CN109329940A - 一种食品级抗氧化剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种食品级抗氧化剂及其制备方法,涉及食品技术领域,本发明中蒲公英和马齿苋混合组分采用生物酶预处理,超声‑微博协同萃取法,荷叶采用生物酶和超声‑微博协同同时萃取。三种药食同源类原料组成的抗氧化剂具有协同增效作用,能显著清除DPPH自由基,动物试验证实本发明抗氧化剂可以通过提高抗氧化酶的活力来抑制脂质过氧化反应,进而提升机体的抗氧化作用,最终抑制自由基对细胞的损害等,本发明具有提取效率高、制备方法简单、省时等特点,适合大范围的推广和应用。
Description
技术领域
本发明涉及食品技术领域,具体涉及一种食品级抗氧化剂及其制备方法。
背景技术
已知的,抗氧化剂按照来源可分为人工合成抗氧化剂和天然抗氧化剂两种。通过现代毒理学实验证实人工合成抗氧化剂具有潜在的毒性和致癌作用,美国和日本等国家相继禁止了丁基羟基茴香醚(BHA)和二丁基羟基甲苯(BHT)两种人工合成抗氧化剂的使用,其它常用如叔丁基对苯二酚(TBHQ)、没食子酸丙酯(PG)的应用也受到限制。随着人们对健康理念及安全意识的日益提升,天然抗氧化剂因其高效、低毒越来越受到关注。天然抗氧化剂主要来源于天然物质,从天然产物中发现和制备天然抗氧化剂已成为我国大健康行业的必然趋势。研究表明体内自由基过剩会产生活性氧,损害体内脂质、蛋白质和核酸等细胞成分,进而引起各种疾病。天然抗氧化剂可有效体内清除自由基,保护机体,抑制疾病的发生与发展等。
发明内容
为克服背景技术中存在的不足,本发明提供了一种食品级抗氧化剂及其制备方法,本发明可有效清除DPPH自由基,具有较强的抗氧化作用,同时本发明还可以通过提高抗氧化酶的活力来抑制脂质过氧化反应,进而提升机体的抗氧化作用,最终抑制自由基对细胞的损害等。
为实现如上所述的发明目的,本发明采用如下所述的技术方案:
一种食品级抗氧化剂,所述抗氧化剂按重量份具体包括如下组分:
蒲公英与马齿苋混合物 1~5份;
荷叶 1~5份。
所述的食品级抗氧化剂,所述蒲公英与马齿苋混合物中蒲公英占蒲公英与马齿苋混合物重量的25%~75%。
一种食品级抗氧化剂的制备方法,所述制备方法具体包括如下步骤:
第一步、首先将适量的蒲公英和马齿苋置于烘箱中,于50℃干燥至恒重,粉碎过药典筛,得混合粉末;
第二步、接上步,在第一步获得的混合粉末中加入适量的去离子水和生物酶进行预处理,获得酶预处理溶液;
第三步、接上步,在第二步获得的酶预处理溶液中加无水乙醇至预定浓度,然后在超声-微波协同萃取仪内提取5~15min,离心得到上清液;
第四步、接上步,将第三步获得的上清液减压浓缩至无醇味浸膏;
第五步、接上步,将第四步获得的无醇味浸膏用去离子水溶解,过大孔吸附树脂纯化,用乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至无醇味,得浸膏A,然后将浸膏A冷冻干燥后备用;
第六步、接上步,将荷叶置于烘箱中,于40℃干燥至恒重,粉碎过药典筛,得粉末;
第七步、接上步,在第六步获得的粉末中加入40~60%乙醇和生物酶,在超声-微波协同萃取仪内提取10~30min,离心得上清液;
第八步、接上步,将第七步获得的上清液减压浓缩至无醇味浸膏;
第九步、接上步,将第八步获得的无醇味浸膏用去离子水溶解,过大孔吸附树脂纯化,用乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至无醇味,得浸膏B,然后将浸膏B冷冻干燥后备用;
第十步、接上步,将第九步获得的浸膏B与第五步获得的浸膏A混合后得到所需的食品级抗氧化剂。
所述的食品级抗氧化剂的制备方法,所述药典筛为60目药典筛。
所述的食品级抗氧化剂的制备方法,所述第五步中乙醇为50%~80%乙醇。
所述的食品级抗氧化剂的制备方法,所述第九步中乙醇为80~100%乙醇。
所述的食品级抗氧化剂的制备方法,所述大孔吸附树脂为非极性或弱极性。
所述的食品级抗氧化剂的制备方法,所述生物酶为纤维素酶、果胶酶中的一种或两者的混合。
采用如上所述的技术方案,本发明具有如下所述的优越性:
本发明中蒲公英和马齿苋混合组分采用生物酶预处理,超声-微博协同萃取法,荷叶采用生物酶和超声-微博协同同时萃取。三种药食同源类原料组成的抗氧化剂具有协同增效作用,能显著清除DPPH自由基,动物试验证实本发明抗氧化剂可以通过提高抗氧化酶的活力来抑制脂质过氧化反应,进而提升机体的抗氧化作用,最终抑制自由基对细胞的损害等,本发明具有提取效率高、制备方法简单、省时等特点,适合大范围的推广和应用。
附图说明
图1是本发明对DPPH自由基的清除作用(n=3)示意图。
具体实施方式
通过下面的实施例可以更详细的解释本发明,本发明并不局限于下面的实施例;
本发明中涉及的蒲公英、马齿苋和荷叶是国家卫生计生委2002年公布的药食同源品种。现代药理学实验证明蒲公英中起抗氧化作用的成分主要是黄酮类物质,且与黄酮含量呈正相关。目前,国内外学者已从蒲公英中分离、鉴定出17种黄酮类化合物,其中槲皮素含量最高,实验结果显示槲皮素具有较强抗氧化活性。动物实验提示蒲公英黄酮通过抑制脂质过氧化反应或直接清除自由基来实现其抗氧化作用。马齿苋为一年生草本植物,具有清热解毒,凉血止血的功效。药理实验显示马齿苋中具抗氧化活性的成分有多糖和黄酮,体外模拟实验表明总黄酮为马齿苋抗氧化活性的主要成分,且呈剂量关系。体内外实验表明马齿苋黄酮抑制脂质过氧化,提高机体SOD活性。荷叶黄酮为荷叶主要成分之一,具有抗氧化、抗衰老、降血脂等多种生理功效。荷叶黄酮主要通过提高抗氧化酶活性,清除或减少氧自由基和脂质过氧化物实现抗氧化作用。
黄酮类成分提取方法主要有传统提取法、新技术提取法及不同技术的偶合技术。传统提取法主要有回流提取法、煎煮法、浸渍法和渗漏法等,新技术主要有超声辅助提取法、微波辅助提取法、闪式提取法、超临界二氧化碳提取法、酶解法等。其中超声波-微波耦合技术应用较为广泛,提取时间短、效率高,对黄酮类成分破坏小。酶解处理破坏植物细胞壁,黄酮类物质更容易溶出,提高提取效率。
目前关于蒲公英和马齿苋混合物利用超声波-微波耦合技术提取总黄酮未见报道,且在提取前利用生物酶进行酶解,提高了总黄酮的提取效率。荷叶总黄酮提取,加入生物酶后,放入超声波-微波协同萃取仪,酶解和提取同时进行,显著提高荷叶总黄酮的提取效率。
本发明的具体实施例如下:
实施例一:
一种食品级抗氧化剂,所述抗氧化剂按重量份具体包括如下组分:
蒲公英与马齿苋混合物 1份;
荷叶 5份;
蒲公英与马齿苋混合物中蒲公英占蒲公英与马齿苋混合物重量的25%,即蒲公英占蒲公英与马齿苋混合物重量的1/4。
一种食品级抗氧化剂的制备方法,所述制备方法具体包括如下步骤:
第一步、首先将称取的蒲公英和马齿苋置于烘箱中,于50℃干燥至恒重,粉碎过60目药典筛,得混合粉末;
第二步、接上步,在第一步获得的混合粉末中加入适量的去离子水和纤维素酶进行预处理,获得酶预处理溶液;
第三步、接上步,在第二步获得的酶预处理溶液中加无水乙醇至预定浓度,然后在超声-微波协同萃取仪内提取5min,离心得到上清液;
第四步、接上步,将第三步获得的上清液减压浓缩至无醇味浸膏;
第五步、接上步,将第四步获得的无醇味浸膏用去离子水溶解,过D101大孔吸附树脂纯化,用50%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至无醇味,得浸膏A,然后将浸膏A冷冻干燥后备用;
第六步、接上步,将荷叶置于烘箱中,于40℃干燥至恒重,粉碎过60目药典筛,得粉末;
第七步、接上步,在第六步获得的粉末中加入40%乙醇和果胶酶-纤维素酶复合酶,在超声-微波协同萃取仪内提取10min,离心得上清液;
第八步、接上步,将第七步获得的上清液减压浓缩至无醇味浸膏;
第九步、接上步,将第八步获得的无醇味浸膏用去离子水溶解,过D101大孔吸附树脂纯化,用80%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至无醇味,得浸膏B,然后将浸膏B冷冻干燥后备用;
第十步、接上步,将第九步获得的浸膏B与第五步获得的浸膏A混合后得到所需的食品级抗氧化剂。
实施例二:
一种食品级抗氧化剂,所述抗氧化剂按重量份具体包括如下组分:
蒲公英与马齿苋混合物 5份;
荷叶 1份;
蒲公英与马齿苋混合物中蒲公英占蒲公英与马齿苋混合物重量的75%,即蒲公英占蒲公英与马齿苋混合物重量的3/4。
一种食品级抗氧化剂的制备方法,所述制备方法具体包括如下步骤:
第一步、首先将称取的蒲公英和马齿苋置于烘箱中,于50℃干燥至恒重,粉碎过60目药典筛,得混合粉末;
第二步、接上步,在第一步获得的混合粉末中加入适量的去离子水和纤维素酶-果胶酶复合酶进行预处理,获得酶预处理溶液;
第三步、接上步,在第二步获得的酶预处理溶液中加无水乙醇至预定浓度,然后在超声-微波协同萃取仪内提取15min,离心得到上清液;
第四步、接上步,将第三步获得的上清液减压浓缩至无醇味浸膏;
第五步、接上步,将第四步获得的无醇味浸膏用去离子水溶解,过AB-8大孔吸附树脂纯化,用80%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至无醇味,得浸膏A,然后将浸膏A冷冻干燥后备用;
第六步、接上步,将荷叶置于烘箱中,于40℃干燥至恒重,粉碎过60目药典筛,得粉末;
第七步、接上步,在第六步获得的粉末中加入60%乙醇和纤维素酶,在超声-微波协同萃取仪内提取30min,离心得上清液;
第八步、接上步,将第七步获得的上清液减压浓缩至无醇味浸膏;
第九步、接上步,将第八步获得的无醇味浸膏用去离子水溶解,过AB-8大孔吸附树脂纯化,用100%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至无醇味,得浸膏B,然后将浸膏B冷冻干燥后备用;
第十步、接上步,将第九步获得的浸膏B与第五步获得的浸膏A混合后得到所需的食品级抗氧化剂。
实施例三:
一种食品级抗氧化剂,所述抗氧化剂按重量份具体包括如下组分:
蒲公英与马齿苋混合物 3份;
荷叶 3份;
蒲公英与马齿苋混合物中蒲公英占蒲公英与马齿苋混合物重量的50%,即蒲公英占蒲公英与马齿苋混合物重量的2/4。
一种食品级抗氧化剂的制备方法,所述制备方法具体包括如下步骤:
第一步、首先将称取的蒲公英和马齿苋置于烘箱中,于50℃干燥至恒重,粉碎过60目药典筛,得混合粉末;
第二步、接上步,在第一步获得的混合粉末中加入适量的去离子水和果胶酶进行预处理,获得酶预处理溶液;
第三步、接上步,在第二步获得的酶预处理溶液中加无水乙醇至预定浓度,然后在超声-微波协同萃取仪内提取10min,离心得到上清液;
第四步、接上步,将第三步获得的上清液减压浓缩至无醇味浸膏;
第五步、接上步,将第四步获得的无醇味浸膏用去离子水溶解,过D101大孔吸附树脂纯化,用65%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至无醇味,得浸膏A,然后将浸膏A冷冻干燥后备用;
第六步、接上步,将荷叶置于烘箱中,于40℃干燥至恒重,粉碎过60目药典筛,得粉末;
第七步、接上步,在第六步获得的粉末中加入50%乙醇和果胶酶-纤维素酶复合酶,在超声-微波协同萃取仪内提取20min,离心得上清液;
第八步、接上步,将第七步获得的上清液减压浓缩至无醇味浸膏;
第九步、接上步,将第八步获得的无醇味浸膏用去离子水溶解,过D101大孔吸附树脂纯化,用90%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至无醇味,得浸膏B,然后将浸膏B冷冻干燥后备用;
第十步、接上步,将第九步获得的浸膏B与第五步获得的浸膏A混合后得到所需的食品级抗氧化剂。
本发明所述的食品级抗氧化剂对DPPH自由基的清除作用检测如下:
材料与方法:
样品:按照本发明制备食品级抗氧化剂。
主要试剂:2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)和L-抗坏血酸购于sigma-Aldrich公司;其它试剂均为国产试剂。
试验方法:精密称取20mg DPPH置于250mL容量瓶,以无水乙醇定容,即得浓度为0.2mmol/L的DPPH溶液。移取相同体积的DPPH乙醇溶液和不同浓度的样品溶液于2mL离心管中,混匀、室温下避光反应30min,吸取0.2mL溶液于96孔板中,于517nm处用酶标仪测定吸光度。L-抗坏血酸为阳性对照,以同样的方法制备和测定吸光度值。依据下列公式计算DPPH自由基的清除率。
DPPH·的清除率/%=
其中:A0为DPPH溶液和无水乙醇的吸光度值;A1为DPPH溶液和样品溶液的吸光度值;A2为样品溶液和无水乙醇的吸光度值。
本发明中图1为本发明食品级抗氧化剂对DPPH自由基的清除作用(n=3);
结论:通过对本发明的试验例研究发现,本发明食品级抗氧化剂可有效清除DPPH自由基,并随着浓度增加而增加,低浓度清除DPPH自由基低,当浓度超过0.1mg/mL时,其DPPH的清除能力达90%以上,且与L-抗坏血酸清除DPPH自由基能力相当,说明本发明的抗氧化剂具有较强的抗氧化作用。
以下通过体内试验例来进一步阐述本发明所述食品级抗氧化剂的良好效果。
本发明食品级抗氧化剂对D-半乳糖致亚急性小鼠衰老模型小鼠的抗氧化作用。
材料与方法:
样品:按照本发明制备食品级抗氧化剂。
主要试剂:丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总还原能力(T-AOC)测定试剂盒:南京建成生物工程研究所;D-半乳糖:美国Sigma-Aldrich公司,其它化学试剂为国产分析纯。
实验动物:雄性小鼠50只,体重20 ±2g,由河南科技大学实验动物中心提供。
试验方法:将50只小鼠适应喂养1周,随机分为5组,设置空白对照组、模型组和本发明的食品级抗氧化剂高、中、低剂量组。除空白对照组外,其余各组小鼠按125 mg/kg剂量颈背部皮下注射D-半乳糖进行造模,空白对照组以等体积生理盐水同法注射。造模同时,高、中、低实验组经口灌胃分别给予不同剂量的本发明的食品级抗氧化剂溶液,空白组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃,连续灌胃42天,末次给药后,小鼠禁食不禁水24h后立即颈椎脱臼处死,迅速剖出脑组织,依据试剂盒说明,测定脑组织匀浆中MDA、SOD和T-AOC的值,结果见表1。
表1本发明食品级抗氧化剂对小鼠脑组织中MDA、SOD和T-AOC的比较(, n=10)
组别 | 剂量 | MDA | SOD | T-AOC |
空白对照组 | 4.69±1.39 | 156.83±14.09 | 8.09±1.06 | |
伤模型组 | 9.26±3.40<sup>++</sup> | 118.23±7.42<sup>++</sup> | 4.19±0.36<sup>++</sup> | |
高剂量组 | 450mg/kg | 4.98±2.13<sup>**</sup> | 152.36±12.03<sup>**</sup> | 7.09±0.24<sup>**</sup> |
中剂量组 | 150mg/kg | 5.27±1.09<sup>**</sup> | 138.89±10.64<sup>**</sup> | 6.79±1.05<sup>**</sup> |
低剂量组 | 50mg/kg | 7.29±3.06 | 126.09±15.05 | 4.49±2.03 |
注:与空白对照组比,++p<0.01;与模型组比,**p<0.01
结论:通过对本发明的试验例研究发现,本发明食品级抗氧化剂能显著提高D-半乳糖所致衰老小鼠脑组织中的SOD活力值和T-AOC含量,降低MDA含量。研究证实本发明的食品级抗氧化剂可以通过提高抗氧化酶的活力来抑制脂质过氧化反应,进而提升机体的抗氧化作用,最终抑制自由基对细胞的损害。
本发明未详述部分为现有技术。
为了公开本发明的发明目的而在本文中选用的实施例,当前认为是适宜的,但是,应了解的是,本发明旨在包括一切属于本构思和发明范围内的实施例的所有变化和改进。
Claims (8)
1.一种食品级抗氧化剂,其特征是:所述抗氧化剂按重量份具体包括如下组分:
蒲公英与马齿苋混合物 1~5份;
荷叶 1~5份。
2.根据权利要求1所述的食品级抗氧化剂,其特征是:所述蒲公英与马齿苋混合物中蒲公英占蒲公英与马齿苋混合物重量的25%~75%。
3.实施权利要求1~2所述的一种食品级抗氧化剂的一种食品级抗氧化剂的制备方法,其特征是:所述制备方法具体包括如下步骤:
第一步、首先将适量的蒲公英和马齿苋置于烘箱中,于50℃干燥至恒重,粉碎过药典筛,得混合粉末;
第二步、接上步,在第一步获得的混合粉末中加入适量的去离子水和生物酶进行预处理,获得酶预处理溶液;
第三步、接上步,在第二步获得的酶预处理溶液中加无水乙醇至预定浓度,然后在超声-微波协同萃取仪内提取5~15min,离心得到上清液;
第四步、接上步,将第三步获得的上清液减压浓缩至无醇味浸膏;
第五步、接上步,将第四步获得的无醇味浸膏用去离子水溶解,过大孔吸附树脂纯化,用乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至无醇味,得浸膏A,然后将浸膏A冷冻干燥后备用;
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第七步、接上步,在第六步获得的粉末中加入40~60%乙醇和生物酶,在超声-微波协同萃取仪内提取10~30min,离心得上清液;
第八步、接上步,将第七步获得的上清液减压浓缩至无醇味浸膏;
第九步、接上步,将第八步获得的无醇味浸膏用去离子水溶解,过大孔吸附树脂纯化,用乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至无醇味,得浸膏B,然后将浸膏B冷冻干燥后备用;
第十步、接上步,将第九步获得的浸膏B与第五步获得的浸膏A混合后得到所需的食品级抗氧化剂。
4.根据权利要求3所述的食品级抗氧化剂的制备方法,其特征是:所述药典筛为60目药典筛。
5.根据权利要求3所述的食品级抗氧化剂的制备方法,其特征是:所述第五步中乙醇为50%~80%乙醇。
6.根据权利要求3所述的食品级抗氧化剂的制备方法,其特征是:所述第九步中乙醇为80~100%乙醇。
7.根据权利要求3所述的食品级抗氧化剂的制备方法,其特征是:所述大孔吸附树脂为非极性或弱极性。
8.根据权利要求3所述的食品级抗氧化剂的制备方法,其特征是:所述生物酶为纤维素酶、果胶酶中的一种或两者的混合。
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