CN109358136A - 一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法 - Google Patents

一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109358136A
CN109358136A CN201811569613.1A CN201811569613A CN109358136A CN 109358136 A CN109358136 A CN 109358136A CN 201811569613 A CN201811569613 A CN 201811569613A CN 109358136 A CN109358136 A CN 109358136A
Authority
CN
China
Prior art keywords
peak
rough gentian
characteristic
gentiana
gentiana rigescens
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811569613.1A
Other languages
English (en)
Inventor
李振雨
陈万发
李乐
王利伟
吴文平
陈向东
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Yifang Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Guangdong Yifang Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Yifang Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Guangdong Yifang Pharmaceutical Co Ltd
Priority to CN201811569613.1A priority Critical patent/CN109358136A/zh
Publication of CN109358136A publication Critical patent/CN109358136A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法，属于中药成分鉴别技术领域；具体包括：（1）采用高效液相色谱法（HPLC法）建立龙胆和坚龙胆的特征图谱：取龙胆苦苷对照品、獐牙菜苦苷对照品、马钱苷酸对照品适量，精密称定，制成三者的混合溶液，得对照品参照物溶液；另取药材粉末（过四号筛）适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇，回流提取15分钟，放冷，滤过，取续滤液，得供试品溶液；分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定；（2）根据药材在高效液相特征图谱中呈现的特征峰值不同，龙胆特征图谱中在特征峰4和5之间无明显高于特征峰6的色谱峰，坚龙胆特征图谱中特征峰4和5之间出现峰高明显高于特征峰5的色谱峰，可判定其为龙胆或坚龙胆；该方法简单、高效、快速、准确。

Description

一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法
技术领域
本发明涉及一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法，属于中药成分鉴别技术领域。
背景技术
龙胆为龙胆科植物条叶龙胆（Gentiana manshurica Kitag.）、龙胆（Gentiana scabra Bge.）、三花龙胆（Gentiana triflora PalL.）或坚龙胆（Gentiana rigescens Franch）的干燥根和根茎。具有清热燥湿，泻肝胆火的功效，用于湿热黄疸，阴肿阴痒，带下，湿疹瘙痒，肝火目赤，耳鸣耳聋，胁痛口苦，强中，惊风抽搐。龙胆始载于东汉《神农本草经》，列为中品，历代本草均有收载。
目前，龙胆为42种保护的野生植物药材品种之一，4个基源的龙胆均是国家三级重点保护野生药材品种，属于资源严重减少的主要常用野生药材物种。目前条叶龙胆和三花龙胆产量低，栽培面积小，唯有龙胆和坚龙胆栽培面积较大，是中药材龙胆原料的主要来源。市场上家种龙胆年产量较坚龙胆少，其有效成分龙胆苦苷含量较高，南龙胆（坚龙胆）虽然种植面积大，但其龙胆苦苷含量较低，因此，龙胆市场价格要明显高于坚龙胆。近年来，一些龙胆的商品药材中时常掺入坚龙胆及一些伪品，造成龙胆质量的参差不齐，因此建立一种快速、准确、客观、简单的鉴别和区分中药材龙胆Gentiana scabra Bge.和坚龙胆Gentiana rigescens Franch.的方法有重要的意义。
目前，鉴别方法包括传统方法和与现代科技结合的色谱方法。现阶段，传统的眼看、口尝、鼻闻、手摸等简便方法由于主观性强，在中药材鉴别已非常局限，而色谱方法诸如UV、IR、NIR、TLC中存在大量的假阳性和假阴性问题，容易导致结论的偏差，另外一些已存在的试图鉴别龙胆和坚龙胆的HPLC法，由于方法复杂，区别点不明确，或者样品不具备代表性，难以做到高效、快速、准确的区分。因此，本发明通过采用高效液相色谱法(HPLC法）建立龙胆的特征图谱，能快速，准确的鉴别和区分龙胆和坚龙胆药材。
发明内容
本发明的目的是提供一种中药材龙胆（Gentiana scabra Bge）和坚龙胆（Gentiana rigescens Franch）的区分鉴别方法，应用高液相色谱法(HPLC法）建立龙胆的特征图谱，鉴别和区分龙胆和坚龙胆两种不同基源的中药材，简单、快速、准确。
为实现上述发明的目的，本发明采取的技术方案如下：
一种中药材龙胆和坚龙胆的区分鉴别方法，包括如下步骤：
（1）采用HPLC法建立龙胆和坚龙胆的特征图谱；
（2）根据药材在HPLC特征图谱中呈现的特征峰值不同，判定其为龙胆或坚龙胆；
步骤（1）所述的龙胆和坚龙胆HPLC特征图谱的建立方法，包括如下步骤：
（1）参照物溶液的制备：取龙胆苦苷对照品、獐牙菜苦苷对照品、马钱苷酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、马钱苷酸各100µg的混合溶液，即得；
（2）供试品溶液的制备：取过四号筛的本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，称定重量，加热回流15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
（3）测定：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，即得；其色谱条件为：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5µm）；以乙腈为流动相A，0.1%醋酸水溶液为流动相B，按下表1中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.80mL；柱温为30℃；检测波长为240nm，理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于3000；
步骤（2）所述的龙胆药材在HPLC特征图谱中应呈现6个特征峰，其中3个峰应分别与相应的参照物峰保留时间一致；与龙胆苦苷参照物峰相对应的峰为S峰，计算特征峰4，5，6的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10%范围之内，规定值为：1.07（峰4），2.18（峰5），2.24（峰6）；与坚龙胆区别点：在HPLC特征图谱中，特征峰4与峰5之间，不出现峰高大于峰6的色谱峰；
步骤（2）所述的坚龙胆药材在HPLC特征图谱中呈现5个特征峰，与龙胆苦苷参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间：其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：1.07（峰4），2.14（峰5）；与龙胆的区别点：在HPLC特征图谱中，峰4和峰5之间，出现峰高大于峰5的色谱峰。
龙胆和坚龙胆药材特征图谱具体见附图1。
图1龙胆药材HPLC特征图谱，该特征图谱中应呈现6个特征峰，其中3个峰应分别与相应的参照物峰保留时间一致；与龙胆苦苷参照物相对应的峰为S峰，计算特征峰4，5，6的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10%范围之内，规定值为：1.07（峰4），2.18（峰5），2.24（峰6）；以此鉴别为龙胆药材；
图1坚龙胆药材HPLC特征图谱，该特征图谱中呈现5个特征峰，其中3个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致；与龙胆苦苷参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间：其相对保留时间应该在规定值的±10％之内；规定值为：1.07（峰4），2.14（峰5）；以此来鉴别为坚龙胆药材；
坚龙胆和龙胆的区分（图中黑圈标记）：龙胆特征图谱中在特征峰4和5之间无明显高于峰6的色谱峰。坚龙胆特征图谱中，特征峰4和5之间出现峰高明显高于峰5的色谱峰。
本发明的有益效果是：
现阶段，龙胆与坚龙胆的鉴别和区分主要从性状、含量测定等方面，而这些方面特征性不强，差异不大，容易造成错误的判断。而本发明能从根本上快速、准确的鉴别和区分龙胆和坚龙胆，具有一定的特征性。
附图说明
图1为龙胆药材HPLC对照特征图谱和坚龙胆药材HPLC对照特征图谱；
图2为20批龙胆药材特征图谱叠加图；
图3为17批坚龙胆药材特征图谱叠加图；
图4特征峰1、2和3采用对照品参照物溶液指认。
具体实施方式
下面通过实例对本发明做进一步详细说明，这些实例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
实施例
我们采集了来自黑龙江，吉林，辽宁三个产地共20批次符合2015年《中国》药典规定的龙胆药材以及来自贵州、云南两个主产区，5个产地的共17批符合2015年《中国》药典规定的坚龙胆（坚龙胆）药材，测定其特征图谱；具体方法如下：
色谱条件 色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18，以乙腈为流动相A，0.1%醋酸水为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱，流速为0.8mL/min，检测波长：240nm，柱温：30℃。
参照物溶液的制备 取龙胆苦苷对照品、獐牙菜苦苷对照品、马钱苷酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、马钱苷酸各100µg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，称定重量，加热回流15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
测定结果
20批龙胆药材测定结果如下：
以3号峰龙胆苦苷为参照，计算其余各峰的相对保留时间，实验结果见下表2所示。
表2 20批龙胆（龙胆）药材特征图谱各特征峰的相对保留时间
序号 峰1 峰2 峰3（S） 峰4 峰5 峰6
1 0.617 0.814 1.000 1.069 2.254 2.313
2 0.616 0.814 1.000 1.069 2.257 2.314
3 0.615 0.809 1.000 1.070 2.206 2.263
4 0.617 0.815 1.000 1.070 2.259 2.318
5 0.616 0.810 1.000 1.070 2.209 2.267
6 0.617 0.813 1.000 1.069 2.243 2.301
7 0.614 0.808 1.000 1.071 2.212 2.270
8 0.615 0.808 1.000 1.070 2.206 2.263
9 0.616 0.809 1.000 1.069 2.210 2.267
10 0.616 0.810 1.000 1.069 2.218 2.275
11 0.616 0.809 1.000 1.069 2.210 2.268
12 0.616 0.810 1.000 1.069 2.213 2.271
13 0.614 0.809 1.000 1.070 2.215 2.275
14 0.615 0.809 1.000 1.068 2.209 2.267
15 0.614 0.807 1.000 1.070 2.203 2.260
16 0.614 0.807 1.000 1.071 2.197 2.254
17 0.614 0.807 1.000 1.070 2.196 2.253
18 0.608 0.802 1.000 1.072 2.143 2.198
19 0.608 0.801 1.000 1.073 2.136 2.191
20 0.609 0.805 1.000 1.072 2.154 2.210
均值 0.614 0.809 1.000 1.070 2.208 2.265
RSD（%） 0.46 0.45 0.00 0.12 1.51 1.52
17 批坚龙胆测定结果如下：
以3号峰龙胆苦苷为参照，计算其余特征峰的相对保留时间，实验结果见下表3。
表3 17批坚龙胆药材特征图谱的相对保留时间
序号 药材批号 峰1 峰2 峰3（S） 峰4 峰5
1 GP1707161 0.604 0.797 1.000 1.074 2.147
2 GP1707162 0.603 0.796 1.000 1.075 2.141
3 GP1707163 0.603 0.797 1.000 1.076 2.144
4 GP1707164 0.604 0.797 1.000 1.074 2.148
5 GP1707165 0.604 0.797 1.000 1.074 2.147
6 GP1708065 0.604 0.798 1.000 1.074 2.152
7 GP1708068 0.604 0.797 1.000 1.073 2.150
8 GP1708069 0.604 0.797 1.000 1.074 2.147
9 GP1806022 0.600 0.794 1.000 1.077 2.125
10 GP1806023 0.601 0.794 1.000 1.077 2.123
11 GP1806024 0.601 0.794 1.000 1.077 2.118
12 GP1806081 0.600 0.794 1.000 1.078 2.115
13 GP1806082 0.600 0.794 1.000 1.077 2.117
14 GP1806083 0.600 0.794 1.000 1.077 2.116
15 GP1806701 0.601 0.795 1.000 1.075 2.127
16 GP1806702 0.602 0.796 1.000 1.073 2.134
17 GP1806703 0.602 0.795 1.000 1.074 2.133
均值 0.602 0.796 1.000 1.075 2.134
RSD（%） 0.28 0.19 0.00 0.14 0.63%
结果显示，20批龙胆药材特征图谱均呈现出6个特征峰，其中峰1、2、3分别与参照物溶液中的马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷保留时间一致，另外3个特征峰的相对保留时间分别均在1.07±10%（峰4），2.18±10%（峰5），2.24±10%（峰6）范围内。龙胆药材特征峰4和5之间，无峰高大于峰6的特征峰。17批坚龙胆药材特征图谱均呈现出5个特征峰，其中峰1、2、3分别与对照品参照物溶液中的马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷保留时间一致，另外2个特征峰的相对保留时间分别均在1.07±10%（峰4），2.14±10%（峰5）范围内。龙胆药材特征峰4和5之间，出现峰高大于峰6的特征峰；以此来实现龙胆、坚龙胆药材的鉴别与区分。

Claims (4)

1.一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）采用HPLC法建立龙胆和坚龙胆的特征图谱；
（2）根据药材在HPLC特征图谱中呈现的特征峰值不同，判定其为龙胆或坚龙胆。
2.根据权利要求1所述的一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法，其特征在于：步骤（1）所述的龙胆和坚龙胆HPLC特征图谱的建立方法，包括如下步骤：
（1）参照物溶液的制备：取龙胆苦苷对照品、獐牙菜苦苷对照品、马钱苷酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、马钱苷酸各100µg的混合溶液，即得；
（2）供试品溶液的制备：取过四号筛的药材粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，称定重量，加热回流15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
（3）测定：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，即得；其色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，0.1%醋酸水溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.80mL；柱温为30℃；检测波长为240nm，理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于3000；
。
3.根据权利要求1所述的一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法，其特征在于：步骤（2）所述的龙胆药材在HPLC特征图谱中应呈现6个特征峰，其中3个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致；与龙胆苦苷参照物峰相对应的峰为S峰，计算特征峰4，5，6的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10%范围之内，规定值为：1.07，2.18，2.24；与坚龙胆区别点：在HPLC特征图谱中，特征峰4与峰5之间，不出现峰高大于峰6的色谱峰。
4.根据权利要求1所述的一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法，其特征在于：步骤（2）所述的坚龙胆药材在HPLC特征图谱中呈现5个特征峰，与龙胆苦苷参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间：其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：1.07，2.14；与龙胆的区别点：在HPLC特征图谱中，峰4和峰5之间，出现峰高大于峰5的色谱峰。
CN201811569613.1A 2018-12-21 2018-12-21 一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法 Pending CN109358136A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811569613.1A CN109358136A (zh) 2018-12-21 2018-12-21 一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811569613.1A CN109358136A (zh) 2018-12-21 2018-12-21 一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109358136A true CN109358136A (zh) 2019-02-19

Family

ID=65329119

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811569613.1A Pending CN109358136A (zh) 2018-12-21 2018-12-21 一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109358136A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115541796A (zh) * 2021-06-29 2022-12-30 西安远大德天药业股份有限公司 藏茵陈特征图谱的构建方法和鉴定藏茵陈的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101530463A (zh) * 2009-04-27 2009-09-16 中国科学院长春应用化学研究所 一种中药龙胆的质量检测方法
CN101890071A (zh) * 2010-07-08 2010-11-24 上海中药标准化研究中心 坚龙胆和关龙胆药材的鉴别方法
CN105092725A (zh) * 2014-05-16 2015-11-25 成都中医药大学 白花龙胆的hplc检测方法
CN108535368A (zh) * 2018-03-13 2018-09-14 宇妥藏药股份有限公司 一种三味龙胆花片的质量控制方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101530463A (zh) * 2009-04-27 2009-09-16 中国科学院长春应用化学研究所 一种中药龙胆的质量检测方法
CN101890071A (zh) * 2010-07-08 2010-11-24 上海中药标准化研究中心 坚龙胆和关龙胆药材的鉴别方法
CN105092725A (zh) * 2014-05-16 2015-11-25 成都中医药大学 白花龙胆的hplc检测方法
CN108535368A (zh) * 2018-03-13 2018-09-14 宇妥藏药股份有限公司 一种三味龙胆花片的质量控制方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张立雯: "龙胆和秦艽钴60 辐照前后指纹图谱变化的研究", 《药物分析杂志》 *
玄敏等: "基于极性导向下的龙胆与坚龙胆HPLC 特征图谱研究", 《中国药学杂志》 *
玄敏等: "龙胆和坚龙胆对照提取物的制备", 《中成药》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115541796A (zh) * 2021-06-29 2022-12-30 西安远大德天药业股份有限公司 藏茵陈特征图谱的构建方法和鉴定藏茵陈的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104713957B (zh) 一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法
CN105842373B (zh) 一种建立金银花的药物制剂的指纹图谱的方法
CN110426479A (zh) 一种泻白散物质基准的hplc特征图谱测定方法
CN108717095A (zh) 一种枇杷叶或含枇杷叶原料的药物的检测方法及鉴别、含量测定方法
CN103926351A (zh) 生血宝制剂质量检测方法及其标准指纹图谱的构建方法
CN105353063B (zh) 复方感冒灵流膏化学成分标准指纹图谱及构建方法、应用
CN103776926A (zh) 溪黄草药材hplc指纹图谱的建立及其指纹图谱
CN107308234A (zh) 一种桂枝茯苓丸的制备方法
CN110907550B (zh) 一种同时检测小儿宣肺止咳颗粒中六种成分含量的方法
CN102778516B (zh) 一种大黄蛰虫胶囊指纹图谱鉴别方法
CN109358136A (zh) 一种中药材龙胆和坚龙胆的鉴别和区分方法
CN104316613B (zh) 一种疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法
CN110441441A (zh) 一种狗脊与烫狗脊药材的uplc特征图谱构建方法及鉴别方法
CN104792889B (zh) 一种银黄清肺制剂的指纹图谱建立方法及其标准指纹图谱和应用
CN102389445A (zh) 白芷配方颗粒及其质量控制
CN110441407A (zh) 一种泽术片质量控制方法
CN106918673B (zh) 一种中药组合物的指纹图谱的建立方法
CN103197003B (zh) 一种柴胡药材的鉴定方法
CN102441058B (zh) 一种养血清脑颗粒的气相色谱指纹图谱检测方法
CN103983735A (zh) 一种制备宫炎平胶囊的检测方法
CN104020225B (zh) 生血宝制剂特征图谱及其建立方法
CN110794049B (zh) 一种感冒颗粒的检测方法
CN107389827A (zh) 益母草或其复方制剂中盐酸水苏碱含量的测定方法
CN110412162B (zh) 白香丹胶囊的hplc特征图谱的构建方法及白香丹胶囊的质量检测方法
CN110715987B (zh) 一种余江夏天无的质量控制方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190219