CN109258148A - 一种蛇足石杉插条生根的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蛇足石杉插条生根的方法，包括将蛇足石杉插条在蛇足石杉外植体的培养液中预处理，再将预处理后的蛇足石杉插条在青苔基质中依次进行预培养和生根培养。该操作方法简单易行，为蛇足石杉扦插繁殖提供新方法。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及多酚的生物合成，具体涉及一种蛇足石杉插条生根的方法。
背景技术
蛇足石杉(Huperzia serrata(Thunb.)Trev.)为石松目(Lycopodiales)石杉科(Lycopodiaceae)石杉属(LycopodiumL.)多年生草本蕨类植物。蛇足石杉在民间主要用于治疗跌打肿痛、内伤出血、毒虫毒蛇咬伤、烧伤烫伤等病症。1927年我国科技工作者报道了从该植物中分离的石杉碱甲具有横纹肌松弛作用，之后的大量研究发现石杉碱甲是一种高效、低毒、可逆和高选择性的乙酰胆碱酯酶抑制剂。现在，被石杉碱甲及经作为治疗阿尔茨海默病(AD，Alzheimer disease)的药物，同时在美国被用做益智的营养保健品。
然而，蛇足石杉自然资源严重短缺。蛇足石杉生长缓慢，野生状态其的繁殖主要以孢子繁殖为主，孢子萌发周期长，萌发后属地下生配子体，需6-15年才能成熟。因此极大地限制了蛇足石杉野生资源的再生。蛇足石杉中的石杉碱甲含量又很低(0.007％)，再加上其全合成石杉碱甲步骤繁琐、价格昂贵且有副作用。目前，石杉碱甲的提取主要依赖于野生资源，提取率仅为0.006％-0.1％，因而大量的市场需求、受限的自然资源和自身生长繁殖的限制。因此，不论是石杉碱甲直接或者间接获得都是以蛇足石杉的原植物为原料，这种自然界有限的资源将处于灭绝的边缘。因此，对蛇足石杉的人工繁殖迫在眉睫。
扦插繁殖主要是指将离体的植物营养器官(根、茎、叶等)插入一定的基质中，在适宜的条件下使离体的营养器官再生成一个完整新植株的繁殖方法。扦插繁殖不仅能保证在短时间内获得大量扦插成活苗，而且还能保持植物原有的遗传特性，是植物无性繁殖的重要方法之一。影响插苗生根成活的因素很多，除受到植物体自身的生物学特性、插条的发育程度及外界条件。有些植物种类比较容易扦插成功，也有一些植物很难扦插成功。因此，找到影响植物扦插生根的关键因素至关重要。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种蛇足石杉插条生根的方法，可用于蛇足石杉的人工扦插繁殖。
为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：
一种蛇足石杉插条生根的方法，其特征在于，包括将蛇足石杉插条在蛇足石杉外植体的培养液中预处理，再将预处理后的蛇足石杉插条在青苔基质中依次进行预培养和生根培养。
具体地，所述的蛇足石杉外植体培养液的制备包括：将蛇足石杉的根、茎和/或叶于MS液体培养基中培养得到培养溶液，培养溶液中加入吲哚丁酸即得。
进一步地，所述的吲哚丁酸浓度为5mg/L。
具体地，所述的预处理是将蛇足石杉插条在生根培养液浸泡备用。
进一步地，所述的预处理阶段中，将插条用生根培养液浸泡的时间为6-12h。
具体地，所述的预培养是将预处理得到的插条扦插到青苔基质中，然后放置到温室中进行培养。
进一步地，所述的预培养时间为2-6d。
具体地，所述的生根培养是将预培养后的蛇足石杉插条更换到消毒后的青苔基质中，再用高锰酸钾溶液和甘露糖溶液依次对蛇足石杉插条进行温室培养。
进一步地，所述的高锰酸钾溶液的质量分数为0.3％，所述的甘露糖溶液的浓度为0.5-1.5mmol/L。
进一步地，所述的温室培养的温度为25±5℃，温室培养的湿度为60％，温室培养的光照强度为4000Lux，温室培养的光周期为16h。
本发明进行蛇足石杉插条生根的方法，具有以下优点：
本发明的蛇足石杉插条生根的方法，是通过将蛇足石杉插条在培养过蛇足石杉外植体的培养液中浸泡和在青苔基质中扦插的方式，达到了提高蛇足石杉插条生根的目的，方法简单易行，为蛇足石杉扦插繁殖提供新方法。
具体实施方式
蛇足石杉的主要分布区位于我国中亚热带和南亚热带所在的地理区域，幅员面积260×10％m2，实际分布生境总面积约39x107mP；性喜阴温，所适应的生态环境为中亚热带常绿國叶林和南亚热带季风常绿叶林及其次生生态系统。本发明中的蛇足石杉采集地主要集中于江西、云南、湖北、浙江等地，是指其蛇足石杉根茎叶俱全，无枯萎，无折断；
以下所述的蛇足石杉插条是指：经生长状态良好的蛇足石杉茎段(3-5cm)；
外植体是指：用于培养的任何植物组织，在本发明中是指蛇足石杉的根、茎或叶片。
生根率＝生根的插条数/所有插条数×％
MS液体培养基也称MS培养基。MS培养基是常用的基本培养基，是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。青苔基质从花卉市场购买，无特殊要求。
以下结合实施例和对比例对本发明作进一步的详细说明。
对比例1：
在野外采集生长良好的蛇足石杉，清洗表面尘土，将茎秆剪成3-5cm的插条，然后将该插条扦插到用水浸湿的青苔基质中，扦插深度为2-3cm，然后放置到培养温度为25±5℃，湿度为60％，光照强度为4000Lux和光周期为16小时的培养室中培养，培养45天后插条的生根率为28％。
实施例2：
以蛇足石杉的根、茎、叶为材料，采取常规表面消毒法对其消毒，并置于MS液体培养基中培养3d，然后向得到的溶液中加入5mg/L的吲哚丁酸，即制得生根培养液；
在野外采集生长良好的蛇足石杉，清洗表面尘土，将茎秆剪成3-5cm的插条，然后将该插条扦插到用上述生根培养液浸湿的青苔基质中，扦插深度为2-3cm，然后放置到培养温度为25±5℃，湿度为60％，光照强度为4000Lux和光周期为16小时的培养室中培养，培养45天后插条的生根率为48％。
实施例3：
(1)生根培养液的配制
以蛇足石杉的根、茎、叶为材料，采取常规表面消毒法对其消毒，并置于MS液体培养基中培养3d，然后向得到的溶液中加入5mg/L的吲哚丁酸，即制得生根培养液；
(2)蛇足石杉插条的处理
在野外采集生长良好的蛇足石杉，清洗表面尘土，将茎秆剪成3-5cm的插条，然后将插条下端2-3cm用生根培养液浸泡6h后备用；
(3)蛇足石杉插条的预培养
将步骤(2)浸泡后的插条扦插到用水浸湿至饱和状态的青苔基质中，扦插深度为2-3cm，然后放置到培养温度为25±5℃，湿度为60％，光照强度为4000Lux和光周期为16h的培养室中培养2d；
(4)蛇足石杉插条的生根
将步骤(3)预培养后的插条更换到用3％过氧化氢消毒的青苔基质中培养，第二天再用质量分数为0.3％的高锰酸钾溶液浇灌插条的根部，第三天再用0.5mmol/L的甘露糖溶液浇灌插条的根部，培养室环境保持不变，培养45d后统计插条生根数量，生根率为54％。
实施例4：
同实施例3，但与实施例3不同的是：步骤(2)中用生根培养液浸泡12h，最后生根率为67％。
实施例5：
同实施例3，但与实施例3不同的是：步骤(2)中用生根培养液浸泡12h；步骤(3)中在温室中培养4d；步骤(4)采用1.0mmol/L的甘露糖溶液，最后生根率为88％。
实施例6：
同实施例3，但与实施例3不同的是：步骤(3)中在温室中培养6d；步骤(4)采用1.0mmol/L的甘露糖溶液，最后生根率为74％。
实施例7：
同实施例3，但与实施例3不同的是：步骤(2)中用生根培养液浸泡12h；步骤(3)中在温室中培养6d；步骤(4)采用1.5mmol/L的甘露糖溶液，最后生根率为65％。
实施例8：
同实施例3，但与实施例3不同的是：步骤(2)中用生根培养液浸泡12h；步骤(3)中在温室中培养4d；步骤(4)采用1.5mmol/L的甘露糖溶液，最后生根率为74％。
Claims (10)
1.一种蛇足石杉插条生根的方法，其特征在于，包括将蛇足石杉插条在蛇足石杉外植体的培养液中预处理，再将预处理后的蛇足石杉插条在青苔基质中依次进行预培养和生根培养。
2.如权利要求1所述的蛇足石杉插条生根的方法，其特征在于，所述的蛇足石杉外植体培养液的制备包括：
将蛇足石杉的根、茎和/或叶于MS液体培养基中培养得到培养溶液，培养溶液中加入吲哚丁酸即得。
3.如权利要求2所述的蛇足石杉插条生根的方法，其特征在于，所述的吲哚丁酸浓度为5mg/L。
4.如权利要求1所述的蛇足石杉插条生根的方法，其特征在于，所述的预处理是将蛇足石杉插条在生根培养液浸泡备用。
5.如权利要求1所述的蛇足石杉插条生根的方法，其特征在于，所述的预处理阶段中，将插条用生根培养液浸泡的时间为6-12h。
6.如权利要求1所述的蛇足石杉插条生根的方法，其特征在于，所述的预培养是将预处理得到的插条扦插到青苔基质中，然后放置到温室中进行培养。
7.如权利要求1所述的蛇足石杉插条生根的方法，其特征在于，所述的预培养时间为2-6d。
8.如权利要求1所述的蛇足石杉插条生根的方法，其特征在于，所述的生根培养是将预培养后的蛇足石杉插条更换到消毒后的青苔基质中，再用高锰酸钾溶液和甘露糖溶液依次对蛇足石杉插条进行温室培养。
9.如权利要求8所述的蛇足石杉插条生根的方法，其特征在于，所述的高锰酸钾溶液的质量分数为0.3％，所述的甘露糖溶液的浓度为0.5-1.5mmol/L。
10.如权利要求6或8所述的蛇足石杉插条生根的方法，其特征在于，所述的温室培养的温度为25±5℃，温室培养的湿度为60％，温室培养的光照强度为4000Lux，温室培养的光周期为16h。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190125 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |