CN109384937A - 二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物，其化学结构式如式(Ⅰ)所示。本发明所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物将Ce6接枝在HPG上，为一种新型的聚合物，其作为药物载体使用，能达到提高治疗肿瘤疗效的目的。本发明还公开了一种二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的制备方法，采用该制备方法能制得二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物，且收率较高，本发明还公开了二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的用途。

Description

二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物及其制备方法和 用途
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物及其制备方法和用途。
背景技术
恶性肿瘤是威胁人类健康的最严重疾病之一，已成为人类的头号杀手。靶向药物对于肿瘤的治疗备受研究者关注，靶向给药具有药物用量少、毒副作用低、药物生物利用率高、便于控制给药速度和方式、治疗效果好等优点。靶向治疗针对肿瘤的特有靶点，即正常细胞与肿瘤细胞的不同所在，这样才能消灭肿瘤细胞而不影响正常的细胞。因此，探索一种新型的多功能传递系统，既一种二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物作为药物载体，既可以高效逆转耐受、诱导肿瘤细胞死亡，将在癌症多药耐药的治疗中具有重要的意义。
超支化聚缩水甘油醚(HPG)是一种分子内部为醚键，合成HPG的单体是缩水甘油，又名环氧丙醇，是具有高反应活性的环氧化合物。分子周围有大量羟基的超支化聚合物。HPG具有超支化聚合物的特点：(1)球形结构(2)丰富的端基(3)良好的溶解性(4)较低的黏度。HPG外侧含有大量的羟基，可以对其进行修饰后包载亲水性或疏水性药物、核酸和造影剂等，从而达到有效治疗的作用。将HPG作为亲水外壳嫁接到疏水的聚合物上形成两亲性共聚物，包载化疗药后可以获得一定的转染效果，但逆转肿瘤耐受的疗效并不理想。光动力疗法(PDT)，一种有效治疗肿瘤的新型治疗方法，PDT治疗基础是用一定波长的光辐照富集有光敏剂的肿瘤组织，此时光敏剂诱发光动力效应而导致肿瘤组织坏死。因此，为了进一步提高HPG的功能，我们选用第二代光敏剂二氢卟吩(Ce6)对HPG进行结构修饰。Ce6是疏水性，在660nm处有个较大的吸收。Ce6在激光的照射下产生的自由氧能破坏复杂的细胞膜，胞内物流出而死亡；同时其改善载体的亲水亲油平衡值，利于传递系统快速进入细胞，发挥逆转耐受，杀死肿瘤细胞的目的。现代导管技术的应用，光动力能对组织深部进行更有效的治疗。有相关研究表明，二氢卟吩e6对胆管癌细胞具有显著杀伤作用，且杀伤作用随光敏剂浓度的增高而增加。目前未发现有将HPG与二氢卟吩结合的技术。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供一种二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物及其制备方法和用途。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物，其化学结构式如式(Ⅰ)所示：
本发明所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物将Ce6接枝在HPG上，为一种新型的聚合物，其作为药物载体使用，能达到提高治疗肿瘤疗效的目的。因对HPG部分羟基进行修饰，保留了其亲水作用的同时，搭载对特定波长的光有敏感性二氢卟吩，其创新之处是相较于其他药物载体融合了氧化还原响应技术和光动力治疗技术，将包载的药物在肿瘤细胞内快速释放实现逆转耐药，治疗肿瘤耐药患者的目的，能较好的运用于临床，对于肿瘤药物的包载传递和特异性治疗具有一定意义。
本发明的目的还在于提供一种如式(Ⅰ)所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)、在0.42～0.84g甲醇钾溶液中加入2.68～5.36g三羟甲基丙烷，加热熔融，减压除去甲醇，在93～97℃滴加10～20mL缩水甘油，反应时间≥12h，反应产物用丙酮沉淀至少1次，干燥，得HPG；
(2)、称量1.0175～2.035g的HPG，除去HPG中的水份，加入40～80mL的DMF，在-2～0℃的冰盐浴下，加入0.4175～0.8350g的无水三乙胺，滴加0.473～0.946g的甲烷磺酰氯，在10～20min滴加完，滴加完成后在冰盐浴条件下反应1～2h，再在室温下反应18～30h，过滤，取滤液，用DMF洗涤滤渣，将滤液和洗液合并，60～70℃旋蒸去除DMF，然后用二氯甲烷溶解，依次用NaOH溶液、NaCl溶液萃取，取有机相，用无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，38～50℃下真空干燥，得到HPG-MsCl；
(3)、向第一反应物中加入10～20mL的DMF溶解的HPG-MsCl 10-20mg，再加入0.403～0.806g的NaN3，最后加入12.5～25.0mg四丁基碘化铵，在68～72℃下反应18～30h，过滤，取滤液，用DMF洗涤滤渣，将滤液和洗液合并，在60～70℃旋蒸去除DMF，然后用二氯甲烷溶解，用水萃取至少1次，取有机相，用干燥剂干燥，旋蒸除去溶剂，38～50℃下真空干燥，得到HPG-N3；
(4)、将200.0～400.0mg二氢卟酚溶于DMF中，在冰水浴条件下加入34.0～68.0mg碳化二亚胺、86.7～173.4mg(烯丙基氨基甲酸酯乙基)二硫乙胺化合物、0.024～0.048mLN-乙基二异丙胺，在室温下反应18～30h，将反应后的混合物用20～40mL水稀释，调节pH＝3～4，用二氯甲烷萃取至少1次，取有机相，用NaCl溶液萃取至少1次，取有机相，用Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得Ce6-cyst-PPA；
(5)、将0.0367～0.0734g HPG-N3用DMF溶解，加入0.1764～0.3528gCe6-cyst-PPA，待其完全溶解后加入24.2～48.4mg的五甲基二乙烯三胺，搅拌均匀，加入26.6～53.2mg的CuI或CuBr，搅拌均匀，通入惰性气体除去混合液中的氧气，密封，在室温下反应8～16h，升温至38～42℃，反应8～16h后，将反应液进行透析纯化，即得式(Ⅰ)所示二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物。
通过发明人反复试验摸索得出，采用上述方法能够制得二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物，且收率较高，超出这些参数范围，制备产物难以获得或者得率低。
优选地，步骤(1)中，反应产物用丙酮沉淀2次。
优选地，步骤(2)中，冰盐浴的温度为0℃；所述旋蒸的温度为65℃；所述NaOH溶液的浓度为1mol/L，所述NaCl溶液的浓度为1mol/L；所述真空干燥的温度为40℃，时间为10～16h，真空度为-0.05～-0.1MPa。
优选地，步骤(3)中，反应温度为70℃，旋蒸温度为65℃。
优选地，步骤(4)中，所述pH＝3，pH采用稀盐酸调节，二氯甲烷萃取次数为3次，所述NaCl溶液的浓度为1mol/L，所述减压操作的条件为-0.05～-0.1MPa。
步骤(1)所述加热熔融并搅拌使各原料混合均匀的真空条件是-0.05～-0.1MPa。
步骤(2)所述过滤是用滤纸过滤。
步骤(2)所述真空干燥条件为-0.05～-0.1MPa。
优选地，步骤(5)中，透析纯化的方法为：将反应液用DMF稀释，装入透析袋，在透析袋外加入EDTA去除铜盐，加入稀盐酸调节pH＝4～5，当透析液的蓝色完全褪去，继续透析用蒸馏水透析去除残留EDTA，用异丙醇透析去除未反应的Ce6-cyst-PPA，再用蒸馏水透析去除异丙醇。
优选地，步骤(1)中，所述缩水甘油的单体和引发剂重量比为：20：1。
优选地，步骤(2)中，除去HPG中的水份的方法为：将HPG在78～82℃下，真空干燥10～20h，置于密封容器中，在N2氛围下加热去除容器中的水份。
优选地，所述透析袋为1000～3500分子量的透析袋，用蒸馏水透析的时间为24～48h。
本发明的目的还在于提供所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物作为药物载体的用途。
所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物作为药物载体结合了HPG与Ce6的优势，既具备了HPG空间的大容量特点，又能被特定波长激发而释放ROS杀死肿瘤细胞，同时又结合氧化还原响应性技术，将包载的药物在肿瘤细胞内快速释放实现逆转耐药，治疗耐药患者的目的。
本发明的目的还在于提供所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物作为治疗肿瘤的药物载体的用途。
本发明的目的还在于提供所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物制备成微球、纳米颗粒或者凝胶作为药物载体的用途。二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物作为载体应用时优选上述形式，但不局限于上述形式。
本发明的目的还在于提供一种包含所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的药物。
本发明的有益效果在于：本发明提供了一种二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物，本发明所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物将Ce6接枝在HPG上，为一种新型的聚合物，其作为药物载体使用，能达到提高治疗肿瘤疗效的目的。本发明还提供了一种二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的制备方法，采用该制备方法能制得二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物，且收率较高，本发明还提供了二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的用途。
附图说明
图1为二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的结构式；
图2为HPG的1HNMR图谱；
图3为Ce6-PPA1HNMR图谱；
图4为HPG-SS-Ce6的1HNMR图谱。
具体实施方式
本发明中化合物采用以下英文缩写：
超支化聚缩水甘油醚：HPG
第二代光敏剂二氢卟吩：Ce6
三羟甲基丙烷：TMP
N,N-二甲基甲酰胺：DMF
(烯丙基氨基甲酸酯乙基)二硫乙胺化合物：PPA-cyst
甲烷磺酰氯：MsCl
二氯甲烷：DCM
碳化二亚胺：EDCI
N-乙基二异丙胺：DIPEA
五甲基二乙烯三胺：PMDETA
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
一种二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的化学结构式如式(Ⅰ)所示：
所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物作为药物载体的制备方法，包括以下步骤：
(1)、在0.42g甲醇钾溶液中加入2.68g TMP，加热熔融，减压除去甲醇，在95℃滴入10mL缩水甘油，反应时间≥12h，反应产物用丙酮沉淀两次，干燥，得到HPG(透明粘性液体)；
(2)、称量1.0175g的HPG(分子量2470，假定为0.0165mol的-OH)置于单口烧瓶内，80℃真空干燥箱内干燥过夜，以除去HPG中的少量水；趁热取出，用反口胶塞密封，待冷却后，安装在双排管上，用双排管操作，在N2氛围下加热除去瓶内微量的水，待冷却后用注射器吸取40mL DMF，注入烧瓶中，0℃下冰盐浴，待溶液完全冷却后，用注射器称量0.4175g的无水三乙胺；再用注射器称量0.473g的MsCl，逐滴缓慢滴入，10min滴完，滴完后维持冰盐浴反应1h；撤掉冰盐浴，在室温、密封下反应24h，反应完成后，出现固体沉淀，过滤，取滤液，用少量DMF洗干净沉淀，合并DMF，65℃旋蒸除去DMF，再用50mL二氯甲烷溶解反应物，然后用100mL的NaOH水溶液(1M)萃取一次，再用100mL的NaCl水溶液(1M)的萃取一次，取有机相，用无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，40℃真空干燥过夜，得到HPG-MsCl(淡黄色透明粘性液体)；
(3)、室温下向第一步反应瓶中加入10mL的DMF溶解的HPG-MsCl(0.0021mmol甲烷磺酰基)，再加入0.403g的NaN3(0.0062mol,3倍摩尔量)，最后加入12.5mg四丁基碘化铵，加热至70℃下反应24h，结束后滤去固体不溶物，并用少量DMF洗涤干净沉淀，65℃旋蒸除去绝大部分DMF，用100mL的DCM溶解聚合物，用水萃取2次，每次用水30mL，取有机相，无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，40℃真空干燥过夜，得到HPG-N3(透明粘性液体)；
(4)、将二氢卟酚e6(200.0mg，0.338mmol)溶于4mL DMF中，冰水浴下向反应混合物中加入EDCI(34.0mg，0.37mmol)、PPA-cyst(86.7mg，0.37mmol)和DIPEA(0.024mL)，将混合物在室温下反应24小时，将反应混合物用20mL水稀释，并用稀盐酸调节至pH＝3，然后用二氯甲烷萃取3次，每次用二氯甲烷30mL，合并有机层，将合并后的溶液用NaCl溶液(1M)萃取，取有机相，有机相用Na2SO4干燥，减压除去溶剂得到Ce6-cyst-PPA(墨绿色粗产物)；
(5)、在手套箱内，将HPG-N3(6.99×10－5mol叠氮基，0.0367g，M＝2625)于2.5mL的无水DMF中溶解，待溶解完毕，将Ce6-cyst-PPA(2.02×10－4mol炔基，0.1764g，M＝870.49)加入到此反应液中，待其完全溶解后，再加入24.2mg的PMDETA，搅拌均匀，最后再加入26.6mg的CuI，搅拌均匀后，胶塞密封，然后移出手套箱，用注射器通氮气20min后，密封，室温反应12h，再升温至40℃反应12h，反应结束后将混合液用适当DMF稀释，洗净反应瓶后，用透析袋透析纯化，透析过程中，烧杯中加入少量EDTA以除去铜盐，同时加入少量HCl以维持pH在弱酸条件(pH＝4～5)，待透析液的蓝色完全退去，继续用蒸馏水透析以除掉残留的EDTA，最后用异丙醇透析以除去未反应的Ce6-cyst-PPA，最后用蒸馏水透析12h以除去异丙醇，冻干后得式(Ⅰ)所示二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物(墨绿色产物)。
本实施例所述制备方法制得的二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物收率为50％。
实施例2
本发明所述式(Ⅰ)所示二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的制备方法的一种实施例，本实施例所述制备方法包括以下步骤：
(1)、在0.63g甲醇钾溶液中加入4.02g TMP，加热熔融，减压除去甲醇，在95℃滴入15mL缩水甘油，反应时间≥12h，反应产物用丙酮沉淀两次，干燥，得到HPG(透明粘性液体)；
(2)、称量1.5262g的HPG置于单口烧瓶内，80℃真空干燥箱内干燥过夜，以除去HPG中的少量水；趁热取出，用反口胶塞密封，待冷却后，安装在双排管上，用双排管操作，在N2氛围下加热除去瓶内微量的水，待冷却后用注射器吸取60mL DMF，注入烧瓶中，0℃下冰盐浴，待溶液完全冷却后，用注射器称量0.6262g的无水三乙胺；再用注射器称量0.7095g的MsCl，逐滴缓慢滴入，15min滴完，滴完后维持冰盐浴反应1.5h；撤掉冰盐浴，在室温、密封下反应25h，反应完成后，出现固体沉淀，过滤，取滤液，用少量DMF洗干净沉淀，合并DMF，65℃旋蒸除去DMF，再用50mL二氯甲烷溶解反应物，然后用100mL的NaOH水溶液(1M)萃取一次，再用100mL的NaCl水溶液(1M)的萃取一次，取有机相，用无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，50℃真空干燥过夜，得到HPG-MsCl(淡黄色透明粘性液体)；
(3)、室温下向第一步反应瓶中加入15mL的DMF溶解的HPG-MsCl(0.003mmol甲烷磺酰基)，再加入0.6045g的NaN3，最后加入20.0mg四丁基碘化铵，加热至70℃下反应25h，结束后滤去固体不溶物，并用少量DMF洗涤干净沉淀，65℃旋蒸除去绝大部分DMF，用100mL的DCM溶解聚合物，用水萃取2次，每次用水30mL，取有机相，无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，50℃真空干燥过夜，得到HPG-N3(透明粘性液体)；
(4)、将300.0mg二氢卟酚e6溶于4mL DMF中，冰水浴下向反应混合物中加入51.00mg EDCI、130.0PPA-cyst和0.036mL DIPEA，将混合物在室温下反应25小时，将反应混合物用30mL水稀释，并用稀盐酸调节至pH＝4，然后用二氯甲烷萃取2次，每次用二氯甲烷30mL，合并有机层，将合并后的溶液用NaCl溶液(1M)萃取，取有机相，有机相用Na2SO4干燥，减压除去溶剂得到Ce6-cyst-PPA(墨绿色粗产物)；
(5)、在手套箱内，将0.055gHPG-N3于2.5mL的无水DMF中溶解，待溶解完毕，将0.2646g Ce6-cyst-PPA加入到此反应液中，待其完全溶解后，再加入36.3mg的PMDETA，搅拌均匀，最后再加入39.9mg的CuI，搅拌均匀后，胶塞密封，然后移出手套箱，用注射器通氮气20min后，密封，室温反应12h，再升温至40℃反应12h，反应结束后将混合液用适当DMF稀释，洗净反应瓶后，用透析袋透析纯化，透析过程中，烧杯中加入少量EDTA以除去铜盐，同时加入少量HCl以维持pH在弱酸条件(pH＝4～5)，待透析液的蓝色完全退去，继续用蒸馏水透析以除掉残留的EDTA，最后用异丙醇透析以除去未反应的Ce6-cyst-PPA，最后用蒸馏水透析12h以除去异丙醇，冻干后得式(Ⅰ)所示二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物(墨绿色产物)。
本实施例所述制备方法制得的二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物收率为60％。
实施例3
本发明所述式(Ⅰ)所示二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的制备方法的一种实施例，本实施例所述制备方法包括以下步骤：
(1)、在0.84g甲醇钾溶液中加入5.36g三羟甲基丙烷(TMP)，加热熔融，减压除去甲醇，在95℃滴入20mL缩水甘油，反应时间≥12h，反应产物用丙酮沉淀两次，干燥，得到HPG(透明粘性液体)；
(2)、称量2.035的HPG(分子量2470，假定为0.0330mol的-OH)置于单口烧瓶内，80℃真空干燥箱内干燥过夜，以除去HPG中的少量水；趁热取出，用反口胶塞密封，待冷却后，安装在双排管上，用双排管操作，在N2氛围下加热除去瓶内微量的水，待冷却后用注射器吸取80mL DMF，注入烧瓶中，0℃下冰盐浴，待溶液完全冷却后，用注射器称量0.8350g的无水三乙胺；再用注射器称量0.946g的MsCl，逐滴缓慢滴入，20min滴完，滴完后维持冰盐浴反应2h；撤掉冰盐浴，室温、密封反应24h，反应完成后，出现固体沉淀，过滤，取滤液，用少量DMF洗干净沉淀，合并DMF，65℃旋蒸除去DMF，再用100mL二氯甲烷溶解反应物，然后用100mL的NaOH水溶液(1M)萃取一次，再用100mL的NaCl水溶液(1M)的萃取一次，取有机相，用无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，40℃真空干燥过夜，得到HPG-MsCl(淡黄色透明粘性液体)；
(3)、室温下向第一步反应瓶中加入20mL的DMF溶解聚合物(HPG-MsCl，0.0042mmol甲烷磺酰基)，再加入0.403g的NaN3(0.0124mol,3倍摩尔量)，最后加入25.0mg四丁基碘化铵，加热至70℃下反应24h，结束后滤去固体不溶物，并用少量DMF洗涤干净沉淀，65℃旋蒸除去绝大部分DMF(用油泵)，用100mL的DCM溶解聚合物，用水萃取2次，每次用水30mL，分出有机相，无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，40℃真空干燥过夜，得到HPG-N3(透明粘性液体)；
(4)、将二氢卟酚e6(400.0mg，0.676mmol)溶于DMF(8mL)中，冰水浴下向反应混合物中加入EDCI(68.0mg，0.74mmol)、PPA-cyst(173.4mg，0.74mmol)和DIPEA(0.048mL)，将混合物在室温下反应24小时，将反应混合物用40mL水稀释，并用稀盐酸调节至pH＝3，然后用二氯甲烷萃取3次，每次用二氯甲烷30mL，合并有机层，将合并后的溶液用NaCl水溶液(1M)萃取，取有机相，有机相用Na2SO4干燥，减压除去溶剂得到Ce6-cyst-PPA(墨绿色粗产物)；
(5)、在手套箱内，将HPG-N3(13.98×10－5mol叠氮基，0.0734g，M＝2625)于5.0mL的无水DMF中溶解；待溶解完毕，将Ce6-cyst-PPA(4.04×10－4mol炔基，0.3528g，M＝870.49)加入到此反应液中，待其完全溶解后，再加入48.4mg的PMDETA，搅拌均匀，最后再加入53.2mg的CuI，搅拌均匀后，胶塞密封，然后移出手套箱，用注射器通氮气40min后，密封，室温反应12h，再升温至40℃反应12h，反应结束后将混合液用适当DMF稀释，洗净反应瓶后，用透析袋透析纯化，透析过程中，烧杯中加入少量EDTA以除去铜盐，同时加入少量HCl以维持pH在弱酸条件(pH＝4～5)，待透析液的蓝色完全退去，继续用蒸馏水透析以除掉残留的EDTA，最后用异丙醇透析以除去未反应的Ce6-cyst-PPA，最后用蒸馏水透析12h以除去异丙醇，冻干后得式(Ⅰ)所示二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物(墨绿色产物)。
本实施例所述制备方法制得的二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物收率为75％。
实施例4
(1)、在0.42g甲醇钾溶液中加入2.68g TMP，加热熔融，减压除去甲醇，在93℃滴入10mL缩水甘油，反应时间≥12h，反应产物用丙酮沉淀两次，干燥，得到HPG(透明粘性液体)；
(2)、称量1.0175g的HPG(分子量2470，假定为0.0165mol的-OH)置于单口烧瓶内，80℃真空干燥箱内干燥过夜，以除去HPG中的少量水；趁热取出，用反口胶塞密封，待冷却后，安装在双排管上，用双排管操作，在N2氛围下加热除去瓶内微量的水，待冷却后用注射器吸取40mL DMF，注入烧瓶中，0℃下冰盐浴，待溶液完全冷却后，用注射器称量0.4175g的无水三乙胺；再用注射器称量0.473g的MsCl，逐滴缓慢滴入，15min滴完，滴完后维持冰盐浴反应1.5h；撤掉冰盐浴，在室温、密封下反应18h，反应完成后，出现固体沉淀，过滤，取滤液，用少量DMF洗干净沉淀，合并DMF，60℃旋蒸除去DMF，再用50mL二氯甲烷溶解反应物，然后用100mL的NaOH水溶液(1M)萃取一次，再用100mL的NaCl水溶液(1M)的萃取一次，取有机相，用无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，38℃真空干燥过夜，得到HPG-MsCl(淡黄色透明粘性液体)；
(3)、室温下向第一步反应瓶中加入10mL的DMF溶解的HPG-MsCl(0.0021mmol甲烷磺酰基)，再加入0.403g的NaN3(0.0062mol,3倍摩尔量)，最后加入12.5mg四丁基碘化铵，加热至68℃下反应18h，结束后滤去固体不溶物，并用少量DMF洗涤干净沉淀60℃旋蒸除去绝大部分DMF，用100mL的DCM溶解聚合物，用水萃取2次，每次用水30mL，取有机相，无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，38℃真空干燥过夜，得到HPG-N3(透明粘性液体)；
(4)、将二氢卟酚e6(200.0mg，0.338mmol)溶于4mL DMF中，冰水浴下向反应混合物中加入EDCI(34.0mg，0.37mmol)、PPA-cyst(86.7mg，0.37mmol)和DIPEA(0.024mL)，将混合物在室温下反应18小时，将反应混合物用20mL水稀释，并用稀盐酸调节至pH＝3，然后用二氯甲烷萃取3次，每次用二氯甲烷30mL，合并有机层，将合并后的溶液用NaCl溶液(1M)萃取，取有机相，有机相用Na2SO4干燥，减压除去溶剂得到Ce6-cyst-PPA(墨绿色粗产物)；
(5)、在手套箱内，将HPG-N3(6.99×10－5mol叠氮基，0.0367g，M＝2625)于2.5mL的无水DMF中溶解，待溶解完毕，将Ce6-cyst-PPA(2.02×10－4mol炔基，0.1764g，M＝870.49)加入到此反应液中，待其完全溶解后，再加入24.2mg的PMDETA，搅拌均匀，最后再加入26.6mg的CuI，搅拌均匀后，胶塞密封，然后移出手套箱，用注射器通氮气20min后，密封，室温反应8h，再升温至38℃反应8h，反应结束后将混合液用适当DMF稀释，洗净反应瓶后，用透析袋透析纯化，透析过程中，烧杯中加入少量EDTA以除去铜盐，同时加入少量HCl以维持pH在弱酸条件(pH＝4～5)，待透析液的蓝色完全退去，继续用蒸馏水透析以除掉残留的EDTA，最后用异丙醇透析以除去未反应的Ce6-cyst-PPA，最后用蒸馏水透析12h以除去异丙醇，冻干后得式(Ⅰ)所示二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物(墨绿色产物)。
本实施例所述制备方法制得的二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物收率为75％。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物，其特征在于，其化学结构式如式(Ⅰ)所示：
2.一种如权利要求1所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、在0.42～0.84g甲醇钾溶液中加入2.68～5.36g三羟甲基丙烷，加热熔融，减压除去甲醇，在93～97℃滴加10～20mL缩水甘油，反应时间≥12h，反应产物用丙酮沉淀至少1次，干燥，得HPG；
(2)、称量1.0175～2.035g的HPG，除去HPG中的水份，加入40～80mL的DMF，在-2～0℃的冰盐浴下，加入0.4175～0.8350g的无水三乙胺，滴加0.473～0.946g的甲烷磺酰氯，在10～20min滴加完，滴加完成后在冰盐浴条件下反应1～2h，再在室温下反应18～30h，过滤，取滤液，用DMF洗涤滤渣，将滤液和洗液合并，60～70℃旋蒸去除DMF，然后用二氯甲烷溶解，依次用NaOH溶液、NaCl溶液萃取，取有机相，用无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，38～50℃下真空干燥，得到HPG-MsCl；
(3)、向第一反应物中加入10～20mL的DMF溶解的HPG-MsCl 10-20mg，再加入0.403～0.806g的NaN3，最后加入12.5～25.0mg四丁基碘化铵，在68～72℃下反应18～30h，过滤，取滤液，用DMF洗涤滤渣，将滤液和洗液合并，在60～70℃旋蒸去除DMF，然后用二氯甲烷溶解，用水萃取至少1次，取有机相，用干燥剂干燥，旋蒸除去溶剂，38～50℃下真空干燥，得到HPG-N3；
(4)、将200.0～400.0mg二氢卟酚溶于DMF中，在冰水浴条件下加入34.0～68.0mg碳化二亚胺、86.7～173.4mg(烯丙基氨基甲酸酯乙基)二硫乙胺化合物、0.024～0.048mL N-乙基二异丙胺，在室温下反应18～30h，将反应后的混合物用20～40mL水稀释，调节pH＝3～4，用二氯甲烷萃取至少1次，取有机相，用NaCl溶液萃取至少1次，取有机相，用Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得Ce6-cyst-PPA；
(5)、在惰性气氛下，将0.0367～0.0734g HPG-N3用DMF溶解，加入0.1764～0.3528gCe6-cyst-PPA，待其完全溶解后加入24.2～48.4mg的五甲基二乙烯三胺，搅拌均匀，加入26.6～53.2mg的CuI或CuBr，搅拌均匀，通入惰性气体除去混合液中的氧气，密封，在室温下反应8～16h，升温至38～42℃，反应8～16h后，将反应液进行透析纯化，即得式(Ⅰ)所示二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物。
3.如权利要求2所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，透析纯化的方法为：将反应液用DMF稀释，装入透析袋，在透析袋外加入EDTA去除铜盐，加入稀盐酸调节pH＝4～5，当透析液的蓝色完全褪去，继续透析用蒸馏水透析去除残留EDTA，用异丙醇透析去除未反应的Ce6-cyst-PPA，再用蒸馏水透析去除异丙醇。
4.如权利要求2所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述缩水甘油的单体和三羟甲基丙烷重量比为：20：1。
5.如权利要求2所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，除去HPG中的水份的方法为：将HPG在78～82℃下，真空干燥10～20h，置于密封容器中，在N2氛围下加热去除容器中的水份。
6.如权利要求3所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的制备方法，其特征在于，所述透析袋为1000～3500分子量的透析袋，用蒸馏水透析的时间为24～48h。
7.如权利要求1所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物作为药物载体的用途。
8.如权利要求1所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物作为治疗肿瘤的药物载体的用途。
9.如权利要求1将所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物制备成微球、纳米颗粒或者凝胶作为药物载体的用途。
10.一种包含权利要求1所述二氢卟吩修饰的超支化聚缩水甘油醚衍生物的药物。
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