CN110117632B

CN110117632B - 一种超声联合双酶解提高西瓜籽多肽抗氧化稳定性的方法

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Publication number: CN110117632B
Application number: CN201910276494.9A
Authority: CN
Inventors: 段玉清; 文超婷; 张继贤; 张海晖; 任晓锋; 蔡梅红; 马海乐
Original assignee: Jiangsu University
Current assignee: Jiangsu University
Priority date: 2019-04-08
Filing date: 2019-04-08
Publication date: 2022-07-22
Anticipated expiration: 2039-04-08
Also published as: CN110117632A

Abstract

本发明公开了一种超声联合双酶解提高西瓜籽多肽抗氧化稳定性的方法，属于食品/农产品及其副产物的加工、蛋白利用技术领域。具体步骤如下：超声联合风味蛋白酶、碱性蛋白酶对西瓜籽蛋白进行双酶酶解、脱盐、浓缩、冷冻干燥，所得西瓜籽多肽经模拟胃肠消化后的抗氧化活性优于未经超声处理单酶酶解制备的西瓜子多肽、超声联合单酶酶解制备的西瓜籽多肽。本发明采用超声联合双酶法制备得到西瓜籽抗氧化肽，通过模拟人体胃、肠消化液体系评价抗氧化肽经消化后的稳定性，为西瓜籽多肽后续的生产、工艺研究和应用提供了科学的参考依据和重要的指导意义。

Description

一种超声联合双酶解提高西瓜籽多肽抗氧化稳定性的方法

技术领域

本发明属于食品/农产品及其副产物的加工、蛋白利用技术领域，涉及一种提高西瓜籽多肽抗氧化稳定性的方法，具体地说是一种超声联合双酶酶解处理提高西瓜籽多肽抗氧化稳定性的方法。

背景技术

在食品体系中，氧化反应会导致食品品质下降；在生物体内，氧化反应产生的过量自由基会引起机体产生氧化应激损伤，进而诱导各种慢性疾病的发生。合成的抗氧化剂不但可以延缓食品储藏期的品质劣变，延长食品的货架期，而且可以有效缓解和预防机体的氧化应激损伤。然而，近年来，随着人们对合成抗氧化剂安全方面的忧虑日益增加，天然抗氧化肽的开发和应用成为研究热点。此外，我国西瓜的产量巨大，年产量约占全世界2/3。然而，我国对西瓜的加工产品主要是果肉，果汁等。对于西瓜的副产品(包括西瓜皮和西瓜籽)综合利用却较少。值得注意的是，西瓜籽富含蛋白质(约占30％)和高比例的优质氨基酸。此外，一些研究表明西瓜籽蛋白水解物还具有较好的抗氧化活性，因此，西瓜籽能够作为一种潜在的抗氧化肽的蛋白来源。

大部分研究表明酶解法被普遍用来制备生物活性肽。然而，酶解法存在时间长，蛋白转化率低和成本高等缺点。超声作为一种新型，绿色，环保的方法，可以弥补酶解法的不足。大量文献表明，超声波处理能够显著提高多肽的制备效率和改善生物活性。然而，有关超声联合双酶酶解制备西瓜籽多肽的研究却未见报道。目前有关抗氧化肽的研究主要集中在多肽的分离、鉴定以及结构和功能之间的关系研究上。然而，关于加工方法和储存条件对肽的抗氧化活性的影响知之甚少。多肽中氨基酸的组成是复杂的，在胃肠消化过程中，食物中的Fe，Cu，H₂O₂，血红素，脂质过氧化物，NO，醛和其它化学物质可以改变氧化条件来影响多肽的抗氧化活性。研究多肽在胃肠道中的稳定性的理论和实践方面是非常重要的，但西瓜籽多肽的抗氧化稳定性研究未见报道。

本发明采用超声联合风味蛋白酶、碱性蛋白酶对西瓜籽蛋白进行双酶酶解，得到的酶解液经过浓缩、干燥步骤，所得西瓜籽多肽经模拟胃肠消化后的抗氧化活性优于未经超声处理单酶酶解制备的西瓜子多肽、超声联合单酶酶解制备的西瓜籽多肽。

超声联合双酶酶解处理不仅是一种绿色的非热物理加工手段，而且能够显著提高蛋白的酶解效率和改善多肽的活性。因此，借助超声联合双酶酶解处理手段，提高西瓜籽多肽模抗氧化活性的稳定性，拓宽了西瓜籽废弃物资源再利用，为西瓜籽多肽后续的生产、工艺研究和应用提供了科学的参考依据和重要的指导意义。

发明内容

本发明具体步骤如下：超声联合风味蛋白酶、碱性蛋白酶对西瓜籽蛋白进行双酶酶解、脱盐、浓缩、冷冻干燥，所得西瓜籽多肽经模拟胃肠消化后的抗氧化活性优于未经超声处理单酶酶解制备的西瓜子多肽、超声联合单酶酶解制备的西瓜籽多肽。本发明的目的在于提供一种超声联合双酶酶解处理提高西瓜籽多肽抗氧化稳定性的方法。本发明方法能够实现废弃物原料的高效利用，为西瓜籽多肽后续的生产、工艺研究和应用提供了科学的参考依据和重要的指导意义。

本发明的技术方案为：

一种超声联合双酶解提高西瓜籽多肽抗氧化稳定性的方法，按照以下步骤进行：

(1)称取西瓜籽蛋白，加入蒸馏水配置成0.2-0.6％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为7.5-9.5，进行超声联合风味蛋白酶和碱性蛋白酶双酶酶解处理西瓜籽蛋白，超声功率100-300W，温度30-55℃，蛋白酶与底物的比例为1-5％(w/w)，酶解时间20-50min，沸水浴10min灭酶，终止酶解反应，在4500r/min转速下离心10min，获得上清液，再经过脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到西瓜籽蛋白水解物。

(2)将步骤(1)得到的西瓜籽蛋白水解物置于锥形瓶中，调节pH为2.0，按照料液比为1:30-1:70(g/mL)加入胃消化液，混合均匀并快速置于30-37℃恒温水浴摇床中，酶解1-4h，得到西瓜籽多肽胃蛋白酶解液。

(3)将步骤(2)得到西瓜籽多肽胃蛋白酶解液的pH值调节为7.5±0.1，按照体积比为1:1-5:1加入肠消化液，混匀后快速置于30-37℃恒温水浴摇床中，酶解1-4h，沸水浴10min灭酶，终止酶解反应，在4500r/min转速下离心10min，取上清液，再经过脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到西瓜籽多肽肠蛋白酶解物。

其中步骤(1)中所述的超声装置为聚能式超声，超声联合风味蛋白酶和碱性蛋白酶双酶酶解是指风味蛋白酶和碱性蛋白酶同时酶解的过程中施加超声处理，其中风味蛋白酶和碱性蛋白酶的添加顺序为同时添加。风味蛋白酶与碱性蛋白酶的比例为1:1(w/w)，风味蛋白酶的酶活力为1.06×10⁶U/g，碱性蛋白酶的酶活力为23400U/mL。

其中步骤(2)中胃消化液的组成为：0.2g NaCl，0.32g胃蛋白酶，加入0.7mL的3mol/L盐酸溶液，充分混匀，调节pH值为1.2，加蒸馏水定容至100mL。胃蛋白酶的酶活力为3000U/mg。

其中步骤(3)中肠消化液组成为：0.175g磷酸二氢钾，加入5mL的0.2mol/L的氢氧化钠溶液，充分混匀，调节pH值为6.4±0.1，再加入0.25g胰蛋白酶，加蒸馏水定容至100mL。胰蛋白酶的酶活力为250U/mg。

本发明的有益效果：

(1)本发明首次利用了超声联合风味蛋白酶、碱性蛋白酶双酶酶解西瓜籽蛋白，充分利用了超声和2种蛋白酶的优势，显著地提高了酶解效率，改善了多肽的抗氧化活性。

(2)本发明获得的西瓜籽多肽，具有较高的胃肠消化抗氧化稳定性。

(3)本发明用途明确，可用于抗氧化功能性食品的开发和应用。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本发明的具体实施方式做详细的说明。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其它不同于在此描述的方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其它实施例互相排斥的实施例。

本发明中Fe²⁺螯合能力、DPPH自由基清除率被用于评估西瓜籽多肽的抗氧化能力。

实施例1

取西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.2％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为7.5，进行超声联合风味蛋白酶、碱性蛋白酶双酶酶解西瓜籽蛋白，超声功率100W，温度30℃，蛋白酶与底物的比例为1％(w/w)，酶解时间20min，沸水浴10min灭酶，终止酶解反应，在4500r/min转速下离心10min，获得上清液，再经过脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到西瓜籽蛋白水解物。3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为25.61±0.21％、75.16±0.34％。将西瓜籽蛋白水解物置于锥形瓶中，按照料液比为1:30(g/mL)加入胃消化液，混合均匀并快速置于30℃恒温水浴摇床中，搅拌酶解1h，得到西瓜籽多肽胃蛋白酶解液。将西瓜籽多肽胃蛋白酶解液分成两部分，一部分经冷冻干燥后进行Fe²⁺螯合能力、DPPH自由基清除率的测定，3mg/mL西瓜籽多肽胃蛋白酶解液测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为29.63±0.32％、81.25±0.24％。另一部分的西瓜籽多肽胃蛋白酶解液的pH值调节为7.5±0.1，按照体积比为1:1加入肠消化液，混匀后快速置于30℃恒温水浴摇床中，酶解1h，沸水浴10min灭酶，终止酶解反应，在4500r/min转速下离心10min，取上清液，再经过脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到西瓜籽多肽肠蛋白酶解物。3mg/mL西瓜籽多肽肠蛋白酶解液测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为72.63±0.32％、51.35±0.14％。

实施例2

取西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.6％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为9.5，进行超声联合风味蛋白酶、碱性蛋白酶双酶酶解西瓜籽蛋白，超声功率300W，温度55℃，蛋白酶与底物的比例为5％(w/w)，酶解时间50min，沸水浴10min灭酶，终止酶解反应，在4500r/min转速下离心10min，获得上清液，再经过脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到西瓜籽蛋白水解物。3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为45.23±0.18％、85.16±0.14％。将西瓜籽蛋白水解物置于锥形瓶中，按照料液比为1:70(g/mL)加入胃消化液，混合均匀并快速置于37℃恒温水浴摇床中，搅拌酶解4h，得到西瓜籽多肽胃蛋白酶解液。将西瓜籽多肽胃蛋白酶解液分成两部分，一部分经冷冻干燥后进行Fe²⁺螯合能力、DPPH自由基清除率的测定，3mg/mL西瓜籽多肽胃蛋白酶解液测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为47.13±0.15％、93.31±0.34％。另一部分的西瓜籽多肽胃蛋白酶解液的pH值调节为7.5±0.1，按照体积比为5:1加入肠消化液，混匀后快速置于37℃恒温水浴摇床中，酶解4h，沸水浴10min灭酶，终止酶解反应，在4500r/min转速下离心10min，取上清液，再经过脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到西瓜籽多肽肠蛋白酶解物。3mg/mL西瓜籽多肽肠蛋白酶解液测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为82.63±0.32％、57.35±0.14％。

实施例3

取西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.4％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为8.0，进行超声联合风味蛋白酶、碱性蛋白酶双酶酶解西瓜籽蛋白，超声功率150W，温度40℃，蛋白酶与底物的比例为3％(w/w)，酶解时间30min，沸水浴10min灭酶，终止酶解反应，在4500r/min转速下离心10min，获得上清液，再经过脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到西瓜籽蛋白水解物。3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为32.31±0.32％、79.16±0.24％。将西瓜籽蛋白水解物置于锥形瓶中，按照料液比为1:50(g/mL)加入胃消化液，混合均匀并快速置于35℃恒温水浴摇床中，搅拌酶解2h，得到西瓜籽多肽胃蛋白酶解液。将西瓜籽多肽胃蛋白酶解液分成两部分，一部分经冷冻干燥后进行Fe²⁺螯合能力、DPPH自由基清除率的测定，3mg/mL西瓜籽多肽胃蛋白酶解液测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为34.53±0.42％、85.35±0.14％。另一部分的西瓜籽多肽胃蛋白酶解液的pH值调节为7.5±0.1，按照体积比为3:1加入肠消化液，混匀后快速置于35℃恒温水浴摇床中，酶解2h，沸水浴10min灭酶，终止酶解反应，在4500r/min转速下离心10min，取上清液，再经过脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到西瓜籽多肽肠蛋白酶解物。3mg/mL西瓜籽多肽肠蛋白酶解液测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为83.23±0.32％、57.15±0.24％。

对比例1

取未经超声处理的西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.2％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为7.5，进行风味蛋白酶酶解西瓜籽蛋白，其它酶解条件和模拟胃肠消化过程同实施例1。胃蛋白酶消化前，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为12.61±0.32％、35.21±0.24％。西瓜籽蛋白水解物经过胃消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为18.23±0.15％、39.31±0.13％。西瓜籽多肽胃蛋白酶解物经过肠消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为49.42±0.25％、18.75±0.26％。

对比例2

取未经超声处理的西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.2％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为7.5，进行碱性蛋白酶酶解西瓜籽蛋白，其它酶解条件和模拟胃肠消化过程同实施例1。胃蛋白酶消化前，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为15.24±0.12％、38.52±0.54％。西瓜籽蛋白水解物经过胃消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为21.14±0.23％、42.31±0.03％。西瓜籽多肽胃蛋白酶解物经过肠消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为52.02±0.21％、21.05±0.12％。

对比例3

取未经超声处理的西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.6％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为9.5，进行风味蛋白酶酶解西瓜籽蛋白，其它酶解条件和模拟胃肠消化过程同实施例2。胃蛋白酶消化前，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为15.91±0.31％、35.62±0.12％。西瓜籽蛋白水解物经过胃消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为16.52±0.17％、38.05±0.28％。西瓜籽多肽胃蛋白酶解物经过肠消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为48.02±0.25％、17.38±0.42％。

对比例4

取未经超声处理的西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.6％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为9.5，进行碱性蛋白酶酶解西瓜籽蛋白，其它酶解条件和模拟胃肠消化过程同实施例2。胃蛋白酶消化前，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为17.61±0.41％、37.21±0.12％。西瓜籽蛋白水解物经过胃消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为18.79±0.27％、40.21±0.18％。西瓜籽多肽胃蛋白酶解物经过肠消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为50.12±0.23％、19.89±0.36％。

对比例5

取西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.2％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为7.5，进行超声联合风味蛋白酶酶解西瓜籽蛋白，其它酶解条件和模拟胃肠消化过程同实施例1。胃蛋白酶消化前，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为16.32±0.13％、38.52±0.32％。西瓜籽蛋白水解物经过胃消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为20.11±0.24％、40.14±0.27％。西瓜籽多肽胃蛋白酶解物经过肠消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为51.26±0.34％、25.15±0.19％。

对比例6

取西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.2％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为7.5，进行超声联合碱性蛋白酶酶解西瓜籽蛋白，其它酶解条件和模拟胃肠消化过程同实施例1。胃蛋白酶消化前，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为18.78±0.23％、40.92±0.35％。西瓜籽蛋白水解物经过胃消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为23.23±0.54％、43.14±0.32％。西瓜籽多肽胃蛋白酶解物经过肠消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为53.15±0.24％、28.16±0.18％。

对比例7

取西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.6％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为9.5，进行超声联合风味蛋白酶酶解西瓜籽蛋白，其它酶解条件和模拟胃肠消化过程同实施例2。胃蛋白酶消化前，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为18.92±0.25％、39.17±0.16％。西瓜籽蛋白水解物经过胃消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为21.26±0.24％、41.27±0.27％。西瓜籽多肽胃蛋白酶解物经过肠消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为52.27±0.54％、27.19±0.29％。

对比例8

取西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.6％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为9.5，进行超声联合碱性蛋白酶酶解西瓜籽蛋白，其它酶解条件和模拟胃肠消化过程同实施例2。胃蛋白酶消化前，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为21.94±0.31％、42.76±0.21％。西瓜籽蛋白水解物经过胃消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为24.17±0.32％、44.02±0.23％。西瓜籽多肽胃蛋白酶解物经过肠消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为55.67±0.31％、32.27±0.14％。

对比例9

取未经超声处理的西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.4％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为8.0，进行风味蛋白酶酶解西瓜籽蛋白，其它酶解条件和模拟胃肠消化过程同实施例3。胃蛋白酶消化前，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为17.24±0.27％、38.05±0.43％。西瓜籽蛋白水解物经过胃消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为18.41±0.27％、40.01±0.35％。西瓜籽多肽胃蛋白酶解物经过肠消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为52.01±0.35％、25.27±0.25％。

对比例10

取未经超声处理的西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.4％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为8.0，进行碱性蛋白酶酶解西瓜籽蛋白，其它酶解条件和模拟胃肠消化过程同实施例3。胃蛋白酶消化前，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为19.24±0.32％、40.12±0.32％。西瓜籽蛋白水解物经过胃消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为20.51±0.37％、42.11±0.25％。西瓜籽多肽胃蛋白酶解物经过肠消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为55.12±0.23％、27.89±0.16％。

对比例11

取西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.4％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为8.0，进行超声联合风味蛋白酶酶解西瓜籽蛋白，其它酶解条件和模拟胃肠消化过程同实施例3。胃蛋白酶消化前，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为20.32±0.25％、40.15±0.35％。西瓜籽蛋白水解物经过胃消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为21.03±0.26％、42.02±0.14％。西瓜籽多肽胃蛋白酶解物经过肠消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为55.14±0.26％、27.24±0.23％。

对比例12

取西瓜籽蛋白1g，加入蒸馏水配置成0.4％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为8.0，进行超声联合碱性蛋白酶酶解西瓜籽蛋白，其它酶解条件和模拟胃肠消化过程同实施例3。胃蛋白酶消化前，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为22.76±0.17％、42.28±0.26％。西瓜籽蛋白水解物经过胃消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为23.18±0.34％、44.13±0.29％。西瓜籽多肽胃蛋白酶解物经过肠消化液水解后，3mg/mL西瓜籽蛋白水解物测定Fe²⁺螯合能力、清除DPPH自由基的能力分别为57.21±0.34％、29.32±0.19％。

本发明通过目前被认为是最优选和最实际的实施例描述，应当能被理解的是，本发明不限于公开的实施例。相反，其目的是涵盖随附权利要求精神和范围内的各种修改和等效安排，其范围是给予最广泛的解释，以包含在法律下允许的所有这样的修改和同等结构。

Claims

1.一种超声联合双酶解提高西瓜籽多肽抗氧化稳定性的方法，其特征在于按照以下步骤进行：

(1)称取西瓜籽蛋白，加入蒸馏水配置成0.2-0.6％(m/v)悬浊液，混合均匀后，调节蛋白溶液的pH值为7.5-9.5，进行超声联合风味蛋白酶和碱性蛋白酶双酶酶解处理西瓜籽蛋白，超声功率100-300W，温度30-55℃，蛋白酶与底物的比例为1-5％(w/w)，酶解时间20-50min，沸水浴10min灭酶，终止酶解反应，在4500r/min转速下离心10min，获得上清液，再经过脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到西瓜籽蛋白水解物；

(2)将步骤(1)得到的西瓜籽蛋白水解物置于锥形瓶中，调节pH为2.0，按照料液比为1:30-1:70(g/mL)加入胃消化液，混合均匀并快速置于30-37℃恒温水浴摇床中，酶解1-4h，得到西瓜籽多肽胃蛋白酶解液；

2.根据权利要求1所述的一种超声联合双酶解提高西瓜籽多肽抗氧化稳定性的方法，其特征在于其中步骤(1)中所述的超声装置为聚能式超声，超声联合风味蛋白酶和碱性蛋白酶双酶酶解是指风味蛋白酶和碱性蛋白酶同时酶解的过程中施加超声处理，其中风味蛋白酶和碱性蛋白酶的添加顺序为同时添加；风味蛋白酶与碱性蛋白酶的比例为1:1(w/w)，风味蛋白酶的酶活力为1.06×10⁶U/g，碱性蛋白酶的酶活力为23400U/mL。

3.根据权利要求1所述的一种超声联合双酶解提高西瓜籽多肽抗氧化稳定性的方法，其特征在于其中步骤(2)中胃消化液的组成为：0.2g NaCl，0.32g胃蛋白酶，加入0.7mL的3mol/L盐酸溶液，充分混匀，调节pH值为1.2，加蒸馏水定容至100mL；胃蛋白酶的酶活力为3000U/mg。

4.根据权利要求1所述的一种超声联合双酶解提高西瓜籽多肽抗氧化稳定性的方法，其特征在于其中步骤(3)中肠消化液组成为：0.175g磷酸二氢钾，加入5mL的0.2mol/L的氢氧化钠溶液，充分混匀，调节pH值为6.4±0.1，再加入0.25g胰蛋白酶，加蒸馏水定容至100mL；胰蛋白酶的酶活力为250U/mg。