CN109342724A

CN109342724A - 一种检测肺炎支原体的试剂盒

Info

Publication number: CN109342724A
Application number: CN201811285987.0A
Authority: CN
Inventors: 廖朝晖
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2018-10-31
Filing date: 2018-10-31
Publication date: 2019-02-15

Abstract

本发明涉及一种检测肺炎支原体的试剂盒，所述试剂盒包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括第一缓冲物、第一稳定剂、第一保护剂第一防腐剂、增浊剂和水，所述R2试剂包括肺炎支原体抗原、聚苯乙烯胶乳微球、第二缓冲物、第二稳定剂、第二保护剂、第二防腐剂和水。本发明具有高灵敏度高、检测速度快、结果稳定、线性范围广、重复好且易于标准化和标本采集容易且标本用量少等优点，能够为临床肺炎支原体感染诊断提供一种早期、快速、灵敏度高和特异性好的新方法。

Description

一种检测肺炎支原体的试剂盒

技术领域

本发明涉及一种体外诊断试剂领域，尤其是一种检测肺炎支原体的试剂盒。

背景技术

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)是儿童社区获得性肺炎的重要病原之一，MP感染大概占儿童社区获得性肺炎感染的10％-30％，多发生在家庭、社区、学校和野营区等人口密集的公众场所。MP感染具有季节性，多发在秋季，主要通过飞沫传播，大多数MP感染具有局限性，是否出现临床感染症状取决于粘附在宿主呼吸道表面的MP能否被清除，但是仍然有3％-13％引起临床症状，其主要症状是干咳，体温在37.7±1.0℃，并可持续1-3周，可伴有咽痛和肌肉酸痛，缺乏特异性的临床特征，而且大约每3-7年会暴发流行1次。因此，早期、快速、准确诊断MP和耐药性MP对指导临床用药、疾病转归及预后起到至关重要的作用。

目前实验室诊断MP感染的方法分为三类：分离培养及鉴定、分子生物学诊断和血清学诊断。分离培养法是诊断MP感染的金标准，但是培养条件要求高，培养周期长(10-14d)，一般用于科研和临床回顾性分析，对MP早期诊断意义不大，现在已经很少运用于临床诊断；分子生物学包括：巢式PCR、实时定量PCR、环介导等温扩增反应(LAMP)技术、依赖核酸序列的扩增技术(NASBA)、实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)和复合PCR等技术，分子生物学技术灵敏度和特异性高，适用于早期的临床诊断，但是，除了分子生物学本身的假阳性率高和标本易污染等缺点外，研究发现在健康人群中MP携带率高(0.1％-13.5％)，并且感染后DNA可在呼吸道存活时间长(7周-7个月时间)，因此，即使运用分子生物学方法检测到MP DNA阳性也不能诊断MP感染需结合临床进行判断。此外还受不同标本类型、采样部位、采样人和实验室采用实验方法等因素影响，目前还没有统一标准，给实验室诊断方法的评估带来一定困难；血清学方法是我国诊断MP感染常用方法，实验方法包括补体结合实验(CFT)、明胶颗粒凝集试验(PA)和ELISA等方法。CFT整体敏感度较差，检测抗体的特异性不高，而且易出现交叉反应，造成假阳性，目前临床上已经很少使用。PA实验和ELISA的灵敏度和特异性都明显优于CFT，被一些国家广泛应用于临床，并且与分子生物学结果有较好的一致性，但是，商品化的血清学方法检测MP感染都是手工法，操作比较繁琐和耗时长，其敏感度还受实验室条件和实验人员的技术等影响。本实验使用的标本类型是末梢全血或者血清，成本低，对儿童的创伤更少，标本更容易采集，从医学的心理学角度来说比抽血测定MP更容易被患儿的家属接受。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种肺炎支原体片段、包含其的试剂盒及试剂盒的使用方法,本发明能够运用在全自动生化仪，具有高灵敏度高、检测速度快、结果稳定、线性范围广、重复好且易于标准化和标本采集容易且标本用量少等优点，能够为临床肺炎支原体感染诊断提供一种早期、快速、灵敏度高和特异性好的新方法，从医学的心理学角度来说比抽血测定MP更容易被患儿的家属接受。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种检测肺炎支原体的试剂盒，所述试剂盒包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括第一缓冲物、第一稳定剂、第一保护剂第一防腐剂、增浊剂和水，所述R2试剂包括肺炎支原体抗原、聚苯乙烯胶乳微球、第二缓冲物、第二稳定剂、第二保护剂、第二防腐剂和水。

本发明的有益效果是：缓冲物能够使溶液的pH值维持在稳定范围，保证溶液中物质能够有稳定的酸碱环境，稳定剂能保持试剂内的电荷平衡，保护剂是能够保护胶乳颗粒表面的抗体的试剂，肺炎支原体与聚苯乙烯胶乳微球和加进来的样本内抗体结合，其分光光度值和样本所含抗体浓度成正比，从而显示样本所含抗原浓度，增浊剂能够增加溶液浊度，增加测试反应的灵敏度、缩短了反应时间，利于后续分光光度的检测，防腐剂在不影响后续反应的同时能够起到杀菌防腐作用，在上述试剂的反应体系中，肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合物与样本中抗体发生抗原抗体反应，在增浊剂的作用下，迅速形成免疫复合物微球，使反应体系出现浊度，这种浊度能够被仪器检测，并且用吸光度表示，在一定线性范围内，其吸光度值与样本中肺炎支原体抗体浓度成正比，从而检测出样本中肺炎支原体抗体的浓度。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：

进一步，所述肺炎支原体的抗原包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3中至少一个片段。

采用上述进一步方案的有益效果是提供肺炎支原体抗原片段，能够与血液中抗体相结合，通过分光光度值的变化跟血液抗体浓度成正比从而检测出抗体浓度。

进一步，所述肺炎支原体的抗原包含肺炎支原体细胞膜成分。

采用上述进一步方案的有益效果是提供肺炎支原体抗原，能够与血液中抗体相结合，通过分光光度值的变化跟血液抗体浓度成正比从而检测出抗体浓度。

进一步，所述肺炎支原体的抗原包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的突变、插入或缺失形成具有肺炎支原抗原性的蛋白片段。

进一步，所述第一缓冲物为Hepes、Tris—HCl、MOPS、PBS、甘氨酸、绷砂中的任一种，所述第一缓冲物在所述R1试剂中浓度范围为25-500mmol/L；所述第二缓冲物为PBS、绷砂、甘氨酸、Hepes、GOODS、MOPS、MES中的任一种，所述第二缓冲物在所述R2试剂中浓度范围为25-50mmol/L，所述稳定剂l选自KCl、NaCl、CaCl中的任一种，所述第一稳定剂在所述R1试剂中的质量浓度为0.5％-10％；所述第二稳定剂包括离子稳定剂和非离子稳定剂，所述离子稳定剂为NaCl、KCl、Na₂C0₃、Na₂S0₄、K₂S0₄,中的任一种，所述非离子稳定剂为Tween20或Tergitol NP9，所述离子稳定剂在所述R2试剂中的浓度为20-25mol/L，所述非离子稳定剂在所述R2试剂中的质量浓度均为0.01-1％，所述第一保护剂为牛血清白蛋白，所述第一保护剂在所述R1试剂的质量浓度为0.1-10％；所述第二保护剂为牛血清白蛋白，所述第二保护剂在所述R2试剂的质量浓度均为0.1-1％。

采用上述进一步方案的有益效果是合适的缓冲物质的选择，具有更佳的缓冲效果能够使溶液pH值保持稳定，有利于物质的保存和反应，合适的稳定剂能够保持溶液电荷的稳定，R2中采用离子稳定剂和悬浮稳定剂结合使用，使试剂的电荷平衡状态，提高了肺炎支原体胶乳增强免疫比浊试剂盒的稳定性，使得肺炎支原体胶乳增强免疫比浊试剂盒的稳定性可达18个月，合适的保护剂的选择能够保护溶液中的胶乳颗粒表面的抗体，有利于后续反应。

进一步，所述聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基或环氧基，所述聚苯乙烯乳胶微球的粒径为100-600nm，所述聚苯乙烯胶乳微球和所述支原体通过共价交联方式连接，所述聚苯乙烯乳胶微球在所述R2试剂中的质量浓度为0.01％-1％，所述肺炎支原体在所述R2试剂中的质量浓度为0.001％-0.1％。

采用上述进一步方案的有益效果是表面官能团决定聚苯乙烯乳胶微球的性质，使肺炎支原体和抗体很好的结合，采用直径为100-600nm的聚苯乙烯胶乳颗粒，具有较大的颗粒，增加了血液中肺炎支原体抗体和肺炎支原体抗原反应时的浊度，从而增加测试反应的灵敏度、缩短了反应时间。

进一步，所述第一防腐剂为叠氮钠、硫柳求、ProClin300中的任一种；所述第二防腐剂为叠氮钠、硫柳求、ProClin300中的任一种，所述第一防腐剂在所述R1试剂中的质量浓度为0.01％-1％，所述第二防腐剂在所述R2试剂中的质量浓度为0.01％-1％，所述增浊剂为PEG8000、PEG4000、PEG2000、葡聚糖中的任一种，所述增浊剂在所述R1试剂中的质量浓度为0.01-1％。

采用上述进一步方案的有益效果是合适的增浊剂能够增加溶液浊度，增加测试反应的灵敏度、缩短了反应时间，利于后续分光光度的检测，合适的防腐剂在不影响后续反应的同时能够起到杀菌防腐作用。

进一步，所述R1试剂的制备方法为称取对应量的第一缓冲物、第一稳定剂、增浊剂、第一防腐剂、第一保护剂之后搅拌混合均匀再用水定容，即得所述R1试剂；

所述R2试剂的制备方法包括，

肺炎支原体及聚苯乙烯胶乳微球的预处理：称量所述第二缓冲物加入对应量的水配制成pH值范围为5-9.6的缓冲液，用所述缓冲液将肺炎支原体稀释,得到肺炎支原体稀释液；将所述聚苯乙烯胶乳微球用蒸馏水离心3次，去掉上清，得到洗涤后聚苯乙烯胶乳微球；将所述洗涤后聚苯乙烯胶乳微球用所述缓冲液稀释得到聚苯乙烯胶乳微球稀释液,加入活化物质,在室温下搅拌反应,反应结束后进行二次离心去上清,得到活化后聚苯乙烯胶乳微球，用缓冲液重悬浮；

肺炎支原体-聚苯乙烯胶乳微球混合物的制备：将所述活化后聚苯乙烯胶乳微球加入到所述所述肺炎支原体抗原稀释液中，室温下二次搅拌反应，再加入终止物终止反应得到肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合液，将得到的所述肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合液三次离心，去掉上清得到肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合物；

R2试剂的制备：用所述缓冲液洗涤所述肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合物，进行四次离心3次，去掉上清，最后加入对应量的第二缓冲物、第二防腐剂、第二稳定剂、第二保护剂和水搅拌混合均匀即得所述R2试剂。

采用上述进一步方案的有益效果是合理的步骤能够发挥每种物质在溶液中的作用，能够显著提高实验的准确性。

进一步，所述肺炎支原体及聚苯乙烯胶乳微球的预处理所述肺炎支原体抗原稀释液的肺炎支原体浓度为2mg/ml，所述离心速率为15000rpm，所述离心时间为10min，所述聚苯乙烯胶乳微球稀释液中所述聚苯乙烯胶乳微球质量浓度为1％，所述活化物质为EDC，所述活化物质在所述聚苯乙烯胶乳微球稀释液中的浓度为10mg/mL，所述搅拌反应时间为30min；所述肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合物的制备所述二次搅拌反应时间为2h，所述终止物为牛血清蛋白，所述终止物在所述肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合液中的浓度为25g/L。

采用上述进一步方案的有益效果是合适的实验参数能够使每种物质合适的浓度能够增加各种物质的适配性，合理的离心时间和离心速率能够在分离物质的同时节省能源，EDC能够对聚苯乙烯胶乳微球起到很好的活化作用。

进一步，所述活化物质还包括NHS，所述NHS在所述肺炎支原体-聚苯乙烯胶乳微球混合液中的浓度为0.01g/L。

采用上述进一步方案的有益效果是加入NHS，能够对聚苯乙烯胶乳微球起到更好的活化作用，进一步增强聚苯乙烯胶乳微球的活性。

附图说明

图1为本发明标准曲线示意图；

图2为本发明标准曲线示意图；

图3为本发明标准曲线示意图

图4为本发明标准曲线示意图；

图5为本发明标准曲线示意图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

如图1所示，本发明实施例1标准曲线示意图；

图2为本发明实施例2标准曲线示意图；

图3是本发明实施例3标准曲线示意图；

图4是本发明实施例4标准曲线示意图；

图5是本发明实施例5标准曲线示意图。

肺炎支原体和聚苯乙烯胶乳微球通过化学键相连，如二步偶联。

实施例1

肺炎支原体P1乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒的制备和检测

(1)试剂R1的制备：

称取23.83gHepes、9gNaCl、15gPEG8000、0.5g叠氮钠、5g牛血清白蛋白，调节pH至7.4,定溶1L即得试剂R1。

(2)试剂R2的制备：

第一步：用0.02M/L的MES缓冲液将人肺炎支原体细胞膜成分(肺炎支原体由中国医学科学院惠赠，通过处理得到细胞膜成分)稀释至浓度为2mg/ml的肺炎支原体细胞膜成分稀释液；聚苯乙烯胶乳微球(136nm)用蒸馏水洗涤3次，去上清。

第二步：再用pH为5.3、浓度为0.02M/L的MES缓冲液将上述洗涤过的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％。向1L上述胶乳稀释液中加入O.O1g的EDC,在室温下搅拌反应30min,反应结束后15000rpm的转速离心15分钟去上清，用0.02M/L的MES缓冲液重悬浮，重复2次，除去未反应的EDC,然后加入步骤一得到的人肺炎支原体细胞膜成分稀释液，室温下搅拌反应2h后，再加入50g牛血清白蛋白终止反应，将得到的反应液于15000rpm的转速下用PBS缓冲液离心15分钟去上清，用PBS缓冲液重悬浮，重复2次，再加入5g牛血清白蛋白、0.5g叠氮钠、9gNaCl和80g庶糖，搅拌混合均匀即得试剂R2。

(3)检测

上述实施例制备的试剂，上述R2用PBS再稀释4倍，用蒸馏水把标准品(浓度：4mg/ml默赛飞公司)稀释成6个不同浓度，分别为0.5mg/ml，1mg/ml,2mg/ml，3mg/ml，4mg/ml。测定仪器为酶标仪；测定条件：主波长：490nm,副波长：630nm；分析类型：两点终点法；测定方法：校准品10uL,再加入120uL的试剂R1混匀,37℃恒温2min,，然后加入40ul试剂R2混匀,37℃孵育2分后读取吸光度A，进行多点定标，并用样条函数进行计算。

样本通过其吸光度变化，与标准曲线进行对比即可得到样本中MP抗体浓度。

实施例2

肺炎支原体P116乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒的制备和检测

(1)试剂R1的制备：

(2)试剂R2的制备：

第一步：用0.02M/L的MES缓冲液将人肺炎支原体抗原P116稀释至浓度为2mg/ml的肺炎支原体抗原P116稀释液；聚苯乙烯胶乳微球用蒸馏水洗涤。

第二步：再用pH为6.0浓度为0.02M/L的MES缓冲液将上述洗涤过的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％。向1L上述胶乳稀释液中加入O.O1g的EDC,在室温下搅拌反应30min,反应结束后15000rpm的转速离心15分钟去上清，用0.02M/L的MES缓冲液重悬浮，重复2次，除去未反应的EDC,然后加入步骤一得到的人肺炎支原体抗原P116稀释液，室温下搅拌反应2h后，再加入50g牛血清白蛋白终止反应，将得到的反应液于15000rpm的转速下用PBS缓冲液离心15分钟去上清，用PBS缓冲液重悬浮，重复2次，再加入5g牛血清白蛋白、0.5g叠氮钠、9gNaCl和80g庶糖，搅拌混合均匀即得试剂R2。

(3)检测

实施例3

肺炎支原体P30乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒的制备和检测

(1)试剂R1的制备：

(2)试剂R2的制备：

第一步：用0.02M/L的MES缓冲液将人肺炎支原体抗原P30稀释至浓度为2mg/ml的肺炎支原体抗原P30稀释液；聚苯乙烯胶乳微球(136nm)用蒸馏水洗涤。

第二步：再用pH为5.0、浓度为0.02M/L的MES缓冲液将上述洗涤过的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％。向1L上述胶乳稀释液中加入O.O1g的EDC,在室温下搅拌反应30min,反应结束后15000rpm的转速离心15分钟去上清，用0.02M/L的MES缓冲液重悬浮，重复2次，除去未反应的EDC,然后加入步骤一得到的人肺炎支原体抗原P30稀释液，室温下搅拌反应2h后，再加入50g牛血清白蛋白终止反应，将得到的反应液于15000rpm的转速下用PBS缓冲液离心15分钟去上清，用PBS缓冲液重悬浮，重复2次，再加入5g牛血清白蛋白、0.5g叠氮钠、9gNaCl和80g庶糖，搅拌混合均匀即得试剂R2。

(3)检测

实施例4

肺炎支原体组合原体(P1+P30+P116)乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒的制备和检测

(1)试剂R1的制备：

(2)试剂R2的制备：

第一步：用0.02M/L的MES缓冲液将肺炎支原体组合原体(P1+P30+P116)稀释至浓度为2mg/ml的肺炎支原体组合抗原(P1+P30+P116)稀释液；聚苯乙烯胶乳微球(136nm)用蒸馏水洗涤。

第二步：再用pH为6.0、浓度为0.02M/L的MES缓冲液将上述洗涤过的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％。向1L上述胶乳稀释液中加入O.O1g的EDC,在室温下搅拌反应30min,反应结束后15000rpm的转速离心15分钟去上清，用0.02M/L的MES缓冲液重悬浮，重复2次，除去未反应的EDC,然后加入步骤一得到的人肺炎支原体组合抗原(P1+P30+P116)稀释液，室温下搅拌反应2h后，再加入50g牛血清白蛋白终止反应，将得到的反应液于15000rpm的转速下用PBS缓冲液离心15分钟去上清，用PBS缓冲液重悬浮，重复2次，再加入5g牛血清白蛋白、0.5g叠氮钠、9gNaCl和80g庶糖，搅拌混合均匀即得试剂R2。

(3)检测

实施例5

一种肺炎支原体乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒，包含如下制备步骤：

(1)试剂R1的制备：

(2)试剂R2的制备：

第一步：用0.02M/L的MES缓冲液将肺炎支原体P1稀释至浓度为2mg/ml的肺炎支原体P1稀释液；聚苯乙烯胶乳微球(197nm)用蒸馏水洗涤。

第二步：再用pH为5.3、浓度为0.02M/L的MES缓冲液将上述洗涤过的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％。向1L上述胶乳稀释液中加入O.O1g的EDC,在室温下搅拌反应30min,反应结束后12000rpm的转速离心12分钟去上清，用0.02M/L的MES缓冲液重悬浮，重复2次，除去未反应的EDC,然后加入步骤一得到的人肺炎支原体P1稀释液，室温下搅拌反应2h后，再加入50g牛血清白蛋白终止反应，将得到的反应液于12000rpm的转速下用PBS缓冲液离心12分钟去上清，用PBS缓冲液重悬浮，重复2次，再加入5g牛血清白蛋白、0.5g叠氮钠、9gNaCl和80g庶糖，搅拌混合均匀即得试剂R2。

(3)检测

上述实施例制备的试剂，上述R2用PBS再稀释4倍，用蒸馏水把标准品(浓度：4mg/ml默赛飞公司)稀释成6个不同浓度，分别为0.5mg/ml，1mg/ml,2mg/ml，3mg/ml，4mg/ml。测定仪器:贝克曼AU5800；测定条件：主波长：490nm,副波长：630nm；分析类型：两点终点法；测定方法：校准品10uL,再加入120uL的试剂R1混匀,37℃恒温2min,，然后加入40ul试剂R2混匀,37℃孵育2分后读取吸光度A，进行多点定标，并用样条函数进行计算。

对比例1

试剂：本专利实例5中制备的试剂盒和购买富士瑞必欧株式会社公司生产的肺炎支原体抗体检测试剂盒(被动凝集法)。

标本：20份阴性样本和20份阳性样本均由深圳市龙华区中心医院检验科提供。

实验方法：本专利试剂盒按照实施例5中的操作方法测定20份阴性样本和20份阳性样本；肺炎支原体抗体检测试剂盒(被动凝集法)按照试剂说明书操作测定20份阴性样本和20份阳性样本。结果判断按照试剂说明书。

实验结果：见表1

表1.本专利制备试剂盒与肺炎支原体抗体检测试剂盒(被动凝集法)比对结果

第一缓冲物为Hepes、Tris—HCl、MOPS、PBS、甘氨酸、绷砂中的任一种；第二缓冲物为PBS、绷砂、甘氨酸、Hepes、GOODS、MOPS、MES中的任一种；稳定剂l选自KCl、NaCl、CaCl中的任一种；第二稳定剂包括离子稳定剂和非离子稳定剂，离子稳定剂为NaCl、KCl、Na₂C0₃、Na₂S0₄、K₂S0₄,中的任一种，非离子稳定剂为Tween20或Tergitol NP9，聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基或环氧基，聚苯乙烯乳胶微球的粒径为100-600nm，第一防腐剂为叠氮钠、硫柳求、ProClin300中的任一种；第二防腐剂为叠氮钠、硫柳求、ProClin300中的任一种，所述增浊剂为PEG8000、PEG4000、PEG2000、葡聚糖中的任一种均能实现上述实施例中的检测。

SEQ ID NO:1为肺炎支原体P1抗原

SEQ ID NO:2为肺炎支原体P116抗原

SEQ ID NO:3为肺炎支原体P30抗原。

SEQ ID NO:1

SEQ ID NO:2

SEQ ID NO:3

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 廖朝晖

<120> 一种检测肺炎支原体的试剂盒

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1635

<212> PRT

<213> 肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)

<400> 1

Met His Gln Thr Lys Lys Thr Ala Leu Ser Lys Ser Thr Trp Ile Leu

1 5 10 15

Ile Leu Thr Ala Thr Ala Ser Leu Ala Thr Gly Leu Thr Val Val Gly

20 25 30

His Phe Thr Ser Thr Thr Thr Thr Leu Lys Arg Gln Gln Phe Ser Tyr

35 40 45

Thr Arg Pro Asp Glu Val Ala Leu Arg His Thr Asn Ala Ile Asn Pro

50 55 60

Arg Leu Thr Pro Trp Thr Tyr Arg Asn Thr Ser Phe Ser Ser Leu Pro

65 70 75 80

Leu Thr Gly Glu Asn Pro Gly Ala Trp Ala Leu Val Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Ala Lys Gly Ile Thr Ala Gly Ser Gly Ser Gln Gln Thr Thr Tyr Asp

100 105 110

Pro Thr Arg Thr Glu Ala Ala Leu Thr Ala Ser Thr Thr Phe Ala Leu

115 120 125

Arg Arg Tyr Asp Leu Ala Gly Arg Ala Leu Tyr Asp Leu Asp Phe Ser

130 135 140

Lys Leu Asn Pro Gln Thr Pro Thr Arg Asp Gln Thr Gly Gln Ile Thr

145 150 155 160

Phe Asn Pro Phe Gly Gly Phe Gly Leu Ser Gly Ala Ala Pro Gln Gln

165 170 175

Trp Asn Glu Val Lys Asn Lys Val Pro Val Glu Val Ala Gln Asp Pro

180 185 190

Ser Asn Pro Tyr Arg Phe Ala Val Leu Leu Val Pro Arg Ser Val Val

195 200 205

Tyr Tyr Glu Gln Leu Gln Arg Gly Leu Ala Leu Pro Asn Gln Gly Ser

210 215 220

Ser Ser Gly Ser Asp Ser Thr Asn Gln Thr Gly Ala Met Phe Gly Leu

225 230 235 240

Lys Val Lys Asp Ala Thr Val Asp Ser Ser Lys Gln Ser Thr Glu Ser

245 250 255

Leu Lys Gly Glu Glu Ser Ser Ser Ser Ser Thr Thr Ser Ser Thr Ser

260 265 270

Thr Thr Gln Arg Gly Gly Ser Ser Asn Glu Asn Lys Val Lys Ala Leu

275 280 285

Gln Val Ala Val Lys Lys Lys Ser Gly Ser Gln Gly Asn Ser Gly Asp

290 295 300

Gln Gly Thr Glu Gln Val Glu Leu Glu Ser Asn Asp Leu Ala Asn Ala

305 310 315 320

Pro Ile Lys Arg Gly Ser Asn Asn Asn Gln Gln Val Gln Leu Lys Ala

325 330 335

Asp Asp Phe Gly Thr Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Gln Asp

340 345 350

Gly Thr Pro Thr Pro Trp Thr Pro Trp Leu Thr Thr Glu Gln Ile His

355 360 365

Asn Asp Pro Ala Lys Phe Ala Ala Ser Ile Leu Ile Leu Tyr Asp Ala

370 375 380

Pro Tyr Ala Arg Asn Arg Thr Ala Ile Asp Arg Val Asp His Leu Asp

385 390 395 400

Pro Lys Ala Met Thr Ala Asn Tyr Pro Pro Ser Trp Arg Thr Pro Lys

405 410 415

Trp Asn His His Gly Leu Trp Asp Trp Lys Ala Arg Asp Val Leu Leu

420 425 430

Gln Thr Thr Gly Phe Phe Asn Pro Arg Arg His Pro Glu Trp Phe Asp

435 440 445

Gly Gly Gln Thr Val Ala Asp Asn Glu Lys Thr Gly Phe Asp Val Asp

450 455 460

Asn Ser Glu Asn Thr Lys Gln Gly Phe Gln Lys Glu Ala Asp Ser Asp

465 470 475 480

Lys Ser Ala Pro Ile Ala Leu Pro Phe Glu Ala Tyr Phe Ala Asn Ile

485 490 495

Gly Asn Leu Thr Trp Phe Gly Gln Ala Leu Leu Val Phe Gly Gly Asn

500 505 510

Gly His Val Thr Lys Ser Ala His Thr Ala Pro Leu Ser Ile Gly Val

515 520 525

Phe Arg Val Arg Tyr Asn Ala Thr Gly Thr Ser Ala Thr Val Thr Gly

530 535 540

Trp Pro Tyr Ala Leu Leu Phe Ser Gly Met Val Asn Lys Gln Thr Asp

545 550 555 560

Gly Leu Lys Asn Leu Pro Phe Asn Asn Asn Arg Trp Phe Glu Tyr Val

565 570 575

Pro Arg Met Ala Val Ala Gly Ala Lys Phe Val Gly Arg Glu Leu Val

580 585 590

Leu Ala Gly Thr Ile Thr Met Gly Asp Thr Ala Thr Val Pro Arg Leu

595 600 605

Leu Tyr Asp Glu Leu Glu Ser Asn Leu Asn Leu Val Ala Gln Gly Gln

610 615 620

Gly Leu Leu Arg Glu Asp Leu Gln Leu Phe Thr Pro Tyr Gly Trp Ala

625 630 635 640

Asn Arg Pro Asp Leu Pro Ile Gly Ala Trp Ser Ser Ser Ser Ser Ser

645 650 655

Ser His Asn Ala Pro Tyr Tyr Phe His Asn Asn Pro Asp Trp Gln Asp

660 665 670

Arg Pro Ile Gln Ser Val Val Asp Ala Phe Ile Lys Pro Trp Glu Asp

675 680 685

Lys Asn Gly Lys Asp Asp Ala Lys Tyr Ile Tyr Pro Tyr Arg Tyr Ser

690 695 700

Gly Met Trp Ala Trp Gln Val Tyr Asn Trp Ser Asn Lys Leu Thr Asp

705 710 715 720

Gln Pro Leu Ser Ala Asp Phe Val Asn Glu Asn Ala Tyr Gln Pro Asn

725 730 735

Ser Leu Phe Ala Ala Ile Leu Asn Pro Glu Leu Leu Ala Ala Leu Pro

740 745 750

Asp Lys Val Lys Tyr Gly Lys Glu Asn Glu Phe Ala Ala Asn Glu Tyr

755 760 765

Glu Arg Phe Asn Gln Lys Leu Thr Val Ala Pro Thr Gln Gly Thr Asn

770 775 780

Trp Ser His Phe Ser Pro Thr Leu Ser Arg Phe Ser Thr Gly Phe Asn

785 790 795 800

Leu Val Gly Ser Val Leu Asp Gln Val Leu Asp Tyr Val Pro Trp Ile

805 810 815

Gly Asn Gly Tyr Arg Tyr Gly Asn Asn His Arg Gly Val Asp Asp Ile

820 825 830

Thr Ala Pro Gln Thr Ser Ala Gly Ser Ser Ser Gly Ile Ser Thr Asn

835 840 845

Thr Ser Gly Ser Arg Ser Ser Leu Pro Thr Phe Ser Asn Ile Gly Val

850 855 860

Gly Leu Lys Ala Asn Val Gln Ala Thr Leu Gly Gly Ser Gln Thr Met

865 870 875 880

Ile Thr Gly Gly Ser Pro Arg Arg Thr Leu Asp Gln Ala Asn Leu Gln

885 890 895

Leu Trp Thr Gly Ala Gly Trp Arg Asn Asp Lys Ala Ser Ser Gly Gln

900 905 910

Ser Asp Asp His Thr Lys Phe Thr Ser Ala Thr Gly Met Gly Gln Gln

915 920 925

Glu Gln Ser Gly Thr Ser Ala Gly Asn Pro Asp Ser Leu Lys Gln Asp

930 935 940

Lys Ile Ser Lys Ser Gly Asp Ser Leu Thr Thr Gln Asp Gly Asn Ala

945 950 955 960

Met Asp Gln Gln Glu Ala Thr Asn Tyr Thr Asn Leu Pro Pro Asn Leu

965 970 975

Thr Pro Thr Ala Asp Trp Pro Asn Ala Leu Ser Phe Thr Asn Lys Asn

980 985 990

Asn Ala Gln Arg Ala Gln Leu Phe Leu Arg Gly Leu Leu Gly Ser Ile

995 1000 1005

Pro Val Leu Val Asn Lys Ser Gly Gln Asp Asp Asn Ser Lys Phe Lys

1010 1015 1020

Ala Glu Asp Gln Lys Trp Ser Tyr Thr Asp Leu Gln Ser Asp Gln Thr

1025 1030 1035 1040

Lys Leu Asn Leu Pro Ala Tyr Gly Glu Val Asn Gly Leu Leu Asn Pro

1045 1050 1055

Ala Leu Val Glu Thr Tyr Phe Gly Asn Thr Arg Ala Ser Gly Ser Gly

1060 1065 1070

Ser Asn Thr Thr Ser Ser Pro Gly Ile Gly Phe Lys Ile Pro Glu Gln

1075 1080 1085

Ser Gly Thr Asn Thr Thr Ser Lys Ala Val Leu Ile Thr Pro Gly Leu

1090 1095 1100

Ala Trp Thr Pro Gln Asp Val Gly Asn Leu Val Val Ser Gly Thr Ser

1105 1110 1115 1120

Phe Ser Phe Gln Leu Gly Gly Trp Leu Val Thr Phe Thr Asp Phe Ile

1125 1130 1135

Lys Pro Arg Ala Gly Tyr Leu Gly Leu Gln Leu Thr Gly Leu Asp Ala

1140 1145 1150

Ser Asp Ala Thr Gln Arg Ala Leu Ile Trp Ala Pro Arg Pro Trp Ala

1155 1160 1165

Ala Phe Arg Gly Ser Trp Val Asn Arg Leu Gly Arg Val Glu Ser Val

1170 1175 1180

Trp Asp Leu Lys Gly Val Trp Ala Asp Gln Ala Gln Ser Asp Ser Gln

1185 1190 1195 1200

Gly Ser Thr Thr Thr Ala Thr Arg Asp Ala Leu Pro Glu His Pro Asn

1205 1210 1215

Ala Leu Ala Phe Gln Val Ser Val Val Glu Ala Ser Ala Tyr Lys Pro

1220 1225 1230

Asn Thr Ser Ser Gly Gln Thr Gln Ser Thr Asn Ser Ser Pro Tyr Leu

1235 1240 1245

His Leu Val Lys Pro Lys Lys Val Ile Gln Ser Asp Lys Leu Asp Asp

1250 1255 1260

Asp Leu Lys Asn Leu Leu Asp Pro Asn Gln Val Arg Thr Lys Leu Arg

1265 1270 1275 1280

Gln Ser Phe Gly Thr Asp His Ser Thr Gln Pro Gln Pro Gln Ser Leu

1285 1290 1295

Lys Thr Thr Thr Pro Val Phe Gly Thr Ser Ser Gly Asn Leu Ser Ser

1300 1305 1310

Val Leu Ser Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gln

1315 1320 1325

Ser Gly Val Asp Leu Ser Pro Val Glu Lys Val Ser Gly Trp Leu Val

1330 1335 1340

Gly Gln Leu Pro Ser Thr Ser Asp Gly Asn Thr Ser Ser Thr Asn Asn

1345 1350 1355 1360

Leu Ala Pro Asn Thr Asn Thr Gly Asn Asp Val Val Gly Val Gly Arg

1365 1370 1375

Leu Ser Glu Ser Asn Ala Ala Lys Met Asn Asp Asp Val Asp Gly Ile

1380 1385 1390

Val Arg Thr Pro Leu Ala Glu Leu Leu Asp Gly Glu Gly Gln Thr Ala

1395 1400 1405

Asp Thr Gly Pro Gln Ser Val Lys Phe Lys Ser Pro Asp Gln Ile Asp

1410 1415 1420

Phe Asn Arg Leu Phe Thr His Pro Val Thr Asp Leu Phe Asp Pro Val

1425 1430 1435 1440

Thr Met Leu Val Tyr Asp Gln Tyr Ile Pro Leu Phe Ile Asp Ile Pro

1445 1450 1455

Ala Ser Val Asn Pro Lys Met Val Arg Leu Lys Val Leu Ser Phe Asp

1460 1465 1470

Thr Asn Glu Gln Ser Leu Gly Leu Arg Leu Glu Phe Phe Lys Pro Asp

1475 1480 1485

Gln Asp Thr Gln Pro Asn Asn Asn Val Gln Val Asn Pro Asn Asn Gly

1490 1495 1500

Asp Phe Leu Pro Leu Leu Thr Ala Ser Ser Gln Gly Pro Gln Thr Leu

1505 1510 1515 1520

Phe Ser Pro Phe Asn Gln Trp Pro Asp Tyr Val Leu Pro Leu Ala Ile

1525 1530 1535

Thr Val Pro Ile Val Val Ile Val Leu Ser Val Thr Leu Gly Leu Ala

1540 1545 1550

Ile Gly Ile Pro Met His Lys Asn Lys Gln Ala Leu Lys Ala Gly Phe

1555 1560 1565

Ala Leu Ser Asn Gln Lys Val Asp Val Leu Thr Lys Ala Val Gly Ser

1570 1575 1580

Val Phe Lys Glu Ile Ile Asn Arg Thr Gly Ile Ser Gln Ala Pro Lys

1585 1590 1595 1600

Arg Leu Lys Gln Thr Ser Ala Ala Lys Pro Gly Ala Pro Arg Pro Pro

1605 1610 1615

Val Pro Pro Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro Pro Val Gln Pro Pro Lys

1620 1625 1630

Lys Pro Ala

1635

<210> 2

<211> 1030

<212> PRT

<213> 肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)

<400> 2

Met Lys Leu Ser Ala Ile Ile Ser Leu Ser Val Ala Gly Thr Val Gly

1 5 10 15

Thr Thr Ala Val Val Val Pro Thr Thr Ile Thr Leu Val Asn Lys Thr

20 25 30

His Gln Val Glu His Glu Ser Glu Gln Ser Asp Phe Gln Asp Ile Arg

35 40 45

Phe Gly Leu Asn Ser Val Lys Leu Pro Lys Ala Gln Pro Ala Ala Ala

50 55 60

Thr Arg Ile Thr Val Glu Asn Gly Thr Asp Lys Leu Val Asn Tyr Lys

65 70 75 80

Ser Ser Pro Gln Gln Leu Phe Leu Ala Lys Asn Ala Leu Lys Asp Lys

85 90 95

Leu Gln Gly Glu Phe Asp Lys Phe Leu Ser Asp Ala Lys Ala Phe Pro

100 105 110

Ala Leu Thr Ala Asp Leu Gln Glu Trp Val Asp Gln Gln Leu Phe Asn

115 120 125

Pro Asn Gln Ser Phe Phe Asp Leu Ser Ala Pro Arg Ser Asn Phe Thr

130 135 140

Leu Ser Ser Asp Lys Lys Ala Ser Leu Asp Phe Ile Phe Arg Phe Thr

145 150 155 160

Asn Phe Thr Glu Ser Val Gln Leu Leu Lys Leu Pro Glu Gly Val Ser

165 170 175

Val Val Val Asp Ser Lys Gln Ser Phe Asp Tyr Tyr Val Asn Ala Ser

180 185 190

Ala Gln Lys Leu Leu Val Leu Pro Leu Ser Leu Pro Asp Tyr Thr Leu

195 200 205

Gly Leu Asn Tyr Met Phe Asp His Ile Thr Leu Asn Gly Lys Val Val

210 215 220

Asn Lys Phe Ser Phe Asn Pro Phe Lys Thr Asn Leu Asn Leu Ala Phe

225 230 235 240

Ser Asn Val Tyr Asn Gly Val Asp Val Phe Glu Ala Gln Lys Asn Leu

245 250 255

Val Gly Lys Gly Lys Tyr Leu Asn Thr His Val Lys Ala Glu Asp Val

260 265 270

Lys Lys Asp Val Asn Ala Asn Ile Lys Asn Gln Phe Asp Ile Ala Lys

275 280 285

Ile Ile Ala Glu Leu Met Gly Lys Ala Leu Lys Glu Phe Gly Asn Gln

290 295 300

Gln Glu Gly Gln Pro Leu Ser Phe Leu Lys Val Met Asp Lys Val Lys

305 310 315 320

Glu Asp Phe Glu Lys Leu Phe Asn Leu Val Arg Pro Gly Leu Gly Lys

325 330 335

Phe Val Lys Gly Leu Ile Gln Ser Ser Ser Gln Ala Glu Asn Lys Ile

340 345 350

Thr Val Tyr Lys Leu Ile Phe Asp Asn Lys Lys Thr Ile Leu Asn Leu

355 360 365

Leu Lys Glu Leu Ser Ile Pro Glu Leu Asn Ser Ser Leu Gly Leu Val

370 375 380

Asp Val Leu Phe Asp Val Ile Thr Asp Ser Asp Gly Leu Tyr Glu Arg

385 390 395 400

Leu Gln Ser Phe Lys Asp Leu Ile Val Pro Ala Val Lys Thr Asn Glu

405 410 415

Lys Thr Ala Ala Leu Ser Pro Leu Ile Glu Glu Leu Leu Thr Gln Lys

420 425 430

Asp Thr Tyr Val Phe Asp Leu Ile Gln Lys His Lys Gly Ile Leu Thr

435 440 445

Asn Leu Leu Lys Asn Phe Leu Ala Asp Phe Gln Lys Ser Thr Pro Phe

450 455 460

Met Ala Asp Gln Val Ala Ile Phe Thr Glu Leu Phe Asp Asn Glu Gly

465 470 475 480

Ala Phe Asp Leu Phe Gly Glu Ala Asp Phe Val Asp Lys Ile Ala Glu

485 490 495

Leu Phe Leu Thr Lys Arg Thr Val Lys Asn Gly Glu Lys Ile Glu Thr

500 505 510

Lys Asp Ser Leu Leu Val Thr Ser Leu Lys Ser Leu Leu Gly Glu Lys

515 520 525

Val Ala Ala Leu Asp Asp Leu Leu Asp Ser Tyr Ile Phe Lys Asn Glu

530 535 540

Leu Leu Asn Arg Ser Val Glu Val Ala Lys Ala Glu Ala Lys Asp Thr

545 550 555 560

Lys Gly Ala Thr Asp Tyr Lys Lys Glu Gln Ala Lys Ala Leu Lys Lys

565 570 575

Leu Phe Lys His Ile Gly Glu Asn Thr Leu Ser Lys Thr Asn Leu Asp

580 585 590

Lys Ile Thr Leu Lys Glu Val Lys Asn Thr Glu Asn Val Glu Leu Glu

595 600 605

Glu Thr Glu Thr Thr Leu Lys Val Lys Lys Leu Asp Val Glu Tyr Lys

610 615 620

Val Glu Leu Gly Asn Phe Glu Ile Lys Asn Gly Leu Ile Lys Ala Met

625 630 635 640

Leu Glu Phe Leu Pro Asp Pro Lys Asp Leu Glu Thr Thr Leu Asp Lys

645 650 655

Leu Leu Phe Lys Gly Glu Ser Tyr Lys Ala Met Lys Asp Lys Tyr Ile

660 665 670

Lys Glu Gly Phe Pro Gly Tyr Gly Trp Ala Lys Gly Val Val Pro Gly

675 680 685

Ala Phe Glu Ser Ile Glu Asn Thr Phe Lys Ser Ala Ile Asp Lys Thr

690 695 700

Lys Ser Ile Arg Asp Leu Phe Gly Asp Met Leu Phe Gly Asn Asp Leu

705 710 715 720

Ser Ser Val Lys Glu Thr Asp Ser Phe Ile Thr Leu Gly Gly Ser Phe

725 730 735

Asp Ile Lys Tyr Gly Gly Glu Asn Leu Asn Val Leu Pro Ala Tyr Tyr

740 745 750

Ser Leu Ile Asn Ser Glu Ile Gly Tyr Gln Ile Ile Gly Val Asp Thr

755 760 765

Thr Ile Asp Ala Thr Lys Val Lys Val Glu Leu Lys Asn Lys Glu Tyr

770 775 780

Lys Gly Lys Ser Pro Ala Ile Asn Gly Gln Val Lys Leu Ser Gln Ser

785 790 795 800

Phe Phe Asn Val Trp Thr Asn Met Phe Asp Ser Ile Thr Lys Gln Ile

805 810 815

Phe Gln Lys Lys Tyr Glu Phe Lys Asp Asn Ile Gln Val Phe Ala Arg

820 825 830

Asn Glu Asp Asn Thr Ser Arg Leu Glu Leu Asp Ile Ser Asp Pro Glu

835 840 845

Gln Arg Val Ile Pro Phe Ala Phe Val Asp Gly Phe Gly Ile Gln Leu

850 855 860

Lys Ala Val Asp Lys Asn Ile Thr Lys Glu Ala Gly Asn Thr Glu Pro

865 870 875 880

Lys Ser Pro Val Ile Gln Leu Tyr Glu Ala Leu Asn Lys Glu Lys Asp

885 890 895

Gln Lys Gln Gln Ser Lys Gln Ser Pro Lys Gln Leu Asp Thr Lys Thr

900 905 910

Gln Leu Gly Tyr Leu Leu Lys Leu Gly Asp Asn Trp Ser Lys Asp Asp

915 920 925

Tyr Lys Ser Leu Ile Asp Asp Thr Ile Ile Asn Asn Asn Tyr Leu Glu

930 935 940

Ala Ser Phe Asn Ser Lys Ile Thr Val Asp Arg Leu Gly Ile Pro Ile

945 950 955 960

Asp Leu Trp Leu Phe Lys Ile Trp Pro Lys Phe Asn Leu Glu Ile Pro

965 970 975

Met Gln Gly Ser Leu Gln Leu Tyr Ser Ser Ser Val Ile Phe Pro Tyr

980 985 990

Gly Ile Tyr Asp Thr Ser Val Gln Asp Ala Thr Lys Ile Val Lys Arg

995 1000 1005

Leu Asn Phe Thr Asp Met Gly Phe Lys Leu Asn Asp Pro Lys Pro Asn

1010 1015 1020

Phe Trp Phe Val Gly Phe

1025 1030

<210> 3

<211> 202

<212> PRT

<213> 肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)

<400> 3

Met Lys Leu Pro Pro Arg Arg Lys Leu Lys Leu Phe Leu Leu Ala Trp

1 5 10 15

Met Leu Val Leu Phe Ser Ala Leu Ile Val Leu Ala Thr Leu Ile Leu

20 25 30

Val Gln His Asn Asn Thr Glu Leu Thr Glu Val Lys Ser Glu Leu Ser

35 40 45

Pro Leu Asn Val Val Leu His Ala Glu Glu Asp Thr Val Gln Ile Gln

50 55 60

Gly Lys Pro Ile Thr Glu Gln Ala Trp Phe Ile Pro Thr Val Ala Gly

65 70 75 80

Cys Phe Gly Phe Ser Ala Leu Ala Ile Ile Leu Gly Leu Ala Ile Gly

85 90 95

Leu Pro Ile Val Lys Arg Lys Glu Lys Arg Leu Leu Glu Glu Lys Glu

100 105 110

Arg Gln Glu Gln Leu Ala Glu Gln Leu Gln Arg Ile Ser Ala Gln Gln

115 120 125

Glu Glu Gln Gln Ala Leu Glu Gln Gln Ala Ala Ala Glu Ala His Ala

130 135 140

Glu Ala Glu Val Glu Pro Ala Pro Gln Pro Val Pro Val Pro Pro Gln

145 150 155 160

Pro Gln Val Gln Ile Asn Phe Gly Pro Arg Thr Gly Phe Pro Pro Gln

165 170 175

Pro Gly Met Ala Pro Arg Pro Gly Met Gln Pro Pro Arg Pro Gly Met

180 185 190

Pro Pro Gln Pro Gly Phe Pro Pro Lys Arg

195 200

Claims

1.一种检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括第一缓冲物、第一稳定剂、第一保护剂第一防腐剂、增浊剂和水，所述R2试剂包括肺炎支原体抗原、聚苯乙烯胶乳微球、第二缓冲物、第二稳定剂、第二保护剂、第二防腐剂和水。

2.根据权利要求1所述一种检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，所述肺炎支原体的抗原包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3中至少一个片段。

3.根据权利要求1所述一种检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，所述肺炎支原体的抗原包含肺炎支原体细胞膜成分。

4.根据权利要求1所述一种检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，所述肺炎支原体的抗原包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的突变、插入或缺失形成具有肺炎支原抗原性的蛋白片段。

5.根据权利要求1-4任一项所述一种检测肺炎支原体的试剂盒,其特征在于，所述第一缓冲物为Hepes、Tris—HCl、MOPS、PBS、甘氨酸、绷砂中的任一种，所述第一缓冲物在所述R1试剂中浓度范围为25-500mmol/L；所述第二缓冲物为PBS、绷砂、甘氨酸、Hepes、GOODS、MOPS、MES中的任一种，所述第二缓冲物在所述R2试剂中浓度范围为25-50mmol/L，所述稳定剂l选自KCl、NaCl、CaCl中的任一种，所述第一稳定剂在所述R1试剂中的质量浓度为0.5％-10％；所述第二稳定剂包括离子稳定剂和非离子稳定剂，所述离子稳定剂为NaCl、KCl、Na₂CO₃、Na₂SO₄、K₂SO₄,中的任一种，所述非离子稳定剂为Tween20或Tergitol NP9，所述离子稳定剂在所述R2试剂中的浓度为20-25mol/L，所述非离子稳定剂在所述R2试剂中的质量浓度均为0.01-1％，所述第一保护剂为牛血清白蛋白，所述第一保护剂在所述R1试剂的质量浓度为0.1％-10％；所述第二保护剂为牛血清白蛋白，所述第二保护剂在所述R2试剂的质量浓度均为0.1％-1％。

6.根据权利要求5所述一种检测肺炎支原体的试剂盒,其特征在于，所述聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基或环氧基，所述聚苯乙烯乳胶微球的粒径为100-600nm，所述聚苯乙烯胶乳微球和所述支原体通过共价交联方式连接，所述聚苯乙烯乳胶微球在所述R2试剂中的质量浓度为0.01％-1％，所述肺炎支原体在所述R2试剂中的质量浓度为0.001％-0.1％。

7.根据权利要求6所述一种检测肺炎支原体的试剂盒,其特征在于，所述第一防腐剂为叠氮钠、硫柳求、ProClin300中的任一种；所述第二防腐剂为叠氮钠、硫柳求、ProClin300中的任一种，所述第一防腐剂在所述R1试剂中的质量浓度为0.01％-1％，所述第二防腐剂在所述R2试剂中的质量浓度为0.01％-1％，所述增浊剂为PEG8000、PEG4000、PEG2000、葡聚糖中的任一种，所述增浊剂在所述R1试剂中的质量浓度为0.01-1％。

8.根据权利要求7所述一种检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，

所述R1试剂的制备方法为称取对应量的第一缓冲物、第一稳定剂、增浊剂、第一防腐剂、第一保护剂之后搅拌混合均匀再用水定容，即得所述R1试剂；

所述R2试剂的制备方法包括，

肺炎支原体及聚苯乙烯胶乳微球的预处理：称量所述第二缓冲物加入对应量的水配制成pH值范围为5-9.6的缓冲液，用所述缓冲液将肺炎支原体稀释,得到肺炎支原体稀释液；将所述聚苯乙烯胶乳微球用蒸馏水离心3次，去掉上清，得到洗涤后聚苯乙烯胶乳微球；将所述洗涤后聚苯乙烯胶乳微球用所述缓冲液稀释得到聚苯乙烯胶乳微球稀释液,加入活化物质,在室温下搅拌反应,反应结束后进行二次离心去上清,得到活化后聚苯乙烯胶乳微球，用缓冲液重新悬浮；

9.根据权利要求8所述一种检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，所述肺炎支原体及聚苯乙烯胶乳微球的预处理所述肺炎支原体抗原稀释液的肺炎支原体浓度为2mg/ml，所述离心速率为15000rpm，所述离心时间为10min，所述聚苯乙烯胶乳微球稀释液中所述聚苯乙烯胶乳微球质量浓度为1％，所述活化物质为EDC，所述活化物质在所述聚苯乙烯胶乳微球稀释液中的浓度为10mg/mL，所述搅拌反应时间为30min；所述肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合物的制备所述二次搅拌反应时间为2h，所述终止物为牛血清蛋白，所述终止物在所述肺炎支原体抗原-聚苯乙烯胶乳微球混合液中的浓度为25g/L。

10.根据权利要求9所述一种检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，所述活化物质还包括NHS，所述NHS在所述肺炎支原体-聚苯乙烯胶乳微球混合液中的浓度为0.01g/L。