CN109349107B - 一种青稞试管苗快繁方法 - Google Patents

一种青稞试管苗快繁方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109349107B
CN109349107B CN201811302861.XA CN201811302861A CN109349107B CN 109349107 B CN109349107 B CN 109349107B CN 201811302861 A CN201811302861 A CN 201811302861A CN 109349107 B CN109349107 B CN 109349107B
Authority
CN
China
Prior art keywords
callus
proline
glutamine
sucrose
highland barley
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811302861.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN109349107A (zh
Inventor
曾兴权
徐齐君
原红军
王玉林
韦泽秀
巴桑玉珍
于明寨
扎桑
尼玛扎西
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute Of Agriculture Tibet Autonomous Region Academy Of Agriculture And Animal Husbandry
Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine of Tibet Academy of Agriculture and Animal Husbandry Sciences
Original Assignee
Institute Of Agriculture Tibet Autonomous Region Academy Of Agriculture And Animal Husbandry
Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine of Tibet Academy of Agriculture and Animal Husbandry Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute Of Agriculture Tibet Autonomous Region Academy Of Agriculture And Animal Husbandry, Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine of Tibet Academy of Agriculture and Animal Husbandry Sciences filed Critical Institute Of Agriculture Tibet Autonomous Region Academy Of Agriculture And Animal Husbandry
Priority to CN201811302861.XA priority Critical patent/CN109349107B/zh
Publication of CN109349107A publication Critical patent/CN109349107A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109349107B publication Critical patent/CN109349107B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明提供了一种青稞试管苗快繁的方法，它是以青稞种子为外植体，通过愈伤诱导、愈伤继代和愈伤分化得到试管苗的方法。本发明还提供了前述方法所用到的培养基的配方。本发明可以有效的实现青稞快繁，青稞试管苗培育方面具有较好的应用前景。

Description

一种青稞试管苗快繁方法
技术领域
本发明涉及植物组培领域，特别涉及一种青稞的试管苗快繁方法。
背景技术
青稞是我国西部特有的禾本科植物。青稞在青藏高原上种植约有3500年的历史，从物质文化之中延伸到精神文化领域，在青藏高原上形成了内涵丰富、极富民族特色的青稞文化。青稞具有重要的药用价值及营养价值，青稞是西藏四宝之首糌粑的主要原料。因其地理位置和环境气候的特殊性，青稞一直是藏族人民的主要的粮食作物。
青稞的育种目标主要集中在产量，对生物和非生物胁迫的抗性等方面。然而传统的遗传育种方法存在一定的局限性。20世纪末兴起的植物基因工程为植物特性的遗传改良提供了新途径。植物转基因技术可以充分利用外源基因，在相对稳定的维持植物品种其他的各种性状基础上，可以定向改良其所调控的特性，这为青稞新品种的培育开阔了一个崭新的途径。
高效而稳定的植株再生体系是植物遗传转化获得成功的重要前提条件。植物的体细胞胚发生是植物的体细胞在离体条件下，通过与合子胚类似的发育途径得到新个体的过程。体细胞胚发生途径再生体系的建立有助于青稞的试管苗快繁，人工种子的生产和冷藏保存，同时胚性细胞是进行青稞遗传转化的最佳受体，可以以体细胞胚为受体进行青稞遗传转化的研究。
目前关于青稞的试管苗快繁研究主要集中在激素组合的优化上面，但未见对外植体的基因型(品种)、基本培养基等进行优化的报道；基于此，现有技术中最佳激素组合可能仅仅适用于常见品种和常见基本培养基的情形，所提供的方法有待优化。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种快繁培养基，它包括诱导培养基、继代培养基和分化培养基；
本发明提供了一种快繁培养基，它包括诱导培养基、继代培养基和分化培养基；
所述诱导培养基是在MS培养基的基础上，还含有1g/L(NH4)2SO4、1.25mg/LCUSO4、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯胺酸、0.8g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、10g甘露醇、1.5mg/L毒莠定、1.5mg/L 2,4-D、0.2mg/L KT和3.5g/L植物凝胶的培养基；
所述继代培养基是在MS培养基的基础上，还含有MS培养基中加入1g/L(NH4)2SO4、1.25mg/L CUSO4、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯胺酸、0.8g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、10g甘露醇、3.5g/L植物凝胶、4mg/L毒莠定和0.1mg/L 6-BA的培养基；
所述分化培养基是在MS培养基的基础上，还含有1mg/L 6-BA和1mg/L KT的培养基。
本发明还提供了如前所述快繁培养基在青稞试管苗快繁中的用途。
本发明还提供了一种青稞试管苗快繁方法，它是使用前述快繁培养基，按如下步骤操作：
(1)青稞种子置于诱导培养基上培养出愈伤组织；
(2)将愈伤组织接种于继代培养基培养，诱导出胚性愈伤；
(3)将胚性愈伤接种于分化培养基，诱导出芽。
进一步地，步骤(1)所述青稞的品种是ZYM0439或昆仑14号。
进一步地，步骤(1)所述青稞的品种是ZYM0439。
进一步地，步骤(1)的种子是带胚乳的碎胚。
本发明的方法，可以将种子分成多个碎片作为外植体，并维持较好的愈伤诱导率，增加了快繁的产量。
本发明的方法，通过愈伤诱导、愈伤继代和愈伤分化等精细地分步，能稳定青稞试管苗的高产率。
本发明的方法在愈伤诱导期间，愈伤诱导率达约80％，且极少出芽，愈伤长势良好；愈伤分化期间，芽诱导率达到50％。
本发明提供了一种优秀的青稞试管苗快繁方法，具有良好的应用前景。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
附图说明
图1是C1在各类培养基上的生长情况图。
图2是昆仑14号的愈伤在M1,M2,M3,M4四种继代培养基中的培养效果图。
图3是不同成熟胚处理方式在三种培养基中的愈伤诱导图。
图4是不同诱导培养基对成熟胚的诱导情况：图中编号1～10对应不同培养基，对应关系见表11。
图5是胚性愈伤在不同基础培养基的诱导图。
图6是胚性愈伤的切片染色图。
图7愈伤分化效果图。
以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发明，本领域技术人员根据本发明作出的各种改变和替换，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
具体实施方式
实施例和实验例的实验材料均生长在24±2℃、光照强度40μmol m-2s-1、光照周期为14h的条件下。
实验所用培养基灭菌前用1mol/L NaOH或1mol/L HCl将pH调至5.8-6.0，121℃高温灭菌20min。
实验对象是实验材料的种子，均以下列方式消毒：
选取颗粒饱满、品质相对一致的大麦种子，70％乙醇消毒3min，无菌水清洗3次，再使用0.15％升汞消毒5min，无菌水清洗3次，4℃浸泡过夜。
实施例青稞试管苗快繁
1愈伤诱导
将青稞(ZYM0439)种子消毒后，接种于愈伤诱导培养基中。所述愈伤诱导培养基以MS培养基为基础，还含有1g/L(NH4)2SO4、1.25mg/L CUSO4、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯胺酸、0.8g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、10g甘露醇、1.5mg/L毒莠定、1.5mg/L 2,4-D、0.2mg/LKT和3.5g/L植物凝胶。
光照培养14天后，观察愈伤组织的诱导情况。
2愈伤继代
取上述诱导良好的愈伤组织接种于愈伤继代培养基，所述的愈伤继代培养基以MS培养基为基础，还含有1g/L(NH4)2SO4、1.25mg/L CUSO4、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯胺酸、0.8g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、10g甘露醇、3.5g/L植物凝胶、4mg/L毒莠定和0.1mg/L 6-BA。
光照培养14天后，观察愈伤组织长势。
3愈伤分化
将继代得到的胚性愈伤接种于愈伤分化培养基，所述愈伤分化培养基以MS培养基为为基础，还含有1mg/L 6-BA和1mg/L KT。
光照培养4周，期间部分愈伤陆续诱导出芽，长成试管苗。
说明书还提供了实验例，实验例中用到的部分培养基配方列表如下：
3m-3：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+30g甘露醇+3mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
4ml：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+40g甘露醇+2mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
4m-3l：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+40g甘露醇+3mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
5m-4：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+4mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
5m-4c11：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+4mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
P2-5m：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+2mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
P4-5m：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+4mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
P6-5m：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+6mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
P8-5m：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+8mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
P10-5m：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+10mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
P12-5m：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+12mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
D2-5m：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+2mg/L麦草畏+3.5g/L植物凝胶
NMB：N6大量+B5微量+B5有机+MS铁盐+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+2mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
5m-4：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+4mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
W8：：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+12mg/L麦草畏+0.5mg/LIAA+3.5g/L植物凝胶
5m-4：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+4mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
W3：：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+1mg/L毒莠定+1mg/L 2,4+3.5g/L植物凝胶
W4：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+1.5mg/L毒莠定+1.5mg/L 2,4-D+0.2mg/L KT
P2-5m：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+2mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
P6-5m：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+6mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
4m-3l：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+40g甘露醇+3mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
5m-4c11：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+4mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
5m-3c11：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+3mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
W3：：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+1mg/L毒莠定+1mg/L 2,4+3.5g/L植物凝胶
W4：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+1.5mg/L毒莠定+1.5mg/L 2,4-D+0.2mg/L KT
4ml：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+40g甘露醇+2mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
4m-3l：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+40g甘露醇+3mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
5m-3c11：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+3mg/L 2，4-D+3.5g/L植物凝胶
W8：：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+12mg/L麦草畏+0.5mg/LIAA+3.5g/L植物凝胶
W9：：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+1mg/L麦草畏+2.5mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
W10：：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+2mg/L2，4-D+0.1mg/L6-BA+3.5g/L植物凝胶
P4C11：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+4mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
P4-C11即为P4C11
3m-4L：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+30g甘露醇+4mg/L 2，4-D+3.5g/L植物凝胶
W8：：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+12mg/L麦草畏+0.5mg/LIAA+3.5g/L植物凝胶
W10：：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+2mg/L2，4-D+0.1mg/L6-BA+3.5g/L植物凝胶
4ml：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+40g甘露醇+2mg/L 2，4-D+3.5g/L植物凝胶
4mC11：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+40g甘露醇+2mg/L 2，4-D+3.5g/L植物凝胶
5mC11：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+2mg/L 2，4-D+3.5g/L植物凝胶
5m-3C11：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+3mg/L 2，4-D+3.5g/L植物凝胶
5m-4C11：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.5mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+4mg/L 2，4-D+3.5g/L植物凝胶
P4：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+4mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
P12-5m：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+50g甘露醇+12mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
2D8：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+8mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
B4-1：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+1.5mg/L麦草畏+1.5mg/L2，4-D+3.5g/L植物凝胶
D2：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+2mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
D4：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+4mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
D6：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+6mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
P2：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+2mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
P4：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+4mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
P6：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+6mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
P8：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+8mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
P10：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10mg/L毒莠定+3.5g/L植物凝胶
W3：：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+1mg/L毒莠定+1mg/L 2,4+3.5g/L植物凝胶
W4：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+1.5mg/L毒莠定+1.5mg/L 2,4-D+0.2mg/L KT
W4-1M即W4
W4-2m：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+20g甘露醇+1.5mg/L毒莠定+1.5mg/L 2,4-D+0.2mg/L KT
W11：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+1mg/L毒莠定+2mg/L 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
W12：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+3mg/L麦草畏+0.25mg/LTDZ+3.5g/L植物凝胶
W13：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+5mg/L2,4-D+2.2mg/L麦草畏+3.5g/L植物凝胶
W14：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+2.2mg/L麦草畏+2mg/L2,4-D+3.5g/L植物凝胶
W15：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+4mg/L麦草畏+0.5mg/L2,4-D+3.5g/L植物凝胶
W16：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+2mg/L麦草畏+8mg/L2,4-D+3.5g/L植物凝胶
W17：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+4mg/L麦草畏+2mg/L2,4-D+3.5g/L植物凝胶
W18：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+0.1mg/L6-BA+3mg/L2,4-D+3.5g/L植物凝胶
W21：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+0.3mg/LKT+4mg/L2,4-D+3.5g/L植物凝胶
WSPD：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+1.5mg毒莠定+1.5mg 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
WSDDN：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+1.5mg麦草畏+1.5mg 2,4-D+3.5g/L植物凝胶
WSPDN：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+1.5mg毒莠定+1.5mg麦草畏3.5g/L植物凝胶
实验例1基因型和基本培养基对青稞愈伤发生的影响
本实验例选择了9个系列的青稞品种共24个青稞品种进行了诱导实验，将其接种在44种基本培养基上，置于光下培养，14d后统计愈伤诱导率。
所述品种分别为甘青(3号，5号)；康青(6号)；ZYM(0254、0439、0762、0850、0957)；东青(18号、19号)；喜拉(3号、10号、19号、22号)；北青(1号、7号)；昆仑(1号、8号、10号、14号、15号)；藏青(25、52、148、320、311、2000、7000)；C1。
能够诱导出愈伤的品种，其结果如表1～8所示，表中列标题为培养基名称。
表1青稞‘昆仑系列’愈伤诱导结果
Figure BDA0001852839570000081
Figure BDA0001852839570000091
表2青稞‘喜拉系列’愈伤诱导结果
Figure BDA0001852839570000092
表3青稞‘东青系列’愈伤诱导结果
Figure BDA0001852839570000093
表4青稞‘ZYM系列’愈伤诱导结果
Figure BDA0001852839570000094
表5：青稞‘藏青系列’愈伤诱导结果
Figure BDA0001852839570000101
表6青稞‘甘青系列’愈伤诱导结果
Figure BDA0001852839570000102
Figure BDA0001852839570000111
表7青稞‘北青系列’愈伤诱导结果
Figure BDA0001852839570000112
表8 C1于各诱导培养基生长情况
Figure BDA0001852839570000113
Figure BDA0001852839570000121
实验结果显示：所接种的青稞出现两类情况：(1)出芽很严重，(2)不出或很少出愈伤。通过比较发现，青稞的初生愈伤生长的时间一般需要1-2周后才能观察到愈伤的生长。其中在W2和D4培养基上的青稞愈伤发生率极高，但易出芽；W2、W4、w5基上的愈伤水化过于严重。W3培养基上的愈伤虽然有一定的出芽，但是C1品种初生愈伤上就长有黄色、致密的胚性愈伤。
由表8可知，C1较适合的培养基有：W3-1，W4，D6，P6。其愈伤生长虽然容易水化和出芽，但即使水化和出芽仍能诱导出胚性愈伤，其中在W4系列上长的胚性愈伤诱导率最大，在W4-0M培养基上其胚性愈伤诱导率达到72.70％。经前期诱导实验后，选定昆仑14号，C1，ZYM0439，北青3号，喜拉10号，藏青320，拉萨芶芒及藏青2000，具体诱导情况见下表9，结果表明P6C11和W3-1和W4-M针对多数品种均可诱导出胚性愈伤，其诱导率因品种不同而异。
表9不同青稞品种胚性愈伤诱导结果
Figure BDA0001852839570000122
Figure BDA0001852839570000131
ZYM0439和昆仑14号目前最稳定，C1在很多培养基上都可以诱导出胚性愈伤，但是由于其初生愈伤诱导的时候很容易出芽，所以诱导率都不高。上述研究结果表明ZYM0439和昆仑14胚性愈伤诱导效果最好，故最终确定以这两个品种作为测试受体。最终确定诱导培养基：W4:MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+1.5mg/L毒莠定+1.5mg/L2,4-D+0.2mg/LKT，青稞在W4培养基诱导一个月后会有少量胚性愈伤形成，继续培养一段时间则会形成大量的胚性愈伤。
实验例2培养基硬度对愈伤继代的影响
额外添加0、4、6、8mg/L的植物凝胶调节诱导培养基的硬度，测试培养基硬度对愈伤继代的影响。结果如图2所示，图中，P41MSK2T4P为培养基MS+1g/L(NH4)2SO4+0.2g/LKNO3+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+4mg/L毒莠定+0.2mg/LKT+3.5g/L植物凝胶。P4代表毒莠定含量为4mg/L,1m代表甘露醇含量为10g,sk代表添加了1g/L(NH4)2SO4及0.2g/LKNO3，2T代表添加了0.2mg/LKT,4P代表植物凝胶的含量为4g/L；其它标识以此类推。
结果表明，随着植物凝胶含量的增加，培养基硬度也会增加，愈伤的色泽逐渐变浅，但其硬度有所增加，松散问题有所改善。但随着培养时间延长，植物凝胶含量越高，愈伤出现营养吸收不够的现象，愈伤变得很紧硬。植物凝胶的含量由以前的3.5g/L增加至4g/L，增加植物凝胶含量后，在继代的前一个星期，其愈伤状态保持较好，但随着继代时间延长，愈伤仍出现松散现象。
实验例3不同处理方式和基本培养基对青稞愈伤诱导的影响
分别采用碎胚和碎胚携带胚乳这两种方式转入诱导培养基(WSPD、WSPDN、WSDDN)中进行测试，光照培养14d后观察愈伤组织诱导情况如图3和表10所示。
表10愈伤组织诱导频率及生长状态
Figure BDA0001852839570000141
结果表明：将碎胚直接放置于诱导培养基中很难诱导出愈伤且诱导的愈伤弱小容易发黑；相比之下，碎胚+胚乳的方式更有利于大麦成熟胚形成愈伤组织。虽然这三种培养基的诱愈率不存在显著差异，但是WSPD诱导愈伤生长迅速；WSPDN诱导愈伤容易出芽，WSDDN诱导愈伤较小容易发黑。
实验例4不同激素组合对青稞愈伤诱导的影响
以WSPD为基础培养基，添加不同的激素组合，形成如表11所示的10种培养基，光照培养14d后观察愈伤组织诱导情况。
如图4和表11所示，不同激素组合的诱导培养基对愈伤组织的诱导以及生长状态有很大的差异，诱导频率高并不代表愈伤生长状态好。BS1-2T、BS3A、BS4、B6诱导的愈伤略好，可以继续进行下一步测试。但是前期实验结果中的WSPD、WSPDN、WSDDN诱导的愈伤组织相比，愈伤质量相对较差。
表11愈伤组织诱导频率及生长状态
Figure BDA0001852839570000151
Figure BDA0001852839570000161
1-9号培养基配方基础是：MS+1g/L(NH4)2SO4+1.25mg/L CUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+10g甘露醇+3.5g/L植物凝胶，激素组合为表格中的组合；10号培养基配方基础是：N6大量+N6大量+B5微量+B5有机+MS铁盐+1.5mg/LCUSO4+0.5g/L谷氨酰胺+0.5g/L脯胺酸+0.8g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+3.5g/L植物凝胶。
实验例5不同培养基对青稞胚性愈伤增殖的影响
将诱导14d的青稞愈伤接种于WSPD、WSPDN、WSDDN培养基中进行继代增殖培养，观察胚性愈伤的生长情况。由表12和图5可知，不同的诱导培养基对诱导胚性愈伤以及生长状态有很大的影响，在早期诱导时WSPDN诱导的愈伤组织生长迅速，但是由于出芽率太高，诱导愈伤组织能力较弱，特别是在继续诱导阶段，胚性愈伤组织诱导频率以及生长速率均显著变慢，WSDDN早期诱导的愈伤的生长状态和其他两种相比略差，因此后期的诱导就会更加明显。相比之下，WSPD诱导的胚性愈伤的频率和质量上都要优于其他两种培养基。胚性愈伤组织发生过程的切片观察见图6。
表12愈伤组织诱导频率及生长状态
Figure BDA0001852839570000162
实验例6不同激素组合对青稞胚性愈伤组织萌发的影响
将诱导培养基(MS+1.5mg/L毒莠定+1.5mg/L 2,4-D+0.2mg/L KT)中诱导6周形成的胚性愈伤转入分化培养基，所述分化培养基均是在MS培养基的基础上，添加不同浓度的6-BA和KT组合。所述组合为：A组，1mg/L 6-BA+1mg/L KT；B组，1.5mg/L 6-BA+2mg/L KT；C组，3mg/L 6-BA+3mg/L KT三种。
表13愈伤组织分化出芽率
Figure BDA0001852839570000163
Figure BDA0001852839570000171
培养4周后统计愈伤分化情况。结果表明，随着6-BA和KT的浓度升高，胚性愈伤分化频率明显降低，目前最适合的浓度是1mg/L 6-BA+1mg/LKT；相比之下，ZYM0439品种大麦的分化能力要明显优于KL14品种大麦(表13和图7)。

Claims (4)

1.一种快繁培养基，其特征在于，包括诱导培养基、继代培养基和分化培养基；
所述诱导培养基是在MS培养基的基础上，还含有1g/L(NH4)2SO4、1.25mg/L CuSO4、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯胺酸、0.8g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、10g甘露醇、1.5mg/L毒莠定、1.5mg/L 2,4-D、0.2mg/L KT和3.5g/L植物凝胶的培养基；
所述继代培养基是在MS培养基的基础上，还含有1g/L(NH4)2SO4、1.25mg/L CuSO4、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯胺酸、0.8g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、10g甘露醇、3.5g/L植物凝胶、4mg/L毒莠定和0.1mg/L 6-BA的培养基；
所述分化培养基是在MS培养基的基础上，还含有1mg/L 6-BA和1mg/L KT的培养基。
2.权利要求1所述快繁培养基在青稞试管苗快繁中的用途。
3.一种青稞试管苗快繁方法，其特征在于：使用如权利要求1所述快繁培养基，按如下步骤操作：
(1)青稞种子置于诱导培养基上培养出愈伤组织；
(2)将愈伤组织接种于继代培养基培养，诱导出胚性愈伤；
(3)将胚性愈伤接种于分化培养基，诱导出芽；
其中步骤(1)所述青稞的品种是ZYM0439或昆仑14号；所述种子是带胚乳的碎胚。
4.如权利要求3所述的快繁方法，其特征在于：步骤(1)所述青稞的品种是ZYM0439。
CN201811302861.XA 2018-11-02 2018-11-02 一种青稞试管苗快繁方法 Active CN109349107B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811302861.XA CN109349107B (zh) 2018-11-02 2018-11-02 一种青稞试管苗快繁方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811302861.XA CN109349107B (zh) 2018-11-02 2018-11-02 一种青稞试管苗快繁方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109349107A CN109349107A (zh) 2019-02-19
CN109349107B true CN109349107B (zh) 2021-05-28

Family

ID=65343995

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811302861.XA Active CN109349107B (zh) 2018-11-02 2018-11-02 一种青稞试管苗快繁方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109349107B (zh)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3519743B2 (ja) * 1991-06-04 2004-04-19 社団法人農林水産技術情報協会 オオムギプロトプラストからの植物体の再生方法
JPH07184492A (ja) * 1993-12-27 1995-07-25 Sapporo Breweries Ltd 形質転換オオムギ植物並びに該植物の作出方法
JPH07213183A (ja) * 1994-02-04 1995-08-15 Sapporo Breweries Ltd オオムギ植物体の再生方法
CN103960131A (zh) * 2014-05-14 2014-08-06 青海省农林科学院 一种青稞成熟胚愈伤组织的诱导培养基及其培养方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN109349107A (zh) 2019-02-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101946702B (zh) 一种草莓茎尖组培专用培养基及其生产脱毒苗的方法
Guo et al. Establishment and plant regeneration of somatic embryogenic cell suspension cultures of the Zingiber officinale Rosc.
CN111492973B (zh) 普通油茶通过体细胞胚胎发生方式获得再生植株的方法
CN102007867B (zh) 一种油茶无性系组培苗生根方法
CN102499086B (zh) 一种刺槐的繁殖方法
WO2019153690A1 (zh) 无种质基因型限制的高频体胚再生培养基及其应用
CN101810144B (zh) 瓜叶菊的快速繁殖方法
Solangi et al. Optimizing tissue culture protocol for in vitro shoot and root development and acclimatization of date palm (Phoenix dactylifera L.) plantlets
CN105519442B (zh) 一种欧李愈伤组织再生体系的培植方法
CN108770692B (zh) 椰子胚诱导培养基和基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法
Liu et al. Somatic embryogenesis and plant regeneration in centipedegrass (Eremochloa ophiuroides [Munro] Hack.)
JPH04287623A (ja) 植物組織培養による球根類の増殖方法
CN105123521A (zh) 一种金银花直接体胚发生和植株再生的培养基及方法
CN106538382B (zh) 一种以幼穗为外植体建立假俭草高效再生体系的方法
CN104938335A (zh) 利用油茶下胚轴获得再生植株的方法
CN104823861B (zh) 油茶胚根不定芽诱导获得再生植株的方法
CN101785430A (zh) 一项以马尾松离体成熟胚为外植体的组织培养技术
Rhimi et al. Plant regeneration via somatic embryogenesis from in vitro tissue culture in two Tunisian Cucumis melo cultivars Maazoun and Beji
CN109349107B (zh) 一种青稞试管苗快繁方法
CN113575422B (zh) 菠萝叶片高效离体再生方法
CN111448991B (zh) 一种利用糯玉米幼胚诱导胚性愈伤组织的培养方法
Huang et al. Chinese gooseberry, kiwifruit (Actinidia spp.)
KR100294656B1 (ko) 배양기 내에서 직접배발생을 통한 가시오갈피 묘목의 미세 번식방법
Gjuleva et al. Micropropagation of Platanus acerifolia in vitro
CN115777533B (zh) 一种以西南桦节间茎段为外植体的再生方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant