CN109293792A - 一种蒲公英多糖铁配合物的制备方法 - Google Patents

一种蒲公英多糖铁配合物的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及多糖配合物技术领域，具体地涉及一种蒲公英多糖铁配合物的制备方法，以药食同源的蒲公英为材料，提取蒲公英多糖，并采用氯化铁共热法制备蒲公英多糖铁。本发明提供了一种简单、有效、快速的蒲公英多糖铁配合物的制备方法，原料来源丰富，制备工艺稳定，为开发新型补铁剂和蒲公英的深加工产品提供了新的选择，不仅具有良好的稳定性，对胃肠道刺激小、生物利用度高，而且当其在体内释放铁之后，蒲公英多糖配体还对机体具有抗菌、抗炎、抗过敏、调节免疫等多种生物活性。

Description

一种蒲公英多糖铁配合物的制备方法
技术领域
本发明涉及多糖铁配合物技术领域，特别是涉及一种蒲公英多糖铁配合物的制备方法。
背景技术
铁是人体内维持很多主要代谢功能所必需的重要生命元素。全球约24.8％的人口患有贫血，中国的贫血患病率约为20.1％，这表明我国有2亿以上的人口存在缺铁性贫血和铁营养不良问题。缺铁和贫血是许多严重疾病常见的并发症，包括慢性肾病、慢性心力衰竭、化疗引起的贫血、炎症性肠病，其中慢性肾病患者、育龄妇女、怀孕妇女、发育期儿童中是缺铁性贫血的高危人群。据世界卫生组织2009年的统计，中国因缺铁性贫血导致的伤残调整生命年(指从发病到死亡所损失的全部健康生命年)损失达2,479,000年，全球排名第二，仅次于印度。因此，加强缺铁性贫血的预防与治疗对减轻我国疾病负担具有重要意义。目前，国际上允许使用的补铁药约有30余种,主要分为无机铁和有机铁两种。一般来说,有机铁比无机铁对肠胃刺激性小、易吸收。目前临床上主要应用硫酸亚铁、乳酸亚铁等口服补铁剂，但它们存在稳定性差、不易被人体吸收、对胃肠道有明显的刺激作用等缺点。
蒲公英以其高营养，高医疗保健作用和无公害绿色食品倍受人们喜爱。2015年，国家卫生计生委将蒲公英列为既是食品又是中药材的药食同源品。蒲公英营养成分非常丰富，具有抗菌、抗炎、抗过敏、抗氧化、抗肿瘤、保肝利胆、降血糖、抗血栓、免疫调节和抗疲劳等作用。蒲公英含有丰富的多糖，蒲公英多糖在抗菌、抗氧化、增强机体免疫力、抗突变、抗疲劳及调节激素等方面都具有一定作用。长白山地区气候适合蒲公英的生长，近几年开始人工种植，2018年已实现机械化播种，因此其资源非常丰富。蒲公英根中多糖约含其干重的30～50％，但目前蒲公英深加工技术比较落后，产品较单一，主要产品为蒲公英根茶。如果能够设计出一种方法可以以蒲公英为基材，经过深加工后在补铁剂上应用，必然会存在很多优势，比如，可以降低目前补铁剂的成本，能够弥补硫酸亚铁、乳酸亚铁等口服补铁剂存在稳定性差的技术问题，甚至还有很多意想不到的新的作用。
发明内容
本发明为了克服上述技术问题的不足，提供了一种蒲公英多糖铁配合物的制备方法，蒲公英多糖铁是蒲公英多糖和氯化铁反应而制得的多糖铁配合物，不仅具有良好的稳定性，对胃肠道刺激小、生物利用度高,而且当其在体内释放铁之后，蒲公英多糖配体还对机体具有抗菌、抗炎、抗过敏、调节免疫等多种生物活性，蒲公英多糖铁是有望开发成为一种新型补铁剂。
解决上述技术问题的技术方案如下：
本发明设计了一种蒲公英多糖铁配合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将蒲公英根经清洗、自然晒干后置于70℃烘箱内烘30min，然后粉碎至过60目筛得蒲公英粉末，依次用石油醚和乙醇分别连续抽提2～3h，室温条件下挥发掉溶剂后，置于50℃烘箱中烘干；石油醚用以去除脂溶性物质；乙醇用以去除黄酮等物质，依次用石油醚和乙醇分别连续抽提的主要目的在于去除杂质，可以更好地提取多糖。
(2)将蒲公英粉按料水比为1：20～40加入去离子水，置于恒温水浴锅中浸提，浸提温度30～90℃，浸提时间2～5h，离心分离，离心转速3000～4000r/min，离心时间10～15min；上清液为蒲公英多糖浸提液，浸提2次，过滤，合并滤液，得蒲公英水浸提液，因为蒲公英多糖不溶于乙醇和石油醚，但是溶于水中；
(3)将蒲公英水浸提液减压浓缩到原体积的1/3～1/4，向浓缩液中加入浓缩体积3～5倍的乙醇，置于冰箱冷藏室，冰箱冷藏室的温度设定为4～5℃，静置10～24h，离心，离心转速3000～4000r/min，沉淀物为蒲公英多糖粗品；
(4)向步骤(3)得到的蒲公英多糖粗品中加入去离子水使其溶解，得粗蒲公英多糖液，加入粗蒲公英多糖液体积25％的Sevage试剂进行振荡脱蛋白，振荡10～15min，静置15～20min，弃掉下层，上层中再加25％的Sevage试剂，重复操作，直至下层由乳白色逐渐变至近无色为止，离心，离心转速3000～4000r/min，沉淀物再依次分别用乙醇、丙酮、乙醚洗涤，获得白色粉末状蒲公英多糖精品；
(5)按照质量比为2:1，称取蒲公英多糖精品，柠檬酸三钠，加入烧杯中，用蒸馏水溶解，置于60℃恒温水浴锅，在搅拌下，缓缓滴加2mol/L三氯化铁溶液，在滴加三氯化铁溶液的过程中，通过滴加20％氢氧化钠溶液控制烧杯中的反应液pH为7～9，当反应液中出现棕红色不溶性沉淀时，立即停止滴加三氯化铁和氢氧化钠溶液，继续在水浴中搅拌1～2h，待反应液冷却至室温后，离心10～15min，离心转速3000～4000r/min，取上层液，加入3～4倍体积的乙醇，置于冰箱冷藏室，冰箱冷藏室的温度设定为4～5℃，静置10～15h后，离心10～15min，离心转速3000～4000r/min，沉淀置于烘箱干燥，设定烘箱的温度为50℃，得到粗蒲公英多糖铁粗品；将得到的蒲公英多糖铁粗品溶于去离子水，放入透析袋，透析24～36h，缓缓加入3～4倍体积的乙醇，置于冰箱冷藏室，冰箱冷藏室的温度设定为4～5℃，静置10～15h，离心10～15min，离心转速3000～4000r/min，沉淀置于烘箱干燥，设定烘箱的温度为50～70℃，得到精制蒲公英多糖铁。
本发明的有益效果是：
本发明提供了一种简单、有效、快速的蒲公英多糖铁配合物的制备方法，原料采用药食同源的蒲公英，来源丰富，制备工艺稳定，为开发新型补铁剂和蒲公英的深加工产品提供了新的选择，从蒲公英中提取蒲公英多糖，并采用氯化铁共热法制备蒲公英多糖铁；且本发明产品蒲公英多糖铁配合物，不仅具有良好的稳定性，对胃肠道刺激小、生物利用度高,而且当其在体内释放铁之后，蒲公英多糖配体还对机体具有抗菌、抗炎、抗过敏、调节免疫等多种生物活性，蒲公英多糖铁是有望开发成为一种新型补铁剂。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
实施例1：
(1)将蒲公英根经清洗、自然晒干后置于70℃烘箱内烘30min，然后粉碎至过60目筛得蒲公英粉末，依次用石油醚和乙醇各连续抽提2h，室温条件下挥发掉溶剂后，置于50℃烘箱中烘干；
(2)将蒲公英粉按料水比为1：20加入去离子水，置于恒温水浴锅中浸提，浸提温度30℃，浸提时间2h，离心分离，离心转速3000r/min，离心时间10min；上清液为蒲公英多糖浸提液，浸提2次，过滤，合并滤液，得蒲公英水浸提液；
(3)将蒲公英水浸提液减压浓缩到原体积的1/3，向浓缩液中加入浓缩体积3倍的乙醇，置于冰箱冷藏室，冰箱冷藏室的温度设定为4℃，静置10h，离心，离心转速3000r/min，沉淀物为蒲公英多糖粗品；
(4)向步骤(3)得到的蒲公英多糖粗品中加入去离子水使其溶解，得粗蒲公英多糖液，加入粗蒲公英多糖液体积25％的Sevage试剂进行振荡脱蛋白，振荡10min，静置15min，弃掉下层，上层中再加25％的Sevage试剂，重复操作，直至下层由乳白色逐渐变至近无色为止，离心，离心转速3000r/min，沉淀物再依次分别用乙醇、丙酮、乙醚洗涤，获得白色粉末状蒲公英多糖精品；
(5)按照质量比为2:1，称取蒲公英多糖精品，柠檬酸三钠，加入烧杯中，用蒸馏水溶解，置于60℃恒温水浴锅，在搅拌下，缓缓滴加2mol/L三氯化铁溶液，在滴加三氯化铁溶液的过程中，通过滴加20％氢氧化钠溶液控制烧杯中的反应液pH为7～9，当反应液中出现棕红色不溶性沉淀时，立即停止滴加三氯化铁和氢氧化钠溶液，继续在水浴中搅拌1h，待反应液冷却至室温后，离心10min，离心转速3000r/min，取上层液，加入3倍体积的乙醇，置于冰箱冷藏室，冰箱冷藏室的温度设定为4℃，静置10h后，离心10min，离心转速3000r/min，沉淀置于烘箱干燥，设定烘箱的温度为50℃，得到粗蒲公英多糖铁粗品；将得到的蒲公英多糖铁粗品溶于去离子水，放入透析袋，透析24h，缓缓加入3倍体积的乙醇，置于冰箱冷藏室，冰箱冷藏室的温度设定为4℃，静置10h，离心10min，离心转速3000r/min，沉淀置于烘箱干燥，设定烘箱的温度为50℃，得到精制蒲公英多糖铁。
实施例2：
(1)将蒲公英根经清洗、自然晒干后置于70℃烘箱内烘30min，然后粉碎至过60目筛得蒲公英粉末，依次用石油醚和乙醇各连续抽提3h，室温条件下挥发掉溶剂后，置于50℃烘箱中烘干；
(2)将蒲公英粉按料水比为1：40加入去离子水，置于恒温水浴锅中浸提，浸提温度90℃，浸提时间5h，离心分离，离心转速4000r/min，离心时间15min；上清液为蒲公英多糖浸提液，浸提2次，过滤，合并滤液，得蒲公英水浸提液；
(3)将蒲公英水浸提液减压浓缩到原体积的1/4，向浓缩液中加入浓缩体积5倍的乙醇，置于冰箱冷藏室，冰箱冷藏室的温度设定为5℃，静置24h，离心，离心转速4000r/min，沉淀物为蒲公英多糖粗品；
(4)向步骤(3)得到的蒲公英多糖粗品中加入去离子水使其溶解，得粗蒲公英多糖液，加入粗蒲公英多糖液体积25％的Sevage试剂进行振荡脱蛋白，振荡15min，静置20min，弃掉下层，上层中再加25％的Sevage试剂，重复操作，直至下层由乳白色逐渐变至近无色为止，离心，离心转速4000r/min，沉淀物再依次分别用乙醇、丙酮、乙醚洗涤，获得白色粉末状蒲公英多糖精品；
(5)按照质量比为2：1，称取蒲公英多糖精品，柠檬酸三钠，加入烧杯中，用蒸馏水溶解，置于60℃恒温水浴锅，在搅拌下，缓缓滴加2mol/L三氯化铁溶液，在滴加三氯化铁溶液的过程中，通过滴加20％氢氧化钠溶液控制烧杯中的反应液pH为7～9，当反应液中出现棕红色不溶性沉淀时，立即停止滴加三氯化铁和氢氧化钠溶液，继续在水浴中搅拌2h，待反应液冷却至室温后，离心15min，离心转速4000r/min，取上层液，加入4倍体积的乙醇，置于冰箱冷藏室，冰箱冷藏室的温度设定为5℃，静置15h后，离心15min，离心转速4000r/min，沉淀置于烘箱干燥，设定烘箱的温度为50℃，得到粗蒲公英多糖铁粗品；将得到的蒲公英多糖铁粗品溶于去离子水，放入透析袋，透析36h，缓缓加入4倍体积的乙醇，置于冰箱冷藏室，冰箱冷藏室的温度设定为5℃，静置15h，离心15min，离心转速4000r/min，沉淀置于烘箱干燥，设定烘箱的温度为70℃，得到精制蒲公英多糖铁。
实施例3：
(1)将蒲公英根经清洗、自然晒干后置于70℃烘箱内烘30min，然后粉碎至过60目筛得蒲公英粉末，依次用石油醚和乙醇各连续抽提2.5h，室温条件下挥发掉溶剂后，置于50℃烘箱中烘干；
(2)将蒲公英粉按料水比为1：30加入去离子水，置于恒温水浴锅中浸提，浸提温度60℃，浸提时间3h，离心分离，离心转速3500r/min，离心时间13min；上清液为蒲公英多糖浸提液，浸提2次，过滤，合并滤液，得蒲公英水浸提液；
(3)将蒲公英水浸提液减压浓缩到原体积的1/3，向浓缩液中加入浓缩体积4倍的乙醇，置于冰箱冷藏室，冰箱冷藏室的温度设定为5℃，静置15h，离心，离心转速3500r/min，沉淀物为蒲公英多糖粗品；
(4)向步骤(3)得到的蒲公英多糖粗品中加入去离子水使其溶解，得粗蒲公英多糖液，加入粗蒲公英多糖液体积25％的Sevage试剂进行振荡脱蛋白，振荡13min，静置18min，弃掉下层，上层中再加25％的Sevage试剂，重复操作，直至下层由乳白色逐渐变至近无色为止，离心，离心转速3500r/min，沉淀物再依次分别用乙醇、丙酮、乙醚洗涤，获得白色粉末状蒲公英多糖精品；
(5)按照质量比为2:1，称取蒲公英多糖精品，柠檬酸三钠，加入烧杯中，用蒸馏水溶解，置于60℃恒温水浴锅，在搅拌下，缓缓滴加2mol/L三氯化铁溶液，在滴加三氯化铁溶液的过程中，通过滴加20％氢氧化钠溶液控制烧杯中的反应液pH为7～9，当反应液中出现棕红色不溶性沉淀时，立即停止滴加三氯化铁和氢氧化钠溶液，继续在水浴中搅拌1.5h，待反应液冷却至室温后，离心12min，离心转速3500r/min，取上层液，加入3倍体积的乙醇，置于冰箱冷藏室，冰箱冷藏室的温度设定为5℃，静置13h后，离心12min，离心转速3500r/min，沉淀置于烘箱干燥，设定烘箱的温度为50℃，得到粗蒲公英多糖铁粗品；将得到的蒲公英多糖铁粗品溶于去离子水，放入透析袋，透析30h，缓缓加入3倍体积的乙醇，置于冰箱冷藏室，冰箱冷藏室的温度设定为5℃，静置12h，离心12min，离心转速3500r/min，沉淀置于烘箱干燥，设定烘箱的温度为60℃，得到精制蒲公英多糖铁。
本发明提供了一种简单、有效、快速的蒲公英多糖铁配合物的制备方法，原料采用药食同源的蒲公英，来源丰富，制备工艺稳定，为开发新型补铁剂和蒲公英的深加工产品提供了新的选择，从蒲公英中提取蒲公英多糖，并采用氯化铁共热法制备蒲公英多糖铁；且本发明产品蒲公英多糖铁配合物，不仅具有良好的稳定性，对胃肠道刺激小、生物利用度高,而且当其在体内释放铁之后，蒲公英多糖配体还对机体具有抗菌、抗炎、抗过敏、调节免疫等多种生物活性，蒲公英多糖铁是有望开发成为一种新型补铁剂。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质上对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种蒲公英多糖铁配合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将蒲公英根经清洗、自然晒干后置于烘箱烘30min，然后粉碎至过60目筛得蒲公英粉末，依次用石油醚和乙醇连续抽提2～3h，室温条件下挥发掉溶剂后，置于烘箱中烘干；
(2)将蒲公英粉按料水比为1：20～40加入去离子水，置于恒温水浴锅中浸提，浸提温度30～90℃，浸提时间2～5h，离心分离，离心时间10～15min；上清液为蒲公英多糖浸提液，浸提2次，过滤，合并滤液，得蒲公英水浸提液；
(3)将蒲公英水浸提液减压浓缩到原体积的1/3～1/4，向浓缩液中加入浓缩体积3～5倍的乙醇，置于冰箱冷藏室，静置10～24h，离心，沉淀物为蒲公英多糖粗品；
(4)向步骤(3)得到的蒲公英多糖粗品中加入去离子水使其溶解，得粗蒲公英多糖液，加入Sevage试剂进行振荡脱蛋白，每次振荡10～15min，振荡至下层近无色为止，离心，沉淀物再分别用乙醇、丙酮、乙醚洗涤，获得白色粉末状蒲公英多糖精品；
(5)按照质量比为2:1的配比称取蒲公英多糖精品，柠檬酸三钠，加入烧杯中，用蒸馏水溶解，置于60℃恒温水浴锅，在搅拌下，缓缓滴加2mol/L三氯化铁溶液，在滴加三氯化铁溶液的过程中，通过滴加20％氢氧化钠溶液控制烧杯中的反应液pH为7～9，当反应液中出现棕红色不溶性沉淀时，立即停止滴加三氯化铁和氢氧化钠溶液，继续在水浴中搅拌1～2h，待反应液冷却至室温后，离心10～15min，取上层液，加入3～4倍体积的乙醇，置于冰箱冷藏室，静置10～15h后，离心10～15min，沉淀置于烘箱干燥，设定烘箱的温度为50℃，得到粗蒲公英多糖铁粗品；将得到的蒲公英多糖铁粗品溶于去离子水，放入透析袋，透析24～36h，缓缓加入3～4倍体积的乙醇，置于冰箱冷藏室，静置10～15h，离心10～15min，沉淀置于烘箱干燥，设定烘箱的温度为50～70℃，得到精制蒲公英多糖铁。
2.根据权利要求1所述的蒲公英多糖铁配合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中自然晒干后进入的烘箱，温度设定为70℃；挥发掉溶剂后进入的烘箱，温度设定为50℃。
3.根据权利要求1所述的蒲公英多糖铁配合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)、(4)和(5)中所述的离心，转速为3000～4000r/min。
4.根据权利要求1所述的蒲公英多糖铁配合物的制备方法，其特征在于，步骤(3)和(5)中所述的冰箱冷藏室的温度设定为4～5℃。
5.根据权利要求1所述的蒲公英多糖铁配合物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述的Sevage试剂的加入量为粗蒲公英多糖液体积的25％。
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