CN109331046B - 一种蟾酥的加工处理方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种蟾酥的加工处理方法，取蟾酥药材，粉碎成粉末，加含酶酸性水溶液进行处理，离心，去除上清液，得下层固体，干燥即得，本发明能去除蟾酥中非药效成分，相对提高蟾酥药材中华蟾毒基和酯蟾毒配基含量，可以大幅提高蟾酥药材合格率。

Description

一种蟾酥的加工处理方法
技术领域
本发明涉及中药材加工炮制技术领域，具体涉及一种蟾酥的加工处理方法。
背景技术
蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo buto gargarizans Gantor和黑眶蟾蜍Bufomelanostictus Schneider耳后腺及皮肤腺所分泌的白色浆液，经加工干燥而成。性味辛温；有毒；归心经。具有解毒消肿、开窍醒神、止痛之效。现代药理表明蟾酥具有强心作用、镇痛作用、平喘、镇咳作用、抗炎、抗肿瘤、抗放射作用。现代临床多用于治疗恶性肿瘤、心力衰竭、骨关节结核及慢性骨髓炎等。
每年夏至到秋分最适宜采集蟾酥，每隔21-30天可采酥1次，传统的采集器具是铜制采集器，现在也有自制的贝壳状的铝制采集器，忌用铁器，轻轻夹住蟾蜍的两个耳后腺，轻挤耳后腺使分泌物流入采集器内，用竹片将浆液刮到非金属的器皿中，滤去杂质后将浆液摊涂在玻璃片上低温烘干或阴干，这样制得的成品称为“片蟾酥”；或将浆液薄薄地铺入圆瓷盘中晒干或阴干，此称为“团酥”，宋代有铁上焙焦(《圣惠方》)，炼制、酒制、浸制(《总微》)，酒炖(《妇人》)等方法。明代有汤浸(《普济方》)、乳汁制(《保元》)等炮制方法。1、蟾酥粉：取原药材，捣碎，研成细粉。2、酒蟾酥：取原药材，捣碎，用白酒浸渍，不断搅动至呈稠膏状，干燥，粉碎。蟾酥10千克用白酒20千克。3、乳蟾酥：取原药材，捣碎，用鲜牛奶浸渍，不断搅动至稠膏状，干燥，研粉。蟾酥每10千克用牛奶20千克。
蟾酥的炮制方法从宋代开始有焙制、炼制及酒制，但叙述简单，至清代提出辅料炮制规格，要用陈酒或烧酒化透，乳汁制始于明代，但法中只简略提到“乳化”、“乳浸”，至清代才有较详细的工艺记载。蟾酥在古代的各种炮制方法，至今仍沿用。目前，大部分地区都是用酒制法。乳浸蟾酥的方法，在山东、北京、天津也有采用。另外，关于蟾酥的软化问题，有的采用微洒水润潮，闷2～3天，候软取出，切薄片，晒干，研粉过筛。有的采用烘软的方法，切片，并置石灰缸中埋2～3天，干燥，研粉。还有的蒸软后切片，干燥研粉。
蟾酥中含有蟾蜍二烯内酯、蛋白质、多肽、色胺、氨基酸、多糖及游离脂肪酸等成分，其中蟾蜍二烯内酯中的华蟾毒基与酯蟾毒配基具有显著的强心及抗肿瘤作用，也是中国药典规定的蟾酥药材的质控成分。而蟾酥药材中含有的多糖及水溶性多肽、蛋白质、色胺等刺激性的物质，不仅造成大量蟾酥药材品质不达药典要求，还导致蟾酥药材及蟾酥制剂具有较大的刺激性和毒性。因此，需要开发一种通过减少非药用成分来提高蟾酥药材的品质的方法
发明内容
本发明的目的在于提供一种工艺合理，可操作性强，既能提高蟾酥药材品质又能降低蟾酥药材刺激性的方法。
本发明的目的是通过下列方法实现的：
一种蟾酥的加工处理方法，取蟾酥药材，粉碎成粉末，加含酶酸性水溶液进行处理，离心，去除上清液，得下层固体，干燥即得。
所述蟾酥的加工处理方法，蟾酥药材粉末的质量克与含酶酸性水溶液的体积毫升比为1：50～100。
所述蟾酥的加工处理方法，含酶酸性水溶液使用盐酸调节pH值为4.0～5.0。
所述蟾酥的加工处理方法，使用的酶为胃蛋白酶。
所述蟾酥的加工处理方法，酶的浓度为5.0～7.0％。
所述蟾酥的加工处理方法，蟾酥药材粉末细度80-200目，加含酶酸性水溶液进行处理方法为浸渍或超声。
所述蟾酥的加工处理方法，超声条件：时间为10～30min，温度为35℃，再静置2h。
所述蟾酥的加工处理方法，干燥方法为烘干法、减压干燥法或日晒法。
所述蟾酥的加工处理方法，超声时间为20min，温度为35℃，再静置2h。
本发明有益效果：
1、本发明提供了新的蟾酥加工处理方法，该方法通过酸性含酶水溶液对蟾酥药材或待加工的蟾酥原料进行处理后，去除蟾酥药材中的酯类、蛋白质类等非药用成分，相对提高有效成分含量，从而提高蟾酥药材品质，留取固体层，干燥，为加工后的蟾酥。该发明能显著地提高蟾酥中的中国药典中所规定的药用有效成分华蟾毒基和脂蟾毒配基的含量，且能明显降低蟾酥药材的毒性与刺激性。
2、蟾酥是中国名贵药材，市场上大部分蟾酥商品不符合中国药典的规定。本发明公开的操作方法简便易行，可将市场上大量不合格蟾酥药材，经此方法处理后,成为符合中国药典规定的合格药材。
具体实施方式
实施例1蟾酥药材加工方法的筛选实验
1.1实验材料与分析方法
高效液相色谱仪(美国Waters公司)；ME104E/02精密电子天平；超声波清洗机(上海赛飞仪器设备有限公司)；蟾酥药材(粉碎过100目筛)(购自安徽毫州中药材交易市场)；华蟾毒精、脂蟾毒配基对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，纯度>98％)；乙腈、甲酸均为色谱纯或分析纯。
将蟾酥药材粉末，加入甲醇，超声20min，离心10min(8000r/min，4℃)，过滤，滤液定容至10mL容量瓶，过0.45μm滤膜备用。
色谱条件：色谱柱为汉邦Hedera ODS-2(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈-0.1％甲酸溶液(45:55，0～6min；65:35，7～18min；45:55，18～20min)检测波长296nm，流速1.0mL·min-1；柱温40℃，进样量为10μL，吸取上述样品，经高效液相色谱进样分析。
1.2实验方法
1.2.1溶剂用量对华蟾毒基含量和脂蟾毒配基含量的影响
1.2.1.1精密称取蟾酥药材粉末100mg，不做任何处理，作为对照，即得蟾酥样品S0。
1.2.1.2精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入2mL含胃蛋白酶量为3％的超纯水涡旋混匀，35℃超声10min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再加2mL超纯水重复操作一次，得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S1。
1.2.1.3精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mL含胃蛋白酶量为3％的超纯水涡旋混匀，35℃超声10min,25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再加5mL超纯水重复操作一次，得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S2。
1.2.1.4精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入10mL含胃蛋白酶量为3％的超纯水涡旋混匀，35℃超声10min,25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再加10mL超纯水重复操作一次，得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S3。
溶剂用量对样品中华蟾毒基和酯蟾毒配基含量的影响见表1，与对照组比，经水溶液处理后，蟾酥样品中华蟾毒基和酯蟾毒配基的含量明显高于对照组，溶剂用量对两种有效成分含量的影响无显著性差异，因此选择溶剂用量为50倍量。
表1溶剂用量考察
Figure BDA0001908409990000031
Figure BDA0001908409990000041
1.2.2溶剂pH值对华蟾毒基含量和脂蟾毒配基含量的影响
1.2.2.1精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mLPH为2.0的含胃蛋白酶量为3％的超纯水涡旋混匀，35℃超声10min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再重复操作一次，得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S4。
1.2.2.2精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mLPH为4.0的含胃蛋白酶量为3％的超纯水涡旋混匀，35℃超声10min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再重复操作一次，得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S5。
1.2.2.3精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mLPH为5.0的含胃蛋白酶量为3％的超纯水涡旋混匀，35℃超声10min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再重复操作一次，得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S6。
溶剂pH值对样品中华蟾毒基和酯蟾毒配基含量的影响见表2，其中溶液pH为5.0时，蟾酥样品中两种成分总含量最高为5.94％，相比于原药材提高了22.47％。PH为2.0与4.0时两种有效成分含量较低的原因可能是由于两种成分含有的内酯环在酸性较强的情况下发生了水解，因此选择溶剂pH值为5.0。
表2溶剂pH值考察
Figure BDA0001908409990000042
1.2.3加酶量对华蟾毒基含量和脂蟾毒配基含量的影响
1.2.3.1精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mL的含胃蛋白酶量为3％的超纯水涡旋混匀，用盐酸调节PH为5.0，35℃超声10min,25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再重复操作一次,得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S7。
1.2.3.2精密称取蟾酥药材粉末100mg,加入5mL的含胃蛋白酶量为5％的超纯水涡旋混匀，用盐酸调节PH为5.0，25℃超声10min，25℃静置2h,然后离心，去除上清液，再重复操作一次，得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S8。
1.2.3.3精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mL的含胃蛋白酶量为7％的超纯水涡旋混匀，用盐酸调节PH为5.0，35℃超声10min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再重复操作一次，得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S9。
加酶量对样品中华蟾毒基和酯蟾毒配基含量的影响见表3，其中加酶量为5.0％时，蟾酥样品中两种成分总含量最高为6.23％，相比于原药材提高了28.45％，不同加酶量均提高了成分含量，说明胃蛋白酶在该条件下有效的将蟾酥药材中的蛋白质分解除去，从而提高药材品质，因此选择加酶量为5.0％。
表3加酶量考察
Figure BDA0001908409990000051
1.2.4提取方法对华蟾毒基含量和脂蟾毒配基含量的影响
1.2.4.1精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mL的含胃蛋白酶量为5％的超纯水涡旋混匀，用盐酸调节PH为5.0，35℃浸渍20min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再重复操作一次,得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S10
1.2.4.2精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mL的含胃蛋白酶量为5％的超纯水涡旋混匀，用盐酸调节PH为5.0，35℃超声20min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再重复操作一次，得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S11。
处理方法对样品中华蟾毒基和酯蟾毒配基含量的影响见表4，其中相同时间下，超声法处理的蟾酥样品中两种有效成分含量显著高于浸渍法，超声法的工艺简单，效率更高，因此，选择超声法处理样品。
表4处理方法
Figure BDA0001908409990000052
1.2.5超声时间对华蟾毒基含量和脂蟾毒配基含量的影响
1.2.5.1精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mL的含胃蛋白酶量为5％的超纯水涡旋混匀，用盐酸调节PH为5.0，35℃超声10min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再重复操作一次，得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S12。
1.2.5.2精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mL的含胃蛋白酶量为5％的超纯水涡旋混匀，用盐酸调节PH为5.0，35℃超声20min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再重复操作一次,得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S13。
1.2.5.3精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mL的含胃蛋白酶量为5％的超纯水涡旋混匀，用盐酸调节PH为5.0，35℃超声30min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再重复操作一次,得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S14。
超声时间对样品中华蟾毒基和酯蟾毒配基含量的影响见表5，其中超声时间为10min时，蟾酥样品中两种有效成分含量最高，超声时间对成分总含量无显著影响，为提高效率，选择，超声20min.
表5超声时间考察
Figure BDA0001908409990000061
1.2.6干燥方法对华蟾毒基含量和脂蟾毒配基含量的影响
1.2.6.1精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mL的含胃蛋白酶量为5％的超纯水涡旋混匀，用盐酸调节PH为5.0，35℃超声20min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再重复操作一次，得下层固体即可，40℃烘干，即得蟾酥样品S15。
1.2.6.2精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mL的含胃蛋白酶量为5％的超纯水涡旋混匀，用盐酸调节PH为5.0，35℃超声20min，25℃静置2h，然后减压抽滤，去除上清液，再重复操作一次，得下层固体即可，40℃减压干燥，即得蟾酥样品S16。
1.2.6.3精密称取蟾酥药材粉末100mg，加入5mL的含胃蛋白酶量为5％的超纯水涡旋混匀，用盐酸调节PH为5.0，35℃超声20min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，再重复操作一次，得下层固体即可，晒干，即得蟾酥样品S17。
干燥方法对样品中华蟾毒基和酯蟾毒配基含量的影响见表6，其中三种干燥方法对蟾酥药材中两种有效成分的含量无显著性差异。但烘干法与日晒法相比减压干燥法含量较高，为保证药材质量及节约时间，因此选择烘干法。
表6干燥方法考察
Figure BDA0001908409990000071
实施例2
取蟾酥药材，粉碎成粉末，过100目筛。取10g，加500mL含酶酸性水溶液(胃蛋白酶含量为5.0％，盐酸调至pH值为5.0)，35℃超声20min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，得下层固体，40℃烘干。
实施例3
取蟾酥药材，粉碎成粉末，过80目筛。取10g，加750mL含酶酸性水溶液(胃蛋白酶含量为6.0％，盐酸调至pH值为4.0)，35℃超声20min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，得下层固体，40℃烘干。
实施例4
取蟾酥药材，粉碎成粉末，过200目筛。取10g，加1000mL含酶酸性水溶液(胃蛋白酶含量为7.0％，盐酸调至pH值为5.0)，35℃超声20min，25℃静置2h，然后离心，去除上清液，得下层固体，40℃烘干。

Claims (5)

1.一种蟾酥的加工处理方法，其特征在于，取蟾酥药材，粉碎成粉末，加含酶酸性水溶液进行处理，离心，去除上清液，得下层固体，干燥即得，所述蟾酥药材粉末的质量克与含酶酸性水溶液的体积毫升比为1：50～100，含酶酸性水溶液使用盐酸调节pH值为4.0～5.0，使用的酶为胃蛋白酶，酶的浓度为5.0～7.0％。
2.如权利要求1所述蟾酥的加工处理方法，其特征在于，蟾酥药材粉末细度80-200目，加含酶酸性水溶液进行处理方法为浸渍或超声。
3.如权利要求2所述蟾酥的加工处理方法，其特征在于，超声条件：时间为10～30min，温度为35℃，再静置2h。
4.如权利要求1所述蟾酥的加工处理方法，其特征在于，干燥方法为烘干法、减压干燥法或日晒法。
5.如权利要求3所述蟾酥的加工处理方法，其特征在于，超声时间为20min，温度为35℃，再静置2h。
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