CN109439714B - 一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法 - Google Patents
一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109439714B CN109439714B CN201811339509.3A CN201811339509A CN109439714B CN 109439714 B CN109439714 B CN 109439714B CN 201811339509 A CN201811339509 A CN 201811339509A CN 109439714 B CN109439714 B CN 109439714B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- crab shell
- shell powder
- scales
- fish scales
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 30
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 241000480037 Argyrosomus japonicus Species 0.000 title claims abstract description 13
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 title claims description 20
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims abstract description 52
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 42
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 36
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 33
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 23
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 91
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 51
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 35
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 35
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 33
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 claims description 29
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 claims description 29
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 claims description 29
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 25
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 21
- 241000347391 Umbrina cirrosa Species 0.000 claims description 19
- UGTZMIPZNRIWHX-UHFFFAOYSA-K sodium trimetaphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P1(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])(=O)O1 UGTZMIPZNRIWHX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 16
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 claims description 15
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 14
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 13
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 7
- 238000007664 blowing Methods 0.000 claims description 7
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 7
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 7
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 7
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 claims description 7
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 7
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 12
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 abstract description 9
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 abstract description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 abstract description 2
- 239000011345 viscous material Substances 0.000 abstract description 2
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 abstract 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 7
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 6
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- VCMMXZQDRFWYSE-UHFFFAOYSA-N plumbagin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C)=CC(=O)C2=C1O VCMMXZQDRFWYSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 2
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001707 (E,7R,11R)-3,7,11,15-tetramethylhexadec-2-en-1-ol Substances 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- ZMOIGGHUSNHCAB-UHFFFAOYSA-N Isoplumbagin Natural products C1=CC(O)=C2C(=O)C(C)=CC(=O)C2=C1 ZMOIGGHUSNHCAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- BLUHKGOSFDHHGX-UHFFFAOYSA-N Phytol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C=CO BLUHKGOSFDHHGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 1
- HNZBNQYXWOLKBA-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofarnesol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)=CCO HNZBNQYXWOLKBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000276707 Tilapia Species 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- BOTWFXYSPFMFNR-OALUTQOASA-N all-rac-phytol Natural products CC(C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)=CCO BOTWFXYSPFMFNR-OALUTQOASA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- BBFQZRXNYIEMAW-UHFFFAOYSA-N aristolochic acid I Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C2=C(C(O)=O)C=C3OCOC3=C2C2=C1C(OC)=CC=C2 BBFQZRXNYIEMAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- ALPCEXCHMFUSAN-UHFFFAOYSA-N beta-Dihydroplumbagin Natural products C1=CC=C2C(=O)C(C)CC(=O)C2=C1O ALPCEXCHMFUSAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940124622 immune-modulator drug Drugs 0.000 description 1
- 235000021190 leftovers Nutrition 0.000 description 1
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- BOTWFXYSPFMFNR-PYDDKJGSSA-N phytol Chemical compound CC(C)CCC[C@@H](C)CCC[C@@H](C)CCC\C(C)=C\CO BOTWFXYSPFMFNR-PYDDKJGSSA-N 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 229960001967 tacrolimus Drugs 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明涉及免疫调节肽制备技术领域，解决了鱼鳞中蛋白酶解不充分的问题，公开了一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法。本发明免疫调节肽的制备方法为先将鱼鳞加入氢氧化钠碱性溶液中除去鱼鳞表面的粘性物质、鱼鳞的脂肪和其它杂质物质，然后浸入盐酸中进行脱钙，再对鱼鳞中蛋白进行酶解，最后依次经过超滤、纳滤、干燥得到免疫调节肽。本发明使用盐酸分解破坏骨质层灰分，鱼鳞中的蛋白质失去骨质层灰分的保护作用，从而大大提高木瓜蛋白酶对鱼鳞中蛋白的酶解效率，使鱼鳞中的蛋白能够得到充分酶解，提高免疫调节肽的产量。
Description
技术领域
本发明涉及免疫调节肽制备技术领域，尤其是涉及一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法。
背景技术
免疫系统对我们的生存至关重要，具有防御病原体的作用，但免疫系统易受到多种因素的影响，包括压力，不健康的生活习惯，病原体和抗原等。已发现的几种具有调节人体免疫应答的药物有环孢菌素，他克莫司，糖皮质激素，叶绿醇，马兜铃酸，白花丹素和左旋咪唑等。然而，由于这些药物的毒副作用和高成本限制了其在患者中的使用，并且大多数免疫调节药物不适用于慢性或预防性用途。研究表明，以食源性蛋白为原料，经商业化蛋白酶水解及分离纯化后得到的寡肽、多肽以及一些蛋白酶水解物混合肽在动物或细胞试验显示出显著免疫调控效果。近年来，研究人员从海洋生物中提取生物活性肽对免疫调节功能进行了大量的研究。在罗非鱼加工过程中丟弃的鱼鳞约占下脚料的10％左右，鱼鳞中含丰富的胶原蛋白，是提取生物活性肽的优良原料。中国专利公开号CN102613383公开了一种鱼鳞蛋白酶解液及其制备方法，该制备方法中先将粉碎的鱼鳞、蒸馏水、蛋白酶置于反应器中，进行酶解，然后过滤收集滤液得到蛋白酶解液，由于鱼鳞的骨质层含有以羟基磷灰石形式存在的灰分，直接使用蛋白酶对鱼鳞中蛋白进行酶解存在酶解不充分的问题。
发明内容
本发明是为了克服现有技术蛋白酶对鱼鳞中蛋白酶解不充分的问题，提供一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，该制备方法中蛋白酶能够充分酶解鱼鳞，从而大大提高免疫调节肽的产量。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，包括以下步骤：
1)将黄姑鱼鱼鳞加入氢氧化钠溶液中，搅拌5-10h，取出后用水洗净；
2)将清洗后的黄姑鱼鱼鳞浸入盐酸溶液中浸泡脱钙20-40min，滤去酸液，向鱼鳞中加入鱼鳞重量10-20％的吸附剂搅拌混合均匀，静置吸附6-8h，用水洗净，干燥粉碎；
3)将干燥粉碎后的鱼鳞按质量比1:35-50加入水中，搅拌混合均匀，然后加入木瓜蛋白酶在40-45℃下进行酶解10-15h，酶解完成后置于沸水中进行灭活5-10min，冷却至室温，以12000-13000r/min转速进行离心25-30min，收集上清液；
4)将上清液依次进行超滤、纳滤浓缩处理，然后经过冷冻干燥，即得。
本发明先使用氢氧化钠除去鱼鳞表面的粘性物质、鱼鳞的脂肪和其它杂质物质，然后浸入盐酸中进行脱钙，盐酸能够分解破坏骨质层灰分，鱼鳞中的蛋白质失去骨质层灰分的保护作用，从而大大提高木瓜蛋白酶对鱼鳞中蛋白的酶解效率，使鱼鳞中的蛋白能够得到充分酶解，提高免疫调节钛的产量，然后利用吸附剂除去鱼鳞上的重金属离子、细菌和腥味，提高免疫调节肽的纯度。
作为优选，所述步骤1)中氢氧化钠的浓度为0.5-2wt％。
作为优选，所述步骤2)中盐酸溶液的摩尔浓度为0.2-0.5mol/L，鱼鳞与盐酸的质量体积比为1:5-10g/mL。
作为优选，所述步骤3)中木瓜蛋白酶的添加量为鱼鳞重量的3-6％。
作为优选，所述步骤2)中吸附剂的制备方法包括以下步骤：
将预处理蟹壳粉置于质量浓度为5-10％醋酸水溶液中浸泡2-5h，水洗至中性，烘干，将烘干后的蟹壳在惰性气体的吹扫下，先以3-4℃/min升温速率升温至300-350℃，焙烧30-50min，然后以6-8℃/min升温速率升温至600-650℃，焙烧1-3h，得到多孔蟹壳粉；将多孔蟹壳粉加入高锰酸钾水溶液中进行活化20-40min，水洗后分离，干燥；将活化后的多孔蟹壳粉添加到海藻酸钠水溶液中，多孔蟹壳粉与海藻酸钠的质量比为1:0.4-0.6，然后加入三偏磷酸钠进行反应1-2h，三偏磷酸钠与海藻酸钠的质量比为1:3-6，经过分离、干燥得到吸附剂。
先对预处理蟹壳粉进行酸处理，使用醋酸溶解蟹壳上的碳酸钙，从而在蟹壳粉颗粒上形成微孔，从而使蟹壳粉颗粒具有吸附作用，对鱼鳞上的杂质颗粒和重金属进行吸附，从而除去鱼鳞中的重金属和杂质颗粒；然后进行焙烧，在高温条件下，蟹壳粉颗粒上的微孔扩大，从而增加蟹壳粉颗粒的表面积，增强吸附作用；利用高猛酸钾的氧化性使蟹壳粉中的发生氧化，使其表面具有更多的活性羟基反应基团，交联剂三偏磷酸钠能够与蟹壳粉上的羟基和海藻酸钠上的羟基发生反应，从而将海藻酸钠连接到蟹壳粉颗粒上，海藻酸钠对重金属离子具有较强的络合作用，从而进一步提高蟹壳粉对重金属离子的去除作用。另外本发明通过三偏磷酸钠将海藻酸钠通过化学键连接在蟹壳粉颗粒上，海藻酸钠不容易从蟹壳粉上脱落；另外海藻酸钠具有杀菌作用，能够杀灭鱼鳞上的细菌。
作为优选，所述高猛酸钾水溶液的浓度为0.5-2wt％。
作为优选，所述海藻酸钠水溶液的浓度为1-5wt％。
作为优选，所述预处理蟹壳粉的制备方法包括以下步骤：
将蟹壳粉碎后得到蟹壳粉，将蟹壳粉与多巴胺按质量比1:0.25-0.5加入水中，蟹壳粉与水的质量体积比为1:30-40g/mL，升温至45-60℃，然后加入戊二醛，戊二醛与多巴胺的摩尔比为1:1-2，搅拌反应1-2h，搅拌速率控制在80-120r/min，经过过滤、水洗后将蟹壳粉在50-70℃下干燥1-4h，得到预处理蟹壳粉。
本发明通过戊二醛将多巴胺连接在蟹壳上，从而使蟹壳粉颗粒上负载大量的氨基，从而进一步提高蟹壳粉对重金属的络合作用；另外，在酸性条件下，蟹壳粉颗粒上负载的氨基发生质子化，从而使蟹壳粉颗粒表面带正电，本发明通过蟹壳粉颗粒表面的静电作用，对鱼鳞表面带负电的杂质和表面带负电的细菌吸附，从而进一步增加细菌和杂质颗粒的去除效果。
因此，本发明具有如下有益效果：1)使用盐酸分解破坏骨质层灰分，鱼鳞中的蛋白质失去骨质层灰分的保护作用，从而大大提高木瓜蛋白酶对鱼鳞中蛋白的酶解效率，使鱼鳞中的蛋白能够得到充分酶解，提高免疫调节钛的产量；2)利用吸附剂除去鱼鳞上的重金属离子、细菌和腥味，提高免疫调节肽的纯度。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案做进一步说明。
本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的，实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例1
吸附剂的制备方法包括以下步骤：
将蟹壳粉碎后得到蟹壳粉，将蟹壳粉与多巴胺按质量比1:0.3加入水中，蟹壳粉与水的质量体积比为1:35g/mL，升温至50℃，然后加入戊二醛，戊二醛与多巴胺的摩尔比为1:1.5，搅拌反应1.5h，搅拌速率控制在100r/min，经过过滤、水洗后将蟹壳粉在60℃下干燥2.5h，得到预处理蟹壳粉；将预处理蟹壳粉置于质量浓度为8％醋酸水溶液中浸泡3h，水洗至中性，烘干，将烘干后的蟹壳在惰性气体的吹扫下，先以3.5℃/min升温速率升温至330℃，焙烧40min，然后以7℃/min升温速率升温至620℃，焙烧2h，得到多孔蟹壳粉；将多孔蟹壳粉加入浓度为1wt％高锰酸钾水溶液中进行活化30min，水洗后分离，干燥；将活化后的多孔蟹壳粉添加到浓度为3wt％海藻酸钠水溶液中，多孔蟹壳粉与海藻酸钠的质量比为1:0.5，然后加入三偏磷酸钠进行反应1.5h，三偏磷酸钠与海藻酸钠的质量比为1:4，经过分离、干燥得到吸附剂。
日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，包括以下步骤：
1)将黄姑鱼鱼鳞加入浓度为1wt％氢氧化钠溶液中，搅拌8h，取出后用水洗净；
2)将清洗后的黄姑鱼鱼鳞浸入摩尔浓度为0.35mol/L盐酸溶液中浸泡脱钙30min，鱼鳞与盐酸的质量体积比为1:8g/mL，滤去酸液，向鱼鳞中加入鱼鳞重量15％的吸附剂搅拌混合均匀，静置吸附7h，用水洗净，干燥粉碎；
3)将干燥粉碎后的鱼鳞按质量比1:40加入水中，搅拌混合均匀，加入木瓜蛋白酶在43℃下进行酶解12h，木瓜蛋白酶的添加量为鱼鳞重量的4.5％，酶解完成后置于沸水中进行灭活8min，冷却至室温，以12500r/min转速进行离心28min，收集上清液；
4)将上清液依次进行超滤、纳滤浓缩处理，然后经过冷冻干燥，即得。
实施例2
吸附剂的制备方法包括以下步骤：
将蟹壳粉碎后得到蟹壳粉，将蟹壳粉与多巴胺按质量比1:0.3加入水中，蟹壳粉与水的质量体积比为1:32g/mL，升温至46℃，然后加入戊二醛，戊二醛与多巴胺的摩尔比为1:1，搅拌反应1.5h，搅拌速率控制在85r/min，经过过滤、水洗后将蟹壳粉在55℃下干燥2h，得到预处理蟹壳粉；将预处理蟹壳粉置于质量浓度为6％醋酸水溶液中浸泡2.5h，水洗至中性，烘干，将烘干后的蟹壳在惰性气体的吹扫下，先以3℃/min升温速率升温至310℃，焙烧35min，然后以6℃/min升温速率升温至620℃，焙烧1.5h，得到多孔蟹壳粉；将多孔蟹壳粉加入浓度为0.8wt％高锰酸钾水溶液中进行活化25min，水洗后分离，干燥；将活化后的多孔蟹壳粉添加到浓度为2wt％海藻酸钠水溶液中，多孔蟹壳粉与海藻酸钠的质量比为1:0.45，然后加入三偏磷酸钠进行反应1h，三偏磷酸钠与海藻酸钠的质量比为1:3.5，经过分离、干燥得到吸附剂。
日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，包括以下步骤：
1)将黄姑鱼鱼鳞加入浓度为0.8wt％氢氧化钠溶液中，搅拌6h，取出后用水洗净；
2)将清洗后的黄姑鱼鱼鳞浸入摩尔浓度为0.25mol/L盐酸溶液中浸泡脱钙25min，鱼鳞与盐酸的质量体积比为1:6g/mL，滤去酸液，向鱼鳞中加入鱼鳞重量12％的吸附剂搅拌混合均匀，静置吸附6.5h，用水洗净，干燥粉碎；
3)将干燥粉碎后的鱼鳞按质量比1:38加入水中，搅拌混合均匀，加入木瓜蛋白酶在42℃下进行酶解11h，木瓜蛋白酶的添加量为鱼鳞重量的3-6％，酶解完成后置于沸水中进行灭活6min，冷却至室温，以12000r/min转速进行离心26min，收集上清液；
4)将上清液依次进行超滤、纳滤浓缩处理，然后经过冷冻干燥，即得。
实施例3
吸附剂的制备方法包括以下步骤：
将蟹壳粉碎后得到蟹壳粉，将蟹壳粉与多巴胺按质量比1:0.4加入水中，蟹壳粉与水的质量体积比为1:38g/mL，升温至55℃，然后加入戊二醛，戊二醛与多巴胺的摩尔比为1:1.5，搅拌反应2h，搅拌速率控制在100r/min，经过过滤、水洗后将蟹壳粉在65℃下干燥3h，得到预处理蟹壳粉；将预处理蟹壳粉置于质量浓度为8％醋酸水溶液中浸泡4h，水洗至中性，烘干，将烘干后的蟹壳在惰性气体的吹扫下，先以4℃/min升温速率升温至340℃，焙烧45min，然后以7℃/min升温速率升温至640℃，焙烧2.5h，得到多孔蟹壳粉；将多孔蟹壳粉加入浓度为1.5wt％高锰酸钾水溶液中进行活化35min，水洗后分离，干燥；将活化后的多孔蟹壳粉添加到浓度为4wt％海藻酸钠水溶液中，多孔蟹壳粉与海藻酸钠的质量比为1:0.55，然后加入三偏磷酸钠进行反应2h，三偏磷酸钠与海藻酸钠的质量比为1:5，经过分离、干燥得到吸附剂。
日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，包括以下步骤：
1)将黄姑鱼鱼鳞加入浓度为1.8wt％氢氧化钠溶液中，搅拌8h，取出后用水洗净；
2)将清洗后的黄姑鱼鱼鳞浸入摩尔浓度为0.45mol/L盐酸溶液中浸泡脱钙35min，鱼鳞与盐酸的质量体积比为1:8g/mL，滤去酸液，向鱼鳞中加入鱼鳞重量18％的吸附剂搅拌混合均匀，静置吸附8h，用水洗净，干燥粉碎；
3)将干燥粉碎后的鱼鳞按质量比1:45加入水中，搅拌混合均匀，加入木瓜蛋白酶在43℃下进行酶解13h，木瓜蛋白酶的添加量为鱼鳞重量的5％，酶解完成后置于沸水中进行灭活8min，冷却至室温，以13000r/min转速进行离心28min，收集上清液；
4)将上清液依次进行超滤、纳滤浓缩处理，然后经过冷冻干燥，即得。
实施例4
吸附剂的制备方法包括以下步骤：
将蟹壳粉碎后得到蟹壳粉，将蟹壳粉与多巴胺按质量比1:0.5加入水中，蟹壳粉与水的质量体积比为1:40g/mL，升温至60℃，然后加入戊二醛，戊二醛与多巴胺的摩尔比为1:2，搅拌反应2h，搅拌速率控制在120r/min，经过过滤、水洗后将蟹壳粉在70℃下干燥4h，得到预处理蟹壳粉；将预处理蟹壳粉置于质量浓度为10％醋酸水溶液中浸泡5h，水洗至中性，烘干，将烘干后的蟹壳在惰性气体的吹扫下，先以4℃/min升温速率升温至350℃，焙烧50min，然后以8℃/min升温速率升温至650℃，焙烧3h，得到多孔蟹壳粉；将多孔蟹壳粉加入浓度为2wt％高锰酸钾水溶液中进行活化40min，水洗后分离，干燥；将活化后的多孔蟹壳粉添加到浓度为5wt％海藻酸钠水溶液中，多孔蟹壳粉与海藻酸钠的质量比为1:0.6，然后加入三偏磷酸钠进行反应2h，三偏磷酸钠与海藻酸钠的质量比为1:6，经过分离、干燥得到吸附剂。
日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，包括以下步骤：
1)将黄姑鱼鱼鳞加入浓度为2wt％氢氧化钠溶液中，搅拌10h，取出后用水洗净；
2)将清洗后的黄姑鱼鱼鳞浸入摩尔浓度为0.5mol/L盐酸溶液中浸泡脱钙40min，鱼鳞与盐酸的质量体积比为1:10g/mL，滤去酸液，向鱼鳞中加入鱼鳞重量20％的吸附剂搅拌混合均匀，静置吸附8h，用水洗净，干燥粉碎；
3)将干燥粉碎后的鱼鳞按质量比1:50加入水中，搅拌混合均匀，加入木瓜蛋白酶在45℃下进行酶解15h，木瓜蛋白酶的添加量为鱼鳞重量的6％，酶解完成后置于沸水中进行灭活10min，冷却至室温，以13000r/min转速进行离心30min，收集上清液；
4)将上清液依次进行超滤、纳滤浓缩处理，然后经过冷冻干燥，即得。
实施例5
吸附剂的制备方法包括以下步骤：
将蟹壳粉碎后得到蟹壳粉，将蟹壳粉与多巴胺按质量比1:0.25加入水中，蟹壳粉与水的质量体积比为1:30g/mL，升温至45℃，然后加入戊二醛，戊二醛与多巴胺的摩尔比为1:1，搅拌反应1h，搅拌速率控制在80r/min，经过过滤、水洗后将蟹壳粉在50℃下干燥1h，得到预处理蟹壳粉；将预处理蟹壳粉置于质量浓度为5％醋酸水溶液中浸泡2h，水洗至中性，烘干，将烘干后的蟹壳在惰性气体的吹扫下，先以3℃/min升温速率升温至300℃，焙烧30min，然后以6℃/min升温速率升温至600℃，焙烧1h，得到多孔蟹壳粉；将多孔蟹壳粉加入浓度为0.5wt％高锰酸钾水溶液中进行活化20min，水洗后分离，干燥；将活化后的多孔蟹壳粉添加到浓度为1wt％海藻酸钠水溶液中，多孔蟹壳粉与海藻酸钠的质量比为1:0.4，然后加入三偏磷酸钠进行反应1h，三偏磷酸钠与海藻酸钠的质量比为1:3，经过分离、干燥得到吸附剂。
日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，包括以下步骤：
1)将黄姑鱼鱼鳞加入浓度为0.5wt％氢氧化钠溶液中，搅拌5h，取出后用水洗净；
2)将清洗后的黄姑鱼鱼鳞浸入摩尔浓度为0.2mol/L盐酸溶液中浸泡脱钙20min，鱼鳞与盐酸的质量体积比为1:5g/mL，滤去酸液，向鱼鳞中加入鱼鳞重量10％的吸附剂搅拌混合均匀，静置吸附6h，用水洗净，干燥粉碎；
3)将干燥粉碎后的鱼鳞按质量比1:35加入水中，搅拌混合均匀，加入木瓜蛋白酶在40℃下进行酶解10h，木瓜蛋白酶的添加量为鱼鳞重量的3％，酶解完成后置于沸水中进行灭活5min，冷却至室温，以12000r/min转速进行离心25min，收集上清液；
4)将上清液依次进行超滤、纳滤浓缩处理，然后经过冷冻干燥，即得。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (7)
1.一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将黄姑鱼鱼鳞加入氢氧化钠溶液中，搅拌5-10h，取出后用水洗净；
2）将清洗后的黄姑鱼鱼鳞浸入盐酸溶液中浸泡脱钙20-40min，滤去酸液，向鱼鳞中加入鱼鳞重量10-20%的吸附剂搅拌混合均匀，静置吸附6-8h，用水洗净，干燥粉碎；
3）将干燥粉碎后的鱼鳞按质量比1:35-50加入水中，搅拌混合均匀，加入木瓜蛋白酶在40-45℃下进行酶解10-15h，酶解完成后置于沸水中进行灭活5-10min，冷却至室温，以12000-13000r/min转速进行离心25-30min，收集上清液；
4）将上清液依次进行超滤、纳滤浓缩处理，然后经过冷冻干燥，即得；
所述步骤2）中吸附剂的制备方法包括以下步骤：
将预处理蟹壳粉置于质量浓度为5-10%醋酸水溶液中浸泡2-5h，水洗至中性，烘干，将烘干后的蟹壳在惰性气体的吹扫下，先以3-4℃/min升温速率升温至300-350℃，焙烧30-50min，然后以6-8℃/min升温速率升温至600-650℃，焙烧1-3h，得到多孔蟹壳粉；将多孔蟹壳粉加入高锰酸钾水溶液中进行活化20-40min，水洗后分离，干燥；将活化后的多孔蟹壳粉添加到海藻酸钠水溶液中，多孔蟹壳粉与海藻酸钠的质量比为1:0.4-0.6，然后加入三偏磷酸钠进行反应1-2h，三偏磷酸钠与海藻酸钠的质量比为1:3-6，经过分离、干燥得到吸附剂。
2.根据权利要求1所述的一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中氢氧化钠的浓度为0.5-2wt%。
3.根据权利要求1所述的一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2）中盐酸溶液的摩尔浓度为0.2-0.5mol/L，鱼鳞与盐酸的质量体积比为1:5-10 g/mL。
4.根据权利要求1所述的一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3）中木瓜蛋白酶的添加量为鱼鳞重量的3-6%。
5.根据权利要求1所述的一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，其特征在于，所述高锰酸钾水溶液的浓度为0.5-2wt%。
6.根据权利要求1所述的一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，其特征在于，所述海藻酸钠水溶液的浓度为1-5wt%。
7.根据权利要求1所述的一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法，其特征在于，所述预处理蟹壳粉的制备方法包括以下步骤：
将蟹壳粉碎后得到蟹壳粉，将蟹壳粉与多巴胺按质量比1:0.25-0.5加入水中，蟹壳粉与水的质量体积比为1:30-40g/mL，升温至45-60℃，然后加入戊二醛，戊二醛与多巴胺的摩尔比为1:1-2，搅拌反应1-2h，搅拌速率控制在80-120r/min，经过过滤、水洗后将蟹壳粉在50-70℃下干燥1-4h，得到预处理蟹壳粉。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811339509.3A CN109439714B (zh) | 2018-11-12 | 2018-11-12 | 一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811339509.3A CN109439714B (zh) | 2018-11-12 | 2018-11-12 | 一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109439714A CN109439714A (zh) | 2019-03-08 |
| CN109439714B true CN109439714B (zh) | 2021-06-18 |
Family
ID=65552135
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811339509.3A Active CN109439714B (zh) | 2018-11-12 | 2018-11-12 | 一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109439714B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110934099B (zh) * | 2019-11-08 | 2021-09-24 | 上海海洋大学 | 一种利用da受体抑制河蟹打斗的方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102533913B (zh) * | 2011-12-23 | 2013-07-31 | 南昌大学 | 一种采用共固定化双酶水解鱼鳞胶原蛋白制备抗氧化活性肽的方法 |
| CN102613383B (zh) * | 2012-04-24 | 2015-04-15 | 天津春宇食品配料有限公司 | 一种鱼鳞蛋白酶解液及其制备方法 |
| CN108530531A (zh) * | 2018-03-02 | 2018-09-14 | 贝尔特（烟台）海洋生物科技有限公司 | 一种鱼鳞胶原蛋白的制备方法 |
-
2018
- 2018-11-12 CN CN201811339509.3A patent/CN109439714B/zh active Active
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Physicochemical properties and biocompatibility evaluation of collagen from the skin of giant croaker (Nibea japonica);Tang Y等;《Marine drugs》;20180629;第16卷(第7期);全文 * |
| 日本黄姑鱼的研究进展;许源剑;《渔业信息与战略》;20101231;第25卷(第5期);全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109439714A (zh) | 2019-03-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107556364B (zh) | 亚临界水辅助酶解提取鲍鱼蛋白肽的方法及产品 | |
| JP6483252B2 (ja) | 低アレルギー誘発性で魚臭さの低下した魚タンパク質オリゴペプチド、その工業的調製方法、およびその用途 | |
| JPH07505521A (ja) | タバコの処理 | |
| CN102776262B (zh) | 一种高f值金枪鱼寡肽制备方法 | |
| CN112062834B (zh) | 一种深海鱼鱼皮胶原蛋白肽及其提取制备方法 | |
| CN108866134B (zh) | 一种蚕蛹蛋白多肽螯合钙的制备方法 | |
| CN109439714B (zh) | 一种日本黄姑鱼鱼鳞免疫调节肽的制备方法 | |
| CN1202750C (zh) | 牡蛎胶囊食品的制备方法 | |
| CN109722461A (zh) | 一种深海鱼胶原蛋白肽及其生产方法 | |
| CN111019989A (zh) | 一种豌豆低聚肽粉及其制备方法 | |
| CN107495357B (zh) | 含有鲍鱼壳水溶性提取物和石决明的咀嚼片及其制备方法 | |
| CN102732592A (zh) | 酶法制备淡水鱼骨明胶的方法 | |
| JP4646217B2 (ja) | 選択抽出によるカキ肉エキスの製造方法 | |
| CN113563459A (zh) | 一种胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺 | |
| CN109439713B (zh) | 一种罗非鱼鱼皮免疫调节肽的制备方法 | |
| CN109355340A (zh) | 一种具有高热稳定性海参抗氧化螯合肽的制备方法 | |
| CN117296980A (zh) | 一种核桃肽的提取方法 | |
| CN110117632B (zh) | 一种超声联合双酶解提高西瓜籽多肽抗氧化稳定性的方法 | |
| CN108949882B (zh) | 提取鱼鳞胶原蛋白肽粉和羟基磷灰石的方法 | |
| WO2017215313A1 (zh) | 一种利用银杏果皮制备抗氧化肽的方法 | |
| CN104131060B (zh) | 一种河蚬抗氧化肽及其制备方法 | |
| CN115449535A (zh) | 一种骨源胶原三肽及其制备方法 | |
| CN112546665B (zh) | 一种去除花椒中塑化剂的方法及花椒油树脂的制备方法和花椒油树脂 | |
| CN104513842A (zh) | 一种无味保湿胶原蛋白的生产方法 | |
| CN108003221B (zh) | 匹多莫德缩合杂质的去除工艺 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |