纳米颗粒，将此颗粒加入到0.01mol/L的HCl/EDTA二钠溶液(以HCl浓度计，HCl和EDTA二钠摩尔比为2:1)中，去除聚谷氨酸钙的固体模板，调节溶液pH值为7.5，得到包含5-FU的层层自组装纳米载体，表示为γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan，将此混悬液取3mL经0.8μm混合纤维(MEC)水系滤膜过滤，经动态光散射(DLS)测试，其平均粒径为72nm(Rh＝36nm)。
按照实施例1中载药量和包封率的测定方法，测定可知实施例5中的纳米载体的载药量为10.3％，包封率为73.9％。
实施例6
将1g纳米CaO(平均粒径为20～30nm)于马弗炉中600℃干燥2h后干燥器中冷却，称取干燥后的纳米CaO 60mg，按照CaO:聚谷氨酸(γ-PGA)溶液＝2:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到30mL 1mg/mL的γ-PGA溶液中充分混匀并稳定0.5h，固液分离，水洗2-3次，得到纳米聚谷氨酸钙颗粒，再将此颗粒按照颗粒质量:5-氟尿嘧啶(5-FU)溶液＝2:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到1mg/mL的5-FU溶液中，再向其中加入与5-FU溶液等体积的1mg/mL的岩藻多糖溶液中混匀并稳定0.5h，固液分离，水洗2-3次，得到从内到外依次吸附有5-FU和Fucoidan的纳米聚谷氨酸钙颗粒；
按上述步骤将颗粒先在30mL 1mg/mL聚谷氨酸溶液中混匀并稳定0.5h，固液分离，水洗2-3次，再将此颗粒加入30mL 1mg/mL 5-氟尿嘧啶溶液混匀并稳定0.5h，再加入1mg/mL岩藻多糖溶液混匀并稳定0.5h，固液分离，水洗2-3次，最后将颗粒交替加入到1mg/mL聚谷氨酸溶液和1mg/mL岩藻多糖溶液中，固液分离，水洗2-3次，得到以聚谷氨酸钙为核心，表面依次吸附5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan的层层自组装纳米颗粒，将此颗粒加入到0.02mol/L的HCl/EDTA二钠溶液(以HCl浓度计，HCl和EDTA二钠摩尔比为2:1)中，去除聚谷氨酸钙的固体模板，调节溶液pH值为7.6，得到包含5-FU的层层自组装纳米载体，表示为γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan，将此混悬液取3mL经0.8μm混合纤维(MEC)水系滤膜过滤，经动态光散射(DLS)测试，其平均粒径为78nm(Rh＝39nm)。
按照实施例1中载药量和包封率的测定方法，测定可知实施例6中的纳米载体的载药量为10.5％，包封率为74.2％。
实施例7
将1g纳米CaO(平均粒径为20～30nm)于马弗炉中600℃干燥2h后干燥器中冷却，称取干燥后的纳米CaO 60mg，按照CaO:聚谷氨酸(γ-PGA)溶液＝2:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到30mL 1mg/mL的γ-PGA溶液中充分混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，得到纳米聚谷氨酸钙颗粒，再将此颗粒按照颗粒质量:5-氟尿嘧啶(5-FU)溶液＝2:1的质量比体积的比例(mg/mL)加入到1mg/mL的5-FU溶液中混匀并稳定1h，再向其中加入与5-FU溶液等体积的1mg/mL的岩藻多糖溶液中混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，得到从内到外依次吸附有5-FU和Fucoidan的纳米聚谷氨酸钙颗粒；
按上述步骤将颗粒先在30mL 1mg/mL聚谷氨酸溶液中混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，再将此颗粒加入30mL 1mg/mL 5-氟尿嘧啶溶液混匀并稳定1h，再加入1mg/mL岩藻多糖溶液混匀并稳定1h，固液分离，水洗2-3次，最后将颗粒交替加入到1mg/mL聚谷氨酸溶液和1mg/mL岩藻多糖溶液中，固液分离，水洗2-3次，得到以聚谷氨酸钙为核心，表面依次吸附5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan的层层自组装纳米颗粒，将此颗粒加入到0.02mol/L的HCl和EDTA二钠溶液(以HCl浓度计，HCl和EDTA二钠摩尔比为2:1)中，去除聚谷氨酸钙的固体模板，调节溶液pH值为7.6，得到包含5-FU的层层自组装纳米载体，表示为γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan，将此混悬液取3mL经0.8μm混合纤维(MEC)水系滤膜过滤，经动态光散射(DLS)测试，其平均粒径为100nm(Rh＝50nm)。
按照实施例1中载药量和包封率的测定方法，测定可知实施例7中的纳米载体的载药量为11.0％，包封率为75.0％。
药物控释实验：在pH＝7.4的磷酸盐缓冲液中利用透析袋测定包含5-FU的纳米载体的5-FU控释实验(如图2中1所示)，定时取样测定5-FU的含量，并计算累计释放率，测得10h后累计释放率为78.6％；在pH＝2.5的盐酸溶液中利用透析袋测定包含5-FU的纳米载体的5-FU控释实验，定时取样测定5-FU的含量，并计算累计释放率，测得1.5h后累计释放率为89％。
对比例1
采用传统层层自组装方法制备内核包含5-FU的纳米载体：称取1g纳米CaO(平均粒径为20～30nm)于坩埚中，置于马弗炉中600℃烘2h，自然冷却取出置于干燥器中，称取60mg干燥后的纳米CaO，缓慢加入30mL的1mg/mL的5-FU溶液中混匀并稳定1h，再加入到30mL的1mg/mL的γ-PGA溶液中混匀并稳定0.5h，离心分离，并水洗2-3次，再将此纳米颗粒加入到30mL的1mg/mL的Fucoidan溶液中混匀并稳定1h，离心分离，水洗2-3次，得到从内到外依次吸附5-FU、γ-PGA和Fucoidan的纳米颗粒。
重复聚谷氨酸溶液及岩藻多糖混匀并稳定，离心分离，水洗步骤2次，得到表面依次吸附5-FU-γ-PGA-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan的层层自组装纳米颗粒，将此颗粒加入到0.02mol/L的HCl和EDTA二钠溶液(以HCl浓度计，HCl和EDTA二钠摩尔比为2:1)中，去除CaO模板，调节溶液pH值为7.4左右，将此悬液取3mL经0.8μm混合纤维(MEC)水系滤膜过滤，经动态光散射(DLS)测试，其平均粒径为58nm(Rh＝29nm)。
按照实施例1中载药量和包封率的测定方法，测定可知对比例1中的纳米载体的载药量为6.9％，包封率为67.2％。
药物控释实验：在pH＝7.4的磷酸盐缓冲液中利用透析袋测定包含5-FU的纳米载体的5-FU控释实验(如图2中2所示)，定时取样测定5-FU的含量，并计算累计释放率，测得9h后累计释放率为60.9％；在pH＝2.5的盐酸溶液中利用透析袋测定包含5-FU的纳米载体的5-FU控释实验，定时取样测定5-FU的含量，并计算累计释放率，测得1h后累计释放率为92％。
对比例2
纳米CaO被纳米碳酸钙替换，纳米碳酸钙的平均粒径为20-50nm，其余条件和步骤与实施例1相同，制备得到包含5-FU的层层自组装纳米载体，表示为γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan，经动态光散射(DLS)测试，其平均粒径为96nm(Rh＝48nm)。
按照实施例1中载药量和包封率的测定方法，测定可知对比例1中的纳米载体的载药量为7.5％，包封率为68.3％。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (17)

1.一种包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体，其特征在于，所述自组装纳米载体最内层为聚谷氨酸，向外依次为5-氟尿嘧啶、岩藻多糖、聚谷氨酸、5-氟尿嘧啶、岩藻多糖、聚谷氨酸，其中，最内层的聚谷氨酸的制备方法是将纳米CaO和聚谷氨酸交联后得到聚谷氨酸钙再去除CaO得到聚谷氨酸。
2.根据权利要求1所述的一种包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体，其特征在于，所述自组装纳米载体的粒径为50～100nm。
3.权利要求1或2所述的一种包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
(1)将纳米CaO在600～800℃干燥1～2h后，在干燥器中冷却；
(2)称取步骤(1)中干燥后的纳米CaO，按CaO与聚谷氨酸溶液质量比体积比(mg/mL)为(1～3):1的比例加入到0.5～1mg/mL的聚谷氨酸溶液中混匀并稳定0.5～1h，固液分离，水洗2～3次，得聚谷氨酸钙颗粒，再将聚谷氨酸钙颗粒按照与5-氟尿嘧啶溶液的质量比体积比 (mg/mL)为(1～3):1的比例加入到0.5～1mg/mL的5-氟尿嘧啶溶液中混匀并稳定0.5～1h，得到吸附有5-氟尿嘧啶和聚谷氨酸的双层纳米颗粒，再将双层纳米颗粒的悬浮液加入到与5-FU溶液等体积的0.5～1mg/mL的岩藻多糖溶液中混匀并稳定0.5～1h，固液分离，水洗2～3次，得到以聚谷氨酸钙为核心从内到外依次吸附5-FU和岩藻多糖的纳米颗粒；
(3)按照步骤(2)中所述的方法，将步骤(2)得到的纳米颗粒加入到0.5～1mg/mL的聚谷氨酸溶液中混匀并稳定0.5～1h，固液分离，水洗2～3次，再将得到的颗粒按照与5-氟尿嘧啶溶液的质量比体积比(mg/mL)为(1～3):1的比例加入到0.5～1mg/mL的5-氟尿嘧啶溶液中混匀并稳定0.5～1h，再将得到的悬浮液加入到与5-FU溶液等体积的0.5～1mg/mL的岩藻多糖溶液中混匀并稳定0.5～1h，固液分离，水洗2～3次，再将纳米颗粒加入到0.5～1mg/mL的聚谷氨酸溶液中混匀并稳定0.5～1h，固液分离，水洗2～3次，再将纳米颗粒加入到0.5～1mg/mL的岩藻多糖溶液中混匀并稳定0.5～1h，固液分离，水洗2～3次，最终得到以聚谷氨酸钙为核心，表面依次吸附5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan的层层自组装纳米颗粒，将此颗粒加入到按与CaO的化学计量比配制的摩尔比为(2～4):1的HCl和EDTA二钠溶液中，去除聚谷氨酸钙模板，调节溶液pH值为7～8，得到包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体，表示为γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-5-FU-Fucoidan-γ-PGA-Fucoidan。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述岩藻多糖的分子量8000～10000。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述聚谷氨酸的分子量为70～100万。
6.根据权利要求3～5任一所述的制备方法，其特征在于，所述固液分离为离心分离。
7.根据权利要求3～5任一所述的制备方法，其特征在于，所述纳米CaO的粒径为20～30nm。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述纳米CaO的粒径为20～30nm。
9.根据权利要求3～5任一所述的制备方法，其特征在于，所述HCl溶液的浓度为0.01～0.02mol/L。
10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述HCl溶液的浓度为0.01～0.02mol/L。
11.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述HCl溶液的浓度为0.01～0.02mol/L。
12.根据权利要求3～5任一所述的制备方法，其特征在于，所述EDTA二钠溶液的浓度为0.0025～0.01mol/L。
13.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述EDTA二钠溶液的浓度为0.0025～0.01mol/L。
14.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述EDTA二钠溶液的浓度为0.0025～0.01mol/L。
15.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述EDTA二钠溶液的浓度为0.0025～0.01mol/L。
16.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述EDTA二钠溶液的浓度为0.0025～0.01mol/L。
17.包含权利要求1或2所述的一种包含5-氟尿嘧啶的层层自组装纳米载体的药物。
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