CN109316475A

CN109316475A - 丁香酸/3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸在制备促进神经修复药物中的应用

Info

Publication number: CN109316475A
Application number: CN201811227527.2A
Authority: CN
Inventors: 林浩东; 林耀发
Original assignee: Second Affiliated Hospital Army Medical University
Current assignee: Second Affiliated Hospital Army Medical University
Priority date: 2018-10-22
Filing date: 2018-10-22
Publication date: 2019-02-12

Abstract

本发明涉及药物的新适应症技术领域，具体公开了丁香酸/3,5‑二甲氧基‑4‑羟基苯甲酸在制备促进神经修复药物中的应用。本发明对中药单体丁香酸促进神经修复作用进行了探索和实验研究，结果表明丁香酸是通过促进施旺细胞迁移、增殖、分化的作用，进而促进神经修复再生。本发明为中药促进神经修复提供了新的思路，为神经损伤的治疗提供了实验基础。

Description

丁香酸/3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸在制备促进神经修复药物中的应用

技术领域

本发明涉及药物的新适应症技术领域，具体地说，是丁香酸/3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸在制备促进神经修复药物中的应用。

背景技术

我国每年因各种创伤或外科手术(如肿瘤切除)而导致的周围神经损伤的病人超100万人。这些病人如得不到及时有效的修复治疗，将造成相关部位神经功能的永久性丧失。神经损伤时神经间隙处增生的瘢痕组织是外周神经自我修复的主要障碍。间隙较大的外周神经损伤，需要用自体神经移植进行修复；但自体神经移植存在诸多缺点，如供区神经障碍、供区神经瘤形成、供区神经有限、供区神经与受区神经难以匹配等等。随着对中药作用的深入研究，发现诸如黄芪、丹参等对神经修复起促进作用。但中药成分复杂，对何种成分起神经修复作用不明确，而中药其他组分会对机体产生何种影响亦不清楚。

施旺细胞(Schwanncells，SCs)是周围神经系统特有的、最主要的胶质细胞，在周围神经的发生及损伤后的再生中起着重要的作用。它是周围神经纤维的鞘细胞，排列成串，包裹着周围神经纤维的轴突，反复包卷形成的同心圆板层，形成髓鞘。施旺细胞可分泌细胞粘附分子、多种神经营养因子(NTFs)和细胞外基质，促进和引导周围神经轴突的再生。综上，施旺细胞通过迁移、增殖、分化等功能来参与髓鞘形成，进行神经修复。

丁香酸(Syringic acid，SYRA)，又名3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸，分子式为C₉H₁₀O₅，是一种天然存在的没食子酸O-甲基化产物，可以在兰屿树杞和阿萨伊果(又称巴西莓)中提取，也可以用20％硫酸通过没食子酸三甲醚的选择性水解(脱甲基化)制得。本研究发现丁香酸能够促进施旺细胞的迁移、增殖、分化的作用，表明丁香酸有促进神经修复作用。

中国专利文献201610155201.8公开了丁香酸/4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸在制备用于终止妊娠的药物中的用途，属于医药技术领域，该发明中的药物由活性成分和药学上可接受的辅料制备而成，所述的活性成分由丁香酸/4-羟基-3，5-二甲氧基苯甲酸作为唯一组分组成；该发明中的药物终止妊娠的效率高，同时对脏器无伤害，毒副作用小，安全可靠，适用于早期妊娠的终止。中国专利文献01210098200.6公开了一种天麻及天麻提取物在制备治疗外周神经损伤再修复药物中的应用，其特征是：它是将天麻或天麻提取物单独制成粉剂、胶囊、片剂或注射剂，或与其他药物制成复合制剂，应用到治疗外周神经损伤再修复的药物中；该本发明的积极效果是：为治疗外周神经损伤再修复提供了一种新的药物，这种药物不仅成本低，而且效果可靠。但是关于本发明的中药单体丁香酸在制备治疗神经修复药物中的应用，目前还未见报道。

发明内容

本发明提供了中药单体丁香酸促进神经修复的证据，为神经修复的治疗提供新的思路和方法。

本发明的第一个目的是，针对现有技术中的不足，提供一种丁香酸/3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸在制备促进神经修复药物中的应用。

本发明的第二个目的是，提供一种促进神经修复的药物。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

丁香酸/3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸在制备促进神经修复药物中的应用。

作为本发明的一个优选技术方案，所述丁香酸/3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸作为促进神经修复药物的唯一活性成分。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

一种促进神经修复的药物，所述促进神经修复的药物的活性组分为丁香酸/3,5-二甲氧基 -4-羟基苯甲酸。

作为本发明的一个优选技术方案，所述促进神经修复的药物还包括药学上可接受的辅料，药剂学上可接受的辅料包括填充剂、崩解剂、粘合剂、矫味剂、润滑剂等等。所述的填充剂选自以下的一种或多种：预胶化淀粉、乳糖、甘露醇和微晶纤维素；所述的崩解剂选自以下的一种或多种：羧甲基淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠和低取代羟丙基纤维素；所述的粘合剂选自以下的一种或多种：淀粉浆、羟丙基纤维素溶液、聚维酮溶液；所述的润滑剂选自以下的一种或两种：硬脂酸镁、滑石粉。

作为本发明的一个优选技术方案，本发明的药物或药物组合物为本领域常规的各种剂型，较佳的为固体、半固体或液体的形式，可以为水溶液、非水溶液或混悬液，更佳的为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液、悬浮液或注射液等。所述药物或药物组合物的给药途径较佳的为注射给药或口服给药。所述注射给药较佳的包括静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮内注射或皮下注射等途径。

本实验的实施例中，在施旺细胞中分别加入含0、500μM丁香酸的DMSO培养液，结果显示，500μM的丁香酸明显促进施旺细胞的迁移。

本实验的实施例中，在施旺细胞中分别加入含0、300、400、500、600μM丁香酸的DMSO培养液，结果显示，在低浓度时丁香酸对施旺细胞的增殖影响并不明显，在600μM 浓度明显促进细胞的增殖，随着时间延长，促进作用越加明显。

本实验的实施例中，在施旺细胞中分别加入含0、400、500、600μM丁香酸的DMSO 培养液，结果显示，随着浓度升高，丁香酸对施旺细胞促增殖的作用越明显。

本实验的实施例中，在施旺细胞中分别加入含0、600μM丁香酸的DMSO培养液，结果显示，在丁香酸作用下施旺细胞体积变大，触角伸长，整体呈长梭形。

本发明中采用了在施旺细胞的DMSO培养液中，加入不同浓度的丁香酸粉末，观察施旺细胞的迁移能力、增殖能力和分化能力。结果显示，丁香酸有明显促进施旺细胞迁移、增殖、分化的作用。本发明对中药单体丁香酸促进神经修复作用进行了探索和实验研究，结果表明丁香酸是通过促进施旺细胞迁移、增殖、分化的作用，进而促进神经修复再生。本发明为中药促进神经修复提供了新的思路，为神经损伤的治疗提供了实验基础。

附图说明

图1是中药单体丁香酸的分子结构。

图2是丁香酸促进施旺细胞的迁移能力，其中，与药物浓度为0μM的丁香酸相比，500 μM的丁香酸明显促进施旺细胞的迁移。

图3是施旺细胞的增殖曲线，其中，在低浓度时丁香酸对施旺细胞的增殖影响并不明显，在600μM浓度明显促进细胞的增殖，随着时间延长，促进作用越加明显。

图4是施旺细胞的集落形成能力，其中，随着浓度升高，丁香酸对施旺细胞促增殖的作用越明显。

图5是丁香酸作用后施旺细胞的形态图，其中，在丁香酸作用下施旺细胞体积变大，触角伸长，整体呈长梭形。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围；此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1丁香酸对施旺细胞迁移能力的作用研究

本实施例取施旺细胞，消化后用含丁香酸2％FBS的DMEM培养液重悬细胞，调整细胞密度为2×10⁵个/ml，每个小室内加100μl，下室加入700μl含10％FBS的DMEM培养液。药物浓度依次为0、500μM，每个浓度设2个副孔，随后置于37℃、5％CO₂饱和湿度培养箱内培养20h。弃去培养基，加入适量PBS漂洗两次，并用棉签擦拭除去小室内部的细胞，用4％乙醇结晶紫染色，处理完毕后置于显微镜下观察，每个样本随机选择3个视野并拍照，统计迁移细胞数，用graphpad5.0进行统计学分析。结果显示，500μM的丁香酸明显促进施旺细胞的迁移(图2)。

实施例2丁香酸对施旺细胞增殖能力的作用研究

本实施例取施旺细胞，以40000个/ml的密度接种于96孔板，每孔100μl，置于37℃、5％CO₂饱和湿度培养箱中培养过夜。更换含丁香酸的DMEM完全培养基，浓度依次为0、 300、400、500、600μM，每个浓度设6个副孔，处理1、3、5、7天。MTT法测定每组细胞在492nm的OD值，并计算增殖速率(proliferation rate)：增殖速率＝样品OD值/对照 OD值，用graphpad5.0绘制增殖曲线，并进行统计学分析。结果显示，在低浓度时丁香酸对施旺细胞的增殖影响并不明显，在600μM浓度明显促进细胞的增殖，随着时间延长，促进作用越加明显(图3)。

实施例3丁香酸对施旺细胞集落形成能力的作用研究

本实施例取施旺细胞，以500个/ml的密度接种于6孔板，每孔2ml，置于37℃、5％CO₂饱和湿度培养箱中培养过夜。次日加入丁香酸，浓度依次为0、400、500、600μM,每个浓度设2个副孔，处理7天。用4％乙醇结晶紫染色，拍照，用Photoshop计数，并用graphpad5.0 作图、进行统计学分析。结果显示，随着浓度升高，丁香酸对施旺细胞促增殖的作用越明显(图4)。

实施例4丁香酸对施旺细胞促进分化能力的作用研究

本实施例取施旺细胞，以40000个/ml的密度接种于96孔板，每孔100μl，置于37℃、5％CO₂饱和湿度培养箱中培养过夜。次日更换含0、600μM丁香酸的DMEM完全培养基，每个浓度设6个副孔，培养2天，每天用显微镜拍照。结果显示，在丁香酸作用下施旺细胞体积变大，触角伸长，整体呈长梭形(图5)。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.丁香酸/3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸在制备促进神经修复药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述丁香酸/3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸作为促进神经修复药物的唯一活性成分。

3.一种促进神经修复的药物，其特征在于，所述促进神经修复的药物的活性组分为丁香酸/3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸。

4.根据权利要求3所述药物，其特征在于，所述促进神经修复的药物还包括药学上可接受的辅料。

5.根据权利要求4所述的药物，其特征在于，所述药学上可接受的辅料包括填充剂、崩解剂、粘合剂、矫味剂和润滑剂。

6.根据权利要求3所述的药物，其特征在于，所述促进神经修复的药物的剂型为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液、悬浮液或注射剂。