CN109387507A - 一种尿液中氧化三甲胺快速检测方法及检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种尿液中氧化三甲胺快速检测方法，包括以下步骤：调节尿液pH，加入雷氏盐，摇匀后反应，通过比色分析法或吸光光度法确定尿液中TMAO的含量。在对尿液的pH值进行调节前还可以包括用生石灰对尿液进行预处理的步骤，以前在预处理前对所述尿液的进行pH值测试，若pH值小于7，则将尿液的pH值调节至7以上。所述试剂盒包括pH调节剂、显色试剂和前处理试剂，所述前处理试剂中包含有生石灰，所述显色试剂中包含有雷氏盐。通过本发明方案可实现快速准确的测定溶液中的TMAO浓度。

Description

一种尿液中氧化三甲胺快速检测方法及检测试剂盒
技术领域
本发明涉及检测技术领域，具体涉及一种尿液中氧化三甲胺快速检测方法及检测试剂盒。
背景技术
氧化三甲胺(Trimetlylamine oxide，TMAO)是由胆碱、甜菜碱和肉毒碱等产生的代谢物，同时也是人类心脏或肾脏疾病的关键生物标志物，近期研究表明其也可以被用于结直肠癌的辅助诊断指标。TMAO通过影响胆固醇在人体器官的新陈代谢对心血管产生影响，是中风、动脉硬化、冠状动脉疾病和心脏衰竭潜在的风险指示物。近期有报道称空腹血液TMAO水平与多种心血管疾病的长期风险疾病之间也存在直接相关性，体内TMAO浓度越高(例如高于5mg/L)，患心血管疾病风险越大。因此，用于快速定量人血清或尿液TMAO的方法有着极大的市场需求。
目前，定量TMAO的常用方法是气相色谱-质谱联用仪(Gas Chromatography-MassSpectrometer，GC-MS)或液相色谱-质谱联用(liquid Chromatograph MassSpectrometer，LC-MS)与核磁共振(nuclear magnetic resonance，NMR)技术，然而这些方法需要昂贵的仪器、复杂的操作且分析时间较长(30min甚至更长时间)。近期有报道称可以通过一种利用TMAO还原酶将TMAO还原为三甲胺(trimethylamine，TMA)的酶促方法，通过离子色谱法量化TMA蒸气，进而测得TMAO含量。或者用苦味酸法，将TMAO用还原剂还原为TMA，通过测量TMA来测定TMAO。然而，这些方法都是先将TMAO全部还原成三甲胺(TMA)，然后通过TMA的量换算出TMAO的含量，实验过程都比较复杂，因此，所需试剂多，且易引起TMA气体的外逸，造成实验结果的偏差过大。由于这些方法操作复杂，检测效率低且设备便携性差，因此应用范围受到了一定的限制，尤其无法适用于快速判断结果的诊断服务。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种操作简便且检测效率高的尿液中氧化三甲胺快速检测试剂盒。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种尿液中氧化三甲胺快速检测方法，包括以下步骤：
调节尿液pH，加入雷氏盐，摇匀后反应，通过比色分析法或吸光光度法确定尿液中TMAO的含量。
进一步地，所述检测方法还包括在进行尿液的pH值调节前，先用生石灰对尿液进行预处理。进一步地，向所述尿液中加入生石灰前，对所述尿液的进行pH值测试，若pH值小于7，则将尿液的pH值调节至7以上。
优选地，所述尿液加入生石灰处理后，离心取尿液上清，调节上清pH值至1～2后，加入雷氏盐溶液，摇匀后置于0-4℃反应5-10min后，通过比色分析法或吸光光度法确定尿液中TMAO的含量。
优选地，所述尿液为检测前收集新鲜尿液，优选地，所述尿液的温度为25～40℃，更优选为37.5℃。
优选地，所述尿液中生石灰的加入量为每10ml尿液中加入0.9～1.6g生石灰。
本发明的有益效果在于：本发明方案采用雷氏盐直接检测尿液中的TMAO含量，由于TMAO直接与雷氏盐反应后会显色吸光度差异明显，因此，既可通过肉眼观察实现快速半定量判定，又可通过吸光光度法对TMAO进行准确定量，操作简便。
本发明还包括一种尿液中氧化三甲胺快速检测试剂盒，所述试剂盒包括显色试剂，所述显色试剂中包含有雷氏盐。
进一步地，所述显色试剂为雷氏盐溶液，优选地，所述雷氏盐溶液中雷氏盐的浓度为5g/L。
进一步地，所述试剂盒还包括前处理试剂，所述前处理试剂包括生石灰。
进一步地，所述试剂盒还包括pH调节剂，所述pH调节剂包括酸性pH调节剂，优选地，所述酸性pH调节剂包括盐酸试剂，更优选地，所述盐酸试剂为质量分数为浓盐酸，更优选地，所述盐酸试剂的质量百分浓度为37.5％。
进一步地，所述pH调节剂还包括碱性pH调节剂。
进一步地，所述试剂盒还包括对照试剂，所述对照试剂包括已知TMAO浓度的对照溶液，优选地，所述已知TMAO浓度的对照溶液中TMAO的浓度为5mg/L。
进一步地，所述对照试剂还包括空白对照溶液，优选地，所述空白对照溶液为盐酸溶液，更优选地，所述盐酸溶液为pH值为1的盐酸溶液。
优选地，所述对照试剂还包括已测定TMAO含量的健康人尿液。
进一步地，所述试剂盒还包括已知浓度的系列TMAO标准溶液。
进一步地，所述试剂盒还包括标准比色卡。
优选地，所述试剂盒还包括pH试纸。
本发明的有益效果在于：本发明方案对测定TMAO的操作步骤进行改进，采用化学反应比色法，直接观察颜色变化和沉淀有无即可判断样品中TMAO含量的高低，使操作步骤简单化，检测效率明显升高；试剂盒在整个操作过程中，无需对待分析样本进行稀释操作，且所需操作步骤少，提高了雷氏盐比色法的灵敏度，使得检测限更低；本发明方案利用雷氏盐与TMAO直接反应，消除了其他方法需将TMAO还原为TMA气体(易发生外逸)造成实验较大偏差等影响。
附图说明
图1为本发明实施例测得的反应后溶液的吸光度-TMAO浓度关系曲线图。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。
本发明最关键的构思在于：本发明方案检测试剂盒基于雷氏盐与TMAO反应生成沉淀的原理，通过观察和比较样品中沉淀的有无和颜色深浅的变化来判断TMAO浓度的高低，约10min即可获得检测结果，同时，也可通过吸光光度法对TMAO含量进行准确定量，可作为一种简便、快速、准确且廉价的TMAO检测工具。
一种尿液中氧化三甲胺快速检测方法，包括以下步骤：
调节尿液pH，加入雷氏盐，摇匀后反应，通过比色分析法或吸光光度法确定尿液中TMAO的含量。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：本发明方案采用雷氏盐直接检测尿液中的TMAO含量，由于TMAO直接与雷氏盐反应后会显色吸光度差异明显，因此，既可通过肉眼观察实现快速半定量判定，又可通过吸光光度法对TMAO进行准确定量，操作简便。
进一步地，所述检测方法还包括在进行尿液的pH值调节前，先用生石灰对尿液进行预处理。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：现有技术中由于对尿液样本前处理不足，导致化学反应比色法受其他因素干扰，且雷氏盐比色法一般需离心、洗涤、溶解等操作步骤，每步操作都会造成一定量的样品损失，从而造成此法灵敏度低，再加上有时样本被稀释数倍或数十倍，导致方法检出限较高；此外，雷氏盐比色法实验受很多因素的影响，在不同的时间和不同的人来操作可能结果都不同，实验结果的可重复性不好。而本发明方案巧妙地通过生石灰与尿液中的水分反应对尿液进行预处理，由于反应过程中会放出大量的热(每消化1kg生石灰，可放热约1160kJ，即1g可放出1.16kJ，水的比热容在液态时为4.2*103J/kg·℃，1g生石灰反应释放的热量能够将10ml的水升温27～28℃)，而氢氧化钙在水中的溶解度随温度的升高而降低，升高的温度可使尿液中的挥发性物质(如氮类(包括挥发性的二甲胺和三甲胺等物质))外逸，避免对雷氏盐反应的干扰(避免因雷氏盐与体内一甲胺、二甲胺、三甲胺等生物碱发生反应，使测量结果偏高)，同时氢氧化钙在沉淀过程中，能够将尿液中的蛋白质及其他杂质进行共沉淀，使得尿液中的颜色变浅，以便于更好的通过比色分析法或吸光光度法直接观察颜色变化及沉淀有无来判断样品中的TMAO含量高低，使得操作简便且检测效率高。
进一步地，向所述尿液中加入生石灰前，对所述尿液的进行pH值测试，若pH值小于7，则将尿液的pH值调节至7以上。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：对尿液的pH值进行测试，避免因个体差异导致尿液本身的pH值偏差较大，进而对实验结果造成轻微干扰。
优选地，所述尿液加入生石灰处理后，离心取尿液上清，调节上清pH值至1～2后，加入雷氏盐溶液，摇匀后置于0-4℃反应5-10min后，通过比色分析法或吸光光度法确定尿液中TMAO的含量。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：反应时间仅需5-10min，相比于现有技术需要30min以上，本发明方案可实现大大提升检测效率。优选地，所述尿液为检测前收集新鲜尿液，优选地，所述尿液的温度为25～40℃，更优选为37.5℃。
优选地，所述尿液中生石灰的加入量为每10ml尿液中加入0.9～1.6g生石灰。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：合理地控制尿液与生石灰的添加比，使得尿液的升温范围合理可控。
本发明还包括一种尿液中氧化三甲胺快速检测试剂盒，所述试剂盒包括显色试剂，所述显色试剂中包含有雷氏盐。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：本发明方案对测定TMAO的操作步骤进行改进，采用化学反应比色法，直接观察颜色变化和沉淀有无即可判断样品中TMAO含量的高低，使操作步骤简单化，检测效率明显升高；试剂盒在整个操作过程中，无需对待分析样本进行稀释操作，且所需操作步骤少，提高了雷氏盐比色法的灵敏度，使得检测限更低；本发明方案利用雷氏盐与TMAO直接反应，消除了其他方法需将TMAO还原为TMA气体(易发生外逸)造成实验较大偏差等影响。
进一步地，所述显色试剂为雷氏盐溶液，优选地，所述雷氏盐溶液中雷氏盐的浓度为5g/L。
进一步地，所述检测试剂盒还包括前处理试剂，所述前处理试剂包括生石灰。
进一步地，所述检测试剂盒还包括pH调节剂，所述pH调节剂包括酸性pH调节剂，优选地，所述酸性pH调节剂包括盐酸试剂，更优选地，所述盐酸试剂为质量分数为浓盐酸，更优选地，所述盐酸试剂的质量百分浓度为37.5％。
进一步地，所述pH调节剂还包括碱性pH调节剂。
进一步地，所述试剂盒还包括对照试剂，所述对照试剂包括已知TMAO浓度的对照溶液，优选地，所述已知TMAO浓度的对照溶液中TMAO的浓度为5mg/L。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：测试过程时，通过对照试剂，即便于对照判定TMAO的含量，同时由于样本与对照试剂的测试条件完全一致，可消除操作条件或操作人员操作习惯等偶然误差导致的实验结果重现性不好等问题。
进一步地，所述对照试剂还包括空白对照溶液，优选地，所述空白对照溶液为盐酸溶液，更优选地，所述盐酸溶液为pH值为1的盐酸溶液。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：以盐酸溶液为空白对照，消除因试剂引起的系统误差。
优选地，所述对照试剂还包括已测定TMAO含量的健康人尿液。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：增加健康人尿液作为对照试剂，以便于更好的消除系统误差。
进一步地，所述试剂盒还包括已知浓度的系列TMAO标准溶液。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：试剂盒中含有已知浓度的系列TMAO标准溶液，便于更好的界定样本中TMAO浓度范围。
进一步地，所述试剂盒还包括标准比色卡。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：可通过将不同浓度范围的TMAO与雷氏盐反应后的溶液颜色设计成标准比色卡，操作人员通过将反应后的溶液与标准比色卡直接比对，更简便直观。
优选地，所述试剂盒还包括pH试纸。
本发明的实施例一为：一种尿液中氧化三甲胺快速检测方法，包括以下步骤：
S1、尿液的预处理：取尿液后，向所述尿液中加入生石灰；
S2、TMAO含量的测定：将经所述步骤S1处理后且经室温静置冷却后的尿液的pH值调节至1后，取上清液加入雷氏盐溶液，摇匀后置于4℃反应5-10min后，通过比色分析法或吸光光度法确定TMAO的含量。
本发明检测方法的检测原理为：雷氏盐(四硫氰基二氨络铬酸铵)在pH为1时与大部分有机碱定量地生成难溶于水的络合物，故可用于进行这些物质的鉴别、检出、分离和含量测定。TMAO属于生物碱性物质，能与雷氏盐(NH4)[Cr(NH3)2(SCN)4]H2O-反应生成红色沉淀。
化学反应方程式：(CH3)3NO HCl+(NH4)[Cr(NH3)2(SCN)4]H2O→[(CH3)3NO]H[Cr(NH3)2(SCN)]H2O↓+NH4Cl
由于测定的吸光度为硫氰酸络铵本身所固有，因此，当过量的试剂使有机碱沉出后，滤取部分滤液或上层清液按比色法测得剩余试剂的量，即可换算出有机碱的含量。雷氏盐在525nm处有最大吸收，故一般选用该波长为测定波长。
本发明检测方法利用沉淀的有无和颜色深浅的变化对TMAO含量的高低进行半定量判定，由于反应后的溶液在525nm处有固定吸光度值，因此，也可通过紫外吸光光度法测定525nm处的吸光度值以确定反应机理：
1、配制溶液
a、盐酸溶液(pH为1)：取1ml浓盐酸(质量分数37.5％)溶于120ml蒸馏水中。
b、雷氏盐反应溶液：称取2g雷氏盐溶于200ml蒸馏水中，在恒温振荡器中震荡45min，用滤纸过滤，用浓盐酸将pH调至1，装在棕色瓶内放入冰箱中保存。
c、TMAO标准溶液：准确称取100mg氧化三甲胺标准样品(Sigma)，定容至1000ml(浓度为100mg/L)，取6份150ml溶液，依次稀释为80，60，40，30，20，10mg/L的标准溶液。
2、标准样品测定
分别取80，60，40，30，20，10mg/L TMAO标准溶液1ml于5ml西林瓶中，同时取1ml蒸馏水于5ml西林瓶中作空白，用浓盐酸将pH调至1，置冰浴中冷却2-5min，加入雷氏盐溶液1ml，并不断地搅拌反应，然后在冰浴中放置5-10min，取出。在分光光度计525nm处用稀释2倍的雷氏盐反应溶液作为参比溶液测定吸光度，吸光度有明显的变化(如图1所示)。反应后溶液中有不同程度的浑浊现象，对反应液进行离心，可见红色沉淀物质，说明在此浓度范围利用雷氏盐反应判断实验结果可靠。
一种用于实现上述检测方法的检测试剂盒包括pH调节剂(盐酸试剂)、显色试剂(雷氏盐)和前处理试剂(生石灰(CaO)包，也可采用其他方式对生石灰进行密封处理，只要能确保生石灰不发生变质即可)、对照试剂、3ml西林瓶、塑料取尿杯、塑料镊子、一次性注射器、一次性过滤头、一次性聚乙烯(polyethylene，PE)手套和泡沫内垫。
对照试剂包括10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/mL TMAO对照溶液(A试剂)和2ml稀盐酸溶液(pH值为1)。
A试剂装在塑料瓶中，含有50～200ml溶液。
盐酸试剂(质量百分数为37.5％)用规格为0.2ml聚乙烯离心管保存，每管20μl。
3ml西林瓶规格：容量3ml，直径16mm，高度35mm，口径13mm，并标有2ml刻度线，材质为低硼硅西林瓶、中性硼硅西林瓶、高硼硅西林瓶玻璃类别中的任意一种均可。
塑料取尿杯：取尿杯规格可为10ml、20ml或30ml，透明塑料材质，均标有10ml的刻度线，上面可以带有杯柄和杯嘴(便于操作)。
生石灰(CaO)包：规格1g/包，聚乙烯塑料薄膜包装；1g生石灰加入到10ml尿液(尿液温度约为37.5℃)中，能使尿液温度升高至65℃。
塑料镊子：塑料制小镊子，长约40mm，用于夹取取尿杯、试纸条及其他物品。镊子头呈尖锐装，能够刺穿生石灰(CaO)包的聚乙烯薄膜。
一次性注射器：规格5ml～10ml，一次性注射器上标有体积刻度。
一次性过滤头：膜材质为尼龙膜、混合纤维素酯膜、聚偏氟乙烯(polyvinylidenefluoride，PVDF)膜中的一种；外壳为聚乙烯或聚丙烯材质；规格为直径13mm、膜面积0.68cm2、孔径0.22um或直径25mm、膜面积4.0cm2、孔径0.22um。
1、生石灰(CaO)处理尿液
生石灰与尿液反应放出大量的热，尿液温度的升高使其中挥发性物质(例如氨类、小分子有机酸等)逸出，还易使尿液中的微量蛋白质变性沉淀。由于反应生成物氢氧化钙溶解度低，很容易沉淀，在其沉淀的过程中，能够去除尿液中其他杂质。
2、结果判定指标
设置TMAO标准对照组(10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L)，利用颜色和沉淀的双重标准来判断测试样本中TMAO含量的高低。
a、试剂盒检测样本要求
取清晨第一次新鲜清洁尿样；非月经期、肝肾功能正常、禁饮食8h后的尿液；尿液样本必须在2h内检测使用且以保存在37.5℃左右的条件下为宜。
b、尿液样本的处理技术
用塑料镊子夹取生石灰包浸入尿液中，并刺破生石灰包聚乙烯膜，使其与尿液发生反应。因为每消化1Kg生石灰,可放热约1160kJ，即1g放出1.16kJ。水的比热容在液态情况下是4.2*103J/(kg·℃)。1g生石灰释放的热量能够将10ml的水升温27～28℃。尿液温度约为37.5℃，若10ml尿液中加入1g生石灰后，温度能够达到65℃。
氢氧化钙是二元强碱，但仅能微溶于水，水中溶解度随温度升高而降低(0℃0.18g；10℃0.17g)。升高的温度可以使尿液中的挥发性物质(例如氨类)外逸，避免对雷氏盐反应的干扰。氢氧化钙在沉淀的过程中，还能共沉淀尿液中其他的杂质。
c、样品与雷氏盐反应
取生石灰处理过的尿液上清，用注射器经过过滤头过滤后，加入到装有雷氏盐的西林瓶中，并用盐酸调节pH值至1。为了减少尿液的稀释，雷氏盐以固体的形式保存在西林瓶中，盐酸也使用浓盐酸(质量分数为37.5％)，根据具体的尿液体积添加适量的雷氏盐和浓盐酸溶液。例如2ml的尿液，经过计算可以加入10mg雷氏盐和16.6μl浓盐酸(质量分数为37.5％)，能够使雷氏盐反应过量和反应体系pH值在1-2之间。考虑到浓盐酸的易挥发性，体积可为20μl。
d、实验结果处理
按照上述要求操作，可见沉淀出现和颜色的变化。如果出现无法判断的情况，可以采用离心的手段来观察沉淀，采用紫外可见分光光度计来检测吸光度的变化。由于本试剂盒中设置有标准对照组，样本检测的结果只需要与对照组进行比对，即可判断样品中TMAO含量与标准对照组中的高低。
3、反应条件的选择
a、温度：雷氏盐与TMAO在室温下反应后，需在冰浴中放置一段时间(TMAO与雷氏盐生成的沉淀室温下微溶于水)，以减少TMAO雷氏盐沉淀的溶解。
b、pH值：TMAO与雷氏盐反应受pH值的影响较大。雷氏盐与氧化三甲胺在酸性条件下反应都会产生红色沉淀，通过实验证明当pH＝1时沉淀最完全。
c、分析不同浓度的TMAO标准溶液及空白，以上的条件下，检测样品TMAO质量浓度在1-100mg/L范围内都符合朗白-比尔定律。
2、雷氏盐浓度与反应pH值的选择
配制雷氏盐饱和溶液(取10g雷氏盐，溶于200ml蒸馏水中，搅拌溶解过滤，溶液呈深红色)、半饱和溶液(约25g/L，溶液呈红色)、低浓度雷氏盐溶液(5g/L，溶液呈淡红色)。分别在盐酸溶液(pH为1)中与TMAO(体系浓度为5mg/L)反应，发现低浓度雷氏盐溶液(5g/L)现象比较明显。进一步研究发现，在低pH值(约为1～2)时，反应速度最快，故优选低浓度雷氏盐溶液(5g/L)和pH值为1的反应体系。
具体操作步骤：
a、量取尿液
取出试剂盒，戴上一次性PE手套，用取尿杯取10～20ml尿液，倒出多余尿液，使液面保持在10ml刻度线左右。
b、处理尿液
用塑料镊子夹取生石灰包浸入尿液中，并刺破生石灰包聚乙烯膜，使其与尿液发生反应。可见有白色沉淀物产生，且液体温度明显升高，室温静置冷却2～5min备用。
c、雷氏盐反应
将西林瓶分为B排和C排，B排编号B1、B2……Bn，C排编号C1、C2……Cn(根据试剂盒大小确定n值)。每个西林瓶中装有10mg四硫氰基二氨络铬酸铵(雷氏盐)，上面用丁基橡胶塞密封。B排西林瓶作为TMAO标准对照组，C排西林瓶作为样本组，每次测试都有一个标准对照品，样本与标准对照品的测试条件完全一致，消除了由于操作条件不同而引起的结果偏差，实验结果的重复性问题可以得到很好地解决。
打开B排其中的一个西林瓶(例如B1)，从A试剂瓶吸取2ml(10mg/L)液体放入其中。同时，打开装有盐酸的离心管，将20μl盐酸放入B1西林瓶中，快速摇匀，此时B1西林瓶中的试剂开始反应(溶液颜色呈淡红色)。其他浓度TMAO对照品操作类似。
打开C排其中的一个西林瓶(例如C1)，用一次性注射器吸取2ml用生石灰处理过的尿液上清液，经过滤头过滤后放入其中。同时，打开装有盐酸的离心管，将20μl盐酸放入C1西林瓶中，快速摇匀，此时C1西林瓶中的试剂开始反应。
将B1和C1西林瓶放入0～4℃冰箱中，反应5min(经反应后淡红色变得更浅，TMAO含量高时将会产生肉眼可见沉淀)。
d、记录反应结果
取出西林瓶，记录反应结果，看西林瓶中颜色是否有变化及是否有沉淀产生。对记录结果进行解读，其中B组为TMAO标准品对照组，若C组西林瓶中的颜色变化及沉淀量在B组的某两个标准品之间，则说明尿液中TMAO含量浓度在这两个标准品的浓度区间范围内。本发明方案的检测结果，既可通过肉眼观察对比样品反应后的沉淀量及颜色变化与系列标准对照品反应后的沉淀量及颜色，判定样品中TMAO浓度的区间范围；也可通过将样品测得的吸光度代入到标准品绘制的标准曲线中，对样品中的TMAO含量进行准确判定。
本发明实施例二为：一种尿液中氧化三甲胺快速检测试剂盒，其与实施例一的区别仅在于：所述试剂盒中不包含TMAO标准溶液，仅包含有标准比色卡，所述标准比色卡上标识有TMAO浓度范围的与对应反应后的溶液颜色，直接通过将样品检测后的溶液与比色卡进行比对即可判定样品中TMAO的浓度范围。
本发明实施例三为：试剂盒重复性实验：试剂盒的组成与实施例一完全相同，区别仅在于：检测样本包括5个TMAO高浓度尿液样本和5个低浓度尿液样本：
取5个TMAO高浓度(30mg/L～40mg/L)和5个低浓度(10mg/L～20mg/L)尿液样本(每个尿液样本约10ml)，严格按照上述试剂盒方法进行检测，每个样本重复检测3次。结果显示，各浓度尿液样本的沉淀量及颜色分别与相应浓度范围的对照组结果一致，由此表明本发明方案的重现性好。
本发明实施例四为：实际样准确度实验：用试剂盒测试尿液样本中TMAO含量高低，与液相质谱仪测定的结果相比，验证准确度。与医院进行合作，医生利用试剂盒对273个尿液样本进行检测，同时作为对照利用液相质谱仪检测，利用颜色深浅和沉淀有无能够很好地判断出来，准确率达到89％。
综上所述，本发明提供的一种尿液中氧化三甲胺快速检测方法及检测试剂盒，通过本发明方案可实现快速准确的测定溶液中的浓度。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种尿液中氧化三甲胺快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
调节尿液pH，加入雷氏盐，摇匀后反应，通过比色分析法或吸光光度法确定尿液中TMAO的含量。
2.根据权利要求1所述的尿液中氧化三甲胺快速检测方法，其特征在于：所述检测方法还包括在进行尿液的pH值调节前，先用生石灰对尿液进行预处理。
3.根据权利要求2所述的尿液中氧化三甲胺快速检测方法，其特征在于：向所述尿液中加入生石灰前，对所述尿液的进行pH值测试，若pH值小于7，则将尿液的pH值调节至7以上。
4.根据权利要求2所述的尿液中氧化三甲胺快速检测方法，其特征在于：所述尿液加入生石灰处理后，离心取尿液上清，调节上清pH值至1～2后，加入雷氏盐溶液，摇匀后置于0-4℃反应5-10min后，通过比色分析法或吸光光度法确定尿液中TMAO的含量。
5.一种尿液中氧化三甲胺快速检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括显色试剂，所述显色试剂中包含有雷氏盐。
6.根据权利要求5所述的尿液中氧化三甲胺快速检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括前处理试剂和pH调节剂，所述前处理试剂包括生石灰；所述pH调节剂包括酸性pH调节剂和碱性pH调节剂。
7.根据权利要求5所述的尿液中氧化三甲胺快速检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括对照试剂，所述对照试剂包括已知TMAO浓度的对照溶液。
8.根据权利要求7所述的尿液中氧化三甲胺快速检测试剂盒，其特征在于：所述对照试剂还包括已测定TMAO含量的健康人尿液。
9.根据权利要求5所述的尿液中氧化三甲胺快速检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括标准比色卡。
10.根据权利要求5-9任一项所述的尿液中氧化三甲胺快速检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括3ml西林瓶、塑料取尿杯、塑料镊子、一次性注射器、一次性过滤头、一次性PE手套和泡沫内垫。
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