CN109260470B - 自然杀伤性t细胞联合西妥昔单抗在制备治疗抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents
自然杀伤性t细胞联合西妥昔单抗在制备治疗抗肿瘤药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗在制备治疗抗肿瘤药物中的应用,涉及抗肿瘤药物技术领域。本发明自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗在制备治疗抗肿瘤药物中的应用通过将具有抗病毒免疫、肿瘤免疫,以及自身免疫疾病中发挥着重要作用的自然杀伤性T细胞与西妥昔单抗进行联合应用,通过研究发现,可以有效抑制肠癌细胞株的体外扩增,进而为寻求一种新的更为安全有效的组合化疗方案进行了有益的探索,对西妥昔单抗与其他类药物联合应用研究以制备抗肿瘤药物具有启示性的意义。
Description
技术领域
本发明涉及抗肿瘤药物技术领域,尤其是涉及一种自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
结直肠癌是癌症相关死亡的的重要原因。几十年来,批准用于治疗结直肠癌的化疗药物只有5-氟尿嘧啶(5-FU),它仍然是大多数晚期疾病患者的一线化疗方案的主要药物。然而,过去的十年中在转移性结直肠癌(mCRC)治疗方面已取得了很大进展,包括几种新型治疗剂包括伊立替(irinotecan)、奥沙利铂(oxaliplatin)、卡培他滨(capecitabine)等药物。重要的是,已经设计出使用这些药物的多种新的化疗方案,这导致响应率提高以及晚期疾病患者的进展时间和中位存活期不断增加。对于作为单药疗法的5-FU/甲酰四氢叶酸、伊立替康、奥沙利铂的响应率低(分别仅为23%,18%和12%),无进展的存活期短(分别是中位4.0、4.3和4.0个月),中位存活期也短,大约(分别是12、12 和14.5个月)。随着使用依立替康和奥沙利铂的基于5-FU的联合化疗方案“FOLFOX方案”的引入,响应率显著提高,据报道,响应率高达64%(FOLFOX7),在一些报道中,进展时间从8.9到12.3个月,中位存活期现已接近大约20个月。
然而遗憾的是,这些更新的组合化疗方案具有提高的毒性。含伊立替康的方案与严重腹泻和其它胃肠道毒性有关,而那些含有奥沙利铂的方案与神经毒性有关。观察到的奥沙利铂的神经毒性有两种类型:第一种,累积的以及经常是伴有可干扰功能的感觉异常,第二种,限制患者接受FOLFOX方案的不适的冷敏感性。有鉴于此,寻找研发出一种更为安全有效的组合化疗方案,对抗肿瘤药物的研究就变得十分必要和迫切。
有鉴于此,特提出本发明。
发明内容
本发明目的在于提供一种自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗在制备治疗抗肿瘤药物中的应用,以改善上述问题中的至少一个问题。
本发明提供的自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。
进一步的,所述自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗对肠癌细胞株在体外具有显著的抑制作用。
更进一步的,所述肠癌细胞株为LOVO、SW480或SW620中的一种。
更进一步的,所述肠癌细胞株在体外培养中的细胞密度为5×103个/50μL。
更进一步的,所述自然杀伤性T细胞与肠癌细胞株的细胞数量比例为5~40:1。
更进一步的,所述西妥昔单抗在体外培养液中的浓度为5~20μg/ mL;
优选的,所述西妥昔单抗在体外培养液中的浓度为10μg/ mL。
进一步的,所述应用还进一步包括培养自然杀伤性T细胞,然后再将培养得到的自然杀伤性T细胞与西妥昔单抗联合应用的步骤。
进一步的,所述自然杀伤性T细胞的培养基质主要由以下成分组成:无血清培养基、自体血浆和细胞因子IL-7、IL-12、IL-15和IL-21;所述无血清培养基包括初期培养基和补液培养基。
更进一步的,所述初期培养基为X-VIVO 15培养基,所述补液培养基为AIM-V培养基。
更进一步的,所述IL-7细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为10~30ng/mL;
所述IL-12细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为2~8ng/mL;
所述IL-15细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为10~30ng/mL;
所述IL-21细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为5~15ng/mL。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:
本发明提供的自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。该应用通过将具有抗病毒免疫、肿瘤免疫,以及自身免疫疾病中发挥着重要作用的自然杀伤性T细胞与西妥昔单抗进行联合应用,通过研究发现,可以有效抑制肠癌细胞株的体外扩增,进而为寻求一种新的更为安全有效的组合化疗方案进行了有益的探索,对西妥昔单抗与其他类药物联合应用研究以制备抗肿瘤药物具有启示性的意义。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
根据本发明的一个方面,自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。
本发明提供的自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。该应用通过将具有抗病毒免疫、肿瘤免疫,以及自身免疫疾病中发挥着重要作用的自然杀伤性T细胞与西妥昔单抗进行联合应用,通过研究发现,可以有效抑制肠癌细胞株的体外扩增,进而为寻求一种新的更为安全有效的组合化疗方案进行了有益的探索,对西妥昔单抗与其他类药物联合应用研究以制备抗肿瘤药物具有启示性的意义。
在本发明的一种优选实施方式中,所述自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗对肠癌细胞株在体外具有显著的抑制作用。
在上述优选实施方式中,所述肠癌细胞株为LOVO、SW480或SW620中的一种。
在上述优选实施方式中,所述肠癌细胞株在体外培养中的细胞密度为5~8×103个/50μL。
在上述优选实施方式中,所述自然杀伤性T细胞与肠癌细胞株的细胞数量比例为5~40:1。
本发明中,上述自然杀伤性T细胞与肠癌细胞株的细胞数量比例典型但非限定性的为5:1、10:1、15:1、20:1、25:1、30:1、35:1和40:1。
在上述优选实施方式中,所述西妥昔单抗在体外培养液中的浓度为5~20μg/ mL;
优选的,所述西妥昔单抗在体外培养液中的浓度为10μg/ mL。
在本发明的一种优选实施方式中,所述应用还进一步包括培养自然杀伤性T细胞,然后再将培养得到的自然杀伤性T细胞与西妥昔单抗联合应用的步骤。
在本发明的一种优选实施方式中,所述自然杀伤性T细胞的培养基质主要由以下成分组成:无血清培养基、自体血浆和细胞因子IL-7、IL-12、IL-15和IL-21;所述无血清培养基包括初期培养基和补液培养基。
作为一种优选的实施方式,上述自然杀伤性T细胞培养基质主要由无血清培养基、自体血浆和细胞因子IL-7、IL-12、IL-15和IL-21组成。该培养基质使用无血清培养基对自然杀伤性T细胞进行培养避免了现有技术中应用异源动物血清或肿瘤细胞对自然杀伤性T细胞进行培养所带来的潜在安全性风险。同时,IL-7、IL-12、IL-15和IL-21,广泛应用于促进自然杀伤性T细胞的活化和增殖。因此,该培养基质在保证安全性的前提下,可以在短周期内大量高效的扩增得到高质量的自然杀伤性T细胞的细胞培养基质和细胞培养方法,进而获得纯度高,细胞毒性强的自然杀伤性T细胞。
在上述优选实施方式中,所述初期培养基为X-VIVO 15培养基,所述补液培养基为AIM-V培养基。
优选的,自体血浆在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为0~5%。
在上述优选实施方式中,所述IL-7细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为10~30ng/mL;
所述IL-12细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为2~8ng/mL;
所述IL-15细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为10~30ng/mL;
所述IL-21细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为5~15ng/mL。
优选的,所述自然杀伤性T细胞的扩增培养方法包括:使用上述的细胞培养基质在CD16抗体包被后的细胞培养瓶中诱导培养人源外周血单个核细胞,得到自然杀伤性T细胞;
更优选的,所述诱导培养具体包括以下步骤:
步骤1:使用初期培养基在CD16抗体包被后的细胞培养瓶中诱导培养人源外周血单个核细胞10~20天;
步骤2:在步骤1培养过程中,每2~4天用补液培养基进行补液,并补加自体血浆和/或细胞因子IL-7、IL-12、IL-15和IL-21。
该扩增培养方法中CD16抗体联合上述细胞培养基质中的细胞因子IL-7、IL-12、IL-15和IL-21诱导人源外周血单个核细胞释放危险信号,间接通过抗体激活自然杀伤性T细胞。上述方法可以在保证安全性的前提下,在短周期内大量高效的扩增得到高质量的自然杀伤性T细胞。同时,该方法得到自然杀伤性T细胞具有纯度高以及细胞毒性强等优点。
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行进一步地说明。
实施例1 制备自然杀伤性T细胞
一种制备自然杀伤性T细胞的方法
(1)CD16抗体抗体包被
将浓度为50ng/mL的CD16抗体包被在细胞培养瓶中,包被条件为37℃,孵育时间为2h,得到包被后的细胞培养瓶。
(2)制备自体血浆和人源外周血单个核细胞
采集外周血,将采集的外周血转移至50mL离心管中,在20℃的温度下2000rmp离心10分钟收集自体血浆;随后使用淋巴细胞分离液分离并收集人源外周血单个核细胞,将收集到的人源外周血单个核细胞用PBS缓冲液清洗三次,得到人源外周血单个核细胞;
其中,上述使用淋巴细胞分离液分离人源外周血单个核细胞的方法包括以下步骤:
1、将吸取血浆后的血液样本按照1:1的比例加入PBS,混匀;
2、将稀释后的血液样本缓慢加在淋巴细胞分离液面上,稀释后的血液样本与淋巴细胞分离液的比例为1:1;
3、离心,转速2000rpm,时间15min,慢升慢降,离心温度为20℃。
4、离心后吸取单个核细胞层细胞。
(3)诱导培养
步骤1:使用X-VIVO 15无血清培养基重悬步骤(2)得到的人源外周血单个核细胞,并将培养基中的细胞浓度调整至1.5×106/mL,随后接种至步骤(1)得到的包被有CD16抗体的细胞培养瓶中;
步骤2:将步骤(2)中得到的自体血浆加入上述步骤1细胞培养瓶中,自体血浆在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为5%,并添加细胞因子IL-7、IL-12、IL-15和IL-21,随后进行诱导培养14天;
所述IL-7细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为10~30ng/mL;
所述IL-12细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为2~8ng/mL;
所述IL-15细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为10~30ng/mL;
所述IL-21细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为5~15ng/mL。
步骤3:在诱导培养过程中前7天,每3天进行一次补液,使用补液培养基调整细胞密度为1.5×106/mL,并补加自体血浆和细胞因子IL-7、IL-12、IL-15和IL-21;在诱导培养过程中后7天,每3天进行一次补液,使用补液培养基调整细胞密度为1.5×106/mL,并补加细胞因子IL-7、IL-12、IL-15和IL-21;
步骤4:在诱导培养14天时收集自然杀伤性T细胞,将收集到的自然杀伤性T细胞用PBS缓冲液清洗3次,得到自然杀伤性T细胞。
实施例2 结直肠癌细胞株培养
将肠癌细胞株为LOVO、SW480和SW620分别置于37℃、5%CO2培养箱中,含有10%胎牛血清、100U/ml青霉素和链霉素的高糖DMEM培养基中常规培养。
实施例3
MTT法检测3种结直肠癌细胞系对自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗的敏感性。
(1)、取实施例2得到的3种对数生长期结直肠癌细胞系,分别接种于96孔板中,5×103个/孔,50微升培养基/孔。
(2)、第二天弃培养液,每组细胞分别按为5:1、15:1、25:1和40:1的比例加入自然杀伤性T细胞,同时每孔加入10微升浓度为10μg/ mL西妥昔单抗,每个浓度设3 个复孔,并设单独培养基对照孔。将96 孔板置于37℃、5%CO2培养箱再培养24~72小时。
(3)、每孔加入4 mg/ml 的MTT 试剂10μl,继续在培养箱中孵育4h。
(4)、小心吸取去上清液,每孔加入100μl DMSO,放于振荡器上震荡15min。酶标仪在490nm 波长下测吸光值(A 值)。
根据OD 值算出肿瘤细胞抑制率,计算公式为抑制率(IR)=(1- 实验组A 值/ 对照组A 值)×100%。
本实施例对直肠癌细胞株的抑制率(%)如下表所示:
自然杀伤性T细胞与肠癌细胞的比值 | 5:1 | 15:1 | 25:1 | 40:1 |
西妥昔单抗加入量 | 10微升 | 10微升 | 10微升 | 10微升 |
LOVO | 2±0.26 | 38±0.03 | 46±0.07 | 87±0.03 |
SW480 | 2±0.20 | 51±0.11 | 76±0.06 | 92±0.04 |
SW620 | 1±0.17 | 83±0.08 | 88±0.12 | 96±0.06 |
对比例1
MTT法检测3种结直肠癌细胞系对自然杀伤性T细胞的敏感性。
本对比例除步骤(2)中不加入西妥昔单抗外,其余同实施例3。
本对比例对直肠癌细胞的抑制率(%)如下表所示:
自然杀伤性T细胞与肠癌细胞的比值 | 5:1 | 15:1 | 25:1 | 40:1 |
LOVO | 0±0.27 | 26±0.13 | 33±0.04 | 57±0.05 |
SW480 | 0±0.18 | 37±0.21 | 53±0.02 | 69±0.02 |
SW620 | 0±0.17 | 43±0.04 | 61±0.11 | 72±0.07 |
对比例2
MTT法检测3种结直肠癌细胞系对西妥昔单抗的敏感性
本对比例除步骤(2)中不加入自然杀伤性T细胞外,其余同实施例3。
本对比例对直肠癌细胞的抑制率(%)如下表所示:
组别 | LOVO | SW480 | SW620 |
加入10微升西妥昔单抗 | 23±0.21 | 31±0.11 | 27±0.05 |
综上所述,本发明提供的自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。该应用通过将具有抗病毒免疫、肿瘤免疫,以及自身免疫疾病中发挥着重要作用的自然杀伤性T细胞与西妥昔单抗进行联合应用,通过研究发现,两者联合应用后相比于自然杀伤性T细胞或西妥昔单抗单独进行应用,其对直肠癌细胞的抑制率效果明显优于自然杀伤性T细胞和西妥昔单抗分别应用时,因此,自然杀伤性T细胞与西妥昔单抗进行联合应用,可以有效抑制肠癌细胞株的体外扩增,进而为寻求一种新的更为安全有效的组合化疗方案进行了有益的探索,对西妥昔单抗与其他类药物联合应用研究以制备抗肿瘤药物具有启示性的意义。
最后应说明的是:以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (4)
1.自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗在制备治疗抗结直肠癌药物中的应用,其特征在于,所述自然杀伤性T细胞联合西妥昔单抗对肠癌细胞株在体外具有显著的抑制作用;
所述肠癌细胞株为LOVO、SW480或SW620中的一种,所述肠癌细胞株在体外培养中的细胞密度为5×103个/50μL;
所述自然杀伤性T细胞与肠癌细胞株的细胞数量比例为40:1;
所述西妥昔单抗在体外培养液中的浓度为10μg/ mL;
所述自然杀伤性T细胞的诱导培养方法包括:
步骤1:使用初期培养基在CD16抗体包被后的细胞培养瓶中诱导培养人源外周血单个核细胞;
步骤2:在步骤1培养过程中,用补液培养基进行补液,并补加自体血浆和/或细胞因子IL-7、IL-12、IL-15和IL-21。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述应用还进一步包括培养自然杀伤性T细胞,然后再将培养得到的自然杀伤性T细胞与西妥昔单抗联合应用的步骤。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述初期培养基为X-VIVO 15培养基,所述补液培养基为AIM-V培养基。
4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述IL-7细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为10~30ng/mL;
所述IL-12细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为2~8ng/mL;
所述IL-15细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为10~30ng/mL;
所述IL-21细胞因子在自然杀伤性T细胞培养基质中的浓度为5~15ng/mL。
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---|---|---|---|---|
CN105994125A (zh) * | 2015-04-15 | 2016-10-12 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 一种评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度的方法 |
CN107475196A (zh) * | 2017-10-09 | 2017-12-15 | 天津长和生物技术有限公司 | 自然杀伤细胞培养基质及自然杀伤细胞的扩增培养方法 |
CN107488630A (zh) * | 2017-10-09 | 2017-12-19 | 天津长和生物技术有限公司 | 自然杀伤性t细胞培养基质及自然杀伤性t细胞的扩增培养方法 |
CN107488631A (zh) * | 2017-10-09 | 2017-12-19 | 天津长和生物技术有限公司 | 自然杀伤细胞培养基质及自然杀伤细胞的扩增培养方法 |
CN108795868A (zh) * | 2018-06-15 | 2018-11-13 | 江苏省肿瘤医院 | 一种人结直肠癌西妥昔单抗耐药细胞株及其应用 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9121008B2 (en) * | 2005-08-31 | 2015-09-01 | University Of Utah Research Foundation | Development of natural killer cells and functional natural killer cell lines |
CN106434552B (zh) * | 2015-08-13 | 2022-04-29 | 清华大学 | 新型nkt样细胞亚群及其治疗肿瘤的用途 |
-
2018
- 2018-09-17 CN CN201811084146.3A patent/CN109260470B/zh active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105994125A (zh) * | 2015-04-15 | 2016-10-12 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 一种评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度的方法 |
CN107475196A (zh) * | 2017-10-09 | 2017-12-15 | 天津长和生物技术有限公司 | 自然杀伤细胞培养基质及自然杀伤细胞的扩增培养方法 |
CN107488630A (zh) * | 2017-10-09 | 2017-12-19 | 天津长和生物技术有限公司 | 自然杀伤性t细胞培养基质及自然杀伤性t细胞的扩增培养方法 |
CN107488631A (zh) * | 2017-10-09 | 2017-12-19 | 天津长和生物技术有限公司 | 自然杀伤细胞培养基质及自然杀伤细胞的扩增培养方法 |
CN108795868A (zh) * | 2018-06-15 | 2018-11-13 | 江苏省肿瘤医院 | 一种人结直肠癌西妥昔单抗耐药细胞株及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Cetuximab Enhanced the Cytotoxic Activity of Immune Cells during Treatment of Colorectal Cancer;Lin Wang等;《Cell Physiol Biochem》;20171127;第44卷(第3期);第1038-1050页 * |
自然杀伤细胞联合西妥昔单抗对肠癌细胞体外作用的研究;黄建栋;《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》;20130315(第03期);摘要,第13页第5小节,第14页第8小节,第23页表7 * |
Also Published As
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