CN109425680A - 一种利用hplc-ms建立新疆阿魏多糖指纹图谱的方法 - Google Patents

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岳丽君
申翔宇
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Abstract

本发明涉及一种利用HPLC‑MS建立新疆阿魏多糖指纹图谱的方法。本发明采用HPLC‑MS技术建立新疆阿魏指纹图谱的方法将色谱的分离功能与质谱的定性功能结合使用，大大提高质量检测的准确性和灵敏度。而且本发明首次建立新疆阿魏水溶性多糖的定量指纹图谱，不仅可以利用质谱对共有峰进行准确定性，还可以通过提取离子色谱图准确计算各峰峰面积进行定量，从两个层面建立指纹图谱更具有效性。本发明的方法灵敏度高，专属性强，可作为新疆阿魏药材的鉴别和质量评价的重要手段之一。

Description

一种利用HPLC-MS建立新疆阿魏多糖指纹图谱的方法
技术领域
本发明涉及一种利用HPLC-MS建立新疆阿魏多糖指纹图谱的方法及由此方法所得到的新疆阿魏多糖标准指纹图谱，属于中药指纹图谱技术领域。
背景技术
新疆阿魏(Ferula sinkiangensis K.M.Shen)是伞形科(Umbelliferae)阿魏，属(Ferula)多年生草本植物，味苦、辛、性温、归脾、胃经，具有强烈葱蒜样异臭味，有消积、散痞、杀虫、祛湿、止痛的功效，被用来治疗肉食积滞，瘀血痞块，虫积腹痛等症。新疆阿魏主产于新疆，应用历史悠久。1977年版《中国药典》中规定作为中药的阿魏只有新疆阿魏(Ferulasinkiangensis K.M.Shen)和阜康阿魏(Ferula fukanensis K.M.Shen)两个种。传统药物阿魏是从阿魏属药用植物中获得的油胶树脂。现代研究表明阿魏具有抗炎、免疫抑制、抗过敏、抗肿瘤、抗氧化和杀菌等广泛的药理活性，在新疆民族药中广泛应用于治疗风湿性关节炎、胃病。
多糖(Polysaccharide，PS)是由醛糖或酮糖通过糖苷键聚合而成的天然高分子化合物，广泛存在于动、植物和微生物中。多糖作为一种重要的生命物质，具有抗免疫调节、抗氧化、抗衰老、抗病毒、抗肿瘤、抗疲劳、降血糖、降血脂等多种生物活性。目前许多研究结果表明，糖类作为信息分子在受精、发生、发育分化，神经系统的维持等方面起着重要作用。另外，炎症和自身免疫疾病、老化、癌细胞的异常增殖和转换，细胞识别和病原体感染等生物学过程中也都有糖类的介导。
中药指纹图谱是通过多维、联用分析技术对中药复杂物质体系进行检测得到的一种信息图谱。目前中药指纹图谱研究比较多的是中药化学指纹图谱。中药化学指纹图谱是将中药的物质基础—化学成分群的特征信息利用分析仪器检测结果给予表达，并用于中药的质量评价、质量控制和新药研究的物质信息表征。中药化学指纹图谱具有整体、宏观和系统的特点，已成为美国FDA、WHO等国际权威机构所接受和认可的一种中药质量评价技术。然而，中药化学成分的多样性和复杂性以及药效物质基础的不确定性，增加了中药指纹图谱建立的难度，以及指纹图谱的有效性和重现性。
目前，新疆阿魏指纹图谱的研究大多集中在建立挥发油、水提物和醇提物的HPLC指纹图谱，但是由于色谱定性分析的局限性，对特征共有峰的定性研究很少，指纹图谱可信度有待提高。此外，仅用单一方法建立的指纹图谱进行中药材的质量控制和质量评价难免会造成信息缺失、评价结果偏颇的现象，很难对中药这样的复杂体系形成清晰完整的认识。
发明内容
为克服现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种利用HPLC-MS建立新疆阿魏多糖指纹图谱的方法。可将新疆阿魏多糖指纹图谱作为新疆阿魏多糖类产品的质量控制和真伪鉴别的主要指标之一。本发明还提供了新疆阿魏多糖HPLC-MS指纹图谱。
本发明的技术方案如下：
一种利用HPLC-MS建立新疆阿魏多糖HPLC-MS指纹图谱的方法，包括下列步骤：
(1)制备单糖标准品溶液；
(2)将步骤(1)制备的单糖标准品溶液使用PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)进行衍生化得到不同单糖衍生化后的标准品溶液，并取衍生化后的单糖溶液制备标准品混合溶液(即混合标样)；
(3)分别对不同批次新疆阿魏进行提取，得到新疆阿魏多糖；
(4)将步骤(3)提取的新疆阿魏多糖进行水解，得到单糖；
(5)将步骤(4)水解的产物使用步骤(2)相同的PMP衍生化步骤进行衍生化；
(6)使用HPLC-MS对步骤(2)制备得到的不同单糖衍生化后的标准品溶液和混合标样进行分析，根据各单糖衍生化后的标准品溶液的色谱峰对混合标样中的色谱峰进行定性，并绘制混合标样中各单糖的浓度-峰面积标准曲线；
(7)使用HPLC-MS对步骤(5)衍生化的新疆阿魏多糖样品进行分析，比较各批次得到的色谱图，确定共有特征峰，并将各批次的新疆阿魏多糖图谱数据用平均数法生成指纹图谱共有模式，并以此共有模式为新疆阿魏HPLC-MS指纹图谱，将得到的HPLC-MS指纹图谱与步骤(6)各单糖标准品色谱图对比，对共有特征峰进行定性分析，并利用标准曲线对共有特征峰进行定量分析。
根据本发明的方法，步骤(1)中，
所述单糖选自葡萄糖(Glu)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)、甘露糖(Man)、核糖(Rib)、鼠李糖(Rham)、半乳糖醛酸(GalA)、阿拉伯糖(Ara)、葡萄糖醛酸(GluA)、岩藻糖(Fuc)；
优选单糖的纯度为95％以上，更优选97％，还优选98％以上。
根据本发明的方法，步骤(2)中，
所述单糖标准品溶液PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)衍生化的方法为使用PMP在碱性环境下与单糖反应，反应完成后使用酸性溶液中和。
例如使用如下的方法衍生化：使用0.3mol/L氢氧化钠溶液混匀后加5mL0.5mol/LPMP的甲醇溶液，于70℃水浴密封反应，冷却至室温；加5mL 0.3mol/L盐酸溶液中和，加超纯水至25mL，再加等体积氯仿，振荡、静置、弃去有机相，萃取3次直至有机相呈透明无色。
所述混合标样为取各相同体积的衍生化后的单糖标准品溶液，配制成不同浓度梯度的溶液，所述浓度的梯度范围为0.1-1000ng/mL，例如配制各单糖浓度分别为0.2、0.5、1、2、5、10、20、50、100、200、500、1000ng/mL的混合标样。
根据本发明的方法，步骤(3)中，
所述不同批次新疆阿魏样品的原产地为新疆。
所述样品至少为9个批次。
所述提取方法为使用乙醇对新疆阿魏加热回流，除去脂类、低聚糖、单糖和色素后晾干；将晾干后的新疆阿魏置于水中浸泡，并置于50-90℃温水浴提取过滤，滤液浓缩后再使用乙醇醇沉后离心，沉淀用无水乙醇及无水乙醚洗涤，干燥。
根据本发明的方法，步骤(4)中，所述水解为酸性水解，所述酸可为三氟乙酸(TFA)。例如，将步骤(3)得到的多糖与三氟乙酸(TFA)在90-110℃条件下密封反应，水解为单糖。优选的，先将步骤(3)得到的多糖用水溶解后离心，取上清液，再将其与酸混合进行水解反应。
根据本发明的方法，步骤(6)中，
所述HPLC-MS的液相色谱条件为：色谱柱：C18柱[(1.5-4.6)mmi.d.×(150-250)mm，1.5-5μm)]；
流动相：A相为0.5mM乙酸铵-0.01％甲酸混合溶液，B相为乙腈；柱温：15-35℃；流速：0.2-1mL/min；
洗脱梯度为：0～10min：18～23B％；10～13.5min：23～29B％；13.5～15min：29～37B％；15～16min：37～90B％；16～16.1min：90～18B％。
所述HPLC-MS的质谱条件优选为：电喷雾电离源(ESI源)，正离子全扫描多反应监测(MRM)模式，电压40psi，离子源温度100℃，雾化器温度325℃，雾化气流：11L/min，毛细管电压3.5kV；扫描质量范围：0-600Da。
本发明还提供如上所述建立方法得到的新疆阿魏多糖指纹图谱。
根据本发明，所述新疆阿魏多糖指纹图谱参见图3。所述新疆阿魏多糖指纹图谱中各单糖组成如下所示：
本发明还提供一种鉴别新疆阿魏的方法或对新疆阿魏进行质量控制的方法，所述方法包括如下步骤：
S1.提取待测样品中的多糖；
S2.将步骤S1提取的多糖进行水解，得到单糖；
S3.将步骤S2中水解后得到的产物用PMP进行衍生化；
S4.使用HPLC-MS对步骤S3衍生化后的样品进行分析检测；
S5.将步骤S4的检测结果与本发明所述的新疆阿魏多糖指纹图谱中各单糖及其组成进行分析对比。
其中，步骤S1中，所述提取方法为使用乙醇对新疆阿魏加热回流，除去脂类、低聚糖、单糖和色素后晾干；将晾干后的新疆阿魏置于水中浸泡，并置于50-90℃温水浴提取过滤，滤液浓缩后再使用乙醇醇沉后离心，沉淀用无水乙醇及无水乙醚洗涤，干燥。
步骤S2中，所述水解为酸性水解，所述酸例如可为三氟乙酸(TFA)。
步骤S3中，使用PMP在碱性环境下与单糖反应，反应完成后使用酸性溶液中和。
例如使用如下方法衍生化：使用0.3mol/L NaOH溶液混匀后加5mL 0.5mol/L PMP的甲醇溶液，于70℃水浴密封反应1h，冷却至室温；加5mL 0.3mol/L HCl溶液振荡中和，加超纯水至25mL，再加等体积CHCl3，振荡、静置、弃去有机相，萃取3次直至有机相呈透明无色。
步骤S4中，所述HPLC-MS的液相色谱条件为：色谱柱：C18柱[(1.5-4.6)mmi.d.×(150-250)mm，1.5-5μm)]；
流动相A为0.5mM乙酸铵-0.01％甲酸的混合溶液，流动相B为乙腈；柱温：15-35℃；流速：0.2-1mL/min；
洗脱梯度为：0～10min：18～23B％；10～13.5min：23～29B％；13.5～15min：29～37B％；15～16min：37～90B％；16～16.1min：90～18B％。
所述HPLC-MS的质谱条件优选为：电喷雾电离源(ESI源)，正离子全扫描多反应监测(MRM)模式，电压40psi，离子源温度100℃，雾化器温度325℃，雾化气流：11L/min，毛细管电压3.5kV；扫描质量范围：0-600Da。
步骤S5中，所述分析对比使用夹角余弦法将步骤S4得到的色谱图与如上所述新疆阿魏多糖指纹图谱(图3)进行相似度对比，当计算相似度为0.9以上时，则认为待测样品为合格的新疆阿魏；当相似度小于0.9时，则认为待测样品不合格。
本发明具有以下优点：
(1)本发明采用HPLC-MS技术建立新疆阿魏指纹图谱的方法将色谱的分离功能与质谱的定性功能结合使用，大大提高质量检测的准确性和灵敏度。而且本发明首次建立新疆阿魏水溶性多糖的定量指纹图谱，不仅可以利用质谱对共有峰进行准确定性，还可以通过提取离子色谱图准确计算各峰峰面积进行定量，从两个层面建立指纹图谱更具有效性。
(2)本发明首次以大分子多糖为指标建立新疆阿魏HPLC-MS指纹图谱，突破了目前大多数建立小分子醇提物指纹图谱的局限。建立新疆阿魏药材的准确鉴别和质量控制的方法，可以有效提高中药材质量控制的可靠性。
(3)本发明可为我国新疆阿魏的质量检测方法和质量标准的提升及完善提供科学依据与参考，从而促进新疆阿魏相关产品的质量提高和稳定，规范新疆阿魏市场，为新疆阿魏的质量控制提供新的技术手段。
(4)本发明提供的构建方法可信度及精密度高，重复率好，得到的指纹图谱可信度高。
附图说明
图1为10种单糖混合标准溶液PMP衍生物的MRM色谱图；
图2为9个批次新疆阿魏多糖的HPLC-MS的MRM色谱图；
图3为新疆阿魏多糖标准指纹图谱。
图4为新疆阿魏多糖指纹图谱及各共有峰的提取离子色谱图比对；
图5为新疆阿魏多糖指纹图谱精密度考察的HPLC-MS的MRM色谱图；
图6为新疆阿魏多糖指纹图谱稳定性考察的HPLC-MS的MRM色谱图；
图7为新疆阿魏多糖指纹图谱重复性考察的HPLC-MS的MRM色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外，应理解，在阅读了本发明所记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本发明所限定的范围。
仪器与试剂
液相色谱仪为Agilent Technologies 1200；质谱仪为Agilent Technologies6430Triple Quad，包括电喷雾电离源(ESI源)、注射器针泵。
单糖标准品：葡萄糖(Glu，99％)、半乳糖(Gal，≥99％)、木糖(Xyl，98％)、甘露糖(Man，99％)、核糖(Rib，≥99％)、鼠李糖(Rham，99％)、半乳糖醛酸(GalA，97％)、阿拉伯糖(Ara，99％)、葡萄糖醛酸(GluA，≥99％)、岩藻糖(Fuc，≥99％)。
新疆阿魏样品：9个批次分别购自新疆乌鲁木齐市、阿勒泰地区、河北安国市药材市场，原产地为新疆。
水为超纯水；乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯。
实施例1、单糖标准曲线的建立
1、单糖标准品溶液的制备
精密称取10种单糖标准品各1mg，分别置于具塞试管中，加入1mL超纯水完全溶解。
10种单糖标准品溶液分别进行PMP衍生化：分别在相应的1mL 1mg/mL单糖标准液中加入1mL 0.3mol/L NaOH溶液和1mL 0.5mol/L PMP甲醇溶液，加塞于70℃水浴密封反应1h，取出放置冷却至室温；分别加1mL 0.3mol/L HCl溶液振荡中和，加超纯水至5mL，再加5mLCHCl3，振荡，静置，弃去有机相，如此萃取3次直至有机相呈透明无色。将水相过0.22μm微孔膜后待进样。
从10种单糖标准品溶液中各取100μL，配制各单糖浓度分别为0.2、0.5、1、2、5、10、20、50、100、200、500、1000ng/mL的标准品混合溶液(即混合标样)。
2、新疆阿魏样品的处理
2.1.提取新疆阿魏多糖
取新疆阿魏置于95％乙醇中热水浴回流4h除去脂类、低聚糖、单糖和色素，取出晾干。
取10g新疆阿魏浸泡于300mL超纯水中过夜，再置于70℃温水浴提取2h，过滤，残渣用150mL超纯水继续于70℃水浴提取2h，过滤，合并两次滤液，减压浓缩至1/4体积，再加4倍体积95％乙醇醇沉过夜后离心，沉淀用无水乙醇洗3次，无水乙醚洗3次，置于真空干燥箱中干燥即得新疆阿魏粗多糖固体。
2.2.新疆阿魏多糖水解
取0.1g步骤2.1中得到的粗多糖溶于10mL热水，离心，上清加等量2mol/L TFA溶液，加盖于100℃下密封降解4h，取出冷却至室温，加适量甲醇后减压蒸干，如此重复加甲醇蒸干3次，去除TFA，再加少量热水溶解残渣(水解产物)，定容100mL，备用。
2.3.将新疆阿魏多糖水解产物进行PMP衍生化反应
取步骤2.2中水解后的样品溶液5mL，与5mL 0.3mol/L NaOH溶液混匀后加5mL0.5mol/L PMP甲醇溶液，加塞于70℃水浴密封反应1h，取出放置冷却至室温；加5mL0.3mol/L HCl溶液振荡中和，加超纯水至25mL，再加等体积25mL CHCl3，振荡，静置，弃去有机相，如此萃取3次直至有机相呈透明无色。将水相过0.22μm微孔膜后待进样。
3、单糖衍生化后的标准品溶液及其混合溶液的检测
色谱条件：色谱柱：SHISEIDO MGIIIC18(2.0mm i.d.×150mm,5μm)；流动相A为0.5mM乙酸铵-0.01％甲酸的混合溶液，流动相B为乙腈，采用梯度洗脱方式：0～10min：18～23B％；10～13.5min：23～29B％；13.5～15min：29～37B％；15～16min：37～90B％；16～16.1min：90～18B％；柱温：25℃；流速：0.4mL/min；进样体积：5μL。
质谱条件：电喷雾电离源(ESI源)，正离子全扫描多反应监测(MRM)模式，电压40psi，离子源温度100℃，雾化器温度325℃，雾化气流：11L/min，毛细管电压3.5kV；扫描质量范围：0-600Da。
在此条件下分别进样步骤1中得到的10种单糖衍生化后的标准品溶液及混合标样溶液，得到10种单糖衍生化后的标准品色谱图以及单糖分离较好的混合标样色谱图，混合标样的色谱图如图1所示。
4、定量标准曲线的绘制
根据步骤1中得到的不同浓度的混合标样溶液的色谱图，以各标准单糖浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标，绘制各单糖定量标准曲线。
5、指纹图谱检测的方法学考察
(1)精密度试验
取一份混合标样溶液(稀释使其浓度在如上所述标准曲线的线性范围内)，重复进样7次，测定其峰面积的相对标准偏差RSD值，考察精密度。
(2)准确性、回收率试验
称取新疆阿魏样品3份，按照上述提取、水解和衍生化步骤处理后，加入一定量衍生化后的混合标样溶液，用超纯水稀释成低、中、高三个浓度(在如上所述标准曲线的线性范围内)，每个浓度平行3份，依次进样，根据标准曲线计算新疆阿魏样品中各单糖含量，计算回收率＝(加样后测得的量-加样前样品中的量)/(加入量)。
实施例2、新疆阿魏多糖指纹图谱的建立
1、新疆阿魏多糖指纹图谱的建立与评价
(1)共有峰的确定
收集9个批次新疆阿魏样品按实施例1中的多糖提取、完全水解、PMP衍生化步骤操作，并在上述检测条件下进行分析，得到各批次样品的色谱图，结果如图2所示。比较各批次得到的色谱图，确定共有特征峰有5个，并将各批次的新疆阿魏多糖图谱数据用平均数法生成共有模式，并以此共有模式为新疆阿魏HPLC-MS指纹图谱(见附图3)，将该指纹图谱与标准单糖样品和样品的保留时间对照，定性上述共有色谱峰(见附图4)；计算这5个共有峰的保留时间的相对标准偏差RSD均小于2％，共有峰面积的RSD均小于5％。根据样品色谱图中各共有峰的峰面积，利用标准曲线分别定量共有峰所代表的标准单糖含量，结果如表1所示。
表1新疆阿魏多糖的单糖组成及含量
9个批次新疆阿魏多糖样品的共有峰保留时间及峰面积RSD值见表2
表2 9批新疆阿魏多糖指纹图谱的共有峰保留时间和峰面积RSD值
(2)指纹图谱相似度评价
如上所述，将9个批次的新疆阿魏多糖图谱数据用平均数法生成指纹图谱共有模式，并以此共有模式为新疆阿魏药材的指纹图谱(见图3)，应用夹角余弦法对各批次新疆阿魏的图谱进行相似度评价，结果见表3。表3的结果表明建立的新疆阿魏多糖指纹图谱能够运用于实际生产中，可满足药材鉴别和质量控制的需求。
表3 9批新疆阿魏多糖指纹图谱的相似度评价结果
3、指纹图谱的方法学考察
(1)精密度试验
取9个批次中1号新疆阿魏为供试品，按照上述提取、水解和衍生化方法处理后，在上述液质条件下连续进样7次，谱图见图5。分别计算共有峰的保留时间和峰面积RSD均小于5％，用相似度计算，将所得的图谱与共有模式进行相似度评价，相似度均大于0.99。
(2)稳定性试验
取上述1号新疆阿魏为供试品，按照上述提取、水解和衍生化方法处理，分别在制备后0、2、8、12、24h按上述液质条件进样分析，谱图见图6。分别计算共有峰的保留时间和峰面积RSD均小于5％，用相似度计算，将所得的图谱与共有模式进行相似度评价，相似度均大于0.99。
(3)重复性试验
取上述1号新疆阿魏为供试品，按照上述提取、水解和衍生化方法平行处理6份，按上述液质条件进样分析，谱图见图7。分别计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积RSD均小于5％，用相似度计算，将所得的图谱与共有模式进行相似度评价，相似度均大于0.99。
由以上结果可知，共有模式得到的图谱与其中各批次新疆阿魏样品图谱的相似度高，并且本发明构建方法的精密度试验、稳定性试验及重复性试验证明该方法得到的结果准确，可信度高。因此，图3可以作为新疆阿魏的指纹图谱。
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种利用HPLC-MS建立新疆阿魏多糖HPLC-MS指纹图谱的方法，包括下列步骤：
(1)制备单糖标准品溶液；
(2)将步骤(1)制备的单糖标准品溶液使用PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)进行衍生化得到不同单糖衍生化后的标准品溶液，并取衍生化后的单糖溶液制备标准品混合溶液(即混合标样)；
(3)分别对不同批次新疆阿魏进行提取，得到新疆阿魏多糖；
(4)将步骤(3)提取的新疆阿魏多糖进行水解，得到单糖；
(5)将步骤(4)水解的产物使用步骤(2)相同的PMP衍生化步骤进行衍生化；
(6)使用HPLC-MS对步骤(2)制备得到的不同单糖衍生化后的标准品溶液和混合标样进行分析，根据各单糖衍生化后的标准品溶液的色谱峰对混合标样中的色谱峰进行定性，并绘制混合标样中各单糖的浓度-峰面积标准曲线；
(7)使用HPLC-MS对步骤(5)衍生化的新疆阿魏多糖样品进行分析，比较各批次得到的色谱图，确定共有特征峰，并将各批次的新疆阿魏多糖图谱数据用平均数法生成指纹图谱共有模式，并以此共有模式为新疆阿魏HPLC-MS指纹图谱，将上述得到的HPLC-MS指纹图谱与步骤(6)各单糖标准品色谱图对比，对共有特征峰进行定性分析，并利用标准曲线对共有特征峰进行定量分析。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中：
所述单糖选自葡萄糖(Glu)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)、甘露糖(Man)、核糖(Rib)、鼠李糖(Rham)、半乳糖醛酸(GalA)、阿拉伯糖(Ara)、葡萄糖醛酸(GluA)、岩藻糖(Fuc)；
优选单糖的纯度为95％以上，更优选97％，还优选98％以上。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中：
所述单糖标准品溶液PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)衍生化的方法为使用PMP在碱性条件下与单糖反应，反应完成后用酸中和；
例如使用如下的方法衍生化：将单糖标准品与氢氧化钠、PMP的甲醇溶液混合，于50-90℃下反应，反应结束后冷却，再加盐酸溶液中和。
4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)中：
所述样品至少为9个批次；
优选地，所述提取方法为使用乙醇对新疆阿魏加热回流，除去脂类、低聚糖、单糖和色素后晾干；将晾干后的新疆阿魏置于水中浸泡，并置于50-90℃温水浴提取过滤，滤液浓缩后再使用乙醇醇沉后离心，沉淀用无水乙醇及无水乙醚洗涤，干燥。
5.如权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(4)中：
所述水解为酸性水解，所述酸可为三氟乙酸(TFA)；例如将步骤(3)得到的多糖与三氟乙酸(TFA)在90-110℃条件下密封反应，水解为单糖；
优选地，先将步骤(3)得到的多糖用水溶解后离心，取上清液，再将其与酸混合进行水解反应。
6.如权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤(6)中：
所述HPLC-MS的液相色谱条件为：色谱柱：C18柱[(1.5-4.6)mmi.d.×(150-250)mm，1.5-5μm)]；
流动相：A相为0.5mM乙酸铵-0.01％甲酸混合溶液，B相为乙腈；柱温：15-35℃；流速：0.2-1mL/min；
洗脱梯度为：0～10min：18～23B％；10～13.5min：23～29B％；13.5～15min：29～37B％；15～16min：37～90B％；16～16.1min：90～18B％；
所述HPLC-MS的质谱条件优选为：电喷雾电离源(ESI源)，正离子全扫描多反应监测(MRM)模式，电压40psi，离子源温度100℃，雾化器温度325℃，雾化气流：11L/min，毛细管电压3.5kV；扫描质量范围：0-600Da。
7.权利要求1-6任一项所述方法得到的新疆阿魏多糖指纹图谱。
8.如权利要求7所述的新疆阿魏多糖指纹图谱，其特征在于，所述指纹图谱为图3，优选的，所述指纹图谱中各单糖组成如下所示：
9.一种鉴别新疆阿魏的方法或对新疆阿魏进行质量控制的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
S1.提取待测样品中的多糖；
S2.将步骤S1提取的多糖进行水解，得到单糖；
S3.将步骤S2中水解后得到的产物用PMP进行衍生化；
S4.使用HPLC-MS对步骤S3衍生化后的样品进行分析检测；
S5.将步骤S4的检测结果与权利要求7或8所述新疆阿魏多糖指纹图谱中各单糖及其组成进行分析对比。
10.如权利要求9所述鉴别新疆阿魏的方法或对新疆阿魏进行质量控制的方法，其特征在于，步骤S1中，所述提取方法为使用乙醇对新疆阿魏加热回流，除去脂类、低聚糖、单糖和色素后晾干；将晾干后的新疆阿魏置于水中浸泡，并置于50-90℃温水浴提取过滤，滤液浓缩后再使用乙醇醇沉后离心，沉淀用无水乙醇及无水乙醚洗涤，干燥；
步骤S2中，所述水解为酸性水解，所述酸例如可为三氟乙酸(TFA)；
步骤S3中，使用PMP在碱性环境下与单糖反应，反应完成后使用酸性溶液中和；
例如使用如下的方法衍生化：将单糖标准品与氢氧化钠、PMP的甲醇溶液混合，于50-90℃下反应，反应结束后冷却，再加盐酸溶液中和；
步骤S4中，所述HPLC-MS的液相色谱条件为：色谱柱：C18柱[(1.5-4.6)mmi.d.×(150-250)mm，1.5-5μm)]；
流动相：0.5mM乙酸铵-0.01％甲酸；柱温：15-35℃；流速：0.2-1mL/min；
洗脱梯度为：0～10min：18～23B％；10～13.5min：23～29B％；13.5～15min：29～37B％；15～16min：37～90B％；16～16.1min：90～18B％；
步骤S5中，所述分析对比使用夹角余弦法将步骤S4得到的色谱图与权利要求7或8所述新疆阿魏多糖指纹图谱进行相似度对比，当计算相似度为0.9以上时，则说明待测样品为合格的新疆阿魏。
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